猪戊型肝炎的研究
猪戊型肝炎病毒分子生物学与流行病学研究进展
炎病毒病原 学、 流行病 学、 实验 室诊断 、 因结构 等方面研 究取得 了重大进展 ， 基 本文就 Ｈ Ｖ的形态、 因分型、 Ｅ 基
分子 生物 学特 性 、 型肝 炎 （ ｅａ ｔ Ｈ 的 流行 病 学特 点作 一 简要 概 述 。 戊 Ｈ ｐｔｉ Ｅ， Ｅ） ｉｓ
关键词 ：戊型肝 炎病毒 ； 态； 因分 型；分子生物学特性 ； 形 基 流行病 学
Ｋｅ ｏ ｄ ｙ ｗ ｒ ｓ：Ｈｅ ａｉｉ ｖｒ ｓ ｍｏ ｐｈ ｌｇ ；ｇ ｎｏｙ ｅ ｐ ｔｔｓＥ ｉ ； ｒ ｏｏ ｙ ｅ ｔ ｐ ；ｍｏｅ ｕ ａ ｈ ａ ｔ ｒｓｉｓ ｅ ｉ ｅ ｏｏ ｙ ｕ ｌｃ ｌ ｃ ａ ｃ ｅｉｔｃ ； ｐ ｄ ｍｉｌ ｇ ｒ ｒ
戊 型肝炎病 毒 是 １８ ９ ２年 发 现 的一 种 新 型 肝 炎病 毒 Ｊ 当时称 为肠 道 传 播 的非 甲非 乙型 肝 炎 ，
ａ ｚ ｏ ３ ０ ０ Ｃ ｎ Ｌ ｎｈ ｕ７ ０ ７ ， ｉ ） ｈ ａ
Ａｂｔ ｃ ｓｒ ｔ：Ｈ ｐ ｔｉ Ｅｖ ｕ Ｈ Ｖ）ｉ ａｎｗＨｅａ ｔ ｉ ｓ ｈｔ ｍ ｒｅ ９ ０ ．Ｉ ｅｅｔ ｅｒ， ｉ ｉｃｎ ｒ ｒｓ ｈｓ ａ ｅａｔ ｉ ｓ（ Ｅ ｉｓ ｒ ｓ ｅ ｐ ｔｉ ｖｒ ａ ｅ ｅｇｄｉ １８ ｓ ｎｒｃｎ ａｓ ｓ ｎｆａｔ ｏ ｅｓ ａ ｉｓ ｕ ｔ ｎ ｙ ｇｉ ｐｇ
郝 宝成 兰 喜 刑小勇。 项海涛。胡永浩 柳纪省 梁剑平 一， ， ， ， ， 一，
（ ．中国农 业 科学 院兰 州畜牧 与兽药 研 究所新 兽药 工程重 点 实验室 ， １ 兰州 ７ ０ ５ ； ．中国农 业 ３０ ０ ２ 科学 院兰 州兽 医研 究所 家 畜疫 病病原 生物 学 国家重 点实验 室 农业 部畜禽 病毒 学重 点开放 实验 室
湖南地区猪戊型肝炎流行病学调查研究
１２ 样 品 处 理 ．
采集 的血样每份约 ５ｍ ， ０ ０ ／ ｎ离心 ２ ｉ Ｌ３ ０ ｍｉ ｒ ０ ｎ ｍ 分离 血清 ， 吸取 血清 于 检测 瓶 中 ， 于一 ０℃超 低 置 ２
温 保存 ， 时直接 吸取 ； 用 同时将 采集 的粪 样置 于干 燥 清洁 的采样 盒 中， 存于超 低温 冰柜 中备用 。粪 保 样检测 前处 理 ：取 １ｇ粪样 品，加入 １ ０倍体 积 的 Ｐ Ｓ溶 液 （ 酸 盐缓 冲溶 液 ） 充分 混 匀使 成悬 液 ， Ｂ 磷 ，
基 因型属Ⅳ型。 关键词 ： ； 猪 戊型肝 炎病毒 ； 检测 ； 序列分析
戊型肝炎 （ ｐ ｔｉＥ 是由戊型肝炎病 毒 （ Ｅ ） Ｈｅａ ｔ ） ｉｓ Ｈ ｖ 引起 的一种 严重 危 害人类 健康 及养 猪 业 的人 兽共 忠传 染 病 ， 猪是 该病 毒 的贮存 宿主 和 传染源 ， 主要 由粪 一 口途径传播 。猪感染戊 型肝炎病 毒后可 检测 到病 毒血症 。中国南方某 农村地 区人与猪 戊型肝炎 病 毒 的检 测 分 析 表 明 ，猪 粪 便 和 人 血 清 中 Ｈ Ｖ Ｅ Ｒ Ａ阳性【 戊型肝炎病毒 是一种 单股正链 Ｒ Ａ病 Ｎ １ ］ 。 Ｎ 毒， ３个开放 阅读框 ， 有 全基 因组长约 ７ ｂ 目前 ．ｋ。 ２ 根据 Ｈ Ｖ分类 、各株 核苷酸 同源性 的大 小及 系统 Ｅ 进 化树 分析 ，可 以将世 界上 的 Ｈ Ｖ分为 ８ 基 因 Ｅ 个 型嘲 。随着对戊 型肝 炎病毒病 原学和流 行病 学研究 的深入 ， 人们 已发现猪 的戊型肝 炎病毒 与人 的戊型 肝炎病毒有较 为密切 的关 系 。大量 资料 表 明， Ｅ ＨＶ 不仅在人类 中流行 ，亦广 泛分 布于 多种动物 中 ， 特 别是猪【 荷兰 、 】 。 新西兰猪粪便排 毒率分别为 ２ ％和 ２ ３％， ８ 日本 、 印度等猪 病毒血症率 在 ２ １％ｔ 陈铁 ％ ０ ３ ￣ 。 桥等 曾解剖 ２ ６例肝肿 大 的病 死猪 ，经 检测 为戊 型 肝炎［ ４ １ 了解湖南地 区猪戊 型肝炎感 染与流 行情 。为 况 ， 一步 深入 研 究猪戊 型 肝炎 的发 病机 理 、 进 猪戊 型肝 炎病 毒在猪 不 同组 织 中的含 量 分布 和分 子病 理学 ， 笔者进 行 了此项 研究 ， 将结果 报告如 下 ， 现 供 同仁参考 。 １ 材 料与方法 １１ 样品 来源 ． ２０ 年 ５ １ ０８ — １月在 湖南省湘 中的湘 潭 、 湘南 的 永州 、 北 的岳 阳、 湘 湘东 的醴 陵 、 西 的怀 化 ５个地 湘
猪戊型肝炎介绍
猪戊型肝炎的详细介绍猪戊型肝炎是颇受关注的新出现的人畜共患传染病之一。
戊型肝病毒（SHEV）是人病毒性肝炎的主要原因。
人戊型肝炎病毒是病毒性肝炎的主要病原之一，妊娠妇女感染后死亡率可达20%，人戊型肝炎病毒可以实验感染者。
1997年美国学者在本土的一只猪上分离出1株野生型戊型肝炎病毒，发现其与人类的戊型肝炎病毒有极高的同源性，并发现它可以感染黑猩猩和恒河猴，从而首次证实了戊型肝炎病毒种间传播的可能性。
SHEV目前在美国猪群中流行率很高，几乎难以找到阴性猪群，仅能在SPF猪中找到阴性猪。
在加拿大、荷兰、西班牙、新西兰、澳大利亚、日本、台湾、尼泊尔等地相继发现SHEV，印度、缅甸和我国猪群中都存在戊型肝炎抗体，血清流行病学研究表明该病毒几乎无处不在。
养猪场内病毒的感染主要是粪便经口感染。
常因饮用水被污染而引起戊型肝炎(HE)的爆发、流行和散发。
对感染猪群不同阶段猪的血清学检测表明，可以感染所有生长阶段的猪，并在其间传播，母源抗体一般在2月龄时下降，此后不久开始血清阳转。
感染早期的猪的组织可以使接种猪感染，显示肝组织在传播中的作用。
本病临床症状一直很难复制。
Meng等用SHEV接种SPE 猪，检测到了病毒血症，但未见临床症状，SHEV水平无显著升高。
Kasorn-dorkbua等用猪戊型肝炎病毒人工感染妊娠母猪诱发了亚临床病毒性肝炎，可见轻微的显微镜下病变，但无明显的临床病症，肝酶水平不升高，繁殖性能和胎儿不受影响，也未见子宫内传播。
由于难以找到SHEV阴性猪群，本病的研究一直采用SPF猪。
Thacker等的研究显示，早期(17一19日龄)断乳可以防止垂直传播，仔猪严格隔离可以防止水平传播，通过这些措施能够建立无SHEV猪群。
对猪防治本病可采取早期（17日龄～19日龄）断奶，可以防止垂直传播，仔猪严格隔离可以防止水平传播，这些措施有助于建立无病毒猪样。
