植物总蛋白提取演示教学

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叶绿体蛋白提取方法(双向电泳)

叶绿体蛋白提取试剂盒

(双向电泳用)

产品组成：

产品组成 BB-31836-1 BB-31836-2

规格 50 assays 100 assays

提取液A 200ml 400ml

提取液B 25ml 50ml

蛋白酶抑制剂混合物 100ul 200ul

产品简介：

贝博叶绿体蛋白提取试剂盒（双向电泳用）用简便快速的方法可以从各种植物样本中提

取叶绿体蛋白，提取过程简单方便，可在一小时内提取得到高质量的叶绿体蛋白。该试剂盒

含有蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。

使用方法：

1.取新鲜植物样本叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉。

2.每2g样本加入4ml提取液A和2ul蛋白酶抑制剂混合物。

3.用研钵快速研磨30-60秒，或者用组织搅碎机高速匀浆1分钟。

4.将匀浆用3层纱布或者400目滤网过滤。

5.将滤液200g力（约1000RPM，不同离心机不一样，以实际为准）离心1分

钟。将上清移入另一干净离心管。

6.将上清1000g力（约3000RPM）离心5分钟。

7.弃上清，收集沉淀。

8.在沉淀中加入200ul抽提液B，充分混匀后在冰上静置15分钟，中间每隔5

分钟高速涡旋振荡10秒。

9.将提取液在4℃，12000×g条件下离心5分钟，取上清。

10.即得叶绿体蛋白。

11.将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或调整相应的浓度后直接

用于下游实验。

WB实验组织总蛋白提取方法

总蛋白提取是生物学实验中常用的一种方法，主要用于从细胞或组织

中提取所有蛋白质。提取总蛋白的目的是为了进一步分析蛋白质的功能和

结构，例如Western blot分析等。下面是一种常用的总蛋白提取方法。

实验材料和试剂：

1.已培养的细胞或组织样品

2. RIPA裂解液：含有非离子界面活性剂（Tween-20或Triton X-100）、蛋白酶抑制剂（如苯甲砜）和磷酸酯酶抑制剂（如磷酸酯酶）

3.低温高速离心管

4.超声波细胞破碎仪或机械研磨器

5.10%SDS-凝胶电泳试剂

6.蛋白加载缓冲液

7.高压电泳设备

实验步骤：

1.将细胞样品从培养皿中用PBS缓冲液洗涤一次，用PBS轻轻冲洗组

织样品。

2.吸去PBS缓冲液，加入足够的RIPA裂解液使细胞或组织完全浸没。注意：RIPA裂解液的加入量需根据样品的大小进行调整。

3.将细胞或组织样品转移到低温高速离心管中。

4.使用超声波仪器或机械研磨器对样品进行破碎。这一步旨在使细胞

或组织的细胞膜破裂，释放出胞浆中的蛋白质。

5.离心样品以除去细胞碎片和细胞核等大颗粒。将离心管置于低温离

心机中进行离心，离心条件需根据实验需要进行调整。

6. 将上清液转移至新的离心管中，得到总蛋白提取物。可以根据需

要进行蛋白质浓度的测定，常用的方法有BCA法、Lowry法等。

7.将总蛋白提取物加入相应的蛋白加载缓冲液，并在沸水中加热变性。

8.蛋白质经过热变性后，将其进行SDS-凝胶电泳分离。

9. 将凝胶中的蛋白质转移到PVDF或NC膜上，通过Western blot分

植物总蛋白提取

一提取植物总蛋白（以植物花粉为例）：

1.三氯乙酸法（TCA）/丙酮(acetone)提取花粉总蛋白质

花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，用含10%TCA和1%DTT的acetone沉淀蛋白质，-20度2个小时(必要时过夜)，4度25000g离心20min后去上清，用含1%DTT的acetone溶液悬浮沉淀，-20度1个小时,再次离心去上清，将真空干燥的沉淀在等电聚焦缓冲液中(8M urea，20mmDTT,4%CHAPS,2%ampholyte,PH:3-10) 20度震荡1小时，20度25000g离心20min，收集上清，沉淀再次用IEF缓冲液离心收集上清，可为后续试验做准备。

