细胞培养基本实验操作一般培养试剂介绍常用培养基及基本特性 HBSS的配制和使用攻略
细胞培养过程中的注意事项及试剂配制
20ug/ml内皮生长因子，
注意事项：
1.配制溶液时必须用新鲜的蒸馏水。
2.安装蔡式滤器时通常使用孔径0.45微米和0.22微米滤膜各一张，放置位置为0.45的位于0.22微米的滤膜上方，并且要特别注意滤膜光面朝上。
4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验人员的无菌准备：
1.肥皂洗手。
2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋
3.用75％酒精棉球擦净双手。
无菌操作的演示：
1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面
2.靠近酒精灯火焰操作。
5.烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。
6.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向15磅时，维持20-30分钟。
7.高压消毒后烘干
(2)旧的玻璃器皿的洗消：
1．刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔溶液（洗涤剂）的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。
一般培养液中谷氨酰胺的含量为1～4mmol/L。可以配制200mmol/L谷氨酰胺液贮存，用时加入培养液。配制方法为，谷氨酰胺2.922g溶于三蒸水加至100ml即配成200mmol/L的溶液，充分搅拌溶解后，过滤除菌，分装小瓶，-20℃保存，使用时可向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液。
(9).肝素溶液的配制：
0.1％Ⅰ型胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制和消毒灭菌。注意：因为Ⅰ型胶原酶分子颗粒比胰酶大，不容易过滤，因此可以用蔡式滤器过滤除菌。分装入10ml小瓶-20℃保存。
医学研究中细胞培养技术实验指南
医学研究中细胞培养技术实验指南细胞培养技术是医学研究中不可或缺的重要手段之一，它为研究人类疾病、药物筛选和治疗方案提供了有力的工具。
本文将为您介绍细胞培养技术实验的指南，帮助您更好地开展医学研究中的细胞培养实验。
一、细胞培养基准备细胞培养基是细胞生长和繁殖所必需的基础培养环境，正确配制培养基是实验成功的关键。
1.1 选择合适的培养基根据所研究的细胞类型选择适合的培养基，通常，最常用的培养基有DMEM、MEM和RPMI 1640等。
另外，根据实验需要，可以添加胎牛血清、人血清、抗生素和生长因子等。
1.2 培养基的配方与储存根据细胞类型和实验需要，制备培养基的配制液，遵循供应商提供的配方和使用说明。
配制好的培养基应储存在4℃冰箱中，避免阳光直射，保质期根据供应商指引执行。
二、细胞培养槽和培养器具准备保持实验环境的清洁和无菌是细胞培养实验中的另一个关键点。
2.1 准备培养槽和培养器具将所需培养槽、培养瓶、离心管、吸头、培养皿、离心机等培养器具在高压蒸汽灭菌锅或培养箱中进行高温高压灭菌。
培养槽在灭菌后应放置在无尘台上，注意避免污染。
2.2 储备适量的试剂和培养物品体外培养需要用到的培养基、胎牛血清、人血清、生长因子、抗生素等试剂必须事先准备好，并按照实验操作规范使用。
三、细胞的分离和培养细胞的有效分离和培养对保证实验结果的准确性至关重要。
3.1 细胞的分离根据所要研究的细胞类型选择合适的方法进行细胞的分离，如胰蛋白酶消化法、组织弹性体分离法以及银离子胶体沉淀分离法等。
在进行细胞分离前，务必将所有操作具备无菌条件，避免外界环境的污染。
3.2 细胞的培养将分离得到的细胞用预先准备好的培养基进行悬浮培养。
培养器具需先预先灭菌处理，避免细胞感染。
培养皿或培养瓶中应添加适量的培养基，根据实验需要添加相应的血清、生长因子等。
将需要培养的细胞分散均匀地加入培养器具中，将培养器具放入恒温培养箱中，维持适当的温度、湿度和二氧化碳浓度。
细胞培养的基本操作
细胞培养的基本操作细胞培养是一项重要的生物学技术，在生物医学研究和药物研发中被广泛应用。
在进行细胞培养前，必须准备好所需材料，并掌握基本操作，以确保实验成功。
本文将详细介绍细胞培养的各个环节，帮助实验者顺利进行实验。
一、实验前准备工作1、选用适合细胞培养的培养基及其配方，并对不同类型的细胞培养进行区分；2、准备好所需工具，包括细胞培养罐、离心管、移液器、培养皿、培养层等；3、需要准备好无菌工具，包括无菌帽、无菌手套、消毒布、培养皿贮存架和培养皿启封器。
二、细胞传代工作流程1、收集培养好的细胞，用离心机离心沉淀；2、用1X PBS（磷酸缓冲盐水）将细胞沉淀洗涤，移至新的细胞培养罐中；3、用细胞消化剂消化，将细胞与培养基混合均匀；4、将细胞移至新的培养皿中；5、将新培养皿置于CO2培养箱内，放入37℃恒温培养箱内暴露于5%CO2气氛下培养。
三、培养基的配制方法1、根据所培养细胞种类和培养目的选取适当的培养基配方；2、按配方要求称取所需材料；3、先将酸性胶原与缓冲液混合均匀，然后逐渐加入其他成分，制成完整的培养基；4、使用培养基前要进行质量控制，如pH值测定、Osmolity测定等，以确保培养基质量良好。
四、细胞结构和形态检测1、用无菌的PBS洗涤细胞，将细胞置于培养皿中；2、用甲醛固定处理，使细胞组织固定在培养皿里，然后进行染色处理；3、可以使用相位对比显微镜或荧光显微镜对细胞形态进行观察和记录；4、通过对细胞形态和生长情况的观察和分析，判断细胞是否正常培养。
以上四部分就是细胞培养的基本操作流程，若能完全掌握上述技巧和操作细节，无疑将极大提高细胞培养实验的成功率。
在操作过程中，应保证操作环境和工具设备的无菌干净，切勿影响实验进程或结果。
希望本文对初学者或需要进行细胞培养的实验者有所帮助。
细胞培养常用器材与试剂
器材与试剂干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器等具体步骤1. 水：细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。
需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水.2. PBS (也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)：主要用于免疫组化染色时组织或细胞的漂洗溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HPO4·H2O 1.56g，KH2PO4 0. 2g ）倒入盛有双蒸水的烧杯中，玻璃棒搅动，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml，摇匀即成新配制的PBS溶液。
