植物蛋白质提取方法总汇

蛋白质提取方法(个人总结篇)

植物蛋白质提取方法汇总（本人经验总结）一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。

2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。

3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清液，样品制备完成。

蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！二、植物组织蛋白质提取方法氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm 以上1小时）弃上清。

3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm 以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。

4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。

5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。

药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。

裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M 的DTT65ul/ml。

这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！三、组织：肠黏膜目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g，5 min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。

植物总蛋白提取

一提取植物总蛋白（以植物花粉为例）：1.三氯乙酸法（TCA）/丙酮(acetone)提取花粉总蛋白质花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，用含10%TCA和1%DTT的acetone沉淀蛋白质，-20度2个小时(必要时过夜)，4度25000g离心20min后去上清，用含1%DTT的acetone溶液悬浮沉淀，-20度1个小时,再次离心去上清，将真空干燥的沉淀在等电聚焦缓冲液中(8M urea，20mmDTT,4%CHAPS,2%ampholyte,PH:3-10) 20度震荡1小时，20度25000g离心20min，收集上清，沉淀再次用IEF缓冲液离心收集上清，可为后续试验做准备。

2．苯酚（phenol）提取法花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，添加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）继续研磨5min,加提取缓冲液（0.1mol/L 8.8 Tr i s –HCl，5mmEDTA,20mmDTT,30%sucrose）。

将样本转移至离心管中，4度震荡30min，25000g离心10min，将上层的phenol层转移进另一个试管，将下边的水相层加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）及提取缓冲液，震荡，离心，将再次收集到的phenol与前边收集的混合，加5倍体积的0.1 M ammonium acetate in 100%methanol，在-20度震荡沉淀蛋白质，必要时过夜，4度 25000g离心10min，将沉淀用0.1 M ammonium acetate in 100%methanol及80% acetone各洗两次, 含10mmDTT的80% acetone再洗一次，在每一步中蛋白沉淀都要完全重悬— -20度震荡30min，4度 25000g离心20min，洗剂完成后，沉淀真空干燥，IEF buffer提取蛋白质，如方法1。

3．直接IEF buffer提取蛋白质直接IEF buffer提取蛋白质，花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，然后加入IEF buffer(8M尿素，20mmDTT,4%CHAPS，5mmEDTA，5mmTris base,2%ampholyte,PH:3-10).如方法1。

植物蛋白质提取方法

一、植物蛋白质提取1. TCA-丙酮法（1）称量一定量的样品置于液氮预冷的研钵中，加少许PVPP，反复加液氮研磨至粉末。

（2）研磨好的样品用10 倍体积（w/V）的10%的TCA-丙酮溶液悬浮，加入0.1 M PMSF、1 M DTT 至终浓度为1 mM PMSF、10mM DTT，超声5 分钟，于-20℃静置6 小时或过夜后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。

（3）沉淀用10 倍体积于样品的丙酮溶液重悬浮，于-20℃静置1 小时后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。

（4）重复步骤（3）一次。

（5）沉淀用10 倍体积于样品的乙醇/乙醚=1:1 洗，于-20℃静置1 小时后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。

（6）重复步骤（3）一次。

（7）取出沉淀真空干燥约5 分钟，除尽有机溶剂。

（8）按10mg 干粉末加200 微升裂解液的比例，加入1 mM PMSF、10mM DTT，超声5分钟，充分溶解1 小时，10℃，35000g 离心30 分钟，上清为所需的蛋白溶液。