人畜共患病——猪戊型肝炎病毒感染概况
二、人畜共患病的分类
1、按病原体种类进行分类
①由细菌引起的人畜共患病如鼠疫、布氏杆菌病、鼻疽 、炭疽、猪丹毒、结核病等。
②由病毒引起的人畜共用病，如流行性乙型脑炎、狂犬 病、口蹄疫等。
③由衣原体引起的人畜共患病，如鹦鹉热等。 ④由立克次氏体引起的人畜共患病，如恙虫病、Q热等
。 ⑤由真菌引起的人畜共患病，如念珠菌病等。
二、人畜共患病的分类
1、按病原体种类进行分类
⑥内寄生虫引起的人畜共患病，如弓形体病、旋毛虫 病、绦虫病等。其中：
◆属于原虫有弓形体、肉孢子虫、隐孢子虫；
◆属于吸虫有东毕血吸虫、肝片吸虫、中华双腔吸虫、卫 氏并殖吸虫、华枝睾吸虫；
◆属于绦虫有猪囊尾蚴、棘球蚴、多头绦虫、牛囊尾 蚴、犬复殖孔绦虫、微小膜壳绦虫；
2、与狗有关的疾病
（1） 狂犬病：狂犬病毒通过咬伤处进入人体，沿周围传入 神经而到达中枢神经系统，引起一系列症状，如兴奋、呼 吸困难、怕风、怕水、麻痹等。 （2）巴斯德菌感染：其特征是人在被咬伤后几个小时内， 被咬处感觉尖锐疼痛。疼痛部位还出现红肿，附近淋巴结 肿大。如果不经适当治疗，感染会导致并发症，如肌腱或 骨质破坏。
五、人畜共患病与宠物饲养
2、与狗有关的疾病
（3）包虫病：这是一种慢性寄生虫病。凡跟病犬接触 的人，都有可能由于抚摸犬的皮毛，把虫卵带入口中 。一旦虫卵进入人的肠胃，卵内的六钩蚴会脱壳而出 ，钻入肠壁随血液带到全身各脏器，逐渐发育成棘球 蚴。最大的可形成小孩头大小的囊体。如寄生在肝脏 、肺部，还极易引起其他病变。
二、人畜共患病的分类
2、按病原储存宿主的性质分类
①动物源性人畜共患病(又称为兽源性人畜共患病)：这类 病是主要在动物中传播。偶而感染人的人畜共患病， 如棘球蚴病、旋毛虫病和马脑炎等。
猪戊型肝炎病毒研究进展
及 无污 染 而成 为一 种理 想 的饲 料 添加 剂 。我 国拥有
兽 医． ０ （ ： ２ ５５ ８ ０ ）．
丰 富 的 中草药 资 源 ， 充 分利 用资 源优 势 ， 应 加速 对 天
ｆ 林 霖ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ， 林 武 ， 自军 ． 草 药 离子 导 入 治 疗 家 畜 痛 症 ８ ４ １ 冉 杨 中 ６ 例 Ⅱ． 龙 江 畜 牧 兽 医，０ ５９： ． １ 黑 ２ ０ （） ２ ２ ［ 李 文 涛， 宏伟 ， 少杰 ， ． 草 药 添 加 剂 研 制 应 用 中应 注 ５ 】 王 韩 等 中 意 的 问 题 Ⅱ． 料博 览，０ ５８： — ９ ］ 饲 ２ ０ （） ７ ３ ． ３ 【 张志远， ６ １ 汪德 刚， 金 合 ． 草 药 添 加 剂 对 肉牛 增 重 影 响 的 王 中
究 。 １９ ９ ７年 Ｍｅ ｇ ］ Ｅ Ａ 方法 证 实 美 国猪 中 ｎ 用 ＵＳ 存 在 戊 型肝 炎抗 体并 用逆 转 录巢 式 聚合酶 联反 应法 （ Ｔ ｎ Ｃ 检 测 到 猪 Ｈ Ｖ Ｒ Ａ， 发 现 其 与 人 类 Ｒ — Ｐ Ｒ） Ｅ Ｎ 后
４℃下保 存 易 裂解 ， 复 冻融 及 在 蔗糖 中可 结 成 团 ， 反
病 毒 。１ ８ ９ ３年前 苏 联学 者 Ｂ ｌ ａ ａａ ｎ等 首 次用 免疫 电 ｙ 镜 技 术从 一 名 志愿 受试 者 粪便 中观察 到 直径 为 ２ ７ ３ ｍ 的病 毒 样 颗 粒 ，９ ９年 东京 国 际会 议 正 式命 ０ｎ １８ 名 该 经 由肠 道传 播 的非 甲非 乙型 肝炎 病毒 为戊 型肝 炎 病 毒 。 １９ ９ ０年 Ｒ ｙ ｓ 首 先 获 得 Ｈ Ｖ 的基 因克 ｅｅ 等 Ｅ 隆并 进行 了序 列 分析 ，由此开 始 了对戊 型 肝炎 的研
猪源戊型肝炎病毒研究现状及进展
获 得 了戊 型肝 炎 病 毒 ｃ） 克隆 ， ＇ 式 命 名 为 戊 型 肝 炎 病 １ ＮＡ 并 Ｆ 毒 Ｈ Ｖ Ｔ ・ ， 得 Ｈ Ｖ 分 子 生 物 学 方 面 的 研 究 获 得 了 突 Ｅ Ｅ １ ｌ使 Ｅ 破性 进 展 在 随 后 的 Ｊ 年 里 ， 别 完 成 丁来 自 缅 甸 、 基 斯 Ｌ 分 巴
猪戊型肝炎研究进展---修改
5猪戊型肝炎的检测手段
通过检测HEV病毒或其抗原组份，特异性的抗 体及HEV RNA进行HEV感染与否进行诊断。 A 酶联免疫吸附试验检测 B 血清中和试验 C 免疫荧光法 D 免疫荧光阻断检测 E RT-nPCR法
HEV的RT-nPCR检测法
引物设计非常关键。
不同HEV基因型常对引物有一定的选择性，不易 找到具有普遍通用性的高灵敏引物。
一般选择与基因1型或2型非常特异的基因序列， 而基因3~8型是采用简并引物进行扩增，该类引 物可以扩增同源性较低的同类序列，因此对戊肝 的检出率很高。
6.猪戊型肝炎的研究意义
HE分布广泛 地域性：主要在发展中国家流行，而目也
在很多发达国家和地区流行。 不同动物：在非灵长动物、啮齿类动物、 猪、羊、牛等中也广泛存在。
4.猪戊型肝炎临床症状和病理变化
临床症状 HE的潜伏期一般15 d~75 d，平均36 d 。感染
后，一般发病急，通常是发热、全身疲乏、食欲不 振、恶心呕吐、尿液深黄、眼睛和皮肤发黄，肝功 能检查出现转氨酶迅速升高，黄疸较常见，可持续 1周。有时呈亚临床症状。
病理变化 1.急性重型：肝组织损伤严重，肝细胞气球样变， 灶性及小片状坏死，枯否氏细胞增生吞噬脂褐素 2.急性黄疸型：肝细胞肿胀及嗜酸性变，枯否氏细 胞增生，汇管区炎及轻至中度碎屑坏死。 3.急性无黄疽型：肝细胞肿胀，脂肪变性明显，汇 管区炎伴碎屑坏死较重型及急性黄疸型轻。
2 戊型肝炎病毒的生物学特性
病原学 基因分型
3.猪戊型肝炎流行学特性
HEV可以感染人，还在动物中广泛分布与传播。 流行特点： 1. 经粪和口途径传播，包括污染的水、食物等。 2.多急性发病，病死率高，尤其孕妇 3.年龄分布集中。 猪：主要感染2~6月龄；人：主要发生在20~59岁 4.多发与秋冬季节
遂平县猪戊型肝炎血清流行病学调查研究
摘 要：猪戊型肝炎为人畜共患传染病，弄清遂平县猪戊型肝炎流行情况对该地区制定戊型肝炎防控措施至关重要。