用HCl或NaOH调PH到7.4。
移入溶液瓶内待消毒：将PBS倒入溶液瓶（大的吊针瓶）内，盖上胶帽，并插上针头放入高压锅内8磅消毒20分钟。
注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。
3. 胰蛋白酶溶液：胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。
不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。
胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。
使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。
因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。
终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调PH到7.2左右）或PBS（D-hanks）液中。
搅拌混匀，置于4℃内过夜。
用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。
然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。
4. 0.05％胰蛋白酶－0.02%EDTA溶液称取胰蛋白酶粉末（1：250）0.05g，EDTA 0.02g，加入PBSA 100ml，0.22um微孔滤膜过滤除菌，分装，于－20℃保存。
实验 动物细胞培养基础实验技术
实验动物细胞培养基础实验技术——器械的清洗与消毒实验目的：学习并掌握细胞培养使用的器皿、器械的洗涤和消毒。
实验用品：1．仪器和用品：超净工作台、干燥箱、高压锅、过滤器、紫外灯、0.22μm/0.45μm微孔滤膜。
2．试剂：75%酒精、5%HCl、1‰新洁尔灭、重铬酸钾。
实验内容：1．准备培养用血清瓶（PBS、培养基，约10套，包括20、50ml）、培养瓶（50个）、玻璃滴管（若干）、离心管（10ml）、EP管若干、不锈钢滤器、胶塞、滴头等。
2．分别包装上述物品，其中血清瓶和瓶盖分别包装，玻璃吸管置于不锈钢筒中、玻璃离心管、 EP管分别置于饭盒中。
3．将上述物品置于高压灭菌锅中进行消毒灭菌。
4．实验室准备。
实验步骤（一）清洗1．玻璃器皿的清洗浸泡刷洗浸酸冲洗（1）. 新购玻璃血清瓶先用洗衣粉洗，再以0.1-0.05 mol/l HCl 浸泡数小时，然后用铬酸浸泡过夜，最后用自来水、一次与二次去离子水洗净后才能开始使用。
（2）. 用过之玻璃血清瓶，用洗衣粉洗净后铬酸浸泡过夜，最后用自来水、用一次与二次去离子水冲洗干净。
此外，玻璃器皿的瓶子的盖子必须也泡铬酸，培养瓶瓶盖可以不用泡铬酸，高温灭菌的时候要拧上瓶盖，留有一定的缝隙，灭菌后盖紧。
瓶盖的上面应当用锡箔纸或者牛皮纸包住，用绳子扎紧2．塑料器皿的清洗自来水充分浸泡冲洗 2%NaOH浸泡过夜蒸馏水漂洗3次 2%-5%盐酸浸泡30min 自来水冲洗晾干紫外线照射30min3．胶塞等橡胶类的清洗自来水冲洗 2%NaOH 煮沸15min 自来水冲洗蒸馏水煮沸10min 自来水冲洗5次以上2%-5%HCl煮沸15min 晾干晾干后高压灭菌4．金属器械的清洗新购置的器械用过的器械（二）包装分为局部包装和全包装。
为了防止消毒灭菌后再次遭受污染。
按照不同类别进行包装。
（三）消毒灭菌主要包括物理法和化学法。
物理法：热灭菌、蒸汽灭菌、滤过除菌、紫外线、熏蒸消毒、煮沸消毒。
常见培养基的配制操作方法和注意事项
常见培养基的配制操作方法和注意事项一、培养基的配制方法：1.准备所需材料：培养基主要由基础成分和添加剂组成，根据不同需求，可以选择不同的成分配制培养基。
常见的基础成分包括碳源、氮源、矿物质盐和特定生长因子等，添加剂包括琼脂、酵母浸泡液等。
2.称量和溶解：根据配方比例，准确称量各个成分并分别溶解在适量的蒸馏水中，可以加温以加快溶解速度。
3.调整pH值：通常需要调整培养基的pH值，使用盐酸或氢氧化钠等酸碱调节剂，逐滴加入直至达到指定的pH值，一般为7.0-7.44.加入琼脂：在溶解各个成分的培养基溶液冷却至约50℃时，加入适量的琼脂，并充分搅拌溶解。
最后通过高温高压灭菌，使培养基凝固。
二、培养基配制的注意事项：1.材料和器皿的消毒：操作前需预先进行灭菌处理，如使用高温高压灭菌器、自闭式消毒法或紫外线照射等方法，以确保培养基的无菌性。
2.避免污染：在操作过程中应尽量避免培养基的污染，如使用干净的器皿和工具，并注意操作环境卫生。
3.精确称量：根据配方比例准确称量各个成分，尤其是微量元素等特定剂量的添加剂。
4.pH值调节：在调整培养基的pH值时，应逐滴添加酸碱调节剂，并反复检测和调整，以确保达到设定的pH值。
5.良好的溶解和混合：搅拌培养基溶液时应充分混合，以确保各个成分均匀分布。
6.温度控制：培养基配制过程中需要注意温度控制，避免溶液过热或过冷，影响琼脂的溶解或培养基的凝固。
7.灭菌处理：配制好的培养基需要通过高温高压灭菌或过滤灭菌进行处理，以保证培养基的无菌性。
8.存储条件：灭菌后的培养基应放置在低温、干燥和避光的环境中保存，并注意严格控制培养基的有效期。
总结：培养基的配制方法包括准备材料、称量和溶解、调整pH值、加入琼脂和灭菌处理等步骤。
在操作过程中需要注意材料和器皿的消毒、避免污染、精确称量、pH值调节、良好的溶解和混合、温度控制、灭菌处理和存储条件等方面的注意事项。
通过严格控制操作环境和工艺要求，可以确保培养基的质量和无菌性。
细胞培养技术操作规范
细胞培养技术操作规范细胞培养是一项重要的实验技术，用于研究细胞的生物学特性及其在疾病治疗和药物开发中的应用。
为了确保实验结果的准确性和可重复性，需要遵循一系列的操作规范。
本文档旨在提供细胞培养技术的操作规范，以帮助研究人员顺利进行实验。
实验室准备- 实验室应保持干净整洁，设施设备应处于正常运行状态。
- 所有使用的试剂和培养物应检查保质期，并妥善存放在适当的温度下。
- 工作平台及工作台面应进行消毒处理，以防止细菌和真菌的污染。
- 所有使用的器械和培养罐应在使用前进行高压蒸汽灭菌。
细胞培养操作细胞培养器具的准备- 使用无菌操作进行所有操作，包括试剂和培养基的添加、培养器具的取用等。
- 使用带无菌手套的清洁无菌工作台进行操作。
- 细胞培养器具（如培养瓶、孔板等）在使用前应进行高压蒸汽灭菌处理，确保无菌状态。
培养基的准备- 准备培养基前应检查其成分和配比是否正确，确保培养基的质量。
- 使用无菌操作取出所需量的培养基，并避免直接接触细胞培养器具。
- 遵循培养基的配制方法和步骤，确保其与细胞的适应性。
细胞的分离与传代- 分离细胞时，使用胰酶等消化酶进行细胞的释放，并遵循操作步骤和浓度要求。