（9）用Bradford 法测定蛋白样品的蛋白浓度。

（10）蛋白样品溶液小量分装，-80℃保存。

注意事项：（1）TCA 有利于去除酚类色素等物质，但不利于蛋白的抽提，使用浓度不宜过高，在后面丙酮处理中，尽量除去。

（2）蛋白样品保存：样品浓度不宜过高，建议将高浓度样品适度调整，为避免反复冻融应分装保存，长期保存用-80℃，短期保存用-20℃。

（3）1M DTT：0.1542g DTT 用1ml MilliQ 水溶解，-20℃保存。

（4）0.1M PMSF：0.0174g PMSF 用1ml 异丙醇溶解，-20℃保存。

蛋白质的十种提取方法

蛋白质的十种提取方法.txt大人物的悲哀在于他们需要不停地做出选择；而小人物的悲哀在于他们从来没有选择的机会。

男人因沧桑而成熟，女人因成熟而沧桑。

男人有了烟，有了酒，也就有了故事；女人有了钱，有了资色，也就有了悲剧。

蛋白质提取方法-------列举10种方法[ 来源：绿谷生物网点击数： 4587 更新时间： 2008年05月30日 ][ 收藏本文 ] 一、植物组织蛋白质提取方法（summer）1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。

2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4 小时）。

3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。

蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！二、植物组织蛋白质提取方法 (summer)三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。

3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1 小时），然后真空干燥沉淀，备用。

4、上样前加入裂解液，室温放置30 分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm 以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。

5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。

药品：提取液：含10%TCA 和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g 尿素0.2gCHAPS 溶于3ml 灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M 的DTT65ul/ml。

这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！三、组织：肠黏膜（newinbio）目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE 提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE 用量）振荡，置室温20min离心： 7500g，5 min，4 度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2 次沉淀中加入100％乙醇 2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20 度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1％SDS 后沉淀不溶解，还是很大的一块，4 度离心后又多了白色沉定，SDS 结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。

不同组织的蛋白提取方法

不同组织的蛋白提取方法•相关推荐不同组织的蛋白提取方法不同组织的蛋白提取方法一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。

2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。

3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。

蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！或者用三氯醋酸—丙酮沉淀法，离子浓度小的1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3-204℃8000rpm以上13、的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上14、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000r pm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。

5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。

药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。

二、组织：肠黏膜应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于BLOT存在的问题：加入1％SDS4度离心后又多了白色沉定，SDS左右。

植物蛋白提取

植物全蛋白提取方法：TCA丙酮沉淀法、Tris-HC1法、Trizol沉淀法提取法。

1 TCA丙酮沉淀法基于蛋白在酸或疏水条件下变性使蛋白浓缩并去除污染物原理的TCA丙酮沉淀法，最早用于小麦蛋白的提取，是目前提取植物蛋白的常用方法之一。

具有降低次生代谢物质的干扰、减少蛋白降解等优点。

TCA能有效地抑制蛋白酶对蛋白质的水解作用，保证在制样过程中蛋白质不被降解；丙酮溶液能除去样品中的酚类及色素等干扰物质，同时实验过程中采用的高速离心办法能较好地去除多糖的影响。

然而该方法的一个最大缺点是蛋白质很难重新溶解，而且样品中的非蛋白成分很难除去，可能会丢失膜蛋白和疏水性蛋白，导致2-DE图谱上有明显的横纵条纹。

在研磨样品时加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP)用来吸附样品中富含的酚、醌类物质。

它们能通过疏水键与酚类形成复合物，离心可以去除该复合物。

然而，TCA丙酮沉淀法中与蛋白共沉淀的污染物在随后的有机溶剂清洗步骤中通常难以去除，可以通过振荡和延长蛋白沉淀在裂解缓冲液中温育时间的方法来增加蛋白的溶解能力。

在提取的过程中同时加入了TCA、β-巯基乙醇及DTT 3 种药剂可以更好的抑制蛋白质的水解及去除干扰物质。

TCA丙酮提取法耗时少且容易操作，一般作为植物蛋白提取的初始方案，该方法常用于幼嫩组织中蛋白的提取，对更为复杂的植物组织该方法并非最佳选择。

但该方法还是在植物蛋白的提取中占有重要位置，很多木本植物的样品应用该方法效果很好，如鹅掌楸叶片、巴东木莲的雌蕊柱头、槟榔叶片、银杏叶片及枝条、茶树叶片及芽、红豆杉的愈伤组织、石斛叶片等。

