动物长期毒性试验的给药期限
BRM-SJS大鼠长期毒性试验(精)
3. BRM-SJS对大鼠血象的影响： 白细胞：给药前后各组大鼠同期比较。外周白细胞计数无 明显差异，波动于正常值水平。见表3。 白细胞分类：表4说明试验期间大鼠外周白细胞分类的组间 同期比较，W-SCC 和 W-LCC 均在正常值范围，无明显差 异。 红细胞和血色素：表 5 、表 6 为大鼠外周血红细胞和血色素 检测结果，同期组间比较无差异，均在正常值范围。
动物实验设施合格证号，京动管准字(1996)第007号。
3. 试验方法：大鼠购入后观察1周，未发现不健康大鼠。随 机分为 4组，每组 40只，雌雄各 20只，即 (1) 空白对照组：灌服 与药液同体积的供动物饮用的蒸馏水 20ml/kg；(2) RBM-SJS低 剂量组：1.0g/kg；(3) RBM-SJS中剂量组：2.0g/kg；(4) BRMSJS高剂量组：4.0g/kg。 给药容积2ml/100g体重。每天灌胃，连续180天。服药的三 个月内每周称重并调整药量，平时观察动物服药后的反应，包 括饮食、活动、毛发、神志、口鼻眼眦、二便及死亡情况。每 月定期记录1次日进食量。 给药前，给药后 30天，60天， 90 天和停药后 30天，分别由 尾 静 脉 取 血 检 查 计 数 红 细 胞 (RBC) ， 血 色 素 (Hb) ， 白 细 胞 (WBC)及分类，血小板(P)等指标。给药90天和停药后30天处死 前，摘取眼球，取血测定血液学10项生化指标，包括谷草转氨 酶 (AST) ，谷丙转氨酶 (ALT) ，碱性磷酸酶 (ALP) ，总蛋白 (TP) ，白蛋白 (ALB) ，总胆红素 (T-BIL) ，肌酐 (Crea) ，总胆固醇 (TCHOL) ，尿素氮 (BUN) 和血糖 (GLU) 。每于尾静脉采血日，同 时作尿常规检查。
一、试验目的：
新药药理学：长期毒性试验
剂有毒性时则增加正常对照组
长毒剂量设计方法（1）
根据急性毒性LD50 －大鼠高、中、低三个剂量分别用1/10、 1/50、1/100 LD50
根据最大耐受量（MTD）推算 - 以MTD、1/3 MTD、1/10 MTD分别作为 大鼠长毒的高、中、低剂量
基本内容和要求 ---- 检测指标（2）
血液学指标： - 红细胞计数 - 血红蛋白 - 白细胞总数及分类 - 血小板 - 凝血时间
基本内容和要求 ---- 检测指标（3）
血液生化指标： - 天门冬氨酸氨基转换酶AST - 丙氨酸氨基转换酶ALT - 碱性磷酸酶ALP - 尿素氮BUN、血糖GIU - 总蛋白TP 、白蛋白Alb - 总胆固醇TcH、肌酐Cr
MTD
1 1/3 1/10
MBSBiblioteka 10Cmax 5Cmax Cmax
ACD
3m
6m
50～100 30～ 50
30～50 15～25
10～20 5～10
➢ half for dog and monkey
剂量设计应注意问题
剂量设计过低 种属差异 中途改变剂量
基本内容和要求 ---- 检测指标（1）
一般观察： - 皮毛贴身或稀疏竖散 - 粪便颜色、性状 - 食量及体重变化 - 神态和步态 - 瞳孔、肛温、皮肤粘膜
长毒剂量设计方法（2）
MBS（Metabolic Body Size）推算 －以最大有效浓度为低剂量，中、高剂量分 别往上增加若干倍
拟用临床剂量ACD推算 - 低剂量为临床剂量10～20倍 - 中剂量为临床剂量30～50倍 - 高剂量为临床剂量50～100倍
长毒剂量设计方法（3）
中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则
中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则二OO五年三月指导原则编号: 【Z】GPT3-1目录一、概述二、基本原则（一）实验管理（二）具体问题具体分析（三）整体性（四）试验设计三、基本容（一）受试物（二）试验动物（三）给药途径（五）给药期限（六）给药剂量（七）观察指标（八）观察指标的时间和次数（九）结果及分析（十）综合评价（十一）其他考虑四、不同情况的中药、天然药物长期毒性试验的要求五、参考文献六、附录（一）长期毒性试验的给药期限（二）长期毒性试验中一般需检测的指标（三）毒性药材七、著者. . . .中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则一、概述：长期毒性试验是重复给药的毒性试验的总称，描述动物重复接受受试物后的毒性特征，它是非临床安全性评价的重要容。
