UDPG焦磷酸化酶(UGP)活性检测试剂盒说明书 微量法

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谷氨酸脱氢酶(GDH)活性检测试剂盒说明书__ 微量法UPLC-MS-4443

谷氨酸脱氢酶(GDH)活性检测试剂盒说明书__ 微量法UPLC-MS-4443

4谷氨酸脱氢酶(GDH )活性检测试剂盒说明书货号:UPLC-MS-4443规格:100T/96S 产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

微量法试剂名称规格保存条件提取液液体100mL×1瓶4℃保存试剂一液体20mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶-20℃保存溶液的配制:工作液的配制:在试剂二中加入19mL 试剂一充分溶解,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min 。

产品说明:GDH (EC 1.4.1.2)广泛分布于植物中,和谷氨酸合成酶(GOGAT )共同参与谷氨酸的合成,在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。

GDH 催化NH +、α-酮戊二酸和NADH ,生成谷氨酸和NAD +,引起340nm 吸光度下降。

通过测定340nm 吸光度的下降速率,计算GDH 活性。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV 板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1、收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次);8000g 4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。

2、称取约0.1g 组织,加入1mL 提取液进行冰浴匀浆。

8000g 4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。

二、测定步骤1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长至340nm ,蒸馏水调零。

2.样本测定:在微量石英比色皿或96孔UV 板中加入10μL 样本和190μL 工作液,混匀,立即记录340nm 处20s 时的吸光值A1和5min20s 后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2。

3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)活性检测试剂盒说明书 微量法

3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)活性检测试剂盒说明书 微量法

3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)活性检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC2215规格:100T/96S产品内容:提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存。

试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体12uL×1支,4℃保存。

临用前加入0.4mL蒸馏水充分混匀,或根据比例现配现用;用不完的试剂4℃保存一周。

产品说明:GAPDH(EC1.2.1.12)催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸,是糖酵解途径的关键酶,与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关,在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。

3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。

GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、无机磷和NAD+,340nm处测定NADH的减少量可反映GAPDH活性的高低。

试验中所需的仪器和试剂:紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:一、粗酶液提取:组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后,8000g,4℃,离心20min,取上清,置冰上待测。

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

血清(浆):直接检测。

二、测定步骤:1、分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,分光光度计蒸馏水调零。

结合态淀粉合成酶(GBSS)活性检测试剂盒说明书 微量法

结合态淀粉合成酶(GBSS)活性检测试剂盒说明书 微量法
第3页共3页
上清液体积,0.15mL;V 提取:加入提取液体积,1mL;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×10-3mL/nmoL/cm; d:比色皿光径,1cm;T:反应时间,20min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g。 b.使用 96 孔板测定的计算公式如下: 1、按样本蛋白浓度计算:
试剂名称(μL)
测定管
样本
100
反应液Ⅰ
135
混匀,30℃保温 20 min,置沸水浴中 1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却
试剂八
75
混匀,30℃保温 30 min,置沸水浴中 1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却,10000g 常
温离心 10min,取上清液(如果一次性测定样本较多,可以将试剂四、五和六按比例配成混
V 测:测量体积,0.26m L; V 样:加入样本体积,0.1m L; V 反总:反应体积,0.31mL; V 上清:加入上清液体积,0.15mL; V 提取:加入提取液体积,1mL; ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×10-3mL/nmoL/cm; d:比色皿光径,1cm; T:反应时间,20 min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样品质量,g。
单位的定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。 GBSS 活性(U/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×V 测]÷(Cpr×V 样÷V 反总×V 上清) ÷T =72×ΔA÷Cpr。 此法需要自行测定样本蛋白质浓度。 2、按照样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。 GBSS 活性(U/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V 测]÷(W÷V 提取×V 样÷V 反总×V 上清) ÷T=72×ΔA÷W。