2．苯酚（phenol）提取法

花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，添加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）继续研磨5min,加提取缓冲液（0.1mol/L 8.8 Tr i s –HCl，5mmEDTA,20mmDTT,30%sucrose）。将样本转移至离心管中，4度震荡30min，25000g离心10min，将上层的phenol层转移进另一个试管，将下边的水相层加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）及提取缓冲液，震荡，离心，将再次收集到的phenol与前边收集的混合，加5倍体积的0.1 M ammonium acetate in 100%methanol，在-20度震荡沉淀蛋白质，必要时过夜，4度 25000g离心10min，将沉淀用0.1 M ammonium acetate in 100%methanol及80% acetone各洗两次, 含10mmDTT的80% acetone再洗一次，在每一步中蛋白沉淀都要完全重悬— -20度震荡30min，4度 25000g离心20min，洗剂完成后，沉淀真空干燥，IEF buffer提取蛋白质，如方法1。3．直接IEF buffer提取蛋白质

植物蛋白质的提取实验报告

一、实验目的

熟悉植物蛋自提取原理和方法，了解其意义及其应用价值。

二、实验原理

植物蛋白提取一般遵循如下基本原则，尽可能提高样品蛋白的溶解度，抽提最大量的总蛋白，减少蛋白质的损失，减少对蛋白质的人为修饰：破

坏蛋白与其他生物大分子的相互作用，并使蛋白质处于完全变性状态。根

据该原则，植物蛋白制备过程中。一般需要有四种试剂①离液剂：尿素和

硫脲等；②表面活性剂：SDS、胆酸钠、CHAPS等；③还原剂：DTT、DTE、TBP、Tri-bae等；④蛋白酶抑制剂及核酸酶：EDTA、PMSF、蛋白酶抑制

剂混合物等，如为了去除缓冲液中存在的痕量重金属离子，可在其中加入0。1-5mmo、L EDTA，同时使金属蛋白酶失活。

三、仪器和试剂

仪器：离心机、移液器、研钵、离心管、冰箱、分光光度计；三角瓶；试管：试管架；移液管；记时器；水浴锅。

植物蛋白提取

植物全蛋白提取方法：

TCA丙酮沉淀法、Tris-HC1法、Trizol沉淀法提取法。

1 TCA丙酮沉淀法

基于蛋白在酸或疏水条件下变性使蛋白浓缩并去除污染物原理的TCA丙酮沉淀法，最早用于小麦蛋白的提取，是目前提取植物蛋白的常用方法之一。

具有降低次生代谢物质的干扰、减少蛋白降解等优点。

TCA能有效地抑制蛋白酶对蛋白质的水解作用，保证在制样过程中蛋白质不被降解；丙酮溶液能除去样品中的酚类及色素等干扰物质，同时实验过程中采用的高速离心办法能较好地去除多糖的影响。然而该方法的一个最大缺点是蛋白质很难重新溶解，而且样品中的非蛋白成分很难除去，可能会丢失膜蛋白和疏水性蛋白，导致2-DE图谱上有明显的横纵条纹。

在研磨样品时加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP)用来吸附样品中富含的酚、醌类物质。它们能通过疏水键与酚类形成复合物，离心可以去除该复合物。然而，TCA丙酮沉淀法中与蛋白共沉淀的污染物在随后的有机溶剂清洗步骤中通常难以去除，可以通过振荡和延长蛋白沉淀在裂解缓冲液中温育时间的方法来增加蛋白的溶解能力。在提取的过程中同时加入了TCA、β-巯基乙醇及DTT 3 种药剂可以更好的抑制蛋白质的水解及去除干扰物质。TCA丙酮提取法耗时少且容易操作，一般作为植物蛋白提取的初始方案，该方法常用于幼嫩组织中蛋白的提取，对更为复杂的植物组织该方法并非最佳选择。但该方法还是在植物蛋白的提取中占有重要位置，很多木本植物的样品应用该方法效果很好，如鹅掌楸叶片、巴东木莲的雌蕊柱头、槟榔叶片、银杏叶片及枝条、茶树叶片及芽、红豆杉的愈伤组织、石斛叶片等。草本植物中的大豆叶片、生菜叶片、黄瓜叶片、番茄子叶、龙胆花芽、灰木相思叶片等应用该方法都获得了较清晰的2-DE图谱。