应用双抗原夹心酶联免疫法对来自遂平县328份猪血清样品进行戊型肝炎病毒（HEV）抗体检测，结果显示104份血清样品检测为阳性，平均阳性率为31.71%（104/328），不同乡镇猪HEV抗体阳性率为18.06～46.15%；其中仔猪、保育猪、育肥猪和种猪不同年龄阶段猪群阳性率分别为16.0%、22.0%、30.36%和43.96%；规模化猪场HEV阳性率低于散养猪场，分别为22.08%和57.95%。
猪HEV在遂平县的流行情况较为严重，对人畜健康产生较大的威胁。
关键词：遂平县；猪戊型肝炎；流行情况调查戊型肝炎是由戊型肝炎病毒（HEV）感染而引起的人畜共患性传染病，该病毒可通过食物和饮水传播，甚至血液和垂直传播[1]。
HEV分为4个基因型，基因1型和2型仅感染人类，导致孕妇和慢性肝炎患者死亡率增加，而基因2型和3型则可以感染包括人在内诸多宿主，其中猪为重要的储存宿主，也有文献报道HEV可以通过猪传染给人类[2]。
加强对猪HEV流行情况的监测有利于进一步对该病进行防治，本次研究通过对遂平县部分地区6个规模化猪场和4个散养场的328份血清进行猪HEV抗体检测，以初步了解猪HEV在遂平县的流行情况。
1 材料与方法1.1 样品来源本次研究于2017年3月～8月从遂平县随机抽选10个养猪场采集生猪血液样品328份，其中6个规模化养殖场240份，4个散养场88份。
颈静脉采集血液样品每份5ml左右，室温静置约3h后吸取上清液至洁净离心管内，分别进行标记后于-20℃保存，待检。
1.2 检测方法戊型肝炎病毒 IgG 抗体双抗原夹心法酶联免疫诊断试剂盒购自于北京万泰生物有限公司，其操作方法与判定标准参考试剂盒提供的说明书进行。
2 调查结果2.1 遂平县不同来源猪HEV抗体检测结果通过对遂平县不同地区共328份猪血清样品进行HEV抗体检测，结果显示104份血清样品检测为阳性，平均阳性率为31.71%，被调查的5个乡镇均存在HEV抗体阳性猪群，其阳性率为18.06～46.15%，其中以E乡镇猪HEV抗体阳性率最高，为46.15%，B乡镇阳性率最低，为18.06%。
猪戊型肝炎研究进展
率 和范 围 。另外 ， ＨＥ在 非 多 发 地 区呈 散 发 型 ， 没有 和 １ ０头 ４月 龄 猪 中 的 ２ ８ ４头 （ ３ ） 到 了 ＨＥ １ 查 Ｖ
ＮＡＴ 。台湾 和 墨 西 哥 ［ １ 群病 原学调查 发现 ， 妇猪 发生 因饮 水 引起 的群 体 感染 事 件 。已得 到 确认 的病 Ｒ Ｍ］
例 是通过 野猪 、 和食 用 猪 肉感 染 和通 过 输 血 感染 鹿 途 径 ， 该还 存在未 知 的传 播途 径 。 应
台湾 ２月 龄 ～ ４月 龄 猪 血 清 中 ３ ％ 检 测 到 ＨＥ ８ Ｖ
原 阳性 。英 国 Ｂ ｎ ｓＭ 等 ［ 从 ４ 猪粪样 品中检 ａ ｋ １ 幻 ２份 到１ ６份 ＨＥ Ｒ Ｖ ＮＡ 阳性 。在 我 国北 京 、 南 和 浙 河
为 １ ， ７ 两者差异非常显著 。郑英杰等［ 对 ２ １ 刀 个人
在 ４ 确猪 的 ＨＦ 感 染 实 况 ， 北 起 北 海 道 南 迄 九 洲 的 群 ＨＥ感染 特 征 进行 了 比较 ， ３ ０例 接 触 猪 职业 ． Ｖ 对 抗 Ｖ ｇ ５ ２ 个 农场 的 ２５０头猪 检 测 抗 ＨＥ ｇ ５ ０ Ｖ ＩＧ。结 果 发 人 群 中 ， ＨＥ ＩＧ 阳 性 者 ２ ４ 人 ，阳 性 率 ４７ 而在 ５ ２例对 照 人群 中 ， ＨＥ ＩＧ 阳性 １ 抗 Ｖ ｇ 现 阳性 猪遍及 所有 ２ ５个农 场 ， 阳性 率 随猪 月 龄 的增 ７． １ ； １ 阳性 率 ６． ０ ， 触 猪 职 业人 群 的 阳性 ２ ３ 接 加而增 加 ， 月 龄 者 为 ７ ， 龄 为 者 ４ ， 龄 者 ３９人 ， ２ ｌ ３月 ０ ４月 １通 ８ 者为 ８ ， 月龄和 ６ ７ ５ 月龄猪竟达 ９ ， ０ 而整体 阳性 率明显比对照 人群高 。曹海 俊等［］ 过调查在浙
猪戊型肝炎研究进展
１ 流 行情 况
性 率 较 低 （７２ ； 中湖 北 ６ ％￣ 湖 南 ７ ．％。Ｌ ７． ％）其 ８ Ｄ ３３ ｉ 世 界 上 第 一 次 戊 型 肝 炎 的 暴 发 应 该 在 １ ５ 等 ∞对 北 京 的猪 ＨＥ 感 染 情 况 进 行 了调 查 ， 果 ９５ Ｖ 结 年 印 度 的 德 里 地 区 ， 由于 自来 水 源 污 染 引 起 ， 是 共 表 明 北 京 地 区 的猪 Ｈ Ｖ感 染 率 很 高 ， 京 郊 区 猪 Ｅ 北 ２ ９万 人 感 染 。从 此 ， 型 肝 炎 的暴 发 时 有 发 生 。 ＨＥ 的平 均 感 染 率 为 ４ ．％～ １ ０ 戊 Ｖ ７５ ０ ％。 １５ ９ ７年 前 苏 联 吉 尔 吉斯 ， １ ０ ０ 感 染 ；９ ８～ 约 ００ 人 １７ ２ 病 原 特 征 １８ ９ ２年 ，印度 喀 什 米 尔 ５ ０ ２ ０ ０人 感 染 ； ９ １ 印 １９ 年 戊 型 肝 炎 病 毒 （ Ｖ） 一 种 无 囊 膜 的 病 毒 ， ＨＥ 是 为 度 米 尔 共 ５ ０ ２０ ０人 感 染 ； ９ １ 印 度 坎 普 尔 约 有 １９ 年 球 形 颗 粒 。直 径 为 ２ ７～ ３ ｍ，表 面 呈 尖 刺 和 锯 ４ｎ 刺 状 ， 现 两 种 不 同 形 态 ， 一 种 内部 致 密 ， 完 呈 即 为
炎病 毒 “ ，当 时 称 为 肠 道 传 播 的 非 甲 非 乙 型 肝 炎 炎 的 ２ ％，而 相 应 的 甲型 肝 炎 所 占 比例 呈 下 降趋 ５ 病 毒 ，９ ９年 正 式 命 名 为 Ｈｅａｉｓ ｉ ｓ Ｖ） １８ ｐ ｔｉＥｖｒ （ ｔ ｕ ＨＥ 。 势 ， 是 一 个 新 的 流 行 的 特 点 。 查 发 现 ，０岁 以 这 调 ２ ２ 有 戊 型 肝 炎 病 毒 主 要 经 粪 一 口传 播 ， 能 够 感 染 人 、 上 的人 群 易 感 ，０岁 以 下 感 染 率 很 低 ， 报 告 表 明 猪 、 猪 、 、 、 猫 等 多 种 动 物 ， 明 人 畜 是 该 只 有 １ 野 鸡 鸟 鼠、 表 ％左 右 ， 性 的 感 染 率 和 发 病 率 高 于 女 性 。 男
猪戊型肝炎的研究进展
２ 流 行病 学
在 全 球 范 围 内 ， 论 是在 发展 中 国家还 是 卫 生 不 和 医疗条 件 好 的发 达 国 家 ，不论 ＨＥ Ｖ在 当地 是 否 为 地 方性 流 行 ，猪 群 中普 遍 存 在着 血 清 抗 ＨＥ Ｖ抗
