植物总蛋白提取
植物总蛋白提取演示教学
植物总蛋白提取精品文档一提取植物总蛋白（以植物花粉为例）：1.三氯乙酸法（TCA）/丙酮(acetone)提取花粉总蛋白质花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，用含10%TCA和1%DTT的acetone沉淀蛋白质，-20度 2个小时(必要时过夜)，4度 25000g离心20min后去上清，用含1%DTT的acetone溶液悬浮沉淀，-20度 1个小时,再次离心去上清，将真空干燥的沉淀在等电聚焦缓冲液中(8M urea，20mmDTT,4%CHAPS,2%ampholyte,PH:3-10) 20度震荡1小时，20度25000g离心20min，收集上清，沉淀再次用IEF缓冲液离心收集上清，可为后续试验做准备。
2．苯酚（phenol）提取法花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，添加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）继续研磨5min,加提取缓冲液（0.1mol/L 8.8 Tr i s –HCl，5mmEDTA,20mmDTT,30%sucrose）。
将样本转移至离心管中，4度震荡30min，25000g离心10min，将上层的phenol层转移进另一个试管，将下边的水相层加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）及提取缓冲液，震荡，离心，将再次收集到的phenol与前边收集的混合，加5倍体积的0.1 M ammonium acetate in 100%methanol，在-20度震荡沉淀蛋白质，必要时过夜，4度 25000g离心10min，将沉淀用0.1 M ammonium acetate in 100%methanol及80% acetone各洗两次, 含10mmDTT的80% acetone再洗一次，在每一步中蛋白沉淀都要完全重悬— -20度震荡30min，4度 25000g离心20min，洗剂完成后，沉淀真空干燥，IEF buffer提取蛋白质，如方法1。
植物总蛋白提取
一提取植物总蛋白（以植物花粉为例）：1.三氯乙酸法（TCA）/丙酮(acetone)提取花粉总蛋白质花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，用含10%TCA和1%DTT的acetone沉淀蛋白质，-20度2个小时(必要时过夜)，4度25000g离心20min后去上清，用含1%DTT的acetone溶液悬浮沉淀，-20度1个小时,再次离心去上清，将真空干燥的沉淀在等电聚焦缓冲液中(8M urea，20mmDTT,4%CHAPS,2%ampholyte,PH:3-10) 20度震荡1小时，20度25000g离心20min，收集上清，沉淀再次用IEF缓冲液离心收集上清，可为后续试验做准备。
2．苯酚（phenol）提取法花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，添加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）继续研磨5min,加提取缓冲液（0.1mol/L 8.8 Tr i s –HCl，5mmEDTA,20mmDTT,30%sucrose）。
将样本转移至离心管中，4度震荡30min，25000g离心10min，将上层的phenol层转移进另一个试管，将下边的水相层加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）及提取缓冲液，震荡，离心，将再次收集到的phenol与前边收集的混合，加5倍体积的0.1 M ammonium acetate in 100%methanol，在-20度震荡沉淀蛋白质，必要时过夜，4度 25000g离心10min，将沉淀用0.1 M ammonium acetate in 100%methanol及80% acetone各洗两次, 含10mmDTT的80% acetone再洗一次，在每一步中蛋白沉淀都要完全重悬— -20度震荡30min，4度 25000g离心20min，洗剂完成后，沉淀真空干燥，IEF buffer提取蛋白质，如方法1。
3．直接IEF buffer提取蛋白质直接IEF buffer提取蛋白质，花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，然后加入IEF buffer(8M尿素，20mmDTT,4%CHAPS，5mmEDTA，5mmTris base,2%ampholyte,PH:3-10).如方法1。
植物蛋白提取方法和工艺流程
植物蛋白提取方法和工艺流程Plant protein extraction is a vital process for industries producing plant-based products such as protein powders, meat alternatives, and dairy substitutes. The method and process used for extracting plant proteins play a crucial role in determining the quality, yield, and functionality of the final product. Generally, plant protein extraction involves breaking down the plant cell wall to release proteins from the plant cells. This can be achieved through various physical and chemical methods such as grinding, pressing, and extraction with solvents.植物蛋白提取是生产植物蛋白粉、肉类替代品和奶制品替代品等植物基产品的行业的重要过程。