焦磷酸测序步骤中文版

焦磷酸测序步骤中文版

焦磷酸测序步骤一、实验操作(一)甲基化检测亚硫酸氢盐转化1. bisulfite Mix+800μL Rnase free water,窝旋5min/60℃加热窝旋混匀(配置好的bisulfite Mix勿放置冰上)2. 配置buffer反应液,室温混匀:DNA Solution (1μg)+RNAfree water 共20μl+bisulfite Mix 85μl+DNA protect buffer 5μl,(配置好的体系为140μl,不方便上PCR仪,最好分为两管70μl)3. 上PCR仪,95℃5min→60℃25min→95℃5min→60℃85min→95℃5min→60℃175min→20℃20min,热循环结束,将PCR product转入Spin-column,加入560 Buffer BL。

(当DNA微量时,需要加入carrier RNA,其加强DNA与column膜的结合;当DNA 量>100ng,则不需要加入carrier RNA)混匀,12,000rpm,1min,废弃液。

4. 清洗Bisulfite DNA convertion1)加入500μl buffer BW,12,000rpm,1min,废弃液。

2)加入500μl buffer BD,室温放置15min(加入buffer BD快速盖盖子,避免出现白色沉淀)3)加入500μl buffer BW,12,000rpm,1min,废弃液。

4)加入500μl buffer BW,12,000rpm,1min,废弃液。

5) 12,000rpm,1min,废弃液。

6) 56℃5min(蒸发残余液体)7) 20μl Buffer EB溶解,12,000rpm,1min(-20℃,可保存3年)PCR扩增目的片段回收的PCR product 1:5稀释→取2μl→PCR→准备焦磷酸测序焦磷酸测序1.在PCR板中,准备微珠预混液配制(每管)1)Beads:3μl,Binding Buffer,40μl,模版:20μl,dd Water:补足80μl。

焦磷酸化酶

焦磷酸化酶

高等植物H+-PPase研究进展摘要:文章介绍高等植物H+-PPase 的属性、功能及其分子生物学的研究进展,并着重阐述H+-PPase对逆境的反应以及在植物抵御盐及干旱胁迫中的作用。

关键字:H+-PPase;属性;功能:逆境;干旱胁迫;进展H+转运无机焦磷酸酶(H+-pyrophosphatase,H+-PPase)是一种区别于H+-ATPase的H+转运酶,广泛存在于植物和少数藻类、原生动物、细菌以及原始细菌中。

在液泡膜上,H+-PPase能够把无机焦磷酸(PPi)水解产生的自由能和H+跨膜转运相藕联,在将PPi水解为2个Pi的同时,还将细胞质中的H+经液泡膜进入液泡内,起质子泵的作用,与液泡膜H+-ATPase一起形成H+跨液泡膜电化学梯度,为各种溶质(如阳离子、阴离子、氨基酸和糖类等)分子跨液泡膜的次级主动运输提供驱动力。

最适pH为7.5~8.5,该酶的结合底物是Mg2PPi,可被K+等阳离子激活,而对阴离子不敏感,但被F-抑制。

自1975年Karlsson从甜菜(Beta vulgaris)根中分离到钾激活的H+-PPase以来,近几十年,此酶的研究已经取得了长足的进展,并对其生理生化性质逐步达成共识。

随着分子生物学研究的不断深入,人们已经成功地从拟南芥、大麦、甜菜、烟草、水稻、绿豆等众多生物体中分离到H+-PPase的cDNA。

此酶的结构和特性,特别是它在植物耐盐抗早中的作用和调节植物生长方面的功能己经逐渐成为众多研究者关注的焦点,近年来,通过克隆并转化H+-PPase 基因以提高植物耐盐性和抗旱性的基因工程已经展开,现将这方面的研究进展介绍如下。

1.H+-PPase的属性1.1 V max和K mDavies等计算出 1mol PPi在细胞质中(pH = 7.3)水解会产生27.3 kJ 的自由能。

Maeshima发现H+-PPase的H+/PPi化学当量为1。

H+- PPase在液泡膜中的比活性(specific activity)随不同植物种类、不同组织以及不同的测定方法而出现差异。

谷胱甘肽还原酶(GR)活性检测试剂盒说明书 微量法

谷胱甘肽还原酶(GR)活性检测试剂盒说明书 微量法

北京索莱宝科技有限公司谷胱甘肽还原酶(GR)活性检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号:BC1165规格:100T/96S产品内容:试剂一:液体120mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体1mL×1支,4℃保存。