构 蛋 白基 因 ，含 依 赖 Ｒ Ａ 的 Ｒ Ａ多 聚 酶 序列 ， Ｎ Ｎ 长 约 ５ｂ ｋ ，主要 编码 与 ＨＥ Ｖ复 制黑猩猩 ， Ｅ 二者均出现 Ｈ Ｖ Ｅ 急 性感 染 的临床 表 现 ， 升 高 ，肝 脏 活检 呈 局 灶 Ａ 性 坏 死性 炎 症 性 改 变 ，粪 便 中检测 到 猪 特 异 Ｈ Ｖ Ｅ Ｒ Ａ，但是 Ａ 升高水平及 临床症状 明显轻于人 Ｎ ＨＥ Ｖ感染 ， 而表 现 为亚 临床感 染 。 Ｈ Ｅ的主要传染源为受到污染的水源 。在卫生
ＤＯｌ ０．９ ９ Ｊ Ｉ ： ３ ６／． １ ＳＳＮ．６ １ ６ ２ ．０１ ． １０ ３ １ ７ — ０ ７２ １ １ ． ０
戊 型肝 炎 是 由戊 型肝 炎病 毒 （ｅａｔ Ｅ Ｈ ｐｔ ｓ ｉ ｉ
ｖ ｕ ， Ｖ ￣起 的一 种 急性 、 ｉ ｓＨＥ ） ｌ ｒ 自限性 病 毒性 肝 炎 ， 主
序列 ｓＣ ２ ｗ Ｈ ５株 ， 与 Ⅳ 型 中 国人源 Ｔ 株 同源 性 高 其 ｌ 达 ８ ．％。葛 胜祥 等 在 全 国 ２ 省 、 、 ９８ ０个 市 自治 区 的
易灭活病毒 ， 病毒在碱性环境中较稳定 ， 在镁 、 锰离 子存在情况下可保持其完整性 。目前 ， 最得到认可 的是将 Ｈ Ｖ分为 ４ Ｅ 种基 因型 ， 分别为 Ｈ Ｖ ＩＨ Ｖ Ｅ 、 Ｅ 项 目来 源 ：０ １ 度蚌埠 市指导性科技 计划项 目 ２１ 年 （ 蚌科［０ １３ 号 ）名称是 《 ２ １ ］６ ， 规模猪场 ４种疾病抗 体水平检测及免疫效果评价》 。
猪戊型肝炎
I
Abstract
The objective of this study was to investigate the current prevalence of Hepatitis E Virus (HEV) in swine livers in China. Five hundred and eighty one swine liver samples and 139 serum samples were collected from slaughter-houses, these swine were purchased from Heilongjiang, Jilin, Liaoning, Hebei, Beijing and Henan. Six experiments were designed to provide enough evidence.
2．H.E 染色切片观察结果表明，536 份 HEV 免疫组织化学染色阳性的肝组织都存在不同程度 的病理变化，病变率 100%。病变表现为肝细胞变性，散在单个核固缩性坏死，淋巴细胞等炎性细 胞浸润、汇管区胆管增生，肝细胞萎缩，纤维结缔组织增生等。
3.巢式 RT-PCR 从 114 份肝脏样品中扩增到 2 条产物，与预期片段 348 bp 大小基本一致，位 于 HEV ORF2 区，用 DNAMAN 和 MEGA4.0 进行序列分析、比较显示，扩增出的 2 个片段同源性为 99.2%， 与 HEV 基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型的同源性分别为 74.9%～78.7%，73.9%～74.1%，74.6%～77%和 81.2%～ 93.7%。用扩增的核苷酸片段绘制的基因进化树显示，2 个分离株与 HEV 基因Ⅳ型 AJ344171、 AJ344172 和 AJ344183 位于同一分支，属于 HEV 基因Ⅳ型。
关于猪HEV的探研
木 瓜 蛋 白酶样 半 胱氨 酸 蛋 白酶 、富 含脯 氨酸 的 “ 链 ”结 铰 构域 、功能 未知 的 ｘ 结构 域 、Ｒ ＮＡ解 旋 酶和 ＲＮＡ依赖 的 ＮＲ 聚 合酶 。 Ｏ １ Ａ ＲＦ 多聚 蛋 白的翻 译和 翻 译 后过 程 大 多还 不 很 清 楚 。 Ｏ Ｉ ＨＥ 的 传 染 不 是 至 关 重 要 的 ，删 除 ＲＦ 对 Ｖ ０Ｆ Ｒ １的变 区不 会减 弱 ＨＥ 的传 染效 率 。 Ｖ ＯＲ ２位 于 ５ ４ — １ ８核 苷 酸 上 。 编 码 的 氨 基 酸 为 Ｆ １７７２ ６ ０个 ，为 主要 的 结 构基 因编 码 区 。ｐ Ｆ ６ ＯＲ ２氨基 酸序 列 具 有 典 型 的病 毒衣 壳 蛋 白特 征 ，且带 有 明显 的信 号 序列 样 区 段 并 含有 潜 在 的切割 位 点 ，其 中翻 译后 修饰 位 点 、蛋 白 酶 水 解位 点 １ 以上 ，糖基 化位 点 １３个 。 个 － ＯＲ ３位 于 ５ ０ — ４ ４核 苷酸 上 。对 ＯＲ ３编 码 蛋 白 Ｆ １６ ５７ Ｆ 的 了解 甚 少 ，现 已确 定 ＯＲ ３编 码产 物 为磷 蛋 白 ，与细 胞 Ｆ 的 支架 及 ＨＥ 型特 异性 免 疫 活 性有 关 ，至 少有 ４个 抗 原 Ｖ 表位 ，可 能 为型 特 异性 抗 原 表位 。ＯＲ ３蛋 白包 括反 式 作 Ｆ 用元 件 因 子 ，并编 码 一个 对猕 猴 感染 起 作用 的蛋 白。有 文 献 报 道 ，Ｏ Ｆ Ｒ ３蛋 白对 复 制 、病 毒组 装或 体 外肝 瘤细 胞 的 感 染 没有 作 用 。但是 Ｏ ３编码 的一 个 蛋 白对 体 内 的病 毒 ＲＦ
整 。ＨＥ Ｖ对 热稳定 ，当温度达到 ５ ℃时 ，５ ％的 ＨＥ ６ ０ Ｖ会失 二、猪戊型肝炎病毒 的传染途径 活。当温度达到 ６ ℃时，几乎所有的 Ｈ Ｖ９ ％） ０ Ｅ （６ 都会失活 。 Ｈ Ｖ在 猪 中被认为 是 通过粪 一口途 径传 播的 。被感染 Ｅ ２分子 生物学 ． 的猪 排 出的粪 便含 有大 量 的 Ｈ Ｖ，有可 能是 病毒传 播 的主 Ｅ 要来 源 。据 此认 为 ，与 被感 染 的猪直 接接 触 或摄 取被 粪 便 ２１基 因组结 构及 编码 ． 蛋 白猪 ＨＥ Ｖ是一个 单股 正链 Ｒ ＮＡ，基 因组 全长 约 ７２ ． 污染 的食 物或 水 ，猪会感 染 ＨＥ Ｖ。实验证 明 ，通过 口服接 Ｅ Ｅ Ｖ的 传播途 ｋ 。包 含 ５个 非 编 码 区 、３个 非 编码 区 和 ３个 相互 重 叠 的 种猪 Ｈ Ｖ 不易使 猪感染 上 Ｈ Ｖ。在研 究 猪 ＨＥ ｂ 阅读 框 Ｏ １ ＲＦ ＲＦ 、Ｏ ２和 Ｏ Ｆ 。 Ｒ ３ 径 的文 章 中指 出 ，ＨＥ Ｖ通过 静脉 内注 射和 肝 内注射 方式能 ＯＲ Ｉ 于 ２ — １ ７ 苷 酸上 。主要 编 码 与 ＮＲＡ复制 成 功 传染 。 由于被感 染的 猪的 粪便含 有大 量 ＨＥ Ｆ位 ８５０ 核 Ｖ。因此 猪 有 关 的非 结 构蛋 白 ，ｐ Ｒ １ 基酸 （ａ 列 从 Ｎ 端 到 ｃ端 粪 会 污染 灌溉 区 或沿 岸水 ，从 而导 致农 产 品或 甲壳 类动 物 Ｏ Ｆ氨 ａ） 序 的 功 能分 别 为 ：病 毒 甲基转 移 酶 、功 能未 知 的 Ｙ结 构 域 、 的污染 ，而且在 污水 中已经检 测到 了猪 Ｈ Ｖ。 Ｅ