草本植物中的大豆叶片、生菜叶片、黄瓜叶片、番茄子叶、龙胆花芽、灰木相思叶片等应用该方法都获得了较清晰的2-DE图谱。

TCA protein precipitation protocolStock Solutions: 100% (w/v) Trichloroacetic acid (TCA)recipe: dissolve 500g TCA (as shipped) into 350 ml dH2O, store at RT.Precipitation Protocol:1. Add 1 volume of TCA stock to 4 volumes of protein sample.i.e. in 1.5ml tube with maximum vol., add 250µl TCA to 1.0ml sample.2. Incubate 10 min at 4°C.3. Spin tube in microcentrifuge at 14K rpm, 5 min.4. Remove supernatant, leaving protein pellet intact. Pellet should be formed from whitish,fluffy ppt.5. Wash pellet with 200µl cold acetone.6. Spin tune in microfuge at 14K rpm, 5min.7. Repeat steps 4-6 for a total of 2 acetone washes.8. Dry pellet by placing tube in 95°C heat block for 5-10 min to drive off acetone.9. For SDS-PAGE, add 2X or 4X sample buffer (with or without bME) and boil smaple for10 min in 95°C herat block before loading smaple onto polyacrylamide gel.2 Trizol沉淀法与TCA 丙酮沉淀法相比，Trizol沉淀蛋白质的方法可有效地除去色素、酚类等干扰电泳的化学物质，特别是对植物样品中高丰度蛋白——Rubisco1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase，通常简写为RuBisCO）。