用于提取植物蛋白的方法和过程对最终产品的质量、产量和功能起着决定性作用。
通常，植物蛋白提取包括破坏植物细胞壁以释放细胞中的蛋白质。
这可以通过各种物理和化学方法来实现，如研磨、压榨和用溶剂提取。
One common method used for plant protein extraction is the solvent extraction method, which involves using organic solvents such as ethanol or hexane to dissolve the proteins from the plant material.This method is effective in extracting a wide range of proteins but may also result in the denaturation of proteins due to the harsh conditions. Another method is the aqueous extraction method, which uses water as the solvent to extract proteins. This method is gentler and more environmentally friendly but may not be as efficient in extracting proteins compared to solvent extraction.一种常用于植物蛋白提取的方法是溶剂提取法，其中使用有机溶剂如乙醇或正己烷来溶解植物材料中的蛋白质。
拟南芥总蛋白提取
河北经贸大学毕业论文拟南芥蛋白不同提取方法的SDS—PAGE凝胶电泳分析专业名称：生物技术班级：2003 02学生姓名：***指导教师：**完成时间：2007年6月河北经贸大学毕业论文摘要植物蛋白提取方法有很多种，不论使用哪一种方法，均必须在操作中保存生物大分子结构的完整性，保存活性防止变性及降解现象的发生。
因蛋白空间结构主要依靠氢键、盐键和范德华力的存在，遇酸、遇碱、高温、剧烈的机械作用及强烈的辐射等均可导致活性丧失，因此选择的条件应为十分温和。
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术作为分离鉴定生物大分子的一种实验技术手段，已经成为分子生物学实验室中的重要技术之一。
本试验采用三种不同的方法（两种蛋白溶解法，一种蛋白沉淀法）分别提取拟南芥不同组织（拟南芥整个植株，拟南芥叶片，拟南芥愈伤组织）的蛋白，然后用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行电泳分析，通过分析凝胶电泳图谱比较分析不同提取液提取蛋白的效果优劣从而确定较好的蛋白提取法，以及拟南芥植株不同组织含有的不同蛋白。
实验结果表明提取液2提取蛋白的效果最好，电泳条带最清楚，提取液3即三氯乙酸丙酮次之，提取液1即PBS溶液最次；并且拟南芥总蛋白跑的电泳谱带最多且最清晰，叶片蛋白谱带最少且较模糊，说明植物各组织的蛋白含量与种类存在差异，这与其功能性质具有相关性，叶片电泳谱带少说明叶片蛋白只含有总蛋白的一部分，由于根部蛋白受培养基中的琼脂的影响而出现一条粗带。
另外，本实验采取了快速脱色和脱色液脱色两种不同的脱色法，结果表明快速脱色法不仅简单方便效果更好适于推广致用。
关键词SDS-PAGE电泳；拟南芥蛋白；蛋白质分析I河北经贸大学毕业论文AbstractThere are many methods of the withdrawtion of the plant proteins, no matter any method, it must preserve the biology macromolecular structure to be integrity in the operation, preserve activity to prevent the degradation and degeneration phenomenon. Space for protein structure mainly rely on hydrogen bonding, salt bonding and the Vander Waals bonding, the existence of the event acid, alkali treatment, high temperature, Mechanical dramatic role and strong radiation can lead to the loss of activity, it should choose the conditions for the very modest. SDS-PAGE as the isolation and identification of biological macromolecules in one of laboratory means, it has become one of the important laboratory technique in Molecular biology.This experiment uses three different methods (two methods are proteins todissolve solution, one method is protein precipitation) withdraws the tissues, protein of Arabidopsis