猪戊型肝炎研究进展
9638卷第4猪群保健H E A L T H猪戊型肝炎是一种由戊型肝病毒引起的急性、暴发性、病毒性肝炎，主要由胃和消化道感染传播。
近几年来，猪戊型肝炎在各国的发病率都呈上升趋势，有报告称人类食用感染戊型肝炎的猪肉会感染戊型肝炎，可见猪戊型肝炎与人们的生命密切相关，因此更需要树立科学养殖的理念，养殖者应该对猪戊型肝炎有一定的认识，做好预防工作，从而降低病毒传染的可能性，为人们的健康生命做好良好铺垫。
猪戊型肝炎研究进展伍玉洁，杨小芹，尹 苗，吴 倩，陈希文 *（绵阳师范学院 四川生猪重大疾病监测与防控工程研究中心，四川 绵阳 621000）摘 要：我国为猪戊肝发病率比较高的地区之一，曾发生戊型肝炎的多次爆发或大面积的流行，并可传播给人类，与人的生活密切相关，回顾猪戊肝炎病毒结构特征研究，流行方式、临床症状及病理变化等，为猪戊型肝炎未来的诊断提供参照。
文章收集国内外文献资料查询酶联免疫吸附试验（ELISA ）、免疫电子显微镜（IEM ）、免疫荧光实验（IFA ）、荧光定量 RT-PCR 法对防治猪戊型肝炎进行研究，对其作了分析、比较和汇总。
为猪戊型肝炎病毒提供了有效诊断方式以及防御措施。
对猪戊型肝炎仍需养殖者认真护理，一旦确诊为动物戊型肝炎，应立即对其进行隔离治疗。
关键词：猪；戊型肝炎；流行特点；诊断；防控Research progress of swine hepatitis EYujie Wu; Xiaoqin Yang; Miao Yin; Qian Wu; Xiwen Chen *(Sichuan Research Center for Major Pig Disease Surveillance and Control Engineering, Mianyang Normal University, Mianyang, Sichuan 621000, China)Abstract ：China, as one of the regions with high incidence rate of hepatitis E in pigs, has experienced outbreaks or large scale epidemic of hepatitis E many times, which can be transmitted to humans and is closely related to human life. The structure characteristics, epidemic pattern, clinical symptoms and pathological changes of swine hepatitis E virus are reviewed in order to provide reference for the future diagnosis of swine hepatitis E. The literatures at home and abroad were collected, and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), immunoelectron microscopy (IEM), immunofluorescence assay (IFA) and fluorescence quantitative RT-PCR were used to study the prevention and treatment of swine hepatitis E. It provided an effective diagnostic method and defensive measures for swine hepatitis E virus. In conclusion swine hepatitis E still needs to be carefully cared by the farmers. Once the animal hepatitis E is diagnosed, it should be isolated and treated immediately .Key word: Swine; Hepatitis E; Epidemic characteristics; Diagnosis; Prevention and control基金项目：阿坝州科技局项目（18YYJSYJ0015）。
鸡西地区猪戊型肝炎病毒的检测及序列分析
作， 经９ ． ５ ｕ Ｌ ＤＥ Ｐ Ｃ处 理后 提 取 Ｒ ＮＡ 实 施反 转 录 。 反 转 录过 程 应 在冰 上操 作 ， 反应体系共 ２ ０ ｕ Ｌ， 组 成 成分包括 ９ ． ５ ｕ Ｌ 病毒 Ｒ Ｎ Ａ； ｌ ｕ Ｌ反 转 录 引 物 Ｒ ／ Ｏ；
４ ｕ Ｌ、 ５ ｘ Ｍ — Ｍ ＬＶ Ｂｕ ｆ ｆ ｅ ｒ ； １ ｕ Ｌ、 ２０ ０ Ｕ／ ｕ ＬＭ — Ｍ ＬＶ ； ０． ５ ｕ Ｌ、 ４ ０Ｕ／ ｕ Ｌ ＲＮａ ｓ ｅ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ： ４ ｕｌ ２． ５ ｍ ｍ ｏｌ ／ Ｌ
Ｈ ｕ ｓ ｂ ａ ｎ ｄ ｒ ｙ Ａ ｎ ｉ ｍ ａ １ Ｍ 。 ｄ ｅ ｒ ｎ 业殖 养禽 畜
组稿 Ｗ ￣ ｍａ ｉ ｈ ｎ ｍｇ ｘ ｍｙ ２ ０ ０ ８ ＠ｓ ｉ ｎ ａ ． ｃ ｏ ｎ ｒ
蔫蘸壤
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黑龙 江工 业学 院 １ ５ ８ １ ０ ０
酶 ； ２ ｕ ｌ Ｄ ＮＡ 模 板 ； ０ ． ５ ｕ Ｌ、 ２ ０ ｐ ｍｏ ｌ ／ Ｌ Ｍ１ ； ０ ． ５ ｕ Ｌ、