试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。

临用前加入2.0mL蒸馏水,混匀。

产品说明:GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶,GR是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一(通常昆虫中GR被TrxR取代)。

GR催化NADPH还原GSSG生成GSH,有助于维持体内GSH/GSSG比值。

GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用,此外GR还参与抗坏血酸-谷胱甘肽循环途径。

GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH,同时NADPH脱氢生成NADP+;NADPH在340nm有特征吸收峰,相反NADP+在该波长无吸收峰;通过测定340nm吸光度下降速率来测定NADPH脱氢速率,从而计算GR活性。

自备仪器和用品:低温离心机、水浴锅、移液器、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)和蒸馏水操作步骤:一、粗酶液提取:称约0.1g组织,加入1.0mL试剂一,冰上充分研磨,10000rpm4℃离心10min,取上清液,待测。

二、GR测定操作:1.分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长到340nm,蒸馏水调零。

2.试剂一置于25℃(普通物质)或者37℃(哺乳动物)中预热30min以上。

3.空白管:取微量石英比色皿或96孔板,加入10μL试剂二,20μL试剂三,170μL试剂一,于340nm 测定10s和190s吸光度,记为A空1和A空2。

第1页共3页4.测定管:取微量石英比色皿或96孔板,加入10μL试剂二,20μL试剂三,20μL上清液,150μL试剂一,于340nm测定10s和190s吸光度,记为A测1和A测2。

谷胱甘肽 S-转移酶(GST)活性检测试剂盒说明书__ 微量法UPLC-MS-4497

谷胱甘肽 S-转移酶(GST)活性检测试剂盒说明书__ 微量法UPLC-MS-4497

谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性检测试剂盒说明书货号:UPLC-MS-4497微量法规格:100T/96S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体100mL×1瓶4℃保存试剂二液体22mL×1瓶4℃保存试剂三粉剂×1瓶4℃保存溶液配制:试剂三:临用前加2mL蒸馏水溶解。

产品说明:GST是一种具有多种生理功能的蛋白质家族,主要存在于细胞质内。

GST是体内解毒酶系统的重要组成部分,主要催化各种化学物质及其代谢产物与GSH的巯基共价结合,使亲电化合物变为亲水物质,易于从胆汁或尿液中排泄,达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。

因此,GST在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。

此外,因为GST具有GSH-Px活性,亦称为non-Se GSH-Px,具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质等的功能。

注意,GST催化的反应减少GSH含量,但是不增加GSSG含量。

GST催化GSH与CDNB结合,其结合产物的光吸收峰波长为340nm;通过测定340nm波长处吸光度上升速率,即可计算出GST活性。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

自备仪器和用品:低温离心机、水浴锅、可调节移液器、紫外-可见分光光度计/酶标仪、研钵/匀浆器、微量石英比色皿/96孔UV 板和蒸馏水。

操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。

8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。

2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

酶法检测试剂盒举例5个

酶法检测试剂盒举例5个

酶法检测试剂盒举例5个酶法检测试剂盒是一种用于测定特定物质或分子在生物样本中的含量或活性的工具。

它们通常由一系列试剂和材料组成,可以通过酶反应来测量目标物质的浓度或活性。

以下是五个常见的酶法检测试剂盒的举例:1. 葡萄糖酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒:G6PD是一种关键的酶,参与细胞内葡萄糖代谢过程中NADPH的产生。

G6PD缺乏会导致溶血性贫血等疾病。

G6PD检测试剂盒可用于测定血液样本中G6PD活性水平,从而帮助诊断和监测相关疾病。

2. 脯氨酸氧化酶(PAO)检测试剂盒:PAO是一种参与氨基酸代谢的重要酶,可以将脯氨酸转化为丙酮酸和亚硝胺。

PAO检测试剂盒可用于测定尿液中PAO活性水平,从而评估肾功能和相关代谢紊乱。

3. 乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒:LDH是一种广泛存在于各种组织和细胞中的酶,参与乳酸代谢过程。