thaliana ( all the protein of Arabidopsis thaliana, the leaf protein of Arabidopsis thaliana, the injuries tissue protein of Arabidopsis thaliana),and then the protein atlas in different tissues and organs of Arabidopsis thaliana were analyzed with SDS polyacrylamidegel, and then, through the analysis of the SDS-PAGE picture we can analysis the different extract buffer and the different protein of the different organizations.Finally, the results indicate that the best method is extract buffer 2 —the SDS-PAGE picture is the clearest, the extract buffer 3 that is the trichloroacetic acid acetone next, the last is the extract buffer 1 which is PBS. The kinds of protein in the whole Arabidopsis thaliana were most and clearest in these three tissues, the kinds of protein in the leaf were least, this phenomenon can be explained by that the protein's content and the protein's type are different, this indicates that the number of the strip belt band has the relevance with the function nature, the phenomenon that the number of the leaf protein is the least indicate that the content and type of the leaf protein are only a part of the whole protein of Arabidopsis thaliana; as aII河北经贸大学毕业论文result of that the culture medium has influence with the root protein, the picture of the whole protein has a thick belt. In addition, this experiment takes two different bleaching methods, one is rapid bleaching, the other is bleaching liquid, the result shows that the rapid bleaching method not only simple and convenient, but also have a better effect, so we can use it extensively.Keywords SDS-PAGE electrophoresis; Arabidopsis thaliana protein; The protein analysisIII河北经贸大学毕业论文目录1 引言 (1)1.1拟南芥简介 (1)1.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (2)1.3拟南芥蛋白提取 (3)1.4实验研究的意义 (3)1.5展望 (4)2材料、主要试剂及主要仪器 (4)2.1实验材料 (4)2.1.1拟南芥培养 (4)2.1.2培养拟南芥愈伤组织 (4)2.2主要试剂及药品 (5)2.2.1溶液的配置 (5)2.2.2所用主要药品和试剂 (7)2.3 主要仪器 (8)3实验方法 (8)3.1样品蛋白的制备——蛋白质的提取 (8)3.1.1提取液1、2和水提取蛋白 (8)3.1.2提取液3提取蛋白 (9)3.1.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (9)4结果与分析 (10)4.1不同方法提取拟南芥不同组织蛋白的效果比较分析 (10)4.2丙酮法提取蛋白与其它提取法的比较 (11)4.3拟南芥蛋白分子量分析 (13)5讨论 (13)5.1金属离子螯合剂在蛋白提取中起重要作用 (13)5.2关于谱带倾斜现象 (13)5.3关于拟南芥各组织蛋白 (13)5.4染色、脱色 (14)6结论 (15)参考文献 (16)致谢 (18)1河北经贸大学毕业论文拟南芥蛋白不同提取方法的SDS—PAGE凝胶电泳分析1 引言1.1 拟南芥简介拟南芥（Arabidopsis thaliana）十字花科。
植物蛋白提取
植物全蛋白提取方法：TCA丙酮沉淀法、Tris-HC1法、Trizol沉淀法提取法。
1 TCA丙酮沉淀法基于蛋白在酸或疏水条件下变性使蛋白浓缩并去除污染物原理的TCA丙酮沉淀法，最早用于小麦蛋白的提取，是目前提取植物蛋白的常用方法之一。
具有降低次生代谢物质的干扰、减少蛋白降解等优点。
TCA能有效地抑制蛋白酶对蛋白质的水解作用，保证在制样过程中蛋白质不被降解；丙酮溶液能除去样品中的酚类及色素等干扰物质，同时实验过程中采用的高速离心办法能较好地去除多糖的影响。