- 记录分离细胞的季度数，避免过度传代，以保持细胞的稳定性和特性。
- 合理设置细胞传代次数和细胞数量，避免细胞过早进入衰老状态。
培养条件和操作- 确保培养器具与细胞接触的表面无菌、干净，避免细胞污染或黏附的问题。
- 控制培养环境的温度、湿度和二氧化碳浓度，以满足不同类型细胞的生长要求。
- 定期更换培养基，确保细胞得到足够的营养物质和生长条件。
- 注意培养器具和试剂的使用方法和操作顺序，避免对细胞生长和健康产生负面影响。
细胞培养操作的记录与管理- 记录每次细胞培养的详细信息，包括培养时间、细胞密度、培养基配制方法等，以便于实验结果的追溯和分析。
- 管理细胞的库存，包括标识、记录和储存，以确保细胞的可追溯性和可重复性。
- 定期检查细胞的污染和变异情况，及时采取必要的措施防止实验结果的偏差。
含钙镁的hbss用途 -回复
含钙镁的hbss用途-回复含钙镁的HBSS（Hanks'平衡盐溶液）是一种常用的细胞培养基液，广泛应用于细胞培养、细胞处理和实验研究中。
本文将从HBSS的组成、作用机制、应用领域以及实验操作等方面进行详尽阐述，并为读者提供一步一步的指导。
第一部分：HBSS的组成含钙镁的HBSS主要由以下成分组成：1. 基础成分：含钙镁的HBSS的基础成分通常为Hanks'平衡盐溶液（Hanks' Balanced Salt Solution），包含了一系列的无机盐和缓冲剂，以维持细胞在培养液中的正常生理环境。
2. 钙和镁：HBSS中含有适量的钙和镁离子，这两种离子对于细胞的生长和功能至关重要，它们可以促进细胞膜的稳定性、调节细胞凋亡和细胞功能等。
3. 缓冲剂：常见的缓冲剂有HEPES、磷酸盐缓冲液等，它们可以维持培养液的pH值，确保细胞在正常的酸碱环境下生长。
第二部分：HBSS的作用机制含钙镁的HBSS具有以下主要作用机制：1. 渗透调节：HBSS中的无机盐浓度可以通过渗透调节来维持细胞内外的渗透平衡，避免细胞因渗透压差而发生损伤。
2. pH调节：HBSS中的缓冲剂可以帮助维持培养液的pH值在稳定的范围内，确保细胞在适宜的酸碱环境中生长。
3. 离子稳定性：HBSS中的钙和镁离子可以稳定细胞膜的结构和功能，同时参与细胞内一系列的信号传导和代谢过程。
4. 营养补充：HBSS中还包含一定量的营养成分，如葡萄糖、氨基酸等，为细胞提供基本的营养需求。
第三部分：HBSS的应用领域含钙镁的HBSS在细胞培养、细胞处理和实验研究中有着广泛的应用：1. 细胞培养：HBSS可以作为细胞培养的缓冲液，用于洗涤和处理培养皿中的细胞，保持细胞在生长过程中的正常环境。
2. 细胞处理：HBSS可以用于细胞的分离、传代和收集。
当细胞需要进行传代或移植后，使用HBSS可以有效地去除细胞培养液中的血清蛋白和其他污染物。
3. 细胞实验：HBSS可用于细胞的形态观察、染色和显微镜检查。
常用细胞培养基配方及缓冲液
常用细胞培养基配方及缓冲液细胞培养基是为了在体外维持细胞生长和增殖所设计的一种营养液。
细胞培养基的配方要求提供细胞所需的基本营养物质，如氨基酸、糖类、维生素和激素，并提供适当的pH和离子平衡。
同时，缓冲液也是细胞培养过程中不可或缺的一部分，用于稳定细胞培养基的pH，维持细胞正常的生长环境。
下面列举几种常用的细胞培养基配方及缓冲液：1. DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)-细胞培养基配方：-DMEM培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：无2. RPMI 1640 Medium (Roswell Park Memorial Institute Medium) -细胞培养基配方：-RPMI1640培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸)溶液，浓度为25mM，用于稳定pH。
3. MEM (Minimum Essential Medium)-细胞培养基配方：-MEM培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)- 缓冲液：盐酸/NaOH缓冲体系，通常用NaHCO3/N-2-羟乙基piperazine-N'-2-乙磺酸(HEPES)缓冲。
4. Hank's Balanced Salt Solution (HBSS)-细胞培养基配方：-HBSS培养基粉末-对应体积的无菌水-缓冲液：无5. L-15 Medium (Leibovitz's L-15 Medium)-细胞培养基配方：-L-15培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-缓冲液：HEPES溶液，浓度为25mM。
6. DMEM/F12 Medium (Dulbecco's Modified Eagle Medium and Ham's F-12 Medium)-细胞培养基配方：-DMEM/F12培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：HEPES溶液，浓度为25mM。
常用细胞培养基配方及缓冲液
常用细胞培养基配方及缓冲液细胞培养基是一种含有适当营养物质和生长因子的液体或凝胶，用于维持细胞的生长与繁殖。
常用的细胞培养基配方和缓冲液如下：一、常用的细胞培养基配方：1. DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）-DMEM是最常用的细胞培养基之一，适用于多种种类的细胞培养。
-基本配方：-高糖DMEM：添加25mM葡萄糖-低糖DMEM：添加5.5mM葡萄糖-高氨基酸DMEM：添加高浓度的氨基酸，以促进细胞生长和蛋白质合成。
2.RPMI1640-适用于淋巴细胞和一些肿瘤细胞的培养。
-基本配方：-高糖RPMI1640：添加25mM葡萄糖-低糖RPMI1640：添加5.5mM葡萄糖-高氨基酸RPMI1640：添加高浓度的氨基酸。
3. MEM（Minimum Essential Medium）-MEM是最早用于细胞培养的培养基。
-基本配方：-高糖MEM：添加25mM葡萄糖-低糖MEM：添加5.5mM葡萄糖4. Ham's F-10-适用于肿瘤细胞和一些原代细胞的培养。
-基本配方：- 高糖Ham's F-10：添加25mM葡萄糖- 低糖Ham's F-10：添加5.5mM葡萄糖5.L-15-适用于多种种类的细胞培养。
-基本配方：- L-15培养基：必须在CO2-free环境下使用。
