费菜提取液抑菌效果和抗氧化研究开题报告

毕业论文开题报告

食品质量与安全

费菜提取液抑菌效果和抗氧化研究

一、选题的背景与意义

费菜俗称“土人参”，又名土三七、救心菜，属景天科多年生草本植物。费菜主要分布于我国长江以南各地，不论在平原、丘陵地带还是高原山区费菜均能生长。它含有齐墩果酸、谷甾醇、生物碱、景天庚糖、黄酮类、有机酸、维生素E等多种成份，费菜中的这些成份使得它具有抑菌、抗氧化、增强免疫、扩张脑血管、改善冠状动脉循环等途径，达到降血压、防中风、防心脏病降血脂、抗肿瘤等功效，有很高的食用价值和医疗保健功能。

随着人们对生活水平的不断提高，对身体保健也越来越重视，近年来世界上掀起了植物药及保健品的开发热潮。通过对费菜提取液抑菌和抗氧化效果的研究，可以提高费菜的使用价值，有助于生产出具有治疗和预防多种疾病的药品和天然保健品，为费菜的综合利用开辟新途径，创造更大的社会效益和经济效益。

二、研究的基本内容与拟解决的主要问题：

基本内容

1.研究费菜提取液对大肠杆菌的抑制效果

2.研究金黄色葡萄球菌的抑制效果

3.研究枯草芽孢杆菌的抑制效果

4.测提取液中总黄酮的浓度

5.研究费菜提取液还原力的测定

6.研究费菜提取液对羟自由基的清除能力

7.研究对DPPH·自由基的清除率

三、研究的方法与技术路线：

1.费菜提取液制取

取新鲜费菜叶在70℃烘干24h，然后用药物粉碎机粉粉碎并过80目筛，得到的叶粉备用，在提取之前将叶粉在105℃烘干2h左右。称取5g干粉，置于150ml锥形瓶中，按照料液比1:50加入浓度为70%的乙醇，超声提取50min，60℃水浴浸提6h，趁热抽滤，得到滤液。将粗提液用旋转蒸发仪在45-50℃下浓缩至适量后，加入3-4倍体积的95％乙醇以沉淀多糖6h以上，再将粗提液用旋转蒸发仪在45-50℃下浓缩至适量，备用。

2.抑菌圈法测定抑菌效果

提前3天把大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌进行活化，接种斜面上备用。制备营养琼脂培养基, 营养肉汤用于细菌的液体培养。把所要用的培养基、培养皿、移液枪头、无菌水等灭菌备用。

首先做每个菌不同梯度浓度的菌悬液。然后选择一种浓度的菌液用涂布的方法在培养皿中做好平板。用在酒精灯上烧过的6mm的打孔器在每个平板上打3个孔，正三角形均匀分散放置在平皿中央，每两个孔之间距离30mm以上，每个菌种做三组平行。并用灭菌的镊子夹掉打孔后的琼脂，分别取50μL的费菜提取液、硫酸庆大霉素和水注入3个孔内。硫酸庆大霉素做阳性对照，水做阴性对照。最后测每种菌菌落总数，基本保证做抑菌圈时各种菌的浓度一样（106-108个/ml）。暗室培养(细菌：37℃/24h)。测定抑菌圈直径，取平均值。

3.费菜提取液最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度（MBC）的测定

采用二倍稀释法，以水为溶剂，配制一系列梯度浓度的费菜提取液溶液，将不同梯度浓度的费菜提取液溶液1ml加入到1ml已灭菌的液体培养基中，混合均匀，使培养基中费菜提取液的浓度分别为原提取液的1：2，1：4，1：8，1：16，1：32，1：64，再在每管中加入0.1ml的菌液。暗室培养(细菌：37℃/24h)，每一与对照组（不加菌）比较，是否变浑浊，以不变浑浊管费菜提取液浓度为其最低抑菌浓度(MIC，minimum inhibitory concentration)。分别吸取1ml以上管中的液体到40度左右的营养琼脂培养基，测是否长菌。不长菌的最小费菜提取液浓度就是MBC。