植物蛋白质提取方法

植物蛋白质提取方法1.机械破碎法机械破碎法是最常用的蛋白质提取方法之一、这种方法使用高速离心或超声波破碎将植物细胞破碎，释放细胞内的蛋白质。

然后通过离心或过滤将残渣去除，得到植物蛋白质溶液。

2.酸碱提取法酸碱提取法是利用酸碱条件使植物细胞膜溶解，从而释放出蛋白质。

首先将植物材料切碎，然后浸泡在酸碱溶液中。

酸性条件下可溶解细胞壁，碱性条件下可溶解细胞质膜，从而释放蛋白质。

最后通过离心或过滤将杂质去除，得到纯化的植物蛋白质。

3.毛细管电泳法毛细管电泳法是一种利用电场和毛细管将植物蛋白质按照电荷和大小进行分离的方法。

首先将植物材料研磨成粉末，然后将粉末溶解在缓冲液中，再将溶液注入毛细管。

通过施加高电压，蛋白质会被带动在毛细管中移动，根据蛋白质的电荷和大小的不同，移动速度也不同，从而实现分离。

4.总蛋白质沉淀法总蛋白质沉淀法是一种简单且高效的蛋白质提取方法。

首先将植物样品研磨成粉末，然后加入缓冲液进行溶解。

接着加入有机溶剂如酒精或丙酮，使蛋白质沉淀。

将沉淀经过离心后，去除上清液，然后用溶液再次洗涤沉淀。

最后用适当的溶剂溶解沉淀，得到纯净的植物蛋白质。

5.亲和层析法亲和层析法是利用一些特定亲和剂与目标蛋白质之间的特异结合来分离纯化蛋白质的方法。

首先将亲和剂固定在其中一种固定相上，列入柱中。

然后将植物蛋白质样品加入柱中，目标蛋白质与亲和剂结合，其他杂质被洗脱。

然后调整条件，将目标蛋白质洗脱下来，得到纯化的植物蛋白质。

综上所述，植物蛋白质提取方法有多种选择，根据实际需求和植物材料的特性，可以选择合适的提取方法进行蛋白质的纯化。

这些方法都有各自的优缺点，需要根据具体的实验条件和目的进行选择。

植物提取蛋白质的方法

植物提取蛋白质的方法植物提取蛋白质是一项关键的实验技术，它可以用于分离纯化和研究各种不同的植物蛋白质。

在这篇文章中，我将介绍一些常见的植物提取蛋白质的方法。

一、机械法提取蛋白质机械法提取蛋白质是最常见的提取方法之一。

机械方法能够充分破碎植物细胞壁，释放细胞液中的蛋白质。

这一方法相对简单，并且适用于大多数植物材料。

首先，将植物样品切碎，例如使用搅拌器或切割机。

然后，将样品置于高速搅拌器中，加入一定量的提取缓冲液。

提取缓冲液的选择会因不同植物而异，常见的包括Tris-HCl缓冲液、PBS缓冲液等。

随后，搅拌样品，使其充分混合，一般搅拌时间为30分钟到1小时。

搅拌完成后，使用离心机将混合液离心，离心时间和速度会因样品的不同而有所变化。

离心完成后，上清液中富含蛋白质，可以用于进一步的分离纯化。

二、化学法提取蛋白质化学法提取蛋白质是一种革命性的方法，它可以应用于很多不同类型的植物材料。

化学法提取蛋白质通常使用表面活性剂来破坏细胞膜，从而释放蛋白质。

一个常用的化学法是使用Tween-20。

首先，将植物样品切碎，然后将样品与一定量的提取缓冲液一起加入离心管中。

提取缓冲液中含有Tween-20等表面活性剂，作用是破坏细胞膜结构。

然后，使用离心机将混合液离心，离心时间和速度的选择会因样品的不同而有所不同。

离心完成后，上清液中富含蛋白质，可以用于进一步的分离纯化。

化学法提取蛋白质相比机械法来说，可以更彻底地破坏细胞膜，更有效地释放蛋白质。

但是，使用化学方法也要注意表面活性剂的种类和浓度，过高的浓度可能会使得蛋白质变性。

三、酶解法提取蛋白质酶解法提取蛋白质是一种选择性高、过程温和的方法。

它利用酶的特异性作用，选择性地降解植物组织中的细胞壁，从而释放蛋白质。

酶解法的步骤较为简单。

首先，将植物样品切碎，然后加入适量的酶解缓冲液和适当浓度的酶。

酶解缓冲液的选择会因不同酶而异，常见的包括PBS缓冲液和Tris-HCl缓冲液等。

植物蛋白质提取方法总汇

1、根据样品重量(1g样品加进3.5ml提取液，可根据材料不同适当加进)，预备提取液放在冰上。

2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加进提取液中在冰上静置(3-4小时)。

3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清液，样品制备完成。

蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl(PH8)45ml2、甘油(Glycerol)75ml3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加进样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。

3、加进等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇)，摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时)，然后真空干燥沉淀，备用。

4、上样前加进裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准)，可临时保存在4℃待用。

5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放进-80℃备用。

药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。

裂解液：2.7g 尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的往离子水中(终体积为5ml)，使用前再加进1M 的DTT65ul/ml。

这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！目的：WESTERNBLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加进异丙醇：(1.5ml每1mlTRIPURE用量) 倒转混匀，置室温10min离心：12000g，10min，4度，弃上清加进0.3M盐酸胍/95％乙醇：(2ml每1mlTRIPURE用量)振荡，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加进100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存(或可直接用于WESTERNBLOT)存在的题目：加进1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。

蛋白提取方法

蛋白质提取的方法总汇 2005-4-15 23:00:00 来源：生命经1、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。

2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。

3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。

蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！2、植物组织蛋白质提取方法三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。

3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。

4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。

5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。

药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。

这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！3、组织：肠黏膜目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心： 7500g，5 min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇 2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。