２ ０ ｐ ｍｏ ｌ ／ Ｌ Ｍ２ ； １ ３ ｕ ｌ ｄ ｄ Ｈ ２ Ｏ， Ｐ Ｐ Ｃ Ｒ 反 应 体 系 ２
（ ５ ０ ｕ Ｌ） ： ０ ． ５ ｕ Ｌ、 ５ Ｕ／ ｕ Ｌ Ｅ ｘ Ｔ ａ ｑ酶 ； ｌ ｕ Ｌ、 ２ ０ ｐ ｍｏ ｌ ／ Ｌ
结 果 并给 予 统 计 学分 析后 得 出结 论 。 结果 ： ６ ０ ０份 猪粪便 样本 中 １ ０ ６份 经 检 测 为 ＨＥ Ｖ— ＲＮＡ 阳性 （ 阳性 率 １ ７ ． ６ ７ ％） ， ４ ９ ４份 阴性 （ 阴性 率 ８ ２ ． ３ ３ ％） ， 阳 性样 本 序 列 与 基 因 Ｉ ｖ型相似度最高， 对 比结 果 具
一种新的人畜共患病——猪戊型肝炎
一种新的人畜共患病——猪戊型肝炎戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(HEV)感染引起的经肠道传播的急性病毒性肝炎，主要通过粪口途径传播。
人群感染后死亡率在0.5%～3%之间，孕妇感染病情较重，死亡率高达15%～25%。
戊型肝炎的暴发流行主要发生在亚洲和非洲一些卫生条件较差的发展中国家，散发病例见于世界各地。
1997年Meng X J等[1]用酶联免疫吸附法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA）证实美国猪中存在HEV抗体并用逆转录巢式聚合酶联反应法(Reverse Transcription-nest Polymerase Chain Reaction, RT-nPCR)检测到猪HEV RNA，发现其与人类HEV 具有极高的同源性,并发现其可感染黑猩猩和恒河猴,从而首次证实了HEV种间传播的可能性。
随后，越来越多的证据表明猪戊型肝炎是一种人畜共患病，凸现出猪戊型肝炎的公共卫生意义。
因此，在2002年国际猪病大会上，猪戊型肝炎受到广泛重视。
1、戊型肝炎病毒戊型肝炎病毒（HEV）是一种无囊膜的病毒，为球形颗粒。
直径为27 nm-34nm，表面呈尖刺和锯刺状,呈现两种不同形态:一种内部致密,为完整的病毒颗粒,另一种内部含电荷透亮区,为不含完整基因的病毒颗粒。
蔗糖梯度离心前者沉降系数为185S,后者为165S。
HEV在氯化铯中浮力密度为130mg/cm3 [2]。
对高盐、氯化铯及氯仿敏感。
反复冻融及在蔗糖中可结成团，导致病毒活性下降。
在碱性环境中较稳定，在镁和锰离子存在下可保持病毒完整。
病毒的分类地位尚未明确，98年时曾认为是一种杯状病毒，以后根据基因测序结果，又将其归入未分类的戊肝样病毒群（Hepatitis E-like virus）[3]。
HEV含单股正链RNA，基因组全长7.2－7.6Kb，编码2400-2533个氨基酸，由5，端非结构基因区（NS）和3，端结构基因区（S）组成[4]。
基因4型猪戊型肝炎病毒SASAS-FX17株感染性克隆的构建的开题报告
基因4型猪戊型肝炎病毒SASAS-FX17株感染性克隆的构建的开题报告题目：基因4型猪戊型肝炎病毒SASAS-FX17株感染性克隆的构建一、研究背景猪戊型肝炎病毒（HEV）是一种单股正链RNA病毒，属于Hepeviridae科，是引起人和动物戊型肝炎的病原体。
近年来，猪HEV在全球范围内引起了广泛关注，并且已成为动物源性疾病的热点研究领域之一。
其中，猪HEV基因4型已被证实对人类具有潜在感染风险，因此对其研究具有重要意义。
然而，由于对基因4型猪HEV的研究相对较少，且病毒的体外培养和感染模型构建较为困难，因此该病毒的复制与感染机制等方面了解有限。
二、研究目的本研究旨在构建基因4型猪HEV SASAS-FX17株的感染性克隆，为深入探究该病毒的生物学特性，以及研究其与人体的相互作用奠定基础。
三、研究内容1.克隆猪HEV SASAS-FX17株全长基因，并构建感染性克隆。
2.优化基因4型猪HEV的原代细胞培养条件，建立稳定、可持续的病毒感染模型。
3.研究基因4型猪HEV SASAS-FX17株的复制及感染特性，如病毒复制周期、病毒入侵策略等。
4.探讨基因4型猪HEV与宿主细胞相互作用的机制。
四、研究意义与价值1.深入了解基因4型猪HEV的生物学特性和相互作用机制，有利于寻找针对该病毒的有效控制手段。
2.对基因4型猪HEV的全面研究有助于评估其对人体的感染风险和可能性。
3.为开发基因4型猪HEV疫苗和抗病毒药物提供理论依据。
五、研究方法1.克隆基因4型猪HEV SASAS-FX17株的全长基因，并构建感染性克隆。
2.利用细胞培养技术，建立基因4型猪HEV SASAS-FX17株的稳定细胞培养模型，并优化培养条件。
3.通过实验室感染模型，研究基因4型猪HEV SASAS-FX17株的复制及感染特性。
4.利用基因编辑技术，构建靶向宿主细胞基因的诱变株，探讨基因4型猪HEV与宿主细胞互作机制。
六、研究进展目前，已从实验动物中分离得到基因4型猪HEV SASAS-FX17株，成功克隆了该病毒的全长基因，并已构建感染性克隆。
一例猪黄疸检出戊型肝炎病毒的案例报道
２ ． ３ ． １ 细 菌学诊断 无菌取病死猪心脏 、肝脏及肺 脏 病料在 Ｔ Ｓ Ａ琼脂平 板上划线 ，于 ３ ７℃恒 温箱 内 培养 ２ ４ ～ ７ ２ ｈ ， 观察细菌生长情况 。 ２ ． ３ ． ２ 猪 戊 型肝炎病 毒 Ｒ Ｔ — ｎ Ｐ Ｃ Ｒ检 测 取 ３头病 猪 的粪 便用 Ｐ Ｂ Ｓ稀释 成 １ ０ ％的粪便悬 液 ， １ ２ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍｉ ｎ离心 １ ０ ｍｉ ｎ ， 取上 清液采 用 Ｔ ｒ ｉ ｚ ｏ ｌ 法提取病料 总 Ｒ Ｎ Ａ样本 。 引物由上海生工公司合成， 预计扩增 １ ５ ０ ｂ ｐ （ 表１ ） 。
Ｅ２ ０． ５ Ｌ， Ｉ ’ ０ ｔ ａ ｌ ＲＮＡ ３ ． ０ Ｌ， ＲＮａ ｓ ｅ Ｆｒ ｅ ｅ ｄ Ｈ２ ０ ３ ． ５