LDH检测试剂盒可用于测定血液、尿液或其他体液中LDH活性水平,从而帮助诊断和监测心肌梗死、肝病、恶性肿瘤等疾病。

4. 超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒:SOD是一种抗氧化酶,能够清除细胞内的超氧阴离子自由基。

SOD 检测试剂盒可用于测定血液或组织样本中SOD活性水平,从而评估抗氧化能力和相关疾病的风险。

5. 淀粉酶(AMY)检测试剂盒:AMY是一种参与淀粉消化的消化酶,能够将淀粉分解为葡萄糖。

AMY检测试剂盒可用于测定食物样本或消化系统分泌物中AMY活性水平,从而评估消化功能和相关消化系统疾病。

以上是五个常见的酶法检测试剂盒的举例。

这些测试剂盒在医学、生物学研究和临床诊断中起着重要的作用,帮助我们了解生物样本中特定物质或分子的含量或活性水平,从而为疾病诊断、治疗和监测提供有力支持。

索莱宝 AGP 活性检测试剂盒说明书

索莱宝 AGP 活性检测试剂盒说明书

腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGP )活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。

货号:BC0430规格:50T/48S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体50 mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体20 mL×1瓶2-8℃保存试剂二A 粉剂×2瓶-20℃保存试剂二B 液体12mL×1瓶2-8℃保存试剂三粉剂×2瓶2-8℃保存试剂四粉剂×2支-20℃保存试剂五粉剂×2支-20℃保存溶液的配制:1.试剂二:临用前将试剂二A 加入试剂二B 充分溶解,用不完的试剂建议-20℃分装保存4周,避免反复冻融.2.试剂三:临用前取1瓶加3 mL 蒸馏水充分溶解,用不完的试剂建议-20℃分装保存4周,避免反复冻融;3.试剂四:临用前取1支加入500 μL 蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂-20℃分装保存4周,避免反复冻融。

4.试剂五:临用前取1支加入500μL 蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂-20℃分装保存4周,避免反复冻融。

产品说明:AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中,催化葡萄糖-1-磷酸(G-1-P )与ATP 反应生成淀粉合成的直接前体ADPG ,是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。

AGP 催化的逆向反应生成G-1-P ,在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH ,340nm 下测定NADPH 增加速率,即可计算AGP 活性。

Glucose 6-PhosphateGlucose 6-Phosphate+NADP +6-Phosphogluconolactone+H ++NADPH注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

植酸酶活性检测试剂盒说明书 微量法

植酸酶活性检测试剂盒说明书 微量法

植酸酶活性检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC3145规格:100T/48S产品内容:提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

缓冲液:液体10mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂×2支,4℃保存,临用前加缓冲液4mL配制,现用现配。

试剂二:液体10mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体10mL×1瓶,4℃保存。

显色剂:粉剂×6瓶,4℃保存,临用前根据用量每瓶加0.4mL双蒸水溶解,再加1.6mL试剂三混匀。

样本处理产品说明:植酸酶(phytase)是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸(盐)的一类酶的总称,属磷酸单酯水解酶,它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷,降低粪便中的磷含量,减轻对环境的污染,改善营养成分的吸收和利用,因此具有极其广泛的研究和应用价值。

测定原理植酸酶在一定温度和pH值条件下,水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物,无机磷在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物,在700nm处有特征吸收峰,根据700nm处吸光值变化可计算得植酸酶活性。

自备实验用品及仪器天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅,超声溶解器,回旋式振荡器。

操作步骤:1.酶制剂:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:500~1000的比例(建议称取约0.001g,加入1mL提取液)第1页,共4页加入提取液,在超声波溶解器上溶解15min,再用回旋式振荡器振荡15min,待测。

2.组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,在超声波溶解器上溶解15min,再用回旋式振荡器振荡15min,4℃,4000g离心10min,取上清待测。