植物蛋白质的提取方法及举例

植物蛋白质的提取方法及举例1.机械破碎法机械破碎法是一种常见的植物蛋白质提取方法，其原理是通过物理力学方法将植物细胞结构破碎，使蛋白质从细胞中释放出来。

具体步骤包括：将植物材料切碎，加入缓冲液，经过高压或高速搅拌破碎，然后离心去除残渣得到植物蛋白提取液。

常用的机械破碎设备有搅拌器、超声波处理器和磨碎器等。

案例：以大豆为例，先将大豆材料研磨成颗粒状，然后添加适量的缓冲液，在高速搅拌器中进行破碎处理，最后离心去除渣滓，得到大豆蛋白提取液。

2.酶解法酶解法是利用酶的特异性作用从植物细胞中释放蛋白质的方法。

酶可降解细胞壁和膜，使蛋白质从细胞中释放出来。

常用的酶解剂有纤维素酶、蛋白酶和淀粉酶等。

具体步骤包括：将植物材料切碎，加入相应酶解液，经过适当时间的酶解作用，然后进行离心或其他处理，得到植物蛋白提取液。

案例：以豌豆为例，将豌豆材料切碎，加入含有纤维素酶的酶解液，经过酶解反应后，进行离心去除沉淀，得到豌豆蛋白提取液。

3.酸碱提取法酸碱提取法是通过调节植物材料的pH值，使蛋白质从植物细胞中溶出的方法。

具体步骤包括：将植物材料切碎，加入一定浓度的酸或碱液，调节pH值促使蛋白质溶解，然后进行离心或其他处理，得到植物蛋白提取液。

案例：以玉米为例，将玉米材料切碎，然后加入适量浓度的苏打水，调节pH值，使玉米蛋白质溶解，最后进行离心去除沉淀，得到玉米蛋白提取液。

4.离心法离心法是通过离心力将植物蛋白质从细胞碎片或植物材料中分离出来的方法。

具体步骤包括：将植物材料破碎或酶解，然后进行离心分离，收集上清液中的蛋白质。

案例：以大麦为例，将大麦材料破碎或酶解后，进行离心分离，收集上清液中的大麦蛋白质。

本文介绍了机械破碎法、酶解法、酸碱提取法和离心法等植物蛋白质提取方法，并给出了相关的提取案例。

这些方法各有优劣，选择提取方法应根据具体需求和材料特性来确定。

植物蛋白质的提取对于食品工业、医药和保健品等领域具有重要意义，能够广泛应用于食品增值、功能食品研发和药物制备等方面。

植物蛋白质提取方法总汇

植物蛋白质提取方法总汇1.机械破碎法机械破碎法是最常用的植物蛋白质提取方法之一、该方法通过机械破碎将植物细胞壁破碎，释放出细胞质中的蛋白质。

常用的机械破碎设备有研钵研磨器、研钵超声波破碎器等。

将植物样品与一定的溶液混合，使用机械设备进行研磨或超声处理，破坏细胞结构，使蛋白质溶于溶液中。

然后对提取的植物蛋白质进行离心、过滤等操作，得到纯化的蛋白质。

2.离心沉淀法离心沉淀法是一种将植物细胞破碎后进行离心来分离蛋白质的方法。

通过高速离心，植物细胞组分根据密度的差异分层沉淀，蛋白质可在上清液中得到。

常用的离心设备有高速离心机。

将植物样品与一定的溶液混合，通过高速离心将蛋白质与其他组分分离。

然后对上清液进行过滤、浓缩等操作，得到纯化的蛋白质。

3.溶剂提取法溶剂提取法是一种利用溶剂将植物蛋白质从细胞中提取的方法。

常用的溶剂有酸、碱、有机溶剂等。

将植物样品与溶剂混合，使用搅拌或超声处理进行提取。

然后对溶液进行过滤、浓缩等操作，得到纯化的蛋白质。

4.酶解法酶解法是一种利用酶对植物样品进行消化，将蛋白质释放出来的方法。

常用的酶有蛋白酶、细胞酶等。

将植物样品与酶混合，进行一定条件下的酶解反应。

然后对溶液进行离心、过滤等操作，得到纯化的蛋白质。

5.离子交换法离子交换法是一种利用离子交换树脂分离蛋白质的方法。

将植物样品与经过离子交换树脂平衡的缓冲液混合，在一定条件下，树脂上的蛋白质会与缓冲液中的其他组分进行离子交换，使蛋白质溶液净化。

然后对树脂进行洗脱等操作，得到纯化的蛋白质。

在植物蛋白质提取过程中，需要注意以下几个问题。

首先，应根据不同植物的特点选择合适的提取方法。

其次，提取条件的选择对提取效果有很大影响，包括提取溶剂的选择、激酶浓度和反应时间的控制等。

此外，还需对提取的蛋白质进行纯化和测定等后续处理。

总的来说，植物蛋白质提取方法有许多种，具体的选择应根据实际情况来确定。

不同的提取方法有其优缺点，需要综合考虑提取效率、纯度和操作等方面的因素。

植物组织蛋白质提取方法

植物组织蛋白质提取方法•相关推荐植物组织蛋白质提取方法用200毫摩每升的tris-cl 和62.5毫摩每升的tris-cl,我们研究室一般用１００毫摩每升的tris-cl，pH 8.0 ．另外，最好加１５０毫摩每升的ＮaCl，用来分离以弱电荷结合到多糖上的蛋白。