第十章植物蛋白质的提取和加工

第十章植物蛋白质的提取和加工
张鹰
粮油加工学
主要内容
10.1 植物蛋白质的基本特征、种类及性质 10.2 大豆蛋白质 10.3 油料蛋白质的提取与应用 10.4 谷物蛋白质的提取与应用
本章重点与学习目标
? 了解植物蛋白的种类和主要特征； ? 掌握主要植物蛋白的制取原理和加工方法； ? 掌握主要植物蛋白的性质和主要用途
10.1.3.1小麦蛋白质
?小麦约含有 13％蛋白质，构成面筋的麦胶蛋白和麦谷蛋白是小麦子粒中的主要蛋白质。
?麦胶蛋白溶解于中等浓度的乙醇 (在60％～70％乙醇中溶解度最大 )，而不溶于无水乙醇。在稀甲醇、丙醇、苯、醇溶液和酚对甲苯、冰醋酸溶液中都能溶解，也能在弱酸和弱碱溶液中溶解。
10.1.1.3 油菜籽蛋白
? 油菜子颗粒小，含有40%～45％油脂和20％～25％蛋白质。蛋白质中的大部分为12s球蛋白，相对分子质量约30 万。与大豆球蛋白相似，含有酸性和碱性亚基。在植物蛋白质中，油菜子蛋白的营养价值最高，没有限制性氨基酸，特别是含有许多在大豆中含量不足的含硫氨基酸。
? 以油菜子的脱脂物为原料可加工浓缩蛋白。蛋白质在提取、分离等加工过程中，易受到加热变性的影响，使蛋白质溶解度降低，不能形成胶体，但该种蛋白质制品具有很好的保水性与持油性，因而可应用于红肠等畜肉制品的加工。此外，经分离得到的变性少的蛋白质，其乳化性、发泡性、凝胶形成性均很好。

植物蛋白质的提取方法及举例

植物蛋白质提取

关键点：a、种子研磨充分 b、蛋白质尽量溶解 c、蛋白质尽量沉淀

所需药品：NaCl、C2H5OH、(NH4)2SO4、NaOH、H Cl、CH3COOH﹑

Na2SO4﹑冰水

注：Na2SO4,芒硝，禁与强酸、铝、镁相配。

药品溶解度：NaCl，36g[20℃]; (NH4)2SO4，76.7g[25℃]; Na2SO4, 19.5g[20℃]

其中溶解蛋白质的常用中性盐是NaCl、(NH4)2SO4、Na2SO4、Mg2SO4等

①、盐析法﹕

原理：蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，之后蛋白质分子之间聚集而沉淀。由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。