二、常用的缓冲液：1. 磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffered Saline，PBS）-0.1MPBS的配方：-8gNaCl-0.2gKCl-1.44gNa2HPO4-0.24gKH2PO4-1L去离子水-调pH至7.42.HEPES缓冲液-基本配方：-119mMNaCl-5mMKCl-0.8mMMgSO4-0.4mMKH2PO4-2.4mMNaHCO3-20mMHEPES（pH7.4）-0.6mMCaCl23. Tris缓冲液-基本配方：- 25mM Tris- 192mM glycine-10%甘油-0.1%SDS-pH8.34. Hanks平衡盐液 (HBSS)-基本配方：-8gNaCl-0.4gKCl-0.146gKH2PO4-0.2gMgSO4-0.06gMgCl2-0.35gNaHCO3-0.06gNa2HPO4-pH7.45. Tris-EDTA-基本配方：- 1M Tris-HCl，pH 8.0-0.5MEDTA，pH8.0以上是常用的细胞培养基配方和缓冲液的一些例子，不同细胞类型和实验要求可能需要不同的培养基和缓冲液。
细胞培养技术中的培养基配制与操作步骤
细胞培养技术中的培养基配制与操作步骤细胞培养是现代生命科学研究中常见的一项关键技术。
在细胞培养中，培养基是维持细胞生长发育所必需的营养物质的来源。
因此，正确的培养基配制和操作步骤对于细胞培养的成功至关重要。
在本文中，我们将详细介绍细胞培养技术中培养基的配制和操作步骤。
一、培养基配制培养基是由多种化学物质组成的，为了保证细胞能够正常生长和增殖，需按照一定比例和操作步骤进行配制。
下面是培养基的配制步骤：1.准备培养基成分：将培养基所需的各种化学品、培养基粉末等准备好，并确保其纯度和质量。
2.按照指定比例称取各种成分：根据培养基的配方，按照比例准确称量所需的化学品。
注意，称量过程中应该避免将不同化学品混合。
3.将化学品溶解于溶液中：取适量的无菌水或其他溶液，将称取好的化学品逐一加入到溶解液中，轻轻搅拌直到完全溶解，并过滤以去除悬浮物。
4.调整pH值和渗透压：使用pH计和滤器检测和调整培养基的pH值，并使用渗透压仪调整培养基的渗透压。
5.灭菌：将配制好的培养基放入高温高压灭菌器中，以确保培养基中无菌。
二、培养基的操作步骤在细胞培养技术中，正确的操作步骤是维持培养基的无菌性和细胞生长的关键。
以下是培养基的操作步骤：1.佩戴无菌操作装备：在开始操作之前，使用石英灯或紫外线灯照射操作台和周围区域，戴上无菌手套，穿戴无菌面罩、无菌衣等无菌操作装备。
2.准备培养器皿：将所需的培养器皿（如培养皿、培养瓶、细胞培养板等）放入培养箱中进行高温高压灭菌，以确保其无菌。
3.操作培养基：将培养器皿放在无菌操作台上，使用均匀受热器加热培养基至适宜温度（通常为37℃），然后将培养基倒入培养器皿中。
4.培养细胞：将待培养的细胞用无菌工具如吸管、吸头等转移到培养基中，确保转移过程中避免细胞接触到外界环境，以防止细胞受到污染。
5.培养器皿密封：将培养器皿封闭，并用无菌胶带封口，以确保培养基中的细胞免受外界细菌和污染物的污染。
同时，避免培养器皿开盖时间过长，以减少空气中的微生物进入。
细胞培养完整手册
细胞培养完整手册引言细胞培养是现代生物学和医学研究领域必不可少的一环。
本文将介绍细胞培养的基本原理、操作步骤、培养常见问题及解决方法。
细胞培养基本原理细胞培养是指利用人工制备的培养基以及适当的生长因子、激素和营养物质等对细胞进行体外培养和扩增，从而使细胞可以在体外连续增殖并保持原有的生物学特性。
细胞培养是现代细胞生物学、免疫学、病毒学、分子生物学以及药学研究的基础。
细胞培养的操作步骤实验前准备实验前要准备工具、试剂和消毒物品等，以确保实验的顺利进行和细胞的纯度与无菌。
细胞解冻1.从低温冻存罐中取出样品，将其放在37℃恒温水浴中解冻，不要使用冷却液或热盘等快速解冻方式。
2.用培养基缓慢悬浮细胞，宜加入10% FBS卡死细胞，避免冷冻完再活化产生过多氧化物等致细胞杀伤性的物质。
3.对细胞悬浮液进行离心，弃掉上清液，用适量的完整培养基重悬细胞沉淀，充分混匀后接续培养。
细胞传代1.用 PBS 泡洗清除细胞上附着的蛋白质和细胞碎片等杂质。
2.加入胰酶 0.05% 消化 3~5 分钟，让细胞分离迅速、均匀，切勿长时间消化。
3.将消化细胞在上清液中轻轻悬浮，检查细胞的分离和体积大小。
4.将细胞上清液转移至新的培养瓶中，鉴定细胞标记和污染情况。
5.加适量的完整培养基，并放入 CO2 培养箱中进行培养，定期观察细胞的生长情况，每两到三天定期更换培养基。
技巧提示1.培养瓶应洗涤干净，并喷壁消毒剂。
2.常用的培养基配方包括 DMEM 培养基、RPMI 1640 培养基、F12 培养基等，根据不同的实验需要进行选择。
3.培养箱应定期清洗和消毒，保证无菌环境。
4.细胞的传代次数不应过多，避免引起细胞特性的变化和突变。
细胞培养常见问题及解决方法细胞失活或死亡1.培养基中缺失营养物质如血清、氨基酸等，应加入完整培养基进行补充。
2.细胞感染，需要添加抗生素，如青霉素、链霉素等。
3.培养条件不适宜，如 CO2 浓度、温度等，应适当调节。
细胞培养标准操作程序(SOP)
细胞培养标准操作程序（SOP）1．目的：为了保证培养细胞的正常生长，实验技术人员必须明确并正确执行细胞培养的基本操作步骤，特制订实验室细胞培养操作流程。
2．适用范围：适用于来我院细胞室进行细胞培养工作的人员。
3．操作规程：3.1 培养液、PBS、胰蛋白酶的配制3.1.1 1000ml培养液的配制1、准备用品：培养粉、1000ml烧杯、玻棒、量筒、电子分析天平、PH仪、2～3天内的新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）、NaHCO3粉、1000ml无菌玻璃瓶（100ml×10个玻璃瓶）、青霉素、链霉素、2～3个过滤器、注射器。
紫外线照台30min。
2、将培养粉用900ml新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）溶解，并冲洗袋内残留粉末。
3、充分搅拌，按说明添加成分（如Invitrogen公司的RPMI-1640配制1000ml需加NaHCO3粉2.0g，Invitrogen 公司的DMEM需加NaHCO3粉3.7g等），再充分搅拌。
无需加谷氨酰胺，因该培养基里已含有。
4、用1M（1mol/L）HCl 调PH至7.0左右（细胞适宜在PH7.2～7.4生长，配制好后PH值会升高0.2～0.3，故配时调PH至7.0左右）。
5、用新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）定容到1000ml。
6、配青霉素 80万/瓶 + 4ml 蒸馏水溶解配链霉素100万/瓶 + 4ml 蒸馏水溶解取0.5ml青霉素和0.4ml链霉素加入到1000ml培养液中，使其终浓度均为100U/ml，充分搅拌混匀。
7、在无菌操作台里用0.22um的除菌滤膜过滤配制好的培养液，并分装到到100ml玻璃瓶中，玻璃瓶口用薄膜封口，盖上橡皮塞，放-20℃保存备用。
注意：（1）配制培养液及调节培养液PH值所使用的HCl和（或）NaOH均需新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）配制。
