乙型肝炎表面抗体定量检测

乙型肝炎表面抗体定量检测

1．检验目的

检测HBsAb主要是用于监测乙型肝炎疫苗是否有效，HBsAb的出现表明机体具有针对乙肝病毒感染的免疫力和抵抗乙肝病毒的侵入，同时定量检测HBsAb还可以观察急性乙肝恢复的动态情况以及乙型肝炎的流行病学调查（以往是否暴露接触过乙肝病毒）。

2．方法原理

采用了美国雅培公司的专利技术——微粒子酶免疫分析（MEIA），即以rHBsAg包被微粒子（M-Ag）与标本中的HBsAb形成M-Ag-Ab 复合物，当复合物被转移到纤维杯上时，微粒子就不可逆地结合到纤维杯表面的玻璃纤维上，加入生物素化HBsAg（Ag-B）形成M-Ag-Ab-Ag-B复合物，再与加入的碱性磷酸酶标记的抗生物素抗体结合，洗去未结合的游离物质，加入底物——四甲基伞形酮磷酸盐，碱性磷酸酶脱去底物的磷酸基而发出荧光，通过MEIA光路元件检测而得到定量结果。

3．性能指标

MEIA定量检测HBsAb在0.00-1000mIU/ml的范围内呈线性关系，不精密度CVs为3-8%，检出限>0.1mIU/ml，灵敏度0.1mIU/ml。

4．标本收集

4．1标本类型：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本（抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1或EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准）；其他体液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等体液可以作为检测标本，但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。

4．2标本留取：以空腹为宜，收到标本后最好立即离心留取血清或血浆（凝固血应待其充分凝固后收集血清），不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝，使用肝素治疗的病人宜在肝素治疗前抽血。4．3标本保存：留取的标本最好在3小时内检测，不能立即检测的应放臵于2-8℃最长达14天（可以含有凝块但要密闭以防蒸发），或者-10℃最长达14天（不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞）。

4．4标本容器：盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管

4．5标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器（0.5ml塑料离心管）存放并密封，并根据邮寄规则和要求进行包装，运送时还要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由专人运送至指定地点指定接收人。

4．6拒收标本：凡与4.1-4.5所述内容不符的标本，检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的原因，并提出解决的方案或建议。

5．分析系统

5．1分析仪器：为美国雅培公司提供的AXSYM全自动免疫分析仪，仪器校准请参见仪器操作规程。

5．2分析试剂：为美国雅培公司提供的配套的HBsA b试剂盒，规格为100test/盒，2-8℃贮存，有效期6个月；在效期内使用试剂。

5．3定标试剂：为美国雅培公司提供的配套的HBsAb试剂盒中所附带，2-8℃贮存，有效期6个月；每换一次不同批号试剂均应进行重新定标。

5．4质控试剂：为美国雅培公司提供的配套的质控品，分为高、低二个浓度，2-8℃贮存，有效期6个月；每天随常规工

作一起检测并保存质控结果，每月一次质控小结，失控要有记录及纠正的结果。

5．5其他耗材：均为美国雅培公司提供，如MUP、Matrix cell液、4号液、探针清洗液、管道消毒液等，其中MUP为2-8℃贮存，其他均室温存放。

6．定标程序

6．1仪器开启后（开机程序参见仪器操作规程），从屏幕主菜单中选择ORDERLIST。

6．2选择F4（CAL）。

6．3选择要定标的项目——HBsAb。

6．4输入标本架的位臵。

6．5输入标准品的批号和效期（可省略）。

6．6选择定标类型——MASTER曲线。

6．7选择F6（ADD）确认定标申请。

6．8返回主菜单，选择STORED RESULTS。

6．9选择CALIBRATION REVIEW。

6．10选择F4-NEW LOT。

6．11选择：F4-SCAN用条码阅读器扫描主校正曲线，先上后下移动条码；或者用键盘手工输入条码数据。

6．12选择F6-SAVE储存主校正曲线数据。

6．13返回主菜单，按RUN键运行即可。

6.14查阅定标结果：从主菜单选择STORED RESULTS/CALIBRATION REVIEW，选择F5（VIEW ALL），选择项目—HBsAb，查看定标内容，F6—查看详细内容。

7．标本申请操作程序

7．1开机以后检查库存是否足够（包括纤维杯、bulk soIUtions、标本架的有效性）和垃圾桶是否需要清理。

7．2从主菜单选择ORDERLIST。

7．3选择F6——PATIENT。

7．4输入标本架的位臵编号，如果系统设定自动标本位臵定义，则无须此步骤。

7．5输入标本编号，如果系统自动设定标本编号定义，则无须此步骤。

7．6输入以下信息（可选择）：病人编号、病人姓名、病人说明，根据需要可以不输。

7．7选择该标本要检测的项目或项目组合（同时检测多个项目的也可以手工选择），在此还可选择稀释模式、检测次数和是否急诊。

7．8选择F6——ADD，确认病人标本申请。

7．9如果还有标本需要申请，重复2-7步骤，如无则选择F1——EXIT返回病人项目申请（这时可以查看申请是否正确）。

7．10选择F1-EXIT返回主菜单。

8．质量控制操作程序

8．1质控品申请参照7“标本操作”步骤执行，即随常规标本一起申请检测。

8．2质控结果登记到本年度的“免疫室定量检测项目室内质控登记表”。

8．3每天将测定的质控结果与质控允许范围进行比较：HBsAb质控血清一共有二个浓度（0mIU/ml、80mIU/ml），质控范围分别为0-2 mIU/ml、60-100mIU/ml。

8．4一旦发现失控，应即时查找和分析原因，并在该结果栏作详细的批注和记录解决的过程；失控情况处理及原因分析详见9“失控处理”。

8．5每月进行质控小结。并将原始数据打印和存盘留档。