然而该方法的一个最大缺点是蛋白质很难重新溶解，而且样品中的非蛋白成分很难除去，可能会丢失膜蛋白和疏水性蛋白，导致2-DE图谱上有明显的横纵条纹。
在研磨样品时加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP)用来吸附样品中富含的酚、醌类物质。
它们能通过疏水键与酚类形成复合物，离心可以去除该复合物。
然而，TCA丙酮沉淀法中与蛋白共沉淀的污染物在随后的有机溶剂清洗步骤中通常难以去除，可以通过振荡和延长蛋白沉淀在裂解缓冲液中温育时间的方法来增加蛋白的溶解能力。
在提取的过程中同时加入了TCA、β-巯基乙醇及DTT 3 种药剂可以更好的抑制蛋白质的水解及去除干扰物质。
TCA丙酮提取法耗时少且容易操作，一般作为植物蛋白提取的初始方案，该方法常用于幼嫩组织中蛋白的提取，对更为复杂的植物组织该方法并非最佳选择。
但该方法还是在植物蛋白的提取中占有重要位置，很多木本植物的样品应用该方法效果很好，如鹅掌楸叶片、巴东木莲的雌蕊柱头、槟榔叶片、银杏叶片及枝条、茶树叶片及芽、红豆杉的愈伤组织、石斛叶片等。
草本植物中的大豆叶片、生菜叶片、黄瓜叶片、番茄子叶、龙胆花芽、灰木相思叶片等应用该方法都获得了较清晰的2-DE图谱。
TCA protein precipitation protocolStock Solutions: 100% (w/v) Trichloroacetic acid (TCA)recipe: dissolve 500g TCA (as shipped) into 350 ml dH2O, store at RT.Precipitation Protocol:1. Add 1 volume of TCA stock to 4 volumes of protein sample.i.e. in 1.5ml tube with maximum vol., add 250µl TCA to 1.0ml sample.2. Incubate 10 min at 4°C.3. Spin tube in microcentrifuge at 14K rpm, 5 min.4. Remove supernatant, leaving protein pellet intact. Pellet should be formed from whitish,fluffy ppt.5. Wash pellet with 200µl cold acetone.6. Spin tune in microfuge at 14K rpm, 5min.7. Repeat steps 4-6 for a total of 2 acetone washes.8. Dry pellet by placing tube in 95°C heat block for 5-10 min to drive off acetone.9. For SDS-PAGE, add 2X or 4X sample buffer (with or without bME) and boil smaple for10 min in 95°C herat block before loading smaple onto polyacrylamide gel.2 Trizol沉淀法与TCA 丙酮沉淀法相比，Trizol沉淀蛋白质的方法可有效地除去色素、酚类等干扰电泳的化学物质，特别是对植物样品中高丰度蛋白——Rubisco1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase，通常简写为RuBisCO）。
动植物总蛋白微量提取试剂盒说明书
动植物总蛋白微量提取试剂盒说明书产品编号：BTN90707规格：50T产品及特点：本产品用于快速提取动植物总蛋白，用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析以及蛋白活性测定等。
本产品的其主要特点是：1.提取过程十分简便，匀浆离心即可，整个过程只需要十几分钟。
2.采用独特的温和裂解成分，蛋白保持天然活性。
3.适用于各种动植物组织材料，包括新鲜或冰冻的材料。
4.得到的提取物可以直接用于SDS-PAGE、2D电泳、Western印迹分析以及蛋白活性测定等下游实验。
5.一次可以处理100mg左右的样品，足够进行几十次SDS-PAGE mini胶电泳检测。
规格及成分：成分规格溶液A50ml5×SDS-PAGE上样液1ml说明书1份保存条件：常温运输，4℃保存，5×SDS-PAGE上样液短期4℃保存，长期可放-20℃保存，有效期一年。
使用方法：使用前，最好请在溶液A中加入自备的1M DTT溶液50μL。
一：匀浆法注意：对致密的实体组织（如肌肉），最好用Polytron式匀浆机匀浆处理。
1.称取动物或植物组织样品100mg，剪刀剪成黄豆大小，转移到10-15mL的塑料离心管中。
2.加入1ml溶液A，在冰上用Polytron式匀浆机匀浆，直到没有肉眼可见的组织块。
为了避免产热，可以分多次匀浆，其间放冰上让匀浆液冷却。
3.将匀浆液全部转移到1.5mL的塑料离心管中。
4.4℃12,000g离心10分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。
5.将上清液转移至一新的1.5mL塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。
如果要测定蛋白浓度，请使用BCA方法，不要使用Bradford方法（如果要使用，也需要把样品稀释10倍后再测定，否则溶液A中的成分会影响浓度侧定）。
如果要进行SDS-PAGE电泳，可取部分到离心管中，加入5×SDS-PAGE上样缓冲液（终浓度为1×），在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。
一种植物总蛋白的提取方法及其专用提取液
一种植物总蛋白的提取方法及其专用提取液