3.饲料样品:饲料烘干粉碎,过40目筛,按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,在超声波溶解器上溶解15min,再用回旋式振荡器振荡15min,4℃,4000g离心10min,取上清待测。

腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶活性测定试剂盒说明书

腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶活性测定试剂盒说明书

腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose pyrophosphorylase,AGP)活性测定试剂盒说明书(货号:G0536F分光法48样)一、产品简介:ADPG焦磷酸化酶(AGP,EC2.7.7.27)是植物淀粉合成过程中起关键性调节作用的酶,催化l-磷酸葡萄糖(G-1-P)与三磷酸腺苷(ATP)反应形成淀粉合成的直接前体腺苷二磷酸葡萄糖(ADPG),在植物中,主要存在于贮藏器官和叶片中。

AGP催化的逆向反应生成G1P,在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH,340nm下测定NADPH增加速率,即可计算AGP活性。

二、测试盒组成和配制:试剂名称规格保存要求备注提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一粉体mg×1支-20℃保存临用前甩几下使粉体落入底部,再加1.1mL蒸馏水溶解,仍-20℃保存。

试剂二粉体mg×1支4℃保存临用前甩几下使粉体落入底部,再加1.1mL蒸馏水溶解。

仍4℃保存。

试剂三液体32mL×1瓶4℃保存试剂四粉体mg×1支-20℃保存临用前甩几下使粉体落入底部,再加2.1mL蒸馏水溶解,仍-20℃保存。

【注】:粉剂量在mg级别,使用前用手甩几次或者进行离心,打开直接加入要求的试剂即可。

三、所需的仪器和用品:可见分光光度计、1ml石英比色皿(光径1cm)、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。

四、腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGP)活性测定:建议正式实验前选取2个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!1、样本制备:①组织样本:称取约0.1g组织(水分充足的样本可取0.2g),加1mL提取液,进行冰浴匀浆,12000rpm,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

【注意】若样本颜色较深(如较深颜色的植物叶片),可引起起始值A1值较大如超过1.5,可在样本制备过程中增加除色素步骤:取约0.1g组织(水分充足的样本可取0.5g),加入80%乙醇冰浴匀浆,12000rpm,4℃离心10min,弃掉色素较深的上清液;以上除色素步骤重复2次。

UDPG焦磷酸化酶(UGP)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

UDPG焦磷酸化酶(UGP)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

UDPG焦磷酸化酶(UGP)活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC3360规格:50T/48S产品简介:尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphosphprylase,UGP,EC 2.7.7.9)在自然界广泛分布。

在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化,将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖(UDPG),UDPG是高等植物和动物中主要活化酶的形式,作为葡萄糖基供体参与糖原、蔗糖、纤维素等的合成代谢。

UGP可逆的催化生成1-磷酸葡萄糖,其在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH,UGP活性可以用340nm的吸光值的变化来反应。

试验中所需的仪器和试剂:紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品内容:提取液:液体55mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂×2瓶,-20℃避光保存。

临用前加15mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融,-20℃保存2周。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存。

临用前加5mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后4℃保存,禁止反复冻融,4℃保存1周。

试剂三:粉剂×1支,-20℃避光保存。

临用前加1.4mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融,-20℃保存2周。

试剂四:粉剂×2支,-20℃避光保存。

临用前每支加1mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融,-20℃保存2周。

试剂五:液体5mL×1瓶,4℃保存。

试剂六:液体15mL×1瓶,4℃保存。

操作步骤:一、粗酶液提取:组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后,10000g,4℃,离心10min。

udpg焦磷酸化酶催化的反应

udpg焦磷酸化酶催化的反应

udpg焦磷酸化酶催化的反应UDPG焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphorylase)是一种重要的酶,在细胞的代谢过程中发挥着关键作用。