中华人民国卫生部于1994年颁发的《中药新药研究指南》和国家药品监督管理局 1999年颁发的《中药新药药理毒理研究的技术要求》，对于统一、规中药长期毒性试验，推动我国中药的研究和开发起到了积极的作用。
但随着新药研究手段的不断改进，对中药、天然药物认识的进一步深入，这些要求越来越表现出它的局限性。
长期毒性试验的主要目的应包括以下五个方面：①预测受试物可能引起的临床不良反应，包括不良反应的性质、程度、剂量-反应和时间-反应关系、可逆性等；②推测受试物重复给药的临床毒性靶器官或靶组织；③预测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量围；④提示临床试验中需重点监测的指标；⑤为临床试验中的解毒或解救措施提供参考信息。
中药在我国已有几千年的应用历史，有丰富的临床应用经验，相对化学药而言多数中药具有毒性较低的特点。
但是，中药的低毒和无毒是相对的。
当前，各种新技术、新工艺不断应用于中药新药的开发，而且从中药、天然药物中提取的有效成分、有效部位及其制剂日益增多，已不完全等同于传统意义上的中药，因此对其非临床安全性评价应给予足够的重视。
长期毒性试验周期长，耗资高，工作量大，若因试验设计不合理，或所进行的试验未充分揭示中药的毒性特征，则会造成人力、物力、财力的浪费，也会影响新药的研究速度。
毒理学指标及试验操作汇总
.药物毒性试验指标1.急性毒性试验一、半数致死量（LD50）的测定(一)目的:观察受试物一次给予动物后，所产生的毒性反应和死亡情况。
(二)动物分组和剂量1.动物:一般用小白鼠8周龄，体重18---22g(同次试验体重相差不超过2g)大白鼠6~8周龄，体重120--150g，同次试验体重相差不超过10g。
2.受试物:溶于水的做成溶液，不溶于水的做成混悬液.(三)试验方法1.剂量:一般选用3一5个剂量，各剂量间剂距根据受试物情况和预试结果而定。
2.给药途径和容积:给药途径:应与临床试验的途径相一致。
口服药物应灌胃给药，一、二类新药应采用两种途径给药，其中一种应为推荐临床研究的给药途径。
水溶性好的药物还应测定静脉给药的急性毒性。
给药容积:小白鼠禁食(12~16小时)，不禁水，按体重计算:灌胃(ig)不超过0. 4ml/ 10g体重。
大白鼠禁食(12~16小时)，不禁水、灌胃(ig)，不超过3ml/只。
3.测定LD:将动物按体重随机分组，每组至少10只(雌雄各半)。
给受试物后立即观察50动物反应情况，每天观察一次连续观察七天。
详细逐天记录动物毒性反应情况及死亡分布，并用适当的统计学方法(申报时应说明方法名称)计算出LD值及95%可信限。
504.观察毒性反应:给受试物后应严密观察反应情况，并记录动物的外观、行为活动、精神状态、食欲(饲料消耗量)、大、小便及其颜色、被毛、肤色、呼吸、鼻、眼、口腔有无异常分泌物，体重变化以及死亡等情况。
死亡动物应及时进行尸检，发现病变器官应做病理组织学检查。
若发现中毒反应或死亡率一与动物的性别有明显相关时，则应选择性别敏感的动物进行复试。
(四)试验报告和结果评价应详细具体，包括试验日期、动物的规格、性别、数量、受试物来源及含量、试验方法。
LD 值及其95%可信限，以及各剂量组的死亡率，或最大耐受量的值及其相当于临床剂量的50倍数.详细报告实验过程中动物出现的中毒表现及致死症状，综合评价受试物毒性大小。
犬长期毒性试验及急毒试验
犬长期毒性试验犬试验计划书2﹑试验目的本研究对Beagle犬连续口服给予供试品盐酸氯苯哌酮9个月，考察犬产生的主要毒性反映及其严重程度，判断其毒性靶器官或靶组织及其毒性的可逆性和迟发性，提供毒性反映计量，为临床设计人用计量及临床毒副反映的监测提供参考依据。
3﹑准则和参考文献《化学药物长期毒性试验技术指导原则》；国家食品药品监督管理局2003年9月1日施行。
4﹑遵从GLP <药物非临床研究质量管理规范>单位及施行日期5﹑试验机构试验机构：机构地址：电话：传真：6﹑委托单位及联系人委托单位：单位地址：联系人：联系方式：7﹑机构负责人﹑项目负责人及试验相关人员机构负责人：项目负责人：兽医：饲育管理：病理负责人：8﹑质量保证QAU负责人：QAU检查人：QAU将检查试验计划书和试验操作，以确保试验计划书及其修改页﹑标准操作规程实施，并符合GLP的要求。
在将试验结果和报告发送给委托单位之前，项目负责人将原始记录和报告草稿交QAU检查，以确保最终报告能够准确反映试验结果。
QA检查的结果将发送给项目负责人和机构负责人。