一般于配制当天制备，以保证水的纯度和质量。
（2）准备的100ml×10个玻璃瓶必须事先高压灭菌！烧杯、量筒、玻棒、盛新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）的容器均不需高压灭菌，干净即可。
HBSS的配制和使用攻略
HBSS的配制和使用攻略HBSS主要用于培养液的配制或清洗细胞，不能单独使用。
本文介绍HBSS的配制和使用方法。
HBSS，即汉克斯平衡盐。
英文全名Hank's Balanced Salt Solution。
D-Hank's与Hank's的一个主要区别在于前者不含有钙和镁离子，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。
Hank平衡盐溶液( HBSS)的配方为：8 g/L NaCl，0.4 g/L KCl，1 g/L 葡萄糖，60 mg/L KH2PO4，47.5 mg/L Na2HPO4，调pH至7.2.一般用于配制细胞培养过程中的培养基或者清洗细胞。
Hank's配方:NaCl 8.01;KCl 0.4;CaCl2 0.14;NaHCO3 0.35;KH2PO4 0.06;Glucose0.34(g/l);Hank平衡盐溶液( HBSS)的配方为：8 g/L NaCl，0.4 g/L KCl，1 g/L 葡萄糖，60 mg/L KH2PO4，47.5 mg/L Na2HPO4，调pH至7.2.HBSS一共分为四种，含钙镁，含酚红;含钙镁，不含酚红;不含钙镁，含酚红(D-hanks );不含钙镁，不含酚红(D-Hanks)。
此四种产品可根据客户需要自己选择。
而如果客户无法判断应该选择哪一种，可以选不含钙镁，不含酚红(D-Hanks )。
Han ks’含钙镁含酚红Hanks’含钙镁，不含酚红D- Hanks’不含钙镁含酚红D- Hanks’不含钙镁不含酚红DPBS不含钙镁不含酚红PBS不含钙镁不含酚红10*PBS不含钙镁不含酚红g/L g/L g/L g/L g/L g/L g/L NaCl 8 8 8 8 8 8 80 Na2HPO.12H2O 0.126 0.126 0.126 0.126 2.9 2.9 29 NaH2PO4·2H2O 0 0 0 0 0 0 0 KCl 0.4 0.4 0.4 0.4 0.2 0.2 2 KH2PO40.06 0.06 0.06 0.06 0.2 0.24 2.4 MgSO40.098 0.098 0 0 0 0 0 CaCl20.14 0.14 0 0 0 0 0D-葡萄糖 1 1 1 1 0 0 0酚红0.01 0 0.01 0 0 0 0 添加NaHCO30.35 0.35 0.35 0.35 0 0 0那么，HBSS能高压灭菌吗?答案是否定的。
HBSS的配制和使用攻略
HBSS 的配制和使用攻略在众多实验缓冲液中，HBSS显得有点默默无名。
HBSS主要用于培养液的配制或清洗细胞，不能单独使用。
本文介绍HB SS的配制和使用方法。
HBSS，即汉克斯平衡盐。
英文全名Ha nk's Balanc ed Salt Soluti on。
D-Hank's与Hank's 的一个主要区别在于前者不含有钙和镁离子，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。
Hank 平衡盐溶液( HBSS)的配方为：8 g/L NaCl，0.4 g/L KCl，1 g/L 葡萄糖，60 mg/L KH2PO4，47.5 mg/L Na2HPO4，调pH至7.2.一般用于配制细胞培养过程中的培养基或者清洗细胞。
Hank's配方:NaCl 8.01；KCl 0.4；CaCl20.14；NaHCO3 0.35；KH2PO4 0.06；Glucos e 0.34(g/l)；还有D-Hank`s不含有Ca2+、Mg2+，HBSS(液体) 不含Ca、Mg。
含碳酸氢钠。
含酚红。
15-30℃保存。
Hank平衡盐溶液( HBSS)的配方为：8 g/L NaCl，0.4 g/L KCl，1 g/L 葡萄糖，60 mg/L KH2PO4，47.5 mg/L Na2HPO4，调pH至7.2.HBSS一共分为四种，含钙镁，含酚红；含钙镁，不含酚红；不含钙镁，含酚红(D-Hanks)；不含钙镁，不含酚红(D-Hanks)。
此四种产品可根据客户需要自己选择。
而如果客户无法判断应该选择哪一种，可以选不含钙镁，不含酚红(D-Hanks)。
Hanks’含钙镁含酚红Hanks’含钙镁，不含酚红D- Hanks’不含钙镁含酚红D- Hanks’不含钙镁不含酚红DPBS不含钙镁不含酚红PBS不含钙镁不含酚红10*PBS不含钙镁不含酚红g/L g/L g/L g/L g/L g/L g/L NaCl 8 8 8 8 8 8 80 Na2HPO.12H2O0.126 0.126 0.126 0.126 2.9 2.9 29 NaH2PO4·20 0 0 0 0 0 0H2OKCl 0.4 0.4 0.4 0.4 0.2 0.2 2 KH2PO40.06 0.06 0.06 0.06 0.2 0.24 2.4 MgSO40.098 0.098 0 0 0 0 0 CaCl20.14 0.14 0 0 0 0 0D-葡萄糖 1 1 1 1 0 0 0 酚红0.01 0 0.01 0 0 0 0 添加0.35 0.35 0.35 0.35 0 0 0 NaHC O3C0200D-PBS(DPBS) 500ml70.00 C0210Hanks(HBSS)含钙镁，含酚红500ml80.00 C0220Hanks（HBSS）含钙镁，不含酚红500ml80.00 C0230D-Hanks（HBSS）不含钙镁，含酚红500ml80.00 C0240D-Hanks（HBSS）不含钙镁，不含酚红500ml80.00 C0260PBS缓冲液（液体）PH7.2-7.4 500ml68.00 C027010×PBS，PH7.2-7.4，10倍浓缩液，液体500ml100.00那么，HBSS能高压灭菌吗?答案是否定的。
细胞培养技术的使用教程
细胞培养技术的使用教程细胞培养技术是生物学实验中常用的一项技术，用于研究生物体内细胞的生长、分化、增殖和功能等方面的机制。
本文将为您介绍细胞培养技术的基本原理、操作步骤和注意事项。
一、细胞培养技术的基本原理细胞培养是通过提供适宜的生长环境，使细胞在体外以体内类似的方式生长和繁殖。
细胞培养的基本原理包括以下几个方面：1. 细胞培养基的选择：细胞培养基是提供细胞生长所需的营养物质和生长因子的培养液。
常见的细胞培养基包括DMEM、RPMI-1640、MEM等。
根据不同类型细胞的特点，选择合适的培养基十分重要。
2. 细胞培养温度和CO2浓度：大多数细胞在37℃下生长最适宜，同时需要加入5%~10%的CO2，以维持培养基的平衡pH值和细胞的正常生长。