它催化着β-D-葡萄糖-1-磷酸和UDP生成焦磷酸葡萄糖(UDP-glucose)和焦磷酸(PPi)。

这个反应在细胞合成葡萄糖、糖苷化合物以及壳多糖的过程中是不可或缺的。

UDPG焦磷酸化酶的催化反应是一个拆分焦磷酸偶联UDP和葡萄糖的异构化反应。

首先,一个焦磷酸(PPi)与酶的激活位点结合,形成一个焦磷酸-酶中间体。

然后,一个β-D-葡萄糖-1-磷酸与中间体结合,被焦磷酸化酶催化成焦磷酸葡萄糖(UDP-glucose),同时释放一个无机磷酸。

这个反应的机理主要通过焦磷酸化酶的活性位点来实现。

UDPG焦磷酸化酶的活性位点是一个镁离子(Mg2+),它能够与催化反应所需的底物结合,促进反应的进行。

此外,活性位点周围还存在着一些保守的氨基酸残基(如谷氨酸和赖氨酸),它们与底物之间的相互作用进一步增强了反应的效率。

这个反应在细胞内具有重要的生物学功能。

焦磷酸葡萄糖(UDP-glucose)是细胞合成多种生物化学物质以及糖酯的重要前体。

它能够与不同的酶结合,参与多种代谢途径,比如参与多糖的合成,细胞膜组装,矿物分子生物合成等。

此外,焦磷酸葡萄糖还是一些环境信号分子的前体,能够调控细胞内多种信号通路的激活。

UDPG焦磷酸化酶在细菌、植物和动物等生物体中都存在。

研究表明,焦磷酸化酶在植物中起着特别重要的作用。

在糖代谢途径中,焦磷酸葡萄糖在植物中的合成起到了非常重要的作用。

植物通过光合作用合成的葡萄糖需要经过多个代谢途径,才能最终合成能够存储或转化为其他重要物质的焦磷酸葡萄糖。

焦磷酸化酶在这个过程中就是关键的限速酶。

除了参与糖代谢,焦磷酸化酶还在其他代谢途径中发挥着重要作用。

举例来说,UDPG焦磷酸化酶在动物体内参与胆固醇合成的反应中扮演着关键角色。

焦磷酸葡萄糖通过参与胆酸的合成调节体内胆固醇的代谢。

100u无机焦磷酸酶配置

100u无机焦磷酸酶配置

100u无机焦磷酸酶配置【最新版】目录1.100u 无机焦磷酸酶的概述2.100u 无机焦磷酸酶的配置步骤3.100u 无机焦磷酸酶的应用领域4.100u 无机焦磷酸酶的注意事项正文一、100u 无机焦磷酸酶的概述100u 无机焦磷酸酶是一种常用的生化试剂,广泛应用于科研和实验领域。