9﹑供试品名称：批号：物理性状：提供单位：含量：防护措施：常规贮存条件：贮存地点：剩余供试品处理：10﹑试验日程（待定）接受样品试验启动时间预计试验开始时间引入动物试验前第一次采血试验前第一次生理（心电图、体温）试验前第二次采血试验前第二次生理试验前眼底检查分组给药开始试验期间第一次采血试验期间第一次生理试验期间第二次采血试验期间第二次生理投药末眼底检查投药末采血投药末生理投药末解剖及采尿恢复期眼底检查恢复期末采血恢复期末生理恢复期末解剖及采尿病理检查预计最终报告完成时间11﹑材料与方法11﹑1主要仪器设备11﹑2试验体系种类：犬品系：Beagle等级：普通级提供单位：许可证号：选择理由：动物数：犬龄：适应期：11﹑3试验条件饲育条件：实验室﹑笼具环境条件：温度﹑湿度﹑照明时间摄食及饮水：动物福利：11﹑4试验方法11﹑4﹑1计量设计设计若干组，分别为（本实验分为4组，分别为高、中、低剂量组和对照组，每组十只，雌雄各半）设计依据：11﹑4﹑2动物分组方法：试验动物的标识方法：耳号（动物引入时自带）和项链法剩余动物处理：11﹑4﹑3供试品配制11﹑4﹑4供试品﹑对照品给药方案给药途径及方法：经口给药频率﹑时间和期限：11﹑4﹑5恢复期设计11﹑4﹑6观察﹑测定及检查11﹑4﹑6﹑1症状观察11﹑4﹑6﹑1﹑1一般症状观察11﹑4﹑6﹑1﹑2详细症状观察11﹑4﹑6﹑2体重称量（SOP:）11﹑4﹑6﹑3摄食称量（SOP：）11﹑4﹑6﹑4生理检查：4﹑1心电图检测4﹑2体温的检测11﹑4﹑6﹑5眼科检查11﹑4﹑6﹑6临床检查采尿：肉眼观察尿外观﹑尿常规检查采血：血常学检查：血液凝固学检查：血液生化学检查：骨髓细胞形态及分类检查：11﹑4﹑6﹑7大体解剖和组织病理学检查大体解剖及肉眼观察：脏器称重：病理组织标本制作：病理组织学检查：全部计划解剖﹑中途濒死解剖及中途死亡动物病理组织学检查项目：11﹑4﹑6﹑8数据处理12试验计划书的修改本试验计划书的任何修改，必须阐明理由，指明修改内容和修改日期，项目负责人签字方能生效；委托方确认试验计划书及其修改页，并签署姓名和日期。
不同给药周期的长期毒性试验
不同给药周期的长期毒性试验《中药、天然药物长期毒性试验技术指导原则》和《化学药物长期毒性试验技术指导原则》均在国内首次提出了“可以用不同给药期限的长期毒性试验来分别支持Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期临床试验”，即对于一些临床疗程较长的药物，药品注册申请人可以根据药物开发的实际情况，选择在Ⅰ期临床前、Ⅱ期临床前或Ⅲ期临床前分别报送支持不同阶段临床研究的长期毒性试验资料。
以不同给药期限的长期毒性试验来分别支持药物进入I期、II期或Ⅲ期临床试验，并不意味着可以用长期毒性试验的中期报告来支持临床试验，每期长期毒性试验的内容应完整、规范，对结果的分析评价应科学、合理。
若设计一个样本量较大的长毒试验，在1个月、3个月、6个月或9个月时分别处死动物，检测指标，同时设立各个时间点的恢复期，这样就可以在第一时间内完成给药期限较长的长期毒性试验，但这种试验设计并没有充分体现出分阶段临床的科学性，无法达到预期的目的，因此属于不符合要求的分阶段方法。
药审中心鼓励创新性药物在进行长期毒性试验设计时应积极考虑采用“不同给药期限的长期毒性试验来分别支持Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期临床试验”，因为对于一个全新的药物，可参考的信息少，通过分阶段的方法可逐步了解药物的毒性，为下一步试验设计提供更充分的信息，可有效地规避风险，提高试验的成功率。
此外，还可在逐步进行试验过程中，根据毒性试验结果和临床研究结果等综合考虑，淘汰开发价值不大的候选药物。
所以，我厂的NO2项目应考虑分阶段申请临床。
通过指导原则及相关文献，我们可认识到各国对重复给药毒性试验并无统一要求，应遵循药物研制开发的客观规律，科学、合理地应用分阶段的毒理试验方法，药物研发是一个渐进的过程，正因为国际上对重复给药毒性试验无统一要求，如何设计并进行合理的试验需靠各试验者的努力，理解其中的科学原理，而不能简单、机械地全盘照搬，应综合考虑多方面因素，如药物的背景资料、前期毒性研究结果等等，对于中药，还应结合临床应用背景情况，科学、合理设计试验，仔细观察指标变化，发现有异常毒性时予以追踪，主动进行探索，加强研究意识，从科学、规范的角度出发进行药物安全性评价，提高药物研究水平。
长期毒性试验