高效蛋白提取是生物学研究中许多生物活性蛋白质的重要技术，同时是天然植物来源高效产出有效复合成制剂的有效技术。
近年来，微生物静电纺丝已成为一种快速、有效和经济的植物总蛋白提取方法，可以有效地提取出植物中的多种活性蛋白，并使其得到有效的应用。
专用总蛋白提取液由水、醇类和有机酸组成，使得植物蛋白质更容易溶解，有效降低蛋白质的结构及生物活性，从而可以获得植物总蛋白，并提高抽取特定集合体的活性蛋白。
此外，专用植物总蛋白提取液还可以采用无纤维素或低纤维素方法进一步提高植物总蛋白的抽取效率，节省时间成本。
专用提取液能够提取植物总蛋白，也有助于保护植物总蛋白，具有抗氧化特性和抗酶水解性，还可以促进蛋白质的活性和高纯度纯化。
同时，专用提取液具有高灵敏度、快速性和无毒性，因此几乎所有的植物级别都可以采用此种专用提取液提取总蛋白。
综上所述，静电纺丝专用植物总蛋白提取液具有许多独特的优点，包括快速、有效、低成本、抗酶水解性和抗氧化性，是生物学研究中活性蛋白质的一种重要技术，也是植物来源高效产出有效复合剂的一种有效技术。
三氯醋酸丙酮沉淀法提取植物总蛋白注意事项
三氯醋酸丙酮沉淀法提取植物总蛋白注意事项嘿呀！今天咱们来好好聊聊“三氯醋酸丙酮沉淀法提取植物总蛋白注意事项”。
这可是个相当重要的话题呢！首先呀，咱们得搞清楚实验材料和设备的准备工作。
选择新鲜、健康的植物材料那是至关重要的呀！哎呀呀，要是材料有问题，后面的步骤可就全白搭啦！还有呢，各种实验仪器得齐全，像离心机、移液器、冰箱这些，都得事先检查好，确保能正常工作。
在操作过程中，提取液的配制可得小心谨慎呢！三氯醋酸和丙酮的比例要精准控制，稍微有点偏差，可能就会影响提取效果。
哇！还有温度的控制，这也是个关键因素。
提取过程中，温度过高或者过低都会对蛋白的稳定性产生影响。
提取时的搅拌速度和时间也不能马虎呀！搅拌速度太快，可能会破坏蛋白的结构；搅拌时间太长或太短，都无法充分提取出总蛋白。
哎呀呀，这可真是需要耐心和细心来把握的！提取结束后，离心这一步也有讲究。
离心机的转速和离心时间要根据具体情况进行调整。
转速太低，蛋白沉淀不充分；转速太高，又可能会导致蛋白变性。
接下来，蛋白沉淀的清洗也很重要呢！要用适量的冷丙酮进行清洗，去除杂质。
但要注意，清洗次数不能太多，不然会损失蛋白。
还有呀，在整个实验过程中，一定要注意保持环境的清洁和无菌。
哪怕是一点点的污染，都可能导致实验失败。
提取出来的蛋白保存也是个大学问！要选择合适的温度和保存条件，不然蛋白很容易降解或者失活。
另外，实验人员自身的操作规范也不能忽视。
必须严格按照操作规程进行，做好防护措施，避免对自身造成伤害。
哇！总之，用三氯醋酸丙酮沉淀法提取植物总蛋白，每一个环节都需要我们用心去对待，注意每一个细节，才能得到满意的结果呢！怎么样，是不是对这个提取方法的注意事项有了更清楚的了解啦？希望大家在实验中都能顺顺利利的，提取出高质量的植物总蛋白！。
植物提取蛋白质的方法
植物提取蛋白质的方法植物提取蛋白质是一项关键的实验技术，它可以用于分离纯化和研究各种不同的植物蛋白质。
在这篇文章中，我将介绍一些常见的植物提取蛋白质的方法。
一、机械法提取蛋白质机械法提取蛋白质是最常见的提取方法之一。
机械方法能够充分破碎植物细胞壁，释放细胞液中的蛋白质。
这一方法相对简单，并且适用于大多数植物材料。
首先，将植物样品切碎，例如使用搅拌器或切割机。
然后，将样品置于高速搅拌器中，加入一定量的提取缓冲液。
提取缓冲液的选择会因不同植物而异，常见的包括Tris-HCl缓冲液、PBS缓冲液等。
随后，搅拌样品，使其充分混合，一般搅拌时间为30分钟到1小时。
搅拌完成后，使用离心机将混合液离心，离心时间和速度会因样品的不同而有所变化。
离心完成后，上清液中富含蛋白质，可以用于进一步的分离纯化。
二、化学法提取蛋白质化学法提取蛋白质是一种革命性的方法，它可以应用于很多不同类型的植物材料。
化学法提取蛋白质通常使用表面活性剂来破坏细胞膜，从而释放蛋白质。
一个常用的化学法是使用Tween-20。
首先，将植物样品切碎，然后将样品与一定量的提取缓冲液一起加入离心管中。
提取缓冲液中含有Tween-20等表面活性剂，作用是破坏细胞膜结构。
然后，使用离心机将混合液离心，离心时间和速度的选择会因样品的不同而有所不同。
离心完成后，上清液中富含蛋白质，可以用于进一步的分离纯化。
化学法提取蛋白质相比机械法来说，可以更彻底地破坏细胞膜，更有效地释放蛋白质。
但是，使用化学方法也要注意表面活性剂的种类和浓度，过高的浓度可能会使得蛋白质变性。
三、酶解法提取蛋白质酶解法提取蛋白质是一种选择性高、过程温和的方法。
它利用酶的特异性作用，选择性地降解植物组织中的细胞壁，从而释放蛋白质。
酶解法的步骤较为简单。
首先，将植物样品切碎，然后加入适量的酶解缓冲液和适当浓度的酶。
酶解缓冲液的选择会因不同酶而异，常见的包括PBS缓冲液和Tris-HCl缓冲液等。
植物蛋白的提取方法
植物蛋白的提取方法
植物蛋白啊，那可是个宝！你知道从植物中提取它都有哪些奇妙的方法吗？咱就拿大豆来说吧，那可是植物蛋白的丰富来源。
可以通过浸泡，让大豆吸饱水，就像人喝足了水一样精神饱满。
然后呢，把它们磨碎，哎呀，这就像是把宝藏给挖掘出来了。
还有啊，像花生，那也是提取植物蛋白的好材料呀！把花生炒熟了，香气扑鼻，然后再去提取蛋白，感觉就像是在烹饪一道美味的大餐。
再说说小麦，通过一些特别的工艺，也能从中获取珍贵的植物蛋白呢。
这就好像是在一堆麦粒中寻找闪闪发光的金子。
提取植物蛋白的过程可不简单呢，需要精心的操作和耐心的等待。
这就跟培养一个优秀的孩子一样，得花费好多心思。
难道不是吗？
在这个过程中，每一个步骤都很关键啊。
从选择合适的植物原料，到运用恰当的提取技术，就像走在一条充满挑战的道路上，但一旦成功，那收获可是满满的呀！想想看，得到了纯净的植物蛋白，那是多么让人兴奋的事情。
而且啊，植物蛋白对我们的身体有那么多好处，能提供能量，让我们活力四射。
这就如同给身体注入了一股强大的力量，让我们能够勇往直前。
