炭疽实验室检测技术63页PPT
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《炭疽防治技术规范》PPT课件
炭疽防治技术规范
丰台区动物卫生监督所 吴长福
2021/6/10
1
炭疽 Anthrax
2001.9.11事件后， 恐怖分子利用炭疽杆菌 进行恐怖主义活动。
2021/6F/1B0 I调查佛州发生的炭疽热事件
2
2021/6/10
2005年7月，我国贵州、宁夏、辽宁、 吉林发生人炭疽，1人死亡. 2012年8月，江苏、辽宁发生人炭疽。
冻皮，应分开取样，不得混掺。
4.取样完毕的皮张，在未收到检疫结果通知单前，应保持原 状，不得重新分类、包装、加工和移动。
5. 取样人员，应进行炭疽预防注射和具有一定的防疫知识 。 在工作前，应穿好防护服，工作后，应充分消毒洗手，工 作服须进行103.41kPa高压蒸汽灭菌，要严格遵守防疫卫 生制度。
• 在濒死后可见鼻流出血样泡沫，肛门及阴门流 出不易凝固的血液。
2021/6/10
19
临床症状
➢ 急性型：常发生于牛、马
• 体 温 升 高 （ 40-42℃ ） ， 精 神 沉郁，食欲减退，瞳孔散大， 恶寒战栗，呼吸困难，脉博加 快。
• 粘膜发紫，病初便秘，腹泻带 血，尿暗红色，泌乳停止，孕 畜流产，濒死期体温急速下降 ，一般经1-2天死亡。
外毒素
水肿因子 保护性抗原 致死因子
抗吞噬，局部水肿 细胞坏死
单独存在不发挥其活性，三者协同发挥毒素效应。
2021/6/10
12
流行病学
➢传染源：
• 主要传染源是病畜，其次是带菌动物。
• 病畜处于菌血症时，细菌可随分泌物、排 泄物、破溃的肿胀部渗出液及天然孔的溢 血排出。
• 尸体中含有大量的炭疽杆菌，如处理不当 ，污染环境，可成为持久的疫源地。
咽喉部红肿
丰台区动物卫生监督所 吴长福
2021/6/10
1
炭疽 Anthrax
2001.9.11事件后， 恐怖分子利用炭疽杆菌 进行恐怖主义活动。
2021/6F/1B0 I调查佛州发生的炭疽热事件
2
2021/6/10
2005年7月，我国贵州、宁夏、辽宁、 吉林发生人炭疽，1人死亡. 2012年8月，江苏、辽宁发生人炭疽。
冻皮，应分开取样，不得混掺。
4.取样完毕的皮张，在未收到检疫结果通知单前，应保持原 状，不得重新分类、包装、加工和移动。
5. 取样人员，应进行炭疽预防注射和具有一定的防疫知识 。 在工作前，应穿好防护服，工作后，应充分消毒洗手，工 作服须进行103.41kPa高压蒸汽灭菌，要严格遵守防疫卫 生制度。
• 在濒死后可见鼻流出血样泡沫，肛门及阴门流 出不易凝固的血液。
2021/6/10
19
临床症状
➢ 急性型：常发生于牛、马
• 体 温 升 高 （ 40-42℃ ） ， 精 神 沉郁，食欲减退，瞳孔散大， 恶寒战栗，呼吸困难，脉博加 快。
• 粘膜发紫，病初便秘，腹泻带 血，尿暗红色，泌乳停止，孕 畜流产，濒死期体温急速下降 ，一般经1-2天死亡。
外毒素
水肿因子 保护性抗原 致死因子
抗吞噬，局部水肿 细胞坏死
单独存在不发挥其活性，三者协同发挥毒素效应。
2021/6/10
12
流行病学
➢传染源：
• 主要传染源是病畜，其次是带菌动物。
• 病畜处于菌血症时，细菌可随分泌物、排 泄物、破溃的肿胀部渗出液及天然孔的溢 血排出。
• 尸体中含有大量的炭疽杆菌，如处理不当 ，污染环境，可成为持久的疫源地。
咽喉部红肿
炭疽实验室检测技术
③分析速度快； ④可以快速灭活标本中的病原菌，用于核酸分析。 目前针对炭疽芽孢杆菌及其芽孢的核酸检测多 数都依赖于PCR ,有定性和定量PCR 的应用报道,
PCR检测引物的设计
炭疽芽孢杆菌的PCR 检测中引物的设计非常关键。 炭疽芽孢杆菌有两个毒力相关质粒pX01 和pX02。
pX01 分子量为110 MDa (185kb) ，携带cya 、 lef 和pag 基因，分别编码水肿因子( EF) 、致死 因子(L F) 和保护性抗原( PA) ； pX02 分子量为60 MDa(95kb)，携带capABC 和dep 基因，分别编码荚膜与参与其生物合成的 酶。
PCR检测引物序列