2我提的蛋白难溶，请问怎么解决？1、请问这是为什么呢？怎么解决？2、溶解时是先在100℃沸水浴后在涡旋吗？3、涡旋时产生大量泡沫，对蛋白有影响吗？4、是在常温溶解还是在4℃？或-20℃？5、一般溶解需要多长时间？怎样才算溶解充分了？我也是做植物叶片的.，建议你可以用TCA-丙酮沉淀，方法如下：1、在液氮中研磨叶片30min，加PVP，和石英砂2、加入样品体积3倍的提取液(丙酮溶液1)在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃10000rpm以上1小时）弃上清。

3. 每份加入9ml丙酮溶液II，捣碎沉淀，常温振动混匀，-20℃沉淀1h；10000rpm，4℃离心15min，弃上清.4. 每份加入9ml丙酮溶液II，常温振动混匀，-20℃沉淀1h；10000rpm，4℃离心15min，弃上清.5. 每份加入9ml 80%丙酮溶液III, 常温振动混匀，-20℃沉淀1h, 10000rpm，4℃离心15min，弃上清6．干燥成硬块，磨成粉磨-20℃保存待用。

第二个问题：37度水浴第三个问题：涡旋时产生大量泡沫，没有影响第四个问题：37度溶解第五个问题1个小时，中间混匀数次出现这种情况是很正常的，要是全部都溶了倒是不太正常。

用沉淀法浓缩蛋白都存在一个变性的问题，在具体的操作过程中，有一部分蛋白变性了，所以会不溶解。

操作的时候尽量保持低温！溶解的时候可以在常温下，蛋白变成粉末后，立即加1*SDS上样缓冲液，用加样器吹打，大约5分钟就好，可以用来进行下一步的实验了。

也可以在4度溶解过夜。

涡旋时产生大量泡沫，个人认为影响不大一般溶解半个小时就很充分了，但仍会有很多不溶物！可以离心弃掉！丙酮沉淀之后要干燥，这个过程一定不要时间太长，不然样品干燥得过了，就很难溶了。

植物蛋白质的提取方法及举例

植物蛋白质提取关键点：a、种子研磨充分b、蛋白质尽量溶解c、蛋白质尽量沉淀所需药品：NaCl、C2H5OH、(NH4)2SO4、NaOH、H Cl、CH3COOH﹑Na2SO4﹑冰水注：Na2SO4,芒硝，禁与强酸、铝、镁相配。

药品溶解度：NaCl，36g[20℃]; (NH4)2SO4，76.7g[25℃]; Na2SO4, 19.5g[20℃]其中溶解蛋白质的常用中性盐是NaCl、(NH4)2SO4、Na2SO4、Mg2SO4等①、盐析法﹕原理：蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。

蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。

同时，中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，之后蛋白质分子之间聚集而沉淀。

由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。

简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。

步骤：溶解蛋白质→离心→取上清液，盐析（低温）→离心沉淀蛋白质→透析②﹑等电点法（本方法中最好不要用Na2SO4）：原理：在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。

等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小，从而有利于悬浮液的过滤。

步骤：溶解蛋白质→离心→取上清液，调节PH，析出蛋白质→离心沉淀蛋白质→透析③、有机溶剂法：原理：有机溶剂能降低溶液的电解常数，从而增加蛋白质分子上不同电荷的引力，导致溶解度的降低；另外，有机溶剂与水的作用，能破坏蛋白质的水化膜，故蛋白质在一定浓度的有机溶剂中的溶解度差异而分离的方法，称“有机溶剂分段沉淀法”，它常用于蛋白质或酶的提纯。