大鼠的长期毒性试验1. 目的：观察连续给予受试动物后由于积蓄而对机体产生的毒性反应及其严重程度，提供毒性反应的靶器官及其损害的可逆性，确定无毒性反应剂量，为人用安全剂量提供参考。
试验条件：2动物：应写明动物的品系，生产单位及生产合格证号，等级，周龄，性别，体重，一般选用动物品系有Wistar、SD、或其他品系的远交系动物。
应根据试验期的长短选用不同周龄的大鼠，试验期在3个月内宜用6～8周龄大鼠，超过三个月者宜用5～6周龄大鼠。
试验开始时，体重差异应不超过平均体重的20%。
实验动物应雌雄分笼饲养，每笼不宜超过5只动物，所有动物试验前至少观察一周，并记录食量和体重等基础数字。
试验报告中应写明饲料供应单位及生产合格证，若用自己配置的饲料，应提供配方及成分含量的检测报告；应写明饲养动物实验室的合格证(未获得合格证者也应注明)及等级。
受试物：应写明受试物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配置方法。
受试物可以是临床试验制剂。
如受试物制剂的体积较大，以不含赋形剂的制剂，如中药浸膏为宜。
固态制剂灌胃给药，可选择适当的溶媒溶解，或研磨成细粉后用1%左右羧甲基纤维素钠(或10%阿拉伯明胶)制成混悬液，但应注意临用前需要摇匀。
避免混悬不匀引起计量误差。
长期毒性试验给药周期较长，固体制剂在配成溶液或混悬液后，冰箱放置，短期内用完，一面受试药物活性降低。
3试验方法：①受试物剂量：一般设三个剂量组和一个对照组。
给受试物剂量单位一般用mg/kg、或g/kg表示。
高剂量组：应使动物产生明显的或严重的毒性反应，或个别动物死亡。
中剂量组：应相当或高于药效学试验的高剂量，应使动物产生轻微的或中等程度的毒性。
低剂量组：略高于整体动物的有效剂量，在此剂量下动物应不出现毒性反应，属基本安全剂量。
对照组：不给收拾药物仅给等容量的溶媒或赋形剂，若所用溶媒或赋形剂可能有毒时，另加一组空白对照。
如果急性毒性试验结果毒性很低，测不出LD50，也未见明显毒性反应，可设高、低两个剂量，高剂量一般为拟用于临床剂量50倍以上(有困难时，可适当减少剂量，最低不能低于临床剂量30倍)并应高于药效学试验的高剂量。
化学药物长期毒性试验技术指导原则
文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持.1文档收集于互联网，如有不妥请联系删除.化学药物长期毒性试验技术指导原则一、概述长期毒性试验（重复给药毒性试验）是药物非临床安全性评价的核心内容，它与急性毒性、生殖毒性以及致癌性等毒理学研究有着密切的联系，是药物从药学研究进入临床试验的重要环节。
在药物开发的过程中，长期毒性试验的目的是通过重复给药的动物试验表征受试物的毒性作用，预测其可能对人体产生的不良反应，降低临床试验受试者和药品上市后使用人群的用药风险。
具体包括以下五个方面：①预测受试物可能引起的临床不良反应，包括不良反应的性质、程度、剂量－反应关系和时间－反应关系、可逆性等；②判断受试物反复给药的毒性靶器官或靶组织；③推测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量范围；④提示临床试验中需重点监测的指标；⑤还可以为临床试验中的解毒或解救措施提供参考。
必须强调的是，长期毒性试验的最终目的是为临床试验和临床用药服务。
本指导原则旨在为长期毒性试验提供技术参考，同时也希望能够对药品的技术审评工作提供帮助，促进药品审评机构与药品注册申请人之间就长期毒性试验达成更为广泛的共识。
本指导原则为化学药物长期毒性试验的一般性原则，仅代表目前对于长期毒性试验的基本认识，其中的内容不完全是进行药物长期毒性试验时必须完成的内容。
具体药物的长期毒性试验应在本指导原则的基础上，根据药物的自身特点制订试验方案。
二、立题原则药物开发的背景和基础研究资料各不相同，在进行长期毒性试验之前应对药物的已有资料进行综合分析，判断是否可以通过已有资料达到长期毒性试验的目的，为临床试验和临床用药提供支持。
原则上，如果已有资料尚不能达到长期毒性试验的目的，从保证临床用药安全的角度就应该进行长期毒性试验；反之，则可以不必进行长期毒性试验。
三、基本原则（一）试验管理根据《中华人民共和国药品管理法》的规定，药物的长期毒性试验必须执行《药物非临床研究质量管理规范》。
药物长期毒性试验中不同给药周期试验浅析
审评二部黄芳华长期毒性试验是药物非临床安全性评价的核心内容，通过重复给药的动物试验表征受试物的毒性作用，预测其可能对人体产生的不良反应，降低临床受试者和药品上市后使用人群的用药风险。