步骤：溶解蛋白质→离心→取上清液，盐析（低温）→离心沉淀蛋白质→透析

②﹑等电点法（本方法中最好不要用Na2SO4）：

原理：在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小，从而有利于悬浮液的过滤。

植物蛋白提取

植物全蛋白提取方法：

TCA丙酮沉淀法、Tris-HC1法、Trizol沉淀法提取法。

1 TCA丙酮沉淀法

基于蛋白在酸或疏水条件下变性使蛋白浓缩并去除污染物原理的TCA丙酮沉淀法，最早用于小麦蛋白的提取，是目前提取植物蛋白的常用方法之一。

具有降低次生代物质的干扰、减少蛋白降解等优点。

在研磨样品时加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP)用来吸附样品中富含的酚、醌类物质。它们能通过疏水键与酚类形成复合物，离心可以去除该复合物。然而，TCA丙酮沉淀法中与蛋白共沉淀的污染物在随后的有机溶剂清洗步骤常难以去除，可以通过振荡和延长蛋白沉淀在裂解缓冲液中温育时间的方法来增加蛋白的溶解能力。在提取的过程中同时加入了 TCA、β-巯基乙醇及 DTT 3 种药剂可以更好的抑制蛋白质的水解及去除干扰物质。 TCA丙酮提取法耗时少且容易操作，一般作为植物蛋白提取的初始方案，该方法常用于幼嫩组织中蛋白的提取，对更为复杂的植物组织该方法并非最佳选择。但该方法还是在植物蛋白的提取中占有重要位置，很多木本植物的样品应用该方法效果很好，如鹅掌楸叶片、巴东木莲的雌蕊柱头、槟榔叶片、银杏叶片及枝条、茶树叶片及芽、红豆杉的愈伤组织、石斛叶片等。草本植物中的大豆叶片、生菜叶片、黄瓜叶片、番茄子叶、龙胆花芽、灰木相思叶片等应用该方法都获得了较清晰的2-DE图谱。

一种植物总蛋白的提取方法及其专用提取液

高效蛋白提取是生物学研究中许多生物活性蛋白质的重要技术，同时是天然植物来源高效产出有效复合成制剂的有效技术。近年来，微生物静电纺丝已成为一种快速、有效和经济的植物总蛋白提取方法，可以有效地提取出植物中的多种活性蛋白，并使其得到有效的应用。

专用总蛋白提取液由水、醇类和有机酸组成，使得植物蛋白质更容易溶解，有效降低蛋白质的结构及生物活性，从而可以获得植物总蛋白，并提高抽取特定集合体的活性蛋白。此外，专用植物总蛋白提取液还可以采用无纤维素或低纤维素方法进一步提高植物总蛋白的抽取效率，节省时间成本。

专用提取液能够提取植物总蛋白，也有助于保护植物总蛋白，具有抗氧化特性和抗酶水解性，还可以促进蛋白质的活性和高纯度纯化。同时，专用提取液具有高灵敏度、快速性和无毒性，因此几乎所有的植物级别都可以采用此种专用提取液提取总蛋白。

综上所述，静电纺丝专用植物总蛋白提取液具有许多独特的优点，包括快速、有效、低成本、抗酶水解性和抗氧化性，是生物学研究中活性蛋白质的一种重要技术，也是植物来源高效产出有效复合剂的一种有效技术。

植物总蛋白提取

Extraction, Clean-Up, and Assay of Protein Extraction:

Phenol Extraction Followed by Methanolic Ammonium Acetate Precipitation

Variation on Hurkman and Tanaka, 1986, Plant Physiology 81:802-806

1. Grind 2 g (0.3g for small scale extractions) of fresh tissue to a powder with

liquid nitrogen with a mortar and pestle. Keep the tissue frozen at all times. Transfer the tissue to 50 ml conical tubes (2 ml Eppendorf tubes) and drop into liquid nitrogen if not ready to begin step 2 immediately.

2. Add 5 ml (600 µl) of chilled Tris pH 8.8 buffered phenol and 5 ml (600 µl)

of chilled extraction buffer and vortex immediately until all tissue is wet and immediately place sample on ice. Use phenol and extraction buffer only IN THE HOOD.

植物蛋白质提取方法汇总

一、植物组织蛋白质提取方法

1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。

2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。

3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃

4、提取上清液，样品制备完成。

蛋白质提取液：300ml

1、1Mtris-HCl（pH8）45ml

2、甘油（Glycerol）75ml

3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g

这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！

二、植物组织蛋白质提取方法

氯醋酸―丙酮沉淀法

1、在液氮中研磨叶片

2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。

3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。

4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。

5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。

药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。裂解液：2.7g 尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65μl/ml。

这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！

植物总蛋白提取方法

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植物总蛋白提取方法

植物总蛋白提取试剂盒

产品组成：

产品组成规格植物蛋白提取液蛋白稳定剂蛋白酶抑制剂混合物BB-3124-1

50T 25ml 200ul 100ul

BB-3124-2 100T 50ml 400ul 200ul

储存条件：

蛋白提取液、稳定剂2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。

有效期：

一年。

产品简介：

本试剂盒提供配套试剂，适用于从各种植物细胞、组织样本中提取总蛋白。提取过程简单方便。本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等蛋白研究。本试剂盒提取的蛋白不可用于2D电泳。如下游实验需要用于2D电泳、等电聚焦电泳，请使用贝博其他货号的'试剂盒。