Ｌ ； 反应程序 ： ４ ２℃， ３ ０ ｍｉ ｎ ： ８ ５ ｃ 【 ＝ ， ５ ｍ ｉ ｎ 。将反转录 基金项 目 ： 四川省科技 支撑计划 （ ２ ０ １ ４ Ｎ Ｚ ０ ０ ４ ３ ） ； 国家“ 十二五 ” 科 产物于一 ２ ０℃保存备用 。 技支撑计划（ ２ ０ １ ５ Ｂ ＡＤｌ ２ Ｂ ｏ ４ — ２ ＿ ３ ） 第 一轮 Ｐ Ｃ Ｒ扩 增 ： 以ｃ Ｄ Ｎ Ａ为模 板 ， 使 用检 测 作者简介 ： 李幽 幽（ １ ９ ９ ２ 一 ） ， 女， 四川江 油人 ， 在 读硕 士研 究生 ， 主 引物进行 Ｐ Ｃ Ｒ扩增 。反应体系 １ ０ Ｉ ｘ Ｌ ：模 板 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 要从事动物传染病病原分子生物学方向的研 究． １ ． ０ Ｌ ； ２ ｘ Ｍａ ｓ ｔ ｅ ｒ Ｍｉ ｘ ５ ． ０ Ｌ ， 外引物上 、 下游 引物各 Ｅ－ ｍａ ｉ ｌ ： ｓ ｅ ｌ ｙ ｙ ＠ｈ ｏ ｔ ｍａ ｉ ｌ ． ｃ ｏ ｎ ｒ ０ ． ５ Ｌ ， ｄ ｄ Ｈ Ｏ ３ ． ０ Ｌ 。反应 条 件 ： ９ ５ ． ０℃预 变 性 ４ 通讯作者 ： 朱 玲， 教授 ， 博士． Ｅ — ｍ ａ ｉ ｌ ： ａ ｂ ｔ ｃ ｘ ｚ １ ７ ２ ＠１ ２ ６ ． ｃ ｏ ｎ ｒ
猪戊型肝炎病毒V1蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定的开题报告
猪戊型肝炎病毒V1蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的
鉴定的开题报告
一、研究背景
猪戊型肝炎病毒（HEV）是一种常见的病毒，其感染可引发急性肝炎和慢性肝炎，甚至导致肝硬化和肝癌等严重后果。
目前猪戊型肝炎疫苗的研究尚处于初级阶段，因此，开发一种针对猪戊型肝炎病毒的特异性单克隆抗体可以用于疫苗的开发和诊断试
剂的制备，从而帮助预防和治疗该疾病。
二、研究目的
本研究旨在通过制备猪戊型肝炎病毒V1蛋白单克隆抗体，鉴定其抗原表位，为
开发疫苗和诊断试剂提供依据。
三、研究方法
1. 克隆和表达V1蛋白
将猪戊型肝炎病毒HEV-1的V1基因克隆到质粒中，在大肠杆菌中表达纯化。
2. 免疫BALB/c小鼠
将表达的V1蛋白作为免疫原，通过免疫BALB/c小鼠获得抗V1蛋白多克隆抗体。
3. 制备单克隆抗体
从免疫BALB/c小鼠获得脾细胞，与骨髓瘤细胞融合，制备单克隆抗体。
4. 鉴定抗体的特异性和亲和力
利用Western blot、ELISA等技术，对制备的单克隆抗体进行特异性和亲和力鉴定。
5. 鉴定抗原表位
采用Western blot和SPOT合成肽数组等技术，鉴定制备的单克隆抗体的抗原表位。
四、预期结果
通过本研究，预计可以制备出针对猪戊型肝炎病毒V1蛋白的单克隆抗体，并鉴
定其特异性和亲和力。
同时，可以进一步了解猪戊型肝炎病毒的抗原表位，为开发疫
苗和诊断试剂提供依据。
五、研究意义
本研究可以为猪戊型肝炎疫苗和诊断试剂的开发提供重要的实验基础和理论依据，有助于解决该疾病的预防和治疗问题，同时也有助于加深人们对于该病毒的认识和了解。
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三个开放阅读框特点—— 三个开放阅读框特点——重叠
抗原表位
对HE V结构蛋 白研究 发 现 ， HE V 存在 V结构蛋 多个免疫显性抗原表位 、 B 细胞抗原表 位 及产 生 中和 抗体 的抗原 位 点 ，且 主要 集 中于 ORF 3 和ORF 2内。 HE V ORF 2 2内。 内至少含有7 内至少含有7 个显性抗 原表位 ， 大部分集 中于靠近C 末端的2 中于靠近C 末端的2 ／ 3 区域。 通过抗原性 分析 ， 确定 了我国基 因型 (Ⅳ型 ) 的 中和 表位位于ORF 表位位于ORF 2 4 7 4 ～ 6 1 3 氨基酸之间 ， 确定了 ( 基因 I型) 的中和表位位 于ORF 2 4 5 8 ～ 6 0 7 氨基酸之问。
HEV基因特点 HEV基因特点
基 因组长约7 ．3 k b ． 包含两端短的非编 因组长约7 码区， 其 中5’端非编码区大概包括2 5 个核 端非编码区大概包括2 苷酸 ， 3 ’端非编码 区为 6 5 ~ 7 4 个核苷 酸 ， 在3 ’末端还连接有一段p o l y ( A) 尾 末端还连接有一段p 巴。中间为3 巴。中间为3 个开放 阅读框分别为O R F 1 、 阅读框分别为O ORF2和ORF3。
戊型肝炎流行病学
(Epidemiology of Hepatitis E) E) 1 9 5 5 —1 9 5 6年， 印度新德里 因一次饮用水被 6年， 污染 ， 随后就暴发 了一场急性病毒性肝炎 的流 行 ， 感染约 2 9 0 0 0人 (基因型为 I型) 0人 1986 — 1988年中国新疆地区爆发了涉及十二万人 1988年中国新疆地区爆发了涉及十二 十二万人 的HEV感染，死亡千人，是世界上最大的一次爆 HEV感染，死亡千人，是世界上最大的一次爆 发感染（基因I 发感染（基因I型） 2 0 0 2年 7月， 日本进行全 国调查， 结果发现， 2年 HEV的感染者已达到 HEV的感染者已达到 6 5 0万人。 0万人。
HEV宿主 HEV宿主
戊型肝炎国内病疫 情报告 ， 近年来中国的 HE发病率呈 HE发病率呈 逐年递增 的趋 势。各省 市 自治区都有 HE 的发生 ， 其 中新疆 、 山 东、 河北 、 辽 宁、 吉林 、 内蒙古和北京等地发生过暴发 或流行 。 全球流行趋 势 ：迄今为止 ， 世界上已 经有 5 0 余次 HE暴发或流行， 临床上超过 HE暴发或流行， 50%的 急性 肝 炎 是 由 HEV 所致 。 50%的
DNA质粒表达系统 质粒表达系统
优点：激发全面免疫应答，抗原性强，能联 激发全面免疫应答，抗原性强，
合免疫，纯度高， 且相当稳定， 合免疫，纯度高， 且相当稳定，载体不会致病
猪戊型肝炎的研究意义
无论发达国家还是发展中国家，都己发现HEV在非人灵长 无论发达国家还是发展中国家，都己发现HEV在非人灵长 类动物、啮齿类动物、猪、牛、羊、鸡中广泛分布和传播， 表明HEV是人畜共患病，并且在动物中猪是戊型肝炎病毒 表明HEV是人畜共患病，并且在动物中猪是戊型肝炎病毒 的主要携带者。与猪有密切接触的养猪人的体内有较高的 抗HEV抗体也有报道这意味着人类可能通过吃动肉，接触 HEV抗体也有报道这意味着人类可能通过吃动肉，接触 动物污染的水甚至是表层水感染戊型肝炎。据报道，猪也 是异体器官移植的良好供体，随着人接受动物器官移植频 率的增高，通过将动物组织器官移植给人引起HEV的感染 率的增高，通过将动物组织器官移植给人引起HEV的感染 的风险也在增加。因此进一步研究前景非常好。