3. 细胞传代和细胞冻存：当细胞达到一定密度时，需要将细胞进行传代，以保持细胞的正常生长。
同时，经过适当处理的细胞还可以进行冻存，以备将来使用。
二、细胞培养的操作步骤下面将为您介绍细胞培养的基本操作步骤：1. 细胞处理：消毒操作台面、工具和培养器具，穿戴好个人防护装备。
2. 细胞离心：将培养皿中的细胞细悬液离心，以去除培养基和代谢产物。
3. 细胞计数：使用显微镜或细胞计数仪对离心后的细胞进行计数。
根据实验需求，计算出所需细胞数目。
4. 接种细胞：将离心后的细胞重新悬浮在培养基中，按照实验要求，平均分装到不同的培养皿中。
5. 细胞培养和观察：将培养皿放入培养箱中，设置合适的培养温度和CO2浓度。
每天观察细胞的生长情况、细胞形态变化和污染情况。
6. 细胞传代：当细胞达到80%~90%的密度时，使用消化酶将细胞从培养皿上脱落，并重新接种到新的培养皿中。
传代细胞时要注意细胞的均一分散和避免过度消化。
7. 细胞冻存：处理好的细胞可进行冻存，将细胞悬液缓慢冷却至-80℃或液氮温度，并存放在液氮罐中保存，以备将来使用。
三、细胞培养的注意事项在进行细胞培养的过程中，有几个需要特别注意的方面：1. 操作环境和消毒：细胞培养需要在无菌环境下进行，操作过程中注意消毒操作台面和使用的工具，以避免细菌和其他微生物的污染。
生物学实验中的细胞培养技巧与培养基配制方法概述
生物学实验中的细胞培养技巧与培养基配制方法概述细胞培养是生物学研究中不可或缺的重要技术。
通过细胞培养，科学家们可以研究细胞的生长、分化、增殖以及各种生物学过程。
在细胞培养中，培养基配制和培养技巧是非常关键的环节，下面将对这两方面进行概述。
一、培养基配制方法培养基是细胞培养的基础，它提供了细胞生长所需的营养物质和环境条件。
培养基的配制需要根据细胞类型和研究目的进行调整。
一般来说，培养基主要包括基础培养基和补充物两部分。
1. 基础培养基的配制基础培养基通常由无菌的培养基粉末和无菌的蒸馏水混合而成。
粉末的配方根据不同的需求而有所不同，常见的有DMEM、RPMI-1640和MEM等。
在配制基础培养基时，需要按照粉末包装上的说明书来操作，确保配制出的培养基是无菌的。
2. 补充物的添加补充物是为了提供细胞所需的营养物质和生长因子。
常见的补充物包括胎牛血清（FBS）、人血清、胰岛素、转铁蛋白等。
在添加补充物时，需要根据细胞类型和实验要求来确定添加的浓度和比例。
同时，为了保持培养基的稳定性，补充物的添加需要在无菌条件下进行。
二、细胞培养技巧细胞培养技巧是细胞培养中至关重要的一环。
正确的培养技巧可以保证细胞的健康生长和实验结果的可靠性。
1. 无菌操作细胞培养需要在无菌条件下进行，以防止细胞被细菌或真菌污染。
在进行细胞培养前，需要将培养器具（如培养皿、离心管等）和培养基用高温高压灭菌器进行灭菌处理。
在实验过程中，需要在无菌工作台或无菌条件下进行操作，同时注意不要将培养物暴露在外界环境中过久。
2. 细胞传代细胞传代是维持细胞生长的重要步骤。
当细胞达到一定密度时，需要将其分离并转移到新的培养皿中。
在细胞传代过程中，需要使用胰酶等消化酶将细胞从培养皿上剥离下来，然后进行离心沉淀和重新悬浮。
在操作过程中，需要注意培养皿的倾斜角度和消化酶的浓度，以避免对细胞造成伤害。
3. 培养条件控制细胞培养需要适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度等条件。
细胞培养基本实验操作一般培养试剂介绍常用培养基及基本特性HBSS的配制和使用攻略
细胞培养基本实验操作一般培养试剂介绍常用培养基及基本特性HBSS的配制和使用攻略常用培养基及基本特性1、RPMI-1640 MediumRPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。
主要用于悬浮细胞培养。
其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。
2、Minimum Essential Medium（MEM）也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。
成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。
MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。
3、DMEM-高糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。
适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
4、DMEM-低糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。
低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。
5、DMEM/F12DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。
F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培养基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。
该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。
为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mM HEPES缓冲液。
6、McCoy’s 5AMcCoy’s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种（如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。
1x hbss密度 -回复
1x hbss密度-回复HBSS密度（HBSS density）是指Hank's平衡盐溶液（Hank's Balanced Salt Solution）的浓度。
这种溶液是一种细胞培养基常用的缓冲液，能够提供细胞所需的物质，并保持细胞的生理状态。
在细胞培养和研究中，了解HBSS密度的重要性是不可忽视的。
本文将一步一步回答有关HBSS密度的问题，帮助读者更好地理解和应用这一知识。
首先，让我们来了解一下HBSS的组成和作用。
HBSS是由Hank配制出的一种缓冲液，用于细胞培养实验。
它包含多种无机盐、糖类、氨基酸和维生素等，能提供细胞所需的营养物质。
此外，HBSS还能维持细胞外液的离子浓度平衡，控制细胞生长的温度和pH值，以及稀释和冲洗细胞等操作。
那么，为什么要关注HBSS的密度呢？密度是指单位体积内所含物质的数量。
在细胞培养中，HBSS是用来稀释和冲洗细胞的缓冲液，因此其浓度会直接影响到溶液对细胞的影响和作用效果。