使用方法：

植物组织样本：

1、提取液准备：每500ul冷的提取液中加入4ul蛋白稳定剂和2ul蛋白酶抑制剂，

混匀后置冰上备用。

2、取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200mg鲜嫩植物组织样本剪碎，采用以下一

种方法处理：

i. 加入500ul提取液A后用匀浆机/匀浆器匀浆。 ii. 置于研钵中用液氮研磨，研磨后加入500μl冷的提取液 A。 iii. 加入500ul提取液A

直接置冰上研磨。

3、研磨后吸入一个预冷的干净离心管中在冰上或4℃冰箱静置1小时。

4、在4℃，12000rpm以上条件下离心10-15分钟。

5、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。

上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

细胞样本：

1、提取液准备：每500ul冷的提取液中加入4ul蛋白稳定剂和2ul蛋白酶抑制剂，

植物蛋白提取

植物全蛋白提取方法：

TCA丙酮沉淀法、Tris-HC1法、Trizol沉淀法提取法。

1 TCA丙酮沉淀法

基于蛋白在酸或疏水条件下变性使蛋白浓缩并去除污染物原理的TCA丙酮沉淀法，最早用于小麦蛋白的提取，是目前提取植物蛋白的常用方法之一。

具有降低次生代物质的干扰、减少蛋白降解等优点。

TCA能有效地抑制蛋白酶对蛋白质的水解作用，保证在制样过程中蛋白质不被降解；丙酮溶液能除去样品中的酚类与色素等干扰物质，同时实验过程中采用的高速离心方法能较好地去除多糖的影响。然而该方法的一个最大缺点是蛋白质很难重新溶解，而且样品中的非蛋白成分很难除去，可能会丧失膜蛋白和疏水性蛋白，导致2-DE图谱上有明显的横纵条纹。

在研磨样品时参加聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP)用来吸附样品中富含的酚、醌类物质。它们能通过疏水键与酚类形成复合物，离心可以去除该复合物。然而，TCA丙酮沉淀法中与蛋白共沉淀的污染物在随后的有机溶剂清洗步骤常难以去除，可以通过振荡和延长蛋白沉淀在裂解缓冲液中温育时间的方法来增加蛋白的溶解能力。在提取的过程中同时参加了 TCA、β-巯基乙醇与 DTT 3 种药剂可以更好的抑制蛋白质的水解与去除干扰物质。 TCA丙酮提取法耗时少且容易操作，一般作为植物蛋白提取的初始方案，该方法常用于幼嫩组织中蛋白的提取，对更为复杂的植物组织该方法并非最正确选择。但该方法还是在植物蛋白的提取中占有重要位置，很多木本植物的样品应用该方法效果很好，如鹅掌楸叶片、巴东木莲的雌蕊柱头、槟榔叶片、银杏叶片与枝条、茶树叶片与芽、红豆杉的愈伤组织、石斛叶片等。草本植物中的大豆叶片、生菜叶片、黄瓜叶片、番茄子叶、龙胆花芽、灰木相思叶片等应用该方法都获得了较清晰的2-DE图谱。

植物蛋白是如何提炼的原理

植物蛋白的提炼原理主要涉及到以下几个步骤：

1. 选择合适的植物材料：选用含有较高蛋白质含量的植物作为原料，例如大豆、豌豆、黄豆、蔗糖等。

2. 破碎植物细胞壁：采用物理或化学方法破碎植物细胞壁，使蛋白质从细胞内释放出来。物理方法可以通过高温、高压或机械力来实现，化学方法可以使用酶解剂或酸碱溶液来破坏细胞壁。

3. 提取植物蛋白：将破碎的植物材料与溶剂（通常为水或盐水）混合搅拌，使蛋白质溶解在溶液中。溶液通常还会进行调节pH值、温度、时间等条件以促进蛋白质的溶解和提取。

4. 分离蛋白质：利用物理或化学方法对溶液中的蛋白质进行分离纯化。常用的方法包括离心、过滤、沉淀、电泳、超滤、逆流chromatography等。这些方法可以根据蛋白质的大小、电荷、亲水性等性质进行选择。