HE发病机制 HE发病机制
许多学者认为HEV发病机制可能是由两种 许多学者认为HEV发病机制可能是由两种 原因引起的，一是免疫机制或由于直接细 原因引起的，一是免疫机制或由于直接细 胞病变引起的肝细胞损伤， 胞病变引起的肝细胞损伤，另一个以病毒 抗原抗体复合物介导的血管炎/肾小球肾炎。 抗原抗体复合物介导的血管炎/肾小球肾炎。
临床症状和病理变化
（Clinical Symptom and Pathological Changes） Changes） 动物感染H V后一般 动物感染H E V后一般 只表 现出亚临床症 状 ，不 产生明显病理变化 。 人发病通常表现是发热、全身疲乏、食欲不振、 厌油腻、恶心呕吐、尿色深黄如浓茶、眼睛和皮 肤发黄，肝功能检查出现转氨酶迅速升高到几百 甚至几千单位，黄疸较常见，并可持续一周。 病理变化主要在肝脏，其病理切片呈典型的急性 肝炎表现，而且ALT升高。肝炎发病经治疗后病 肝炎表现，而且ALT升高。肝炎发病经治疗后病 毒约2 毒约2周左右逐渐从粪便中消失，带病毒的粪便可 再次经口引发新的感染。
全球分布图
戊型肝炎传播途径
途径
食源性传播
水源性传播
血液传播
垂直传播
水源性传播
感染HEV猪 感染HEV猪
通过粪尿
食源性传播
主要通过未煮熟的食物
猪肝
烧烤
血液传播
主要通过打针和输血传播
打针
输血
垂直传播
主要通过胎盘传播
戊型肝炎的病原学
（Pathogenic Characters of Hepatitis E） E） HEV为单股正链RNA病毒，无囊膜的球形颗粒 HEV为单股正链RNA病毒，无囊膜的球形颗粒 ， 直径为 2 7 ～3 8 n m，平均 3 2 ～3 4 n m，表面 m，平均 m，表面 有刺突( 有刺突( s p i k e s ) 和 锯齿状( i n d e n t a t i o n ) ， 锯齿状( 内部呈现 两种不同形态 ： 一种 内部密 ， 为完整 病毒颗粒 ； 另一 种内部透亮， 为不含完整基 因 的缺陷病毒颗粒。蔗 糖梯度离心前者沉降系数为 1 8 3 S， 后者为 1 6 5 S 。病 毒的浮密度在蔗糖溶 S， 液中为 1 ．3 4 g ／ mL， 在酒石酸 钾溶液中为 mL， 1 ．1 8 g ／ mL。 mL。
病毒性戊肝是能预防的，应采取以切断传 播途径为重点的综合性措施。戊肝预防具 体包括以下几个方面：
（1）及时报告疫情 ）
方 法
（2） ） 传
（3）切断传播途径 ）
HEV疫苗的研究 HEV疫苗的研究
（Research Progress of Hepatitis E Vaccine） Vaccine）
到目前为止，在动物实验中应用的HEV候 到目前为止，在动物实验中应用的HEV候 选疫苗主要有原核细胞表达的重组蛋白 选疫苗主要有原核细胞表达的重组蛋白， 原核细胞表达的重组蛋白， 昆虫细胞表达的重组蛋白和DNA疫苗 疫苗。 昆虫细胞表达的重组蛋白和DNA疫苗。
HEV图片（ HEV图片（一） 图片
电镜下的HEV病毒粒子结构图 电镜下的HEV病毒粒子结构图
图片（二） 图片（
病毒的醋酸铅负染电镜照片，箭头所指白 点为病毒颗粒
图片（三） 图片（
HEV粒子电镜照片模拟图 HEV粒子电镜照片模拟图
血清型和基因型
通过氨基酸推导 ， 现已经确定H E V 只有一种血 现已经确定H 清型。 但在不同的分离株中发现， 其核苷酸变异 非 常大 ，因而针对H E V 基 因分类提出了多种不 ，因而针对H 同的议 案。目前 ，最得到认可的是将H E V 分为 ，最得到认可的是将H 4 种基 因型 ，分别为H E V I、 HE V Ⅱ 、 HE ，分别为H I、 V Ⅲ 、 H E V I V。 4 个基因型 中还可细分为不 V。 同的基因亚型。基 因I 型 、 Ⅱ型在 热带或亚热带 主要是通过粪 便污染水源而引起HE 流行和暴 发 ； 便污染水源而引起HE 基因Ⅲ 基因Ⅲ型 、Ⅳ型 在美 国、 欧洲 国家、 中国、日 本等国家则主要以散发
猪戊型肝炎的研究进展
（Progress on swine Hepatitis E） E）
2010年10月31日 2010年10月31日
目录
( CONTENTS )
1.1 猪戊型肝炎的流行病学 1.2 猪戊型肝炎的病原学 1.3 猪戊型肝炎的临床症状和病理变化 1.4 猪戊型肝炎的发病机制 1.5 猪戊型肝炎的诊断 1.6 猪戊型肝炎的预防 1.7 猪戊型肝炎的疫苗的研究 1.8 猪戊型肝炎的研究意义与问题 研究意义与问题
戊型肝炎的诊断
（Diagnosis of Hepatitis E） E）
实验室诊断方法
酶联免疫吸附实验 RT-PCR技术 RT-PCR技术 免疫印迹（IB） 免疫印迹（IB） 免疫荧光试验（IFA） 免疫荧光试验（IFA） 免疫电镜（IEM） 免疫电镜（IEM） 胶体金免疫电镜
戊型肝炎的预防
（Prevention of Hepatitis E） E）
优点：技术成熟、 表达量大、 速度快、 技术成熟、 表达量大、 速度快、
培养条件和过程简单、 成本低，免疫源性好。 培养条件和过程简单、 成本低，免疫源性好。
真核细胞表达系统
缺点：真核细胞本身表达蛋白质对目的蛋
白有限制
优点：翻译后加工功能， 免疫原性好， 表 翻译后加工功能， 免疫原性好，
达水平高， 达水平高，能同时表达多个外源基因 。
三个开放阅读框编码蛋白
ORF1 主要编码与病毒RNA复制有关的非 主要编码与病毒RNA复制 复制有关的非 结构蛋白，长约5Kb，位于基因组5 结构蛋白，长约5Kb，位于基因组5’末端。 ORF2 编码的结构蛋白,ORF2长约2kb，位 编码的结构蛋白,ORF2长约2kb，位 于编码区的3′末端，为主要的结构基因编码 于编码区的3′末端，为主要的结构基因编码 区，编码病毒衣壳 区，编码病毒衣壳产物分子量约74kD。 病毒衣壳产物分子量约74kD。 O R F 3 为一个小的阅读框 ， 最大由3 7 2 最大由3 个核苷酸构 成 ，编码一个小的具有免疫原 ，编码一个小的具有免疫原 性的磷蛋白。 V型特 性的磷蛋白。 与细胞 的支架及 HE V型特 异性免疫活 性有关。
主 要 疫 苗 种 类