针对长期毒性试验，《中药、天然药物长期毒性试验技术指导原则》和《化学药物长期毒性试验技术指导原则》均在国内首次提出了“可以用不同给药期限的长期毒性试验来分别支持Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期临床试验”，即对于一些临床疗程较长的药物，药品注册申请人可以根据药物开发的实际情况，选择在Ⅰ期临床前、Ⅱ期临床前或Ⅲ期临床前分别报送支持不同阶段临床研究的长期毒性试验资料。
在该指导原则发布后，有些注册申请人已开始接受该种方式，并进行了分阶段提交长期毒性试验资料。
但是有些申请者未能全面理解甚至是误解了该不同给药周期长期毒性试验的具体涵义，导致虽采用了此种方式而未能充分体现出此种方式的优越性，尤其是在中药新药的申请过程中。
现根据国际上对长期毒性试验的要求，对分阶段要求及不同给药周期长期毒性试验进行浅析。
以下仅属个人观点，有不同意见欢迎交流。
一、长期毒性试验的名称和所包含内容首先，需明确一下“长期毒性试验”这一名称，通常所指长期毒性试验，包含了不同给药周期的试验，事实上“长期毒性试验”该名称仅限于国内使用，在撰写指导原则的过程中，因为考虑到目前国内的实际使用情况和习惯，而沿用了该名词。
国际上将此类试验统称为重复给药毒性试验（Repeat dose toxicity studies），区别于急性毒性试验（Acute toxicity study），是观察动物重复给药后的影响，来预测受试物对人体是否有潜在的影响。
重复给药毒性试验包含了不同给药周期的试验，1-4周为短期毒性试验（short-term toxicity studies），3个月为亚慢性毒性试验（subchronic toxicity studies），6-12个月为慢性毒性试验（chronic toxicity studies）。
一般药理研究中SD应注意的关键问题
一般毒理研究中SD应注意的关键问题国家上海新药安全评价研究中心马璟2008-101.理论基础,预初实验2.供试品特性,合理设置对照3.动物选择依据充分4.剂量设计及给药方式5.检测指标考虑特殊要求6.总结报告，综合评价长期毒性研究的试验设计应该在对受试物的认知基础上，遵循基本原则整体性原则新药的开发是一个连续的、渐进的系统工程，长期毒性研究是新药开发的一个有机组成部分。
长期毒性研究不能与药理学、药代动力学和其它毒理学研究割裂，试验设计应充分考虑其它药理毒理研究的试验设计和研究结果。
长期毒性研究的结果应该力求与其它药理毒理试验结果互为印证、说明和补充。
具体问题具体分析长期毒性研究的试验设计应该在对受试物的认知基础上，遵循“具体问题具体分析”的原则进行。
试验设计应根据化合物的结构特点和理化性质、同类化合物在国内或国外的临床使用情况、临床适应症和用药人群、临床用药方案、相关的药理学、药代动力学和毒理学研究信息等综合考虑。
随机、对照、重复长期毒性研究的试验设计应遵循“随机、对照、重复”的原则。
1.扎实的理论基础,细致的预初实验药物毒理学：研究药物对机体的毒性作用及其机制，评价药物的安全性的一门专业学科。
跨医学、药学、实验动物学。
作为SD应具备宽厚的理论基础，包括生理学、生化学、药理学、实验动物学、病理学、病理生理学、临床诊断、药学等对所有毒性症状均应知其然，更应知其所以然1.扎实的理论基础,细致的预初实验实验设计前：应仔细查阅文献，注意同类药物的临床前资料或临床不良反应报道，注意前期药效、药代结果案例一：国外文献报道Rg3可特异性兴奋M3受体，在设计一从半合成Rg3类似物时，特别注意与M受体兴奋的有关症状，加强在Tmax时间点的观察，在给药后15 min观察到了动物出现明显流涎、出汗、排便症状，否则一天2次观察，这些症状很容易漏掉。
案例二：在新药评审过程中，曾有一干扰素类长毒试验未导致动物体温升高，也未发现任何毒性反应。
北京大学《药物毒理学》4药物毒理学-长期毒性试验
犬≥8 性别：雌雄各半
如果设计要求在染毒受试物期间处死一部分动物，进行某些指标动态观 察，则在试验开始时应相应增加实验动物数。
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8
实验动物染毒期限
❖ 在药物临床前毒性研究中，长期毒性试验的期限主要取决于药
物临床拟用的期限，一般为临床拟用期限的2～3倍。 还应有适当的 恢复期。
于 啮齿类，常以腹腔注射作为静脉的替代途径
➢ 经呼吸道：亚慢性：每天吸入4-6小时
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11