如果HBSS的密度过高或过低，都会对细胞的生长和代谢产生不良影响。
因此，合理控制HBSS的密度是细胞培养实验中的重要步骤。
接下来，我们将详细介绍HBSS密度的调控方法。
首先，我们需要了解HBSS的密度单位和测量方法。
HBSS的密度通常以摩尔或克/升为单位。
测量HBSS的密度可以使用分光光度计、密度计或称重器等设备，通过与已知浓度的标准溶液进行比较来确定。
在实验中，我们可以通过溶解相应的化学品来调节HBSS的密度。
一般来说，可以根据细胞系的需求选择合适的浓度范围进行稀释。
若HBSS密度过高，可以适量加入无菌水稀释。
如果密度过低，则需要加入适量的HBSS 浓缩液进行增加密度。
此外，还有一些注意事项需要遵守。
首先，要确保取样时的操作无菌，以避免污染影响生长。
其次，要按照实验步骤进行配制，遵循检测系统和设备的要求。
最后，在使用过程中要严格遵守操作规程和安全措施。
综上所述，HBSS密度是细胞培养中不可忽视的重要因素。
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常用培养基及基本特性1、RPMI-1640 MediumRPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。
主要用于悬浮细胞培养。
其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。
2、Minimum Essential Medium（MEM）也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。
成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。
MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。
3、DMEM-高糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。
适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
4、DMEM-低糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。
低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。
5、DMEM/F12DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。
F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培养基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。
该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。
为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mM HEPES缓冲液。
6、McCoy’s 5AMcCoy’s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种（如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。
例如Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT-29、BHL-100等上皮细胞。
7、Iscove’s Modified Dulbecco Medium (IMDM)Guilber 和Iscove将Dulbecco’Medium 改良为Iscove’s Medium，用于培养红细胞和巨噬细胞前体。
此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPES。
并用硝酸钾取代了硝酸铁。
IMDM还能够促进小鼠B淋巴细胞，LPS刺激的B细胞，骨髓造血细胞，T细胞和淋巴瘤细胞的生长。
IMDM为营养非常丰富的培养液，因此可以用于高密度细胞的快速增殖培养。
8、M-199 Medium1950年，Morgan成功研制出具有确定化学成分的细胞培养液，即M-199，主要用于鸡胚成纤维细胞培养。
此培养液必须辅以血清才能支持长期培养。
M-199可用于培养多种种属来源的细胞，并能培养转染的细胞。
9、Leibovitz Medium （L-15）L-15培养液适用于快速增殖瘤细胞的培养，用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株。
此培养液采用磷酸盐缓冲体系，氨基酸组成进一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。
10、Ham’s F-10培养基：适应小鼠细胞、人类二倍体的培养。
11、Ham’s F-12培养基：可以在加入很少血清的情况下应用，特别适合单细胞培养和克隆化培养，是无血清培养中常用的基础培养液。
12、William’s Medium E：用于大鼠肝上皮细胞的长期细胞培养。
13、MCDB 131 培养液：用于培养内皮细胞。
14、Opti-MEM I Reduced Serum Media：用于培养造血细胞。
15、植物血凝素（PHA）：增加细胞转化和DNA合成。
1、合成培养基（液）基本成分有哪些？合成培养基的种类虽多，但一般均含有氨基酸、维生素、糖类、无机离子和一些其它的辅助性成分。
（1）氨基酸：是合成培养基的主要成分，合成培养基中以必需氨基酸为主。
不同种类的细胞对氨基酸的要求也不同，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。
其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。
（2）维生素：细胞生长代谢中大多数的酶、辅酶是依靠维生素来形成的。
在细胞培养中，尽管血清是维生素重要来源，但是许多培养基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长。
（3）糖类：培养基中的碳水化合物包括葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠等，主要提供细胞生长的能量，也可参与合成蛋白质和核酸。
（4）无机离子：培养基含有平衡盐溶液的钾、钠等无机盐，有些培养基含有微量元素，如Fe2+、Zn2+、Ca2+等。
（5）其它成分：有时可在少数合成培养基中加入代谢的中间产物、氧化还原剂、三磷酸腺苷、辅酶A等。
为适应某些特殊培养的需要可以补加一些新的成分，如杂交瘤技术中常用的DMEM培养液，使用时还需要补加丙酮酸钠和2-巯基乙醇。
