淋巴细胞功能检测一T细胞功能检测二B细胞功精品PPT课件

三、NK细胞活性测定
染色计数
➢形态法 ➢酶释法 ➢荧光法 ➢同位素法 ➢化学发光法
离心取上清
靶 测LDH或AKP
细
胞 溶 解
离心取沉淀 测活细胞荧光
测CPM值
常用靶细胞: K562细胞株
测发光强度
第二节 吞噬细胞功能检测技术
吞噬细胞的吞噬活动大体分为趋化、吞噬和胞内 杀灭作用三个阶段，据此建立相应的检测方法。
肿瘤细胞破坏 51Cr 释放 测定γ射线
意义： 肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力
图15-2 T细胞细胞毒试验示意图
(四) 体内试验
➢特异性抗原皮肤试验 ➢PHA皮肤试验
二、B细胞功能检测
➢B细胞增殖能力的试验 ➢溶血空斑试验 ➢B细胞抗体形成功能的检测 ➢体内试验
(一)B细胞增殖能力的试验
抗IgM 细菌脂多糖 SAC的SPA
➢优点：形态学方法简便易行，普通光 学显微镜便能观察结果，适于基层实验 室应用。 ➢缺点：是依靠肉眼观察形态学变化， 判断结果易受主观因素影响，重复性和 准确性较差。
（2）3H-TdR掺入法
试验孔A 均值
SI
570nm
对照孔A 均值
570nm
➢优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观 性强，重复性好。 ➢缺点：但需一定设备条件，同时还存在 放射性核素污染问题。
第一节 淋巴细胞的功能检测
淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外 实验。体内实验主要是间接了解淋巴细胞对 抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应；体 外实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂 原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴 细胞分泌产物的测定
淋巴细胞
➢T细胞（负责细胞免疫功能） ➢B细胞（执行体液免疫功能） ➢NK和K细胞（非特异性免疫作用）
一、T细胞功能的检测
➢T细胞增殖试验 ➢T细胞分泌功能测定 ➢T细胞介导的细胞毒试验 ➢体内试验
（一）T淋巴细胞增殖试验
1. 原理：
淋巴细胞
刺激物
DNA合成 母细胞
分化
细胞变大 细胞浆扩大 空泡 核仁明显 核染色质疏松
未转化和转化淋巴细胞的形态特征
转化的淋巴细胞
淋巴母细胞 过渡型
细胞大小(直径μm) 12～20
第十五章 免疫细胞功能检测技术
第一节 淋巴细胞的功能检测 一、T细胞功能检测 二、B细胞功能检测 三、NK细胞活性测定
第二节 吞噬细胞功能检测技术 一、中性粒细胞功能检测 二、巨噬细胞功能检测
第三节 免疫细胞功能检测的临床应用
思考题 小结
对淋巴细胞群，中性粒细胞、巨噬 细胞、树突状细胞等功能测定可以 有效评价机体特异性和非特异性免 疫功能。
(二)吞噬功能检测
巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强 的吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白 色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒， 用斑蟊敷贴法收集人巨噬细胞或从腹腔 渗出液获得鼠巨噬细胞。
(三)巨噬细胞溶酶体酶的测定
1．酸性磷酸酶的测定 硝酸铅法 偶氮法
2．非特异性酯酶的测定 常用α-萘醋酸法
12～16
核大小、染色质 增大、疏松
增大、疏松
核仁
清晰、1～4个 有或无
有丝分裂
有或无
无
胞质、着色
增多、嗜碱
增多、嗜碱
浆内空泡
有或无
有或无
伪足
有或无
有或无
未转化的淋巴细胞
6～8 不增大、密集 无 无 极少、天青色 无 无
2. 淋巴细胞转化的刺激物
非特异性刺激物： PHA ------T细胞 ConA -------T细胞 PWM -------T、 B细胞 LPS -------B细胞
特异性刺激物： 异种抗原 同种组织抗原
3. 检测方法
形态法：刺激物 淋巴细胞（4-6天） 同位素法：PHA 淋巴细胞（54h）
DNA合成期 + 3HTdR掺入
母细胞化
收集细胞
检测β射线
测定细胞内的3H－TdR
（1）形态学检查法
转化率
转化的淋巴细胞数
100%
Hale Waihona Puke Baidu
转化和未转化的淋巴细胞数
方法学评价：
(二) T细胞分泌功能测定
体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激 后,分泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生 物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、 生物学活性或基因表达水平，以反映T细胞功 能。
（三）T细胞介导的细胞毒试验
1.原理：
靶细胞抗原
T细胞 靶细胞
致敏CTL
观察杀伤活力
2.方法
➢ 形态学方法：淋巴细胞+肿瘤细胞 计数残留肿瘤细胞 ➢ 同位素法 ：淋巴细胞（CTL）+含51Cr 的肿瘤细胞
1.原理：
2．应用与方法学评价：
➢该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检 测抗体分泌量。 ➢优点：
稳定、特异、抗原用量少； 可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量； 可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。
(四) 体内试验
➢体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、 破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。 ➢将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫 前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血 清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判 断受检者体内B细胞的功能。
一、中性粒细胞功能检测技术 二、巨噬细胞功能检测技术
吞噬细胞的功能：
趋化 吞噬 胞内杀灭作用
一、中性粒细胞功能的检测
➢ 细胞趋化功能的检测 ➢ 吞噬和杀菌功能的检测
(一) 细胞运动功能——趋化功能检测
1.原理：
2. 方法学： 滤膜渗透法（Boyden 小室法）
琼脂糖平板法
(二)吞噬和杀菌功能测定
1．显微镜检查法：
吞噬率(%) 吞噬细菌的白细胞数 100 计数的白细胞数
杀菌率(%)
胞内含着染菌体的细胞数 计数的白细胞数
100
2. 溶菌法
杀菌率(%) （1 作用30、06m0或in 9菌0落mi数n 菌落数）100
3．NBT还原试 验
二、巨噬细胞功能检测
(一)炭粒廓清试验
正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90% 炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据 此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)， 间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒 的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判 断巨噬细胞的功能。
B细胞增殖
形态学 3H－TdR掺入 法
(二) 溶血空斑试验 1. 原理：
2. 方法学：
➢ 经典溶血空斑形成试验 ➢ 被动溶血空斑试验
3．临床应用与评价
➢溶血空斑试验主要用于测定药物和 手术等因素对体液免疫功能的影响 ➢评价免疫治疗或免疫重建后机体产 生抗体的能力。
(三) B细胞抗体形成功能的检测 ——酶联免疫斑点法