植物组培复习题

某培养基的配方是MS+BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+2.5%蔗糖+0.7%琼脂粉。MS母液的浓度分别是大量元素20倍，微量500倍，铁盐100倍，有机物50倍；BA母液浓度1.0mg/mL,NAA母液浓度0.1mg/mL，要配置400mL该培养基，需要吸取各种母液各多少mL？分别称取蔗糖、琼脂多少克？
大量元素：1000/20*1*0.4=20mL
微量 1000/500*1*0.4=0.8mL
铁盐 1000/100*1*0.4=4mL
有机物 1000/50*1*0.4=8mL
BA 2.0*0.4=1.0*VBA VBA=0.8mL
NAA 0.5*0.4=0.1*VNAA VNAA=2mL
蔗糖 2.5%*400=10g
琼脂 0.7%*400=2.8g

简述MS培养基的基本特点
无机盐浓度高，元素平衡较好，缓冲性能好，微量元素和有机成分含量齐全且较丰富

简述外植体消毒的一般步骤
1、先用清水冲洗，茸毛较多的外植体用皂液洗涤后再用清水冲洗，用吸水纸吸干表面水分；
2、将外植体浸泡在0.1%-0.2%的氯化汞溶液中2-19min，或先在70%酒精中浸泡数秒，然后再10%次氯酸钙中浸泡10-20min，或先在70%酒精中浸泡数秒，再2%次氯酸钠溶液中浸泡15-30min进行灭菌；
3、灭菌后倒掉灭菌液，无菌水冲洗外植体3-5次，置外植体于无菌滤纸上吸干表面水分，适当分割后接种

①植物组织培养：在无菌和人工控制的条件下，利用适当的培养基，使植物的离体器官、组织、细胞及原生质体生长和发育的所有培养技术的总称。
②细胞脱分化：离体培养条件下生长的细胞、组织或器官经过细胞分裂或不分裂逐渐失去原来的结构和功能而恢复分生状态，形成无组织结构的细胞团或愈伤组织或成为未分化细胞特性的细胞的过程
③外植体：植物组织培养过程中使用的各种器官、组织和细胞
④人工种子：植物离体培养中产生的胚状体或不定芽，被包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中，从而形成能发芽出苗的颗粒体
⑤胚状体：在离体培养条件下，植物离体培养的细胞、组织、器官产生的类似胚的结构
⑥愈伤组织：外植体因受伤或在离体培养时，其未分化的细胞和已分化的细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织
⑦植物细胞全能性：植物体的每个生活细胞都具有该植物机体的全部遗传信息，具有发育完整个体的性能
⑧原球茎：是兰花种子萌发形成的一种形态学构造，是短缩的，呈珠粒状，类似嫩茎的器官
⑨再分化：离体培养的植物细胞和组织可以由脱分化状态重新进行分化，形成一种或几种类型的细胞、组织、器官，甚至形成完整植株的过程
10丛生芽：指外植体携带的顶芽或腋芽在适宜培养环境中不断发生腋芽而呈丛生状态
11培养基：是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料

培养基制作程序并画图

表示
确定培养基配放用量---称取蔗糖、琼脂---熬培养基---定容---PH调整---分装---封口---标识、记录---高压灭菌

如何减轻植物组织中试管苗玻璃化现象
1、两个增加：增加琼脂浓度，增加蔗糖含量
2、连个增强：增强容器通风，增强光照
3、连个加入：加入渗透剂，加入ABA
4、一个减少：减少培养基氮素含量，特别是NH4-N
试管苗繁殖的一般程序：初代培养-继代培养-生根培养-移栽驯化
植物组培中影响器官分化的因素有哪些？IAA和CTK的比值和绝对含量对器官分化的影响
IAA/CTK 高:有利于形成根 适中:维持原组织生长而不分化 低:有利于形成芽

试叙述植物脱毒的机理，常用的脱毒方式有哪些？
1、病毒在植物体内的分布是不均匀的，在茎尖中呈梯形分布
2、植物病毒自身不具有主动转移的能力，病毒的移动都是被动的
3、在旺盛分裂的细胞中，代谢活性很高，使病毒无法进行复制
4、在植物体内可能存在病毒钝化系统
5、在茎尖中存在高水平内源生长素可抑制病毒的增值
方法：1、物理方法 2、化学方法3、生物化学方法 4、综合脱毒法

填空题
①脱毒苗的检测方法有：（直接测定法）（指示植物法）（血清鉴定法）（核酸分析法）（电镜鉴定法）
②培养基有（基本培养基）（完全培养基）
③外植体的选择原则（再生能力强）（遗传稳定性好）（外植体来源丰富）（外植体灭菌容易）
④植物离体培养细胞产生胚状体的过程即（植物胚胎发生）
⑤植物快速繁殖初代培养物形成有5种类型（段枝发生型）（丛生芽发生型）（不定芽发生型）（胚状体发生型）（原球茎发生型）

造成组培过程中发生污染的原因有哪些？如何有效控制污染
①细菌污染原因：工具消毒不彻底，人呼吸引起，手接触材料或器皿
控制措施：戴口罩，不讲话，用酒精棉球擦双手
②真菌污染原因：接种室空气污染，超净工作台运行不良所致
控制措施：1、紫外灯照射接种室30min以上
2、超净工作台提前20min开机
3、培养瓶应拿成斜角，放在酒精灯火焰上方
（若以上三项措施无效，需对接种室进行熏蒸

植物离体快速繁殖有哪些方面的应用
1、良种的快速繁殖 新育成的 新引进的新发现的稀缺良种的快速繁殖
2、少量脱毒良种苗的快速繁殖和无病毒苗的快速繁殖
3、特殊育种材料的快速繁殖
4、制种材料的快速繁殖
5、基因工程植株的快速繁殖
6、自然和人工诱变有用突变体的快速繁殖
7、离体保存种质
8、濒危植物的繁殖
植物组织培养的基本特点：1 整个过程都是在无菌条件下进行的
2 在多数情况下是利用完全确定的人工培养

基进行的，在组织培养中的植物材料不需依靠自身，光合作用提供养分
3 材料可以是植物的器官，组织，也可以是单个细胞，他们都处于离体状态
4 通过连续培养，可以不断增殖，形成克隆
5 在封闭的容器中进行，组培苗叶片表面一般都无角质层或蜡质层，气孔始终张开
6 环境湿度，光照强度和时间都是人为设定的
应用：1植物离体快繁
2 培育无病毒苗木
3培育新品种或创制新物种 1）选育杂交品种2）离体选择突变体3）单倍体育种（花药培养）
4 次生代谢物产生（天然有机化合物）
5 植物种质自愿的离体保存
6 人工种子
7 用于基因工程

组培过程中发生褐变现象的原因及防治方法
①原因：酚类在完整的细胞中单独存在，不与多酚氧化酶接触，较稳定，外植体切口受损，酚类外溢，与多酚氧化酶接触，氧化为醌类物质
②防治方法：1，选择适宜的外植体
2、转接到新鲜培养基
3、用抗氧化剂 在培养基中加入VC，半胱氨酸等抗氧化剂，或用抗氧化剂对材料进行处理
4、活性炭 在培养基中添加0.1%-0.5%活性炭
对于易发生褐变的材料，用无菌水浸泡