三、试验分组和剂量设计
☻为了要得出明确的剂量-反应关系，和确定未观察到有害作用
剂量(NOAEL)，因此至少应设：
高剂量组： 能引起较为明显的毒性作用
☻ 3个剂量组 中剂量组： 应为LOAEL
低剂量组：应相当于NOAEL
☻ 阴性(溶剂)对照组。
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试验分组和剂量设计
1．以相同物种的毒性资料作基础
1-3个月毒性试验的剂 量设计
高剂量组 急性毒性的阈剂量 1/20～1/5 LD50
中剂量组 低剂量组 阴性对照组 组距：3-10倍，最低
不小于2倍
>6个月毒性试验的剂量 设计
高剂量组 亚慢性毒性的MTD或其 1/5~1/2
长期毒性
(chronic toxicity )
/重复给药毒性
(repeated dose toxicity)
北京大学医学部 毒理学系 姚碧云 Tel：82801531
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1
基本概念
★长期毒性/重复给药毒性(repeated dose toxicity )： 实验动物反复多次接触药物所引起的毒性反应
毒理学 长期毒性试验
四、长期毒性试验的试验目的 1、发现在急性毒性试验中未发现的毒作用，为受试物的毒作用研究提供新的信息； 2、描述毒反应的性质和程度； 3、研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官； 4、研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量—反应(效应)关系，确定其观察到有害作用的最
出现毒性反应。同时应设溶剂或者已知药物的毒性对照组。
2.动物：应是年轻健康、来源清楚，对药物敏感、与人类代谢相类似的动物。
3.给药途径：与临床拟用途径一致。
4.观察指标：应能反映实验动物功能及结构的完整性是否受到损害。
一般是以药政部门的技术要求规范为核心，同时兼顾给药时限和给药剂量这两个重要因
素，对整个长期毒性试验做一个较为合理的安排和设计，力争高效率、全面地了解药物长期
行染毒,试验期间观察记录每组动物死亡数。当试验组累积发生一半动物死亡即可终止试验。 此时，计算累积总接触剂量[LD50(n)]，根据公式计算 K 值，进行评价。但若接触剂量已累积 达到 5 个 LD50 剂量，也可终止试验。 2.剂量递增法：
在试验期间，当化学毒物引起动物累积死亡一半时即可终止试验，计算 K 值进行评价。 一般来说，在试验第 2l 天也可结束试验，因为这之前如果动物没有死亡或死亡数不足一半， 说明其累积剂量已达 5.26LD50，即 K＞5。
•光照： 持续 12 小时明亮，12 小时黑暗，有利于刺激动物甲状腺激素、促肾上腺皮质 激素和生长激素的分泌；
•通风条件： •饮水质量：
•饲料配方：所用饲料应符合动物的营养标准，若用自已配制的饲料，应提供配方及营养 成分含量的检测报告，若是购买的饲料，应注明生产单位。
一般药理研究中SD应注意的关键问题
一般毒理研究中SD应注意的关键问题国家上海新药安全评价研究中心马璟2008-101.理论基础,预初实验2.供试品特性,合理设置对照3.动物选择依据充分4.剂量设计及给药方式5.检测指标考虑特殊要求6.总结报告，综合评价长期毒性研究的试验设计应该在对受试物的认知基础上，遵循基本原则整体性原则新药的开发是一个连续的、渐进的系统工程，长期毒性研究是新药开发的一个有机组成部分。
长期毒性研究不能与药理学、药代动力学和其它毒理学研究割裂，试验设计应充分考虑其它药理毒理研究的试验设计和研究结果。
长期毒性研究的结果应该力求与其它药理毒理试验结果互为印证、说明和补充。
具体问题具体分析长期毒性研究的试验设计应该在对受试物的认知基础上，遵循“具体问题具体分析”的原则进行。
试验设计应根据化合物的结构特点和理化性质、同类化合物在国内或国外的临床使用情况、临床适应症和用药人群、临床用药方案、相关的药理学、药代动力学和毒理学研究信息等综合考虑。
随机、对照、重复长期毒性研究的试验设计应遵循“随机、对照、重复”的原则。
1.扎实的理论基础,细致的预初实验药物毒理学：研究药物对机体的毒性作用及其机制，评价药物的安全性的一门专业学科。
跨医学、药学、实验动物学。