它能够催化无机焦磷酸分子的水解反应,产生相应的磷酸盐和无机焦磷酸酶。

这种酶具有高效、专一的特点,对于研究磷酸酯化合物的合成和降解具有重要意义。

二、100u 无机焦磷酸酶的配置步骤1.准备实验所需的化学试剂,如无机焦磷酸、缓冲液、酶标仪等。

2.在一定温度下(通常为 37℃),将无机焦磷酸酶和适量的缓冲液加入到反应体系中,充分混合均匀。

3.将混合好的反应液倒入酶标仪中,设置相应的测量波长和时间,进行检测。

4.按照实验需要,对酶标仪进行校正,以确保测量结果的准确性。

5.根据实验结果,计算出 100u 无机焦磷酸酶的浓度,并进行适当调整。

三、100u 无机焦磷酸酶的应用领域1.生物化学:100u 无机焦磷酸酶可用于研究磷酸酯化合物的合成和降解,以及相关酶的活性和动力学特性。

2.分子生物学:在研究基因表达调控、信号传导途径等方面,100u 无机焦磷酸酶可用于检测磷酸酯化合物的变化。

3.药物研发:100u 无机焦磷酸酶可用于筛选和评估具有磷酸酯酶抑制活性的化合物,为药物研发提供实验依据。

四、100u 无机焦磷酸酶的注意事项1.在实验过程中,应避免酶标仪的强烈震动和长时间照射,以免影响测量结果。

2.在配置 100u 无机焦磷酸酶时,应尽量选择高质量的化学试剂,以保证实验结果的准确性。

UDPG 焦磷酸化酶(UGP)活性检测试剂盒说明书__紫外分光光度法UPLC-MS-4179

UDPG 焦磷酸化酶(UGP)活性检测试剂盒说明书__紫外分光光度法UPLC-MS-4179

UDPG 焦磷酸化酶(UGP )活性检测试剂盒说明书:UPLC-MS-4179:50T/48S 紫外分光光度法试剂名称规格保存条件提取液液体55mL×1瓶2-8℃保存试剂一粉剂×1瓶-20℃保存试剂二粉剂×2瓶2-8℃保存试剂三粉剂×2支-20℃保存试剂四粉剂×2支-20℃保存试剂五液体5mL×1瓶2-8℃保存试剂六液体15mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制:1.试剂一:临用前取一瓶加30mL 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃可保存4周,禁止反复冻融。

2.试剂二:临用前取一瓶加2.5mL 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂2-8℃保存2周。

3.试剂三:临用前加1.4mL 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃可保存2周,禁止反复冻融。

4.试剂四:临用前每支加1mL 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃可保存2周,禁止反复冻融。

5.工作液的配制:将试剂一:试剂二:试剂三:试剂四:试剂五:试剂六按体积比=600:100:20:40:100:250混合,现用现配。

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphosphprylase ,UGP ,EC 2.7.7.9)在自然界广泛分布。

在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化,将1-磷酸葡萄糖与UTP 分子合成为UDP-葡萄糖(UDPG ),UDPG 是高等植物和动物中主要活化酶的形式,作为葡萄糖基供体参与糖原、蔗糖、纤维素等的合成代谢。

UGP 可逆的催化生成1-磷酸葡萄糖,其在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP 转化为NADPH ,UGP 活性可以用340nm 的吸光值的变化来反应。

UDP-Glucose UGP Glucose-1-PhosphatePhosphoglucomutase Glucose 6-phosphate Glucose 6-phosphate+NADP +G6PGH 6-Phosphogluconolactone+H ++NADPH注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

UDPG焦磷酸化酶检测

UDPG焦磷酸化酶检测

迪信泰检测平台
UDPG焦磷酸化酶检测
UDPG焦磷酸化酶(UDP-Glucosepyro Phosphosphprylase),是生物体糖原合成过程中的关键酶。

在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化,将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖(UDPG)。

UDPG焦磷酸化酶可逆催化反应生成1磷酸葡萄糖,在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH,340nm 的吸光值增加速率反映了UDPG焦磷酸化酶活性。

迪信泰检测平台采用生化的方法检测糖原系列物质,结合相应的试剂盒,可高效、精准的检测UDPG焦磷酸化酶的活性变化。

此外,我们还提供其他糖原类的检测服务,以满足您的不同需求。

生化法测定UDPG焦磷酸化酶样本要求:
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。

周期:2~3周。

项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告,报告包括:
1. 实验步骤(中英文)。

2. 相关参数(中英文)。

3. 图片。

4. 原始数据。

5. UDPG焦磷酸化酶含量/活性信息。

迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案,具体可免费咨询技术支持。

糖化酶活性检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4239

糖化酶活性检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4239

糖化酶活性检测试剂盒说明书可见分光光度法UPLC-MS-423950T/24S试剂名称规格保存条件提取液液体110mL×1瓶2-8℃保存试剂一粉剂×2瓶2-8℃保存试剂二液体35mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制:1、试剂一:临用前取1瓶加入20mL提取液,充分混匀后沸水浴直至溶解(约10min),2-8℃保存4周;2、标准品:10mg无水葡萄糖。

临用前加1mL提取液溶解为10mg/mL的葡萄糖标准品备用,2-8℃保存两周;糖化酶,即葡萄糖淀粉酶(EC3.2.1.3),又称γ-淀粉酶。

糖化酶是由一系列微生物分泌的,具有外切酶活性的胞外酶,主要作用是从淀粉、糊精、糖原等碳链上的非还原性末端依次水解α-1,4糖苷键,切下一个个葡萄糖单元,对于支链淀粉,当遇到分支点时,它也可以水解α-1,6糖苷键由此将支链淀粉全部水解成葡萄糖。