不用 animal 蛋白，咱用植物蛋白也能打造出健康又美味的食物，这多厉害呀！这就好像我们有了一把神奇的钥匙，可以打开健康生活的大门。
所以呀，大家可别小看了植物蛋白的提取，这可是一项充满魅力和价值的事情呢！。
植物蛋白质提取方法总汇
植物蛋白质提取方法总汇植物蛋白质提取方法质质一、植物质质蛋白质提取方法、根据质品重量;质品加入提取液～可根据材料不同适加入,～准质提取液放在上。
当冰11g3.5ml、把质品放在质中用液磨～磨后加入提取液中在上置;研氮研研冰静小质,。
23-4 、用心机心离离?或?38000rpm40min411100rpm20min4 、提取上液～质品制质完成。
清4蛋白质提取液,300ml、;, 11Mtris-HClPH845ml、甘油;,2Glycerol75ml、聚乙质质质;吡咯,3Polyvinylpolypyrrordone6g质质方法质质～垂直板质泳,SDS-PAGE二、植物质质蛋白质提取方法质醋酸丙质淀法—沉、在液中磨片氮研叶1、加入质品质体倍的提取液在?的件下质夜～然后心;条离?以上小质,上。
弃清23-2048000rpm1 、加入等质的浴丙质;含体冰的质基乙醇,～质后心;匀离?以上小质,～然后空真30.07%β-48000rpm1干燥淀～质用。
沉、上质前加入裂解液～室放置温分质～使蛋白充分溶于裂解液中～然后心;离?以上小430158000rpm1质或更质质质以有淀质质准,～可质质保存在没沉?待用。
4、用法定量蛋白～然后可分放入装?质用。
5Brandford-80质品,提取液,含和的质基乙醇的丙质。
裂解液,尿素溶于质菌的10%TCA0.07%β-2.7g0.2gCHAPS3ml去子水中;质质质离体,～使用前再加入的。
5ml1MDTT65ul/ml 质质方法质质向质泳～质质少～子质度小的特点,然质向质泳也同质适用～只是质泳的质质质少,双离当条会减三、质质,质膜黏目的,质质凋亡相质蛋白的表达WESTERN BLOT质用提取蛋白质步质,TRIPURE含蛋白质上液中加入丙醇,;清异每用量,1.5ml1mlTRIPURE倒质混～置室匀温10min心,离～～度～上弃清12000 g10min4加入质酸胍,乙醇,;每用量,0.3M/952ml1mlTRIPURE振质～置室温20min心, 离～～度～上弃清7500g5 min4重质质酸胍,乙醇步次0.3M/952淀中加入沉,乙醇 1002ml充分振质混～置室匀温20 min心, 离～～度～上吹干淀弃清沉7500g5min4,溶解淀沉1SDS心,离～～度10000g10min4取上清度保存;或可直接用于,-20WESTERN BLOT存在的质质,加入,后淀不溶解～质是大的一质～沉很度心后又多了白色定～离沉质晶,质质度～1SDS4SDS含量才左右。
植物蛋白质提取方法
一、植物蛋白质提取1. TCA-丙酮法（1）称量一定量的样品置于液氮预冷的研钵中，加少许PVPP，反复加液氮研磨至粉末。
（2）研磨好的样品用10 倍体积（w/V）的10%的TCA-丙酮溶液悬浮，加入0.1 M PMSF、1 M DTT 至终浓度为1 mM PMSF、10mM DTT，超声5 分钟，于-20℃静置6 小时或过夜后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。
（3）沉淀用10 倍体积于样品的丙酮溶液重悬浮，于-20℃静置1 小时后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。
（4）重复步骤（3）一次。
（5）沉淀用10 倍体积于样品的乙醇/乙醚=1:1 洗，于-20℃静置1 小时后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。
（6）重复步骤（3）一次。
（7）取出沉淀真空干燥约5 分钟，除尽有机溶剂。
（8）按10mg 干粉末加200 微升裂解液的比例，加入1 mM PMSF、10mM DTT，超声5分钟，充分溶解1 小时，10℃，35000g 离心30 分钟，上清为所需的蛋白溶液。
（9）用Bradford 法测定蛋白样品的蛋白浓度。
（10）蛋白样品溶液小量分装，-80℃保存。
注意事项：（1）TCA 有利于去除酚类色素等物质，但不利于蛋白的抽提，使用浓度不宜过高，在后面丙酮处理中，尽量除去。
（2）蛋白样品保存：样品浓度不宜过高，建议将高浓度样品适度调整，为避免反复冻融应分装保存，长期保存用-80℃，短期保存用-20℃。
（3）1M DTT：0.1542g DTT 用1ml MilliQ 水溶解，-20℃保存。
（4）0.1M PMSF：0.0174g PMSF 用1ml 异丙醇溶解，-20℃保存。
植物总蛋白提取方法
植物总蛋白提取方法•相关推荐植物总蛋白提取方法植物总蛋白提取试剂盒产品组成：产品组成规格植物蛋白提取液蛋白稳定剂蛋白酶抑制剂混合物BB-3124-150T 25ml 200ul 100ulBB-3124-2 100T 50ml 400ul 200ul储存条件：蛋白提取液、稳定剂2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期：一年。
产品简介：本试剂盒提供配套试剂，适用于从各种植物细胞、组织样本中提取总蛋白。
提取过程简单方便。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等蛋白研究。
本试剂盒提取的蛋白不可用于2D电泳。
如下游实验需要用于2D电泳、等电聚焦电泳，请使用贝博其他货号的'试剂盒。
使用方法：植物组织样本：1、提取液准备：每500ul冷的提取液中加入4ul蛋白稳定剂和2ul蛋白酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
2、取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200mg鲜嫩植物组织样本剪碎，采用以下一种方法处理：i. 加入500ul提取液A后用匀浆机/匀浆器匀浆。