作为SD应具备宽厚的理论基础，包括生理学、生化学、药理学、实验动物学、病理学、病理生理学、临床诊断、药学等对所有毒性症状均应知其然，更应知其所以然1.扎实的理论基础,细致的预初实验实验设计前：应仔细查阅文献，注意同类药物的临床前资料或临床不良反应报道，注意前期药效、药代结果案例一：国外文献报道Rg3可特异性兴奋M3受体，在设计一从半合成Rg3类似物时，特别注意与M受体兴奋的有关症状，加强在Tmax时间点的观察，在给药后15 min观察到了动物出现明显流涎、出汗、排便症状，否则一天2次观察，这些症状很容易漏掉。
案例二：在新药评审过程中，曾有一干扰素类长毒试验未导致动物体温升高，也未发现任何毒性反应。
长期毒性试验-文档资料
适宜温度为 18~27 ℃ 。
ห้องสมุดไป่ตู้
犬
单笼饲养，定量喂食。
Beagle 狗实验前至少驯 养 1~2 周; 杂种狗应先检疫，驱虫。
相对湿度为 40%~70%。
光照宜持续 12 小时明亮，12 小时黑暗。
通风条件良好。
所用饲料应符合动物的营养标准。
雌雄动物应分开饲养，每笼不宜超过 5只
2.饲养管理
如果一种化合物以1000mg/kg 的剂量，按规定期限连续给药， 不产生任何可观察到的毒性反 应，而且根据结构相关药物的 已有资料，估计不会产生毒性 的话，就不需要再用三个剂量 来进行试验，除非预期临床需 要更高的剂量。
6.给药方法及时限
每天给药，每周必须给药 7 天。给药期限长（3个月或以上） 的药物每周至少应给药6天。
主要因素
温度(℃ ) 湿 度 动物类别
小鼠、大鼠
20-26 40-60%
豚鼠、家兔
18-28 40-60% 18-28
犬
40-60%
换气次数
气流速度 压 力 洁 净 度 落下细菌 照 噪 明 声
10-15次/h
13-18cm/s 正 压 100000级 ＜＝3个/皿
150-300 Lux
10-15次/h
低剂量 X高剂量 计算
高剂量组--产生明显或严重的毒性反应，或个 别动物死亡（但死亡率应控制在 20% 以内）； 空白对照--溶媒或其它赋形剂，若溶媒或赋形剂有毒性时则增加 正常对照组
<3月，大鼠♂♀各20只/组 ≥3月，大鼠♂♀各30只/组 大动物6-8只/组（♂♀各半）
5.剂量及分组
在选择合适的剂量时还应考虑到： ①药物在体内的生物蓄积作用。对于高蓄积性药物应 适当减少其剂量，否则在长期毒性试验结束时各剂量均有 可能出现毒性作用；
化学药物长期毒性试验技术指导原则
文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持.1文档收集于互联网，如有不妥请联系删除.化学药物长期毒性试验技术指导原则一、概述长期毒性试验（重复给药毒性试验）是药物非临床安全性评价的核心内容，它与急性毒性、生殖毒性以及致癌性等毒理学研究有着密切的联系，是药物从药学研究进入临床试验的重要环节。
在药物开发的过程中，长期毒性试验的目的是通过重复给药的动物试验表征受试物的毒性作用，预测其可能对人体产生的不良反应，降低临床试验受试者和药品上市后使用人群的用药风险。
具体包括以下五个方面：①预测受试物可能引起的临床不良反应，包括不良反应的性质、程度、剂量－反应关系和时间－反应关系、可逆性等；②判断受试物反复给药的毒性靶器官或靶组织；③推测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量范围；④提示临床试验中需重点监测的指标；⑤还可以为临床试验中的解毒或解救措施提供参考。
必须强调的是，长期毒性试验的最终目的是为临床试验和临床用药服务。
本指导原则旨在为长期毒性试验提供技术参考，同时也希望能够对药品的技术审评工作提供帮助，促进药品审评机构与药品注册申请人之间就长期毒性试验达成更为广泛的共识。
本指导原则为化学药物长期毒性试验的一般性原则，仅代表目前对于长期毒性试验的基本认识，其中的内容不完全是进行药物长期毒性试验时必须完成的内容。
具体药物的长期毒性试验应在本指导原则的基础上，根据药物的自身特点制订试验方案。
二、立题原则药物开发的背景和基础研究资料各不相同，在进行长期毒性试验之前应对药物的已有资料进行综合分析，判断是否可以通过已有资料达到长期毒性试验的目的，为临床试验和临床用药提供支持。
原则上，如果已有资料尚不能达到长期毒性试验的目的，从保证临床用药安全的角度就应该进行长期毒性试验；反之，则可以不必进行长期毒性试验。
三、基本原则（一）试验管理根据《中华人民共和国药品管理法》的规定，药物的长期毒性试验必须执行《药物非临床研究质量管理规范》。
桑杜口服液急性毒性和长期毒性试验