植物蛋白提取

植物全蛋白提取方法：TCA丙酮沉淀法、Tris-HCl法、Trizol沉淀法提取法。

1TCA丙酮沉淀法基于蛋白在酸或疏水条件下变性使蛋白浓缩并去除污染物原理的TCA丙酮沉淀法，最早用于小麦蛋白的提取，是目前提取植物蛋白的常用方法之一。

具有降低次生代物质的干扰、减少蛋白降解等优点。

TCA能有效地抑制蛋白酶对蛋白质的水解作用，保证在制样过程中蛋白质不被降解；丙酮溶液能除去样品中的酚类及色素等干扰物质，同时实验过程中采用的高速离心办法能较好地去除多糖的影响。

然而该方法的一个最大缺点是蛋白质很难重新溶解，而且样品中的非蛋白成分很难除去，可能会丢失膜蛋白和疏水性蛋白，导致2-DE图谱上有明显的横纵条纹。

在研磨样品时加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP )或交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP )用来吸附样品中富含的酚、醌类物质。

它们能通过疏水键与酚类形成复合物，离心可以去除该复合物。

然而，TCA丙酮沉淀法中与蛋白共沉淀的污染物在随后的有机溶剂清洗步骤常难以去除，可以通过振荡和延长蛋白沉淀在裂解缓冲液中温育时间的方法来增加蛋白的溶解能力。

在提取的过程中同时加入了TCA、B-巯基乙醇及DTT 3种药剂可以更好的抑制蛋白质的水解及去除干扰物质。

TCA丙酮提取法耗时少且容易操作，一般作为植物蛋白提取的初始方案，该方法常用于幼嫩组织中蛋白的提取，对更为复杂的植物组织该方法并非最佳选择。

但该方法还是在植物蛋白的提取中占有重要位置，很多木本植物的样品应用该方法效果很好，如鹅掌楸叶片、巴东木莲的雌蕊柱头、槟榔叶片、银杏叶片及枝条、茶树叶片及芽、红豆杉的愈伤组织、石斛叶片等。

草本植物中的大豆叶片、生菜叶片、黄瓜叶片、番茄子叶、龙胆花芽、灰木相思叶片等应用该方法都获得了较清晰的2-DE图谱。

TCA protein precipitation protocolStock Solutions: 100% (w/v) Trichloroacetic acid (TCA) recipe: dissolve 500g TCA (as shipped) into 350 ml dH2O, store at RT. Precipitation Protocol:1.Add 1 volume of TCA stock to 4 volumes of protein sample.1. e. in 1.5ml tube with maximum vol., add 250讥TCA to 1.0ml sample.2.Incubate 10 min at 4°C.3.Spin tube in microcentrifuge at 14K rpm, 5 min.4.Remove supernatant, leaving protein pellet intact. Pellet should be formed from whitish,fluffy ppt.5.Wash pellet with 200^l cold acetone.6.Spin tune in microfuge at 14K rpm, 5min.7.Repeat steps 4-6 for a total of 2 acetone washes.8.Dry pellet by placing tube in 95°C heat block for 5-10 min to drive off acetone.9.For SDS-PAGE, add 2X or 4X sample buffer (with or without bME) and boil smaple for10 min in 95°C herat block before loading smaple onto polyacrylamide gel.2Trizol沉淀法与TCA丙酮沉淀法相比，Trizol沉淀蛋白质的方法可有效地除去色素、酚类等干扰电泳的化学物质，特别是对植物样品中高丰度蛋白Rubisco1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/ 加氧酶(Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase，通常简写为RuBisCO)。

植物蛋白质提取方法总汇

植物蛋白质提取方法总汇植物蛋白质提取方法质质一、植物质质蛋白质提取方法、根据质品重量;质品加入提取液～可根据材料不同适加入,～准质提取液放在上。

当冰11g3.5ml、把质品放在质中用液磨～磨后加入提取液中在上置;研氮研研冰静小质,。

23-4 、用心机心离离?或?38000rpm40min411100rpm20min4 、提取上液～质品制质完成。

清4蛋白质提取液,300ml、;, 11Mtris-HClPH845ml、甘油;,2Glycerol75ml、聚乙质质质;吡咯,3Polyvinylpolypyrrordone6g质质方法质质～垂直板质泳,SDS-PAGE二、植物质质蛋白质提取方法质醋酸丙质淀法—沉、在液中磨片氮研叶1、加入质品质体倍的提取液在?的件下质夜～然后心;条离?以上小质,上。