ii. 置于研钵中用液氮研磨，研磨后加入500μl冷的提取液 A。
iii. 加入500ul提取液A直接置冰上研磨。
3、研磨后吸入一个预冷的干净离心管中在冰上或4℃冰箱静置1小时。
4、在4℃，12000rpm以上条件下离心10-15分钟。
5、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
细胞样本：1、提取液准备：每500ul冷的提取液中加入4ul蛋白稳定剂和2ul蛋白酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
2、细胞用PBS洗涤2次。
3、加入细胞体积5-10倍体积的蛋白提取液，振荡1小时。
4、在4℃，12000rpm以上条件下离心10-15分钟。
5、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
植物总蛋白提取试剂盒 - Coolaber
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注意事项： 1、 如果急用或者暂时没有液氮或者匀浆机，也可以正常研磨：称取植物组织样品 100 mg，剪刀剪
成碎片，转移到预冷的研钵或离心管中； 加入 1ml 植物总蛋白提取液，用研磨杵研磨，直到没有肉眼可 见的块状物。后续和液氮研磨步骤一致。
2、 植物组织中存在有大量的多酚、多糖、色素、次生代谢产物，如果需要除去植物蛋白样品中残存 的色素等杂质，可以在最后得到的上清液中加入 5 倍体积的冷丙酮或冷甲醇，混匀后-20℃放置 1 小时或 过夜，然后 4℃ 12,000 rmp/min 离心 10 min，弃上清后室温风干，然后将样品溶于自备的后续实验缓冲 液中即可。经过此纯化处理后，部分蛋白质可能会发生变性， 不能再用于活性检测。
等。采用独特的温和裂解成分，蛋白保持天然活性。得到的提取物可以直接用于 SDS-PAGE、2D 电泳、 Western 印迹分析以及蛋白活性测定等下游实验。 使用方法：
使用前请将 DTT 溶液全部加入到植物总蛋白提取试剂中。 液氮研磨：
1、 取大约 100 mg 植物组织样品，转移到预冷的研钵中。加入少量液氮，用研磨杵研磨成粉。 2、 加入 1ml 植物总蛋白提取液混匀，然后将混合液全部转移到 1.5 mL 的离心管中。 3、 4℃ 12,000 rmp/min 离心 10 分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。 4、 将上清液转移至一新的 1.5 mL 离心管中即得到蛋白溶液，可置于-80℃ 冰箱保存或立即使用。
植物总蛋白提取试剂盒
保存：4℃保存，一年有效，DTT 溶液长期-20℃保存。 包装内容：
植物蛋白质提取方法总汇
植物蛋白质提取方法总汇1.机械破碎法机械破碎法是最常用的植物蛋白质提取方法之一、该方法通过机械破碎将植物细胞壁破碎，释放出细胞质中的蛋白质。
常用的机械破碎设备有研钵研磨器、研钵超声波破碎器等。
将植物样品与一定的溶液混合，使用机械设备进行研磨或超声处理，破坏细胞结构，使蛋白质溶于溶液中。
然后对提取的植物蛋白质进行离心、过滤等操作，得到纯化的蛋白质。
2.离心沉淀法离心沉淀法是一种将植物细胞破碎后进行离心来分离蛋白质的方法。
通过高速离心，植物细胞组分根据密度的差异分层沉淀，蛋白质可在上清液中得到。
常用的离心设备有高速离心机。
将植物样品与一定的溶液混合，通过高速离心将蛋白质与其他组分分离。
然后对上清液进行过滤、浓缩等操作，得到纯化的蛋白质。
3.溶剂提取法溶剂提取法是一种利用溶剂将植物蛋白质从细胞中提取的方法。
常用的溶剂有酸、碱、有机溶剂等。
将植物样品与溶剂混合，使用搅拌或超声处理进行提取。
然后对溶液进行过滤、浓缩等操作，得到纯化的蛋白质。
4.酶解法酶解法是一种利用酶对植物样品进行消化，将蛋白质释放出来的方法。
常用的酶有蛋白酶、细胞酶等。
将植物样品与酶混合，进行一定条件下的酶解反应。
然后对溶液进行离心、过滤等操作，得到纯化的蛋白质。
5.离子交换法离子交换法是一种利用离子交换树脂分离蛋白质的方法。
将植物样品与经过离子交换树脂平衡的缓冲液混合，在一定条件下，树脂上的蛋白质会与缓冲液中的其他组分进行离子交换，使蛋白质溶液净化。
然后对树脂进行洗脱等操作，得到纯化的蛋白质。
在植物蛋白质提取过程中，需要注意以下几个问题。
首先，应根据不同植物的特点选择合适的提取方法。
其次，提取条件的选择对提取效果有很大影响，包括提取溶剂的选择、激酶浓度和反应时间的控制等。
此外，还需对提取的蛋白质进行纯化和测定等后续处理。
总的来说，植物蛋白质提取方法有许多种，具体的选择应根据实际情况来确定。
不同的提取方法有其优缺点，需要综合考虑提取效率、纯度和操作等方面的因素。
植物总蛋白提取ripa 原理
植物总蛋白提取ripa 原理
RIPA（Radio-Immunoprecipitation Assay）提取法是一种常用
的蛋白质提取方法，广泛应用于细胞生物学和分子生物学研究中。
该方法的原理是利用一种缓冲液（RIPA缓冲液）破坏细胞膜和细胞
核膜，释放细胞内的蛋白质，并且通过离心等步骤获得所需的蛋白质。
RIPA缓冲液通常包含Tris-HCl缓冲液、盐类（如氯化钠）、
非离子表面活性剂（如聚氧乙烯硬脂酸酯）、蛋白酶抑制剂和其他
添加剂。
这些成分的作用是多方面的，Tris-HCl缓冲液维持溶液的pH值；盐类维持渗透压和离子强度；非离子表面活性剂破坏细胞膜
和细胞核膜，释放蛋白质；蛋白酶抑制剂防止蛋白质降解。
在实验操作中，细胞或组织样品首先与RIPA缓冲液混合，然后
通过离心等步骤将细胞碎片和细胞核沉淀，上清液中含有所需的蛋
白质。
这些蛋白质可以用于后续的免疫印迹、酶联免疫吸附测定、
蛋白质纯化等实验。
RIPA提取法的优点在于可以有效地提取细胞内的蛋白质，同时
不会对蛋白质的活性造成影响。