收稿日期：２０１８－０６－０９ 基金项目：国家自然科学基金（编号：３１７０２２８６）。 作者简介：奚照寿（１９６６—），男，江苏泰兴人，副教授，主要从事兽医
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江苏农业科学 ２０１９年第 ４７卷第 １７期
料消耗 １次。 １．４．３ 指标检测及病理学检查 １．４．３．１ 血液细胞学指标检测 于给药 ３０ｄ结束时，取 １０ 只大鼠（雌、雄各半），大鼠经全麻后从腹主动脉采血，血液经 抗凝处理后，采用全血自动分析仪测定血液中白细胞、中性白 细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、红 细胞、血红蛋 白、红细胞压积和血 小 板 的 含 量，取 各 指 标 平 均值。 １．４．３．２ 血清生化指标检测 于给药 ３０ｄ结束时，取 １０只 大鼠（雌、雄各半），大鼠经全麻后从腹主动脉 采 血，制 备 血 清，采用血液生化自动分析仪检测血清中谷丙转氨酶、谷草转 氨酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶活性及血尿素、肌酐、葡萄糖、 白蛋白、总蛋白、总胆固醇、甘油三酯含量，取各指标平均值。 １．４．３．３ 病理检查 于给药 ３０ｄ结束时，各组取 １０只大鼠 （雌、雄各半），在以上采血结束时进行剖检。称量心、肝、脾、 肺、肾、卵巢子宫、睾丸质量，并计算各脏器系数，取各指标平 均值；必要时对肝、肾、脾、胃、睾丸、卵巢、十二指肠、结肠等主 要脏器进行组织病理学检查。 １．５ 数据处理与分析
４周龄清洁级 Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ８０只，雌、雄各半，购自扬州大 学兽医学院比较医学中心。大鼠饲料经６０Ｃｏ照射，饮水为符合 城市饮用水标准的灭菌自来水。大鼠实行自由采食和饮水。 １．３ 急性毒性试验方法 １．３．１ 动物分组与处理 预试验：取 ＩＣＲ小鼠（清洁级）４０ 只，雌、雄各半，分为高、中、低浓度药物组和空白对照组，每组 １０只。给药组药物浓度分别为 ４．０、２．０、１．０ｇ／ｍＬ，空白对照 组给以生理盐水。各组 １次灌胃给药，给药量为 ０．４ｍＬ。自 灌药后每日观察小鼠饮食、行为及死亡情况。连续观察 ７ｄ 发现，７ｄ内小 鼠 无 任 何 异 常。 因 此 根 据 动 物 预 试 验 结 果 不 能测出半数致死量（ＬＤ５０），依据新兽药注册管理办法急性毒 性试验技术规范，对桑杜口服液进行最大给药量试验 。 ［３］
急性毒性和长期毒性试验预算
急性毒性和长期毒性试验***主治非小细胞肺癌，为按照我国《药品注册管理办法》及《生物制品注册分类及申报资料要求》,拟开展CAPRI细胞原液的急性毒性试验、长期毒性试验（待定）。
首先要对***急性毒性、长期毒性试验进行预算。
实验条件:SPF动物房,动物实验环境设施合格证1、急性毒性试验：选取健康的昆明系小鼠（18.00～22.00g/只）,按低、中、高的给药剂量设4-5个处理组,于24h内分2～3次静脉注射给药进行急性毒性试验。
观察指标：给药后立即观察动物的反应情况,并继续观察4周,记录动物毒性反应表现及出现和恢复时间,观察动物食量,在第7、14、21和28天称量动物体重。
于给药后28d,取血检测血液学指标(红细胞计数、血红蛋白、血小板、白细胞计数及分类)及血生化指标,处死动物,进行剖检,取心、肝、脾、肺、肾、肾上腺和胸腺,称重并进行肉眼剖检。
CAPRI细胞急性毒性试验预算名称品种数量具体内容金额费用动物费Km6060只×20元/只=￥1,200.00观察费60只×14d×1元/d=￥1680.00静脉注射给药费60只×36次×1元/次=￥1080.00检测费60只×35元/套=￥2,100.00取材费60只×2元/只=￥120.00合计￥6480.00注：（1）、次数预算不包括|：人员费用、以及试剂、耗材、仪器等费用（2）、试验实行时间需要根据细胞类试验情况决定（3）亮标处（给药剂量、处理组、观测指标、试验时间）为需要根据Capri细胞特点重点细化的地方（4）检测费是否需要根据免疫毒性检测项目来做评估待定2、长期毒性试验将80只大鼠随机分为空白对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组20只，每天给药1次，连续给药3个月（6个月），停药3周，观察给药中、末期及停药恢复期大鼠的一般状况，称量大鼠体重，计算脏器系数，测定主要血液学指标、生化学指标，并进行脏器组织病理学检查。