弃清23-2048000rpm1 、加入等质的浴丙质;含体冰的质基乙醇,～质后心;匀离?以上小质,～然后空真30.07%β-48000rpm1干燥淀～质用。

沉、上质前加入裂解液～室放置温分质～使蛋白充分溶于裂解液中～然后心;离?以上小430158000rpm1质或更质质质以有淀质质准,～可质质保存在没沉?待用。

4、用法定量蛋白～然后可分放入装?质用。

5Brandford-80质品,提取液,含和的质基乙醇的丙质。

裂解液,尿素溶于质菌的10%TCA0.07%β-2.7g0.2gCHAPS3ml去子水中;质质质离体,～使用前再加入的。

5ml1MDTT65ul/ml 质质方法质质向质泳～质质少～子质度小的特点,然质向质泳也同质适用～只是质泳的质质质少,双离当条会减三、质质,质膜黏目的,质质凋亡相质蛋白的表达WESTERN BLOT质用提取蛋白质步质,TRIPURE含蛋白质上液中加入丙醇,;清异每用量,1.5ml1mlTRIPURE倒质混～置室匀温10min心,离～～度～上弃清12000 g10min4加入质酸胍,乙醇,;每用量,0.3M/952ml1mlTRIPURE振质～置室温20min心, 离～～度～上弃清7500g5 min4重质质酸胍,乙醇步次0.3M/952淀中加入沉,乙醇 1002ml充分振质混～置室匀温20 min心, 离～～度～上吹干淀弃清沉7500g5min4,溶解淀沉1SDS心,离～～度10000g10min4取上清度保存;或可直接用于,-20WESTERN BLOT存在的质质,加入,后淀不溶解～质是大的一质～沉很度心后又多了白色定～离沉质晶,质质度～1SDS4SDS含量才左右。

植物蛋白质提取方法总汇

植物蛋白质提取方法总汇一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。

2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。

3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清液，样品制备完成。

蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！二、植物组织蛋白质提取方法氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。

3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。

4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。

5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。

药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。

裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml 灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。

这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！三、组织：肠黏膜目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g，5 min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。

植物蛋白质的提取方法及举例

植物蛋白质提取关键点：a、种子研磨充分 b、蛋白质尽量溶解 c、蛋白质尽量沉淀所需药品：NaCl、C2H5OH、(NH4)2SO4、NaOH、H Cl、CH3COOH﹑Na2SO4﹑冰水注：Na2SO4,芒硝，禁与强酸、铝、镁相配。

药品溶解度：NaCl，36g[20℃]; (NH4)2SO4，76.7g[25℃]; Na2SO4, 19.5g[20℃]其中溶解蛋白质的常用中性盐是NaCl、(NH4)2SO4、Na2SO4、Mg2SO4等①、盐析法﹕原理：蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。

蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。

同时，中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，之后蛋白质分子之间聚集而沉淀。

由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。

简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。

步骤：溶解蛋白质→离心→取上清液，盐析（低温）→离心沉淀蛋白质→透析②﹑等电点法（本方法中最好不要用Na2SO4）：原理：在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。

等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小，从而有利于悬浮液的过滤。

步骤：溶解蛋白质→离心→取上清液，调节PH，析出蛋白质→离心沉淀蛋白质→ 透析③、有机溶剂法：原理：有机溶剂能降低溶液的电解常数，从而增加蛋白质分子上不同电荷的引力，导致溶解度的降低；另外，有机溶剂与水的作用，能破坏蛋白质的水化膜，故蛋白质在一定浓度的有机溶剂中的溶解度差异而分离的方法，称“有机溶剂分段沉淀法”，它常用于蛋白质或酶的提纯。