pagA F: 5' ATT TGC GGT AAC ACT TCA CT 3' pagA R: 5' AGA CCG TGA CAA TGA TGG AA 3' cap外F：5' CCT GGT TGT TCT TTT CGT TGC 3' cap外R：5' CGG ATT GTA TAT GGA GTG GG 3' cap内F：5' TTT CAC CAG CAC CCA CAT AG 3' cap内R：5' GGG ACA GGA ATG TTT GGA TC 3' rpoB 2F：5' CCA ACA GTA GAA ATG CC 3' rpoB 2R：5' AAT TTC ACC AGT TTC TGG ATC T 3'
一些进化研究学者推论,这几种细菌来源于同一个 祖先,为了适应不同的环境而产生分化,炭疽芽孢 杆菌成为温血动物的病原菌,蕈状芽孢杆菌是环境 中的正常菌,对人和动物没有致病能力;而蜡样芽 孢杆菌和苏云金芽孢杆菌处于以上两种菌之间,蜡 样芽孢杆菌是环境中的常见菌,偶尔也会使温血动 物感染;苏云金芽孢杆菌则成为昆虫的致病菌。
PCR检测引物的设计
炭疽芽孢杆菌的PCR 检测中引物的设计非常关键。 炭疽芽孢杆菌有两个毒力相关质粒pX01 和pX02。
pX01 分子量为110 MDa (185kb) ，携带cya 、 lef 和pag 基因，分别编码水肿因子( EF) 、致死 因子(L F) 和保护性抗原( PA) ； pX02 分子量为60 MDa(95kb)，携带capABC 和dep 基因，分别编码荚膜与参与其生物合成的 酶。
PCR检测引物序列
pagA F: 5' ATT TGC GGT AAC ACT TCA CT 3' pagA R: 5' AGA CCG TGA CAA TGA TGG AA 3' cap外F：5' CCT GGT TGT TCT TTT CGT TGC 3' cap外R：5' CGG ATT GTA TAT GGA GTG GG 3' cap内F：5' TTT CAC CAG CAC CCA CAT AG 3' cap内R：5' GGG ACA GGA ATG TTT GGA TC 3' rpoB 2F：5' CCA ACA GTA GAA ATG CC 3' rpoB 2R：5' AAT TTC ACC AGT TTC TGG ATC T 3'
一些进化研究学者推论,这几种细菌来源于同一个 祖先,为了适应不同的环境而产生分化,炭疽芽孢 杆菌成为温血动物的病原菌,蕈状芽孢杆菌是环境 中的正常菌,对人和动物没有致病能力;而蜡样芽 孢杆菌和苏云金芽孢杆菌处于以上两种菌之间,蜡 样芽孢杆菌是环境中的常见菌,偶尔也会使温血动 物感染;苏云金芽孢杆菌则成为昆虫的致病菌。
炭疽采样与检测PPT课件
• 从现场标本中直接进行细菌分离培养、初 步鉴定、药物敏感性试验、生化鉴定、免 疫学试验、PCR核酸提取、涂片、显微镜检 查等检测活动可在生物安全二级实验室中 进行。
• 大量活菌操作和动物感染实验应在生物安 全三级实验室中进行。
2019/11/26
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3
• 基层实验室一般仅做细菌检验分离，要求 具有实验室、无菌室和生物安全柜，一般 不做强毒菌动物感染和解剖，应有能用的 高压灭菌设备和安全的污水消毒设施。
双份血清。急性期和恢复期采集时间间隔应在7 天以上
➢ 急性期血清：发病7天内的血清（放宽条件14天内） ➢ 恢复期血清：发病14天后的血清
2019/11/26
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13
具体采集方法 —— 病患标本
1、采样人员到现场后，首先拿出一次性中单 铺在一处平整的桌面等地方，然后穿戴一次 性衣服、口罩、帽子、双层手套、防护眼镜 、鞋套等。 2、观察病灶部位。 3、打开出诊箱，拿出采样器材，按下述方法 采样。
➢水疱较小时：用注射器先抽取无菌生理盐水，注射进 水疱，再把水疱内生理盐水抽出来，放无菌离心管， 再用无菌拭子沾取水疱处可能剩余液体，然后用碘酒 消毒处理以免细菌扩散。
2019/11/26
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15
采集方法 —— 病患标本
（2人一起合作采样）
疑似皮肤炭疽
✓