5. 精制和干燥：通过去除杂质、水分等步骤，使提取的植物蛋白质更纯净，并经过干燥处理，将其转化为粉末或颗粒状，方便储存和使用。

提炼植物蛋白的具体方法和步骤可能会因不同的植物和所需的蛋白质类型而有

差异，但以上步骤大致代表了植物蛋白提炼的一般原理和过程。

植物核蛋白提取方法

产品产品号产品产品号总蛋白提取试剂盒bb3101磷酸化蛋白富集试剂盒bb3108核蛋白提取试剂盒bb3102膜蛋白提取试剂盒bb3103bradford蛋白定量试剂盒bb3411bca蛋白定量试剂盒bb3401ecl化学发光检测试剂盒bb3501蛋白markerbb3721细胞蛋白提取试剂盒bb3121细菌膜蛋白提取试剂盒bb3151组织蛋白提取试剂盒bb3122植物总蛋白提取试剂盒bb3124细菌蛋白提取试剂盒bb3123植物膜蛋白提取试剂盒bb3152酵母蛋白提取试剂盒bb3125蛋白酶抑制剂混合物bb3301磷酸化蛋白提取试剂盒bb3105磷酸酶抑制剂混合物bb3311sdspage凝胶配制试剂盒bb3702sdspage上样bufferbb3703
7. 在沉淀中加入 200μl 冷的提取液 B，高速涡旋振荡 15 秒。
8. 置冰上 40 分钟，每隔 10 分钟高速涡旋振荡 15 秒。
9. 在 4℃，16000×g 条件下离心 10 分钟。
10. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。 11. 将上述蛋白提取物定量①后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验②。
有效期：一年。
产品简介：贝博植物核蛋白提取试剂盒提供配套试剂，适用于从各种植物细胞和各种实体植物组
织，如叶片、根、种子等植物组织中提取核蛋白。提取过程简单方便，可在 1 小时内完成。制备的核蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于 Western Blotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。

植物蛋白质的提取方法及举例

1.机械破碎法

机械破碎法是一种常见的植物蛋白质提取方法，其原理是通过物理力

学方法将植物细胞结构破碎，使蛋白质从细胞中释放出来。具体步骤包括：将植物材料切碎，加入缓冲液，经过高压或高速搅拌破碎，然后离心去除

残渣得到植物蛋白提取液。常用的机械破碎设备有搅拌器、超声波处理器

和磨碎器等。

案例：以大豆为例，先将大豆材料研磨成颗粒状，然后添加适量的缓

冲液，在高速搅拌器中进行破碎处理，最后离心去除渣滓，得到大豆蛋白

提取液。

2.酶解法

酶解法是利用酶的特异性作用从植物细胞中释放蛋白质的方法。酶可

降解细胞壁和膜，使蛋白质从细胞中释放出来。常用的酶解剂有纤维素酶、蛋白酶和淀粉酶等。具体步骤包括：将植物材料切碎，加入相应酶解液，

经过适当时间的酶解作用，然后进行离心或其他处理，得到植物蛋白提取液。

案例：以豌豆为例，将豌豆材料切碎，加入含有纤维素酶的酶解液，

经过酶解反应后，进行离心去除沉淀，得到豌豆蛋白提取液。

3.酸碱提取法

酸碱提取法是通过调节植物材料的pH值，使蛋白质从植物细胞中溶

出的方法。具体步骤包括：将植物材料切碎，加入一定浓度的酸或碱液，

调节pH值促使蛋白质溶解，然后进行离心或其他处理，得到植物蛋白提取液。

案例：以玉米为例，将玉米材料切碎，然后加入适量浓度的苏打水，调节pH值，使玉米蛋白质溶解，最后进行离心去除沉淀，得到玉米蛋白提取液。

4.离心法

离心法是通过离心力将植物蛋白质从细胞碎片或植物材料中分离出来的方法。具体步骤包括：将植物材料破碎或酶解，然后进行离心分离，收集上清液中的蛋白质。