2、平衡盐溶液平衡盐溶液（BSS）是组织细胞培养中常用的基本液体。
它可以维持渗透压、调节pH值及供给细胞生存所需的能量和无机离子成分。
主要作为合成培养基（液）的基础液及用于洗涤组织、细胞等。
常用的平衡盐溶液有PBS、Hanks液（HBSS）与D-Hanks液等。
各种平衡盐溶液的主要区别在于氯化钠的浓度、离子的浓度及缓冲系统不同，可根据需要选用适当的平衡盐溶液。
3、消化液原代培养中欲分散组织、细胞时，传代中欲使细胞脱离附着的底物时均需使用消化液。
组织细胞培养中常用的消化液为胰蛋白酶、EDTA两种溶液，使用时可以单独使用或混合使用。
胰蛋白酶是从动物胰脏分离的一种水解酶，其主要功能为使细胞间的蛋白质水解、细胞分散。
胰蛋白酶分离细胞的能力与细胞种类及细胞的特性有关，不同种类的细胞以及不同数量的细胞采用胰蛋白酶消化的时间亦不相同。
浓度大、温度高、新配制的胰蛋白酶可使细胞分离速度增快。
胰蛋白酶溶液在pH8.0，温度为37℃时，作用能力最强。
注意：钙离子、镁离子和血清蛋白的存在会降低胰蛋白酶活力。
消化细胞时，加入一些血清或含血清的培养液，或胰蛋白酶抑制剂能终止胰蛋白酶对细胞的消化作用。
保存条件：配制好的胰蛋白酶溶液必须保存在-20℃冰箱中，以免分解失效。
请在溶解的一周内使用贮存在4℃冰箱中的液体胰蛋白酶溶液EDTA是一种化学螯合剂，主要作用为能螯合Ca2+、Mg2+，使细胞分离，对细胞毒性小。
常用的浓度为0.02%。
胰蛋白酶和EDTA联合使用可提高消化效率，但需注意EDTA不能被血清中和，使用EDTA处理细胞后，一定要用Hanks液冲洗干净，因残留的EDTA 会影响细胞生长。
4、液体培养基怎么保存？（1）液体培养基应于4℃冰箱避光保存，实验前需放入37℃预热再用。
（2）未加血清液体培养基存放期为12个月，加入血清的液体培养及存放期为6个月。
（3）液体培养基中的L-谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解。
如果细胞生长不良，可以再添加适量L-谷氨酰胺。
5、液体培养基偶然被冻，可否继续使用？如果细胞培养基偶然被冻，您应该融化培养基并观察是否有沉淀产生。
如果没有沉淀产生，培养基可以正常使用，如果出现沉淀，只能丢弃这些培养基。
6、培养基及其它添加物和试剂可反复冻融吗？大部分添加物和试剂最多可以冻融3次，如果次数更多都会在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，将会影响它的性能。
7、为什么有的培养基中要去掉酚红？酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂，桃红色表示中性pH，黄色代表酸性pH，紫色表示碱性pH。
但是酚红具有一定的固醇类激素样的作用，如雌激素样作用，尤其对于所培养的哺乳类动物细胞，可能发生的固醇类反应不可忽视。
为了避免酚红干扰检测结果，许多研究人员视情况不同来选择是否使用含酚红的培养基。
8、培养基中丙酮酸钠的作用是什么？细胞通常以葡萄糖作为碳源，丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。
如果没有足够的葡萄糖供应，细胞就会选择丙酮酸钠作为代谢底物。
9、在培养基中加入HEPES有何好处？培养基中最常用的缓冲体系是碳酸氢盐，它可提供营养，但却在生理pH条件下会降低缓冲能力。
而HEPES是一种很强的缓冲剂，能使细胞培养基在pH7.2-7.6条件下缓冲能力增强。
10、有关血清的常见问题血清是细胞培养中最重要的元素之一。
因此，我们特别整理了一些实验室里常会遇到的问题，供大家参考：（1）保存血清最好的方法？我们建议血清应保存在-5℃至-20℃。
需要长期保存的血清必须储存于-20℃至–70℃低温冰箱中。
然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。
若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。
由于血清结冰时体积会增加约10％，因此，血清在冻入低温冰箱前，必须预留一定体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。
（2）如何解冻血清才不会使产品质量受损?我们建议您采用逐步解冻法：将-20℃至-70℃低温冰箱中的血清取出后先置于2℃-8℃冰箱中使之融解，然后移入室温待全部溶解后再分装。
在溶解过程中需轻轻规则地摇晃均匀（小心勿造成气泡），使温度与成分均一，减少沉淀的发生。
切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻，这样因温度改变太大，容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。
（3）血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?血清中沉淀物的出现有许多种原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成的，而血纤维蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血渭解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。
但这些絮状沉淀物并不影响血清本身的质量。
若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。
我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。
（4）何谓热灭活？一般是以56℃, 30分钟来处理已解冻的血清，因为此加热步骤可以使补体去活化，而补体所参与的反应有：溶细胞活性，平滑肌的收缩，肥大细胞和血小板组胺的释放，增强吞噬作用，淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。
（5）有必要做热灭活吗？实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。
经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。
而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误认为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。
因此我们建议您，若非必须，您可以不需要做热处理这一步。
如此一来，不但节省您宝贵的时间，更确保血清的质量！（6）如何避免沉淀物的产生?我们建议您在使用血清的时候，注意下列的操作：①解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温)，若血清解冻时。