然而，RIPA提取法也有一些局限性，
比如对于一些特定的膜蛋白或核蛋白，可能需要使用其他的提取方法。
总的来说，RIPA提取法通过破坏细胞膜和细胞核膜，释放细胞内的蛋白质，并且通过离心等步骤获得所需的蛋白质，是一种常用且有效的蛋白质提取方法。
植物总蛋白的提取
• 样品经细胞破碎后，各种蛋白质被释放 出来。根据不同蛋白质的特性，选择不 同的溶剂进行抽提：
• 例如：水溶性蛋白质可以用中性缓冲 溶液抽提，
• 酸性蛋白质用稀碱性溶液抽提
• 脂溶性蛋白则可用有机溶剂抽提等
• 得到的粗抽提物，经离心除去固体杂
质后，在通过盐析，等电点沉淀或有
机溶剂沉淀等方法处理，即得到蛋白
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二、植物组织蛋白质提取方法
丙酮沉淀法
1、在液氮中研磨叶片
2、加入样品体积3倍的冰浴丙酮在-20℃的 条件静置10-30min ，然后离心4℃ 12000rpm 10min,弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β巯基乙醇），摇匀后离心（4℃12000rpm 10min,弃上清。
4、吹干沉淀，样品制备完成。
操作步骤
一、植物组织蛋白质提取方法 1、把样品放在研钵中用液氮研磨，
研磨后加入1.5ml离心管中。 2、根据样品重量（0.5g样品加入
400ul提取液，可根据材料不同适当加 入），静置10-30min。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃ 或11100rpm20min4℃
4、提取上清液，样品制备完成。
实验五 植物总蛋白的提取
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一、实验目的： 掌握植物总蛋白提取的原理 了解蛋白提取操作过程
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二、实验原理
• 蛋白质存在于生物体的组织细胞中，在分离纯 化之前必须采用适当方法使蛋白质以溶解状态 释放出来。通常是先将生物组织进行机械破碎。 由于一般的机械方法不能破坏细胞，因此还需 要进一步将细胞破碎，根据细胞的结构特点， 可以选择不同的方法进行破碎，常用的方法有 研磨法，超声波法，冻融法和酶解法等。
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一提取植物总蛋白（以植物花粉为例）：
1.三氯乙酸法（TCA）/丙酮(acetone)提取花粉总蛋白质
花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，用含10%TCA和1%DTT的acetone沉淀蛋白质，-20度2个小时(必要时过夜)，4度25000g离心20min后去上清，用含1%DTT的acetone溶液悬浮沉淀，-20度1个小时,再次离心去上清，将真空干燥的沉淀在等电聚焦缓冲液中(8M urea，20mmDTT,4%CHAPS,2%ampholyte,PH:3-10) 20度震荡1小时，20度25000g离心20min，收集上清，沉淀再次用IEF缓冲液离心收集上清，可为后续试验做准备。
2．苯酚（phenol）提取法
花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，添加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）继续研磨5min,加提取缓冲液（0.1mol/L 8.8 Tr i s –HCl，5mmEDTA,20mmDTT,30%sucrose）。
将样本转移至离心管中，4度震荡30min，25000g离心10min，将上层的phenol层转移进另一个试管，将下边的水相层加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）及提取缓冲液，震荡，离心，将再次收集到的phenol与前边收集的混合，加5倍体积的0.1 M ammonium acetate in 100%methanol，在-20度震荡沉淀蛋白质，必要时过夜，4度 25000g离心10min，将沉淀用0.1 M ammonium acetate in 100%methanol及80% acetone各洗两次, 含10mmDTT的80% acetone再洗一次，在每一步中蛋白沉淀都要完全重悬— -20度震荡30min，4度 25000g离心20min，洗剂完成后，沉淀真空干燥，IEF buffer提取蛋白质，如方法1。
3．直接IEF buffer提取蛋白质
直接IEF buffer提取蛋白质，花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，然后加入IEF buffer(8M尿素，20mmDTT,4%CHAPS，5mmEDTA，5mmTris base,2%ampholyte,PH:3-10).如方法1。
4．Tris-HCL缓冲液法
花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，加入Tris-HCL缓冲液（50mm,8.8,Tris-HCL, 5mmEDTA,20mmDTT,100mmKCL,2mmPMSF）,在融化后，混合液在4度放30min, 25000g离心20min,收集上清，对沉淀重新提取一次，将收集到的上清混合，用5倍体积的100%丙酮沉淀蛋白质，-20度孵育2h,离心后，用80%的丙酮洗剂沉淀2次，IEF buffer重悬沉淀，方法如1
5．利用Bradford试剂法估测提取的总蛋白浓度，并调整浓度行蛋白电泳，-80度保存。
本人翻译的，具体方法流程见附件原文。
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