4.测费菜提取液中总黄酮的浓度

用芦丁做标准曲线，精密量取芦丁取液0．10mL、0．20mL、0．30mL、0．40mL、0．50mL、0．60mL，费菜提取液0.5ml、1.0ml、1.5ml、2ml、2.5ml分置25mL量瓶中，各加水至6mL；分别加5 %NaNO2溶液1mL，摇匀，放置6min；分别加10 %Al(N03)3溶液1mL，摇匀，放置6min；然后分别加4 %NaOH溶液1OmL，并分别加水至刻度，摇匀，静置15min，在510nm测定吸收度，以芦丁浓度(C)(mg／mL)对吸光度(A)作标准曲线，费菜提取液吸光度根据标准曲线算出浓度。

5.还原力测定

取2．5 mL不同浓度的费菜提取液于试管中，依次加人2．5 mL0．2 mol／L PBS (pH6．6)、5 mL 1％ K3Fe(CN)6溶液，于5O℃保温20 min后快速冷却，再加入2．5 mL10％三氯乙酸溶液，3000 r／min离心10 min，取上清液2．5 mL，依次加入2．5 mL蒸馏水、0．5 mL 0．1％FeC1，溶液，充分混匀，静置10 min，测定吸光值（以蒸馏水为参比溶液)，吸光度值越高还原力越强，作成曲线。

6.羟自由基清除率测定

按照Smirnof(1989)的方法，利用H2O2与FeSO4混合产生(·OH)，在体系内加入水杨酸捕捉(·OH)并产生有色物质，该物质在510 nm处有最大吸收。于10 mL容量瓶中依次加入2 mmol／LFeSO42 mL，6 mmol／L H2O2 2 mL，6 mmol／L水杨酸一乙醇6 mL，于37℃水浴中保温15 min后取出，以蒸馏水为参比，510 nm下测其吸光度(A。)，然后再加入0.4 mL被测定样品，摇匀，37℃水浴中保温15 min后取出，以蒸馏水为参比，510 nm下测其吸光度(Ax)。考虑到色素本身的吸光度值，做了对照试验：于25 mL容量瓶中依次加入2mmol／LFeSO42mL，蒸馏水5mL，6 mmol／L水杨酸一乙醇6 mL，于37℃水浴中保温15 min，然后加入0.4mL被测定样品，摇匀，于37℃水浴中保温15 min后取出，以蒸馏水为参比，510 nm下测其吸光度

清除率计算公式为：清除率(％)=[A0-(Ax-Ax0)]/A0

式中：A o：为空白对照液的吸光度；Ax：为加入色素溶液后的吸光度；

Ax o：为不加显色剂H202：色素溶液本底的吸光度。

7.对DPPH·自由基清除率的测定

取不同浓度费菜提取液2 ml及浓度为2×104mol/L的DPPH溶液2ml先后加入同一具塞试管中，避光30 min后以样品提取溶剂为空白调零测定其吸光度Ai；测定2 ml 浓度为2×104mol/L 的DPPH溶液与2 ml无水乙醇混合液的吸光度Ae；再测定2 ml黄酮提取液与2m1无水乙醇混合液的吸光度Aj，重复5次，求其平均值。根据下列公式计算沙枣黄酮提取液对DPPH的抑制率，即：抑制率(％)= [1-(Ai-Aj)/Ae]×100％,做标准曲线。

四、研究的总体安排与进度：

2010．10—2010．11 查阅文献，设计初步实验方案；

2010．11—2008．12 实验设计，开题报告；

2011．02—2011．04 实验操作；

2011．04—2011．05 数据处理，撰写论文。

五、主要参考文献：

[1] 袁婷,钟学稳.常见中草药的体外抑菌试验[J].试验研究,2009,9:23-24.

[2] 郑瑞生,封辉.植物中抗氧化活性成分研究进展[J].中国震学通提 2010，26(9)：85—90.

[3] 张连琴.自由基与疾病[J].天津医科大学学报,1997,3(2):85-88

[4] 陈月明,王水明.植物提取物的抗菌作用[J].饲料研究,2010,5:38-39.

[5] 吴万传,杜小凤,王伟中等.植物源抑菌活性成分研究进展[J].淮阴工学院学报,2004,13(3):28-35.

[6] 曲中堂,项昭保,赵志强等.橄榄总黄酮抑茵作用研究[J].中国酿造,2010,4:62-63.