多应用于酒精、白酒、抗生素、氨基酸、有机酸,甘油,淀粉糖等工业中,是我国重要的工业酶制剂之一。

糖化酶将可溶性淀粉生成葡萄糖,碱性条件下,葡萄糖与3,5-二硝基水杨酸共热后生成红棕色化合物,在540nm处有最大光吸收,在一定范围内葡萄糖的量与反应液颜色深浅成正比,以此测定糖化酶的活力。

Soluble Starch Glycosylase GlucoseGlucose+3,5-Dinitrosalicylic Acid3-Amino-5-Nitrosalicylate(540nm)注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅、研钵/匀浆器,超声破碎仪、冰和蒸馏水。

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1.按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。

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UDPG焦磷酸化酶(UGP)活性检测试剂盒说明书微量法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC3365
规格:100T/96S
产品简介:
尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphosphprylase,UGP,EC 2.7.7.9)在自然界广泛分布。

在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化,将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖(UDPG),UDPG是高等植物和动物中主要活化酶的形式,作为葡萄糖基供体参与糖原、蔗糖、纤维素等的合成代谢。

UGP可逆的催化生成1-磷酸葡萄糖,其在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH,UGP活性可以用340nm的吸光值的变化来反应。

试验中所需的仪器和试剂:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品内容:
提取液:液体110mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。

临用前加15mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融,-20℃保存2周。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存。

临用前加2.5mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后4℃保存,禁止反复冻融,4℃保存1周。

试剂三:粉剂×1支,-20℃避光保存。

临用前加1.4mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融,-20℃保存2周。

试剂四:粉剂×1支,-20℃避光保存。

临用前每支加1mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融,-20℃保存2周。

试剂五:液体2.5mL×1瓶,4℃保存。

试剂六:液体5mL×1瓶,4℃保存。

操作步骤:
一、粗酶液提取:
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后,10000g,4℃,离心10min。

细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

血清等液体:直接检测。

二、测定步骤:
1、紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、工作液的配制:将试剂一:试剂二:试剂三:试剂四:试剂五:试剂六按体积比=600:100:20:40:
100:250混合,现用现配。

3、操作表:
试剂名称空白管测定管
样本(µL)20
工作液(µL)180180
蒸馏水(µL)20-
在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入上述试剂,充分混匀后于340nm处测定10s时的吸光值A1,迅速置于37℃(哺乳动物)水浴锅或者培养箱5min(酶标仪有控温功能的可将温度调至37℃),拿出迅速擦干测定310s时的吸光值A2,计算△A测定管=A2测定-A1测定,△A空白管=A2空白-A1空白,△A=△A测定管-△A空白管。

空白管只需做一次。

UGP酶活计算
1、按微量玻璃比色皿进行计算:
(1)按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

UGP(U/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样×Cpr)÷T=321.54×ΔA÷Cpr
(2)按照样本鲜重计算
酶活单位定义:每克组织每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

UGP(U/g鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V反总×109]÷(W×V样÷V样总)÷T=321.54×ΔA÷W
(3)按照细胞数量计算
酶活单位定义:每104个细胞每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

UGP(U/104cell)=[ΔA÷(ε×d)×V反总×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.643×ΔA
(4)按照液体体积计算
酶活单位定义:每毫升液体每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

UGP(U/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V反总×109]÷V样÷T=321.54×ΔA
V反总:反应体系总体积,1×10-3L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.1mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,5min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万;109:单位换算系数,1mol=109nmol。

2、按96孔UV板进行计算:将计算公式中的d-1cm修改为d-0.6cm进行计算即可。

注意事项
1、空白管为检测各试剂组分质量的检测孔,正常情况下,变化不超过0.01。

2、△A大于0.6或者A2测定大于1.5时,建议将样品稀释后再进行测定。

当△A小于0.01时,可以延长
反应时间(5min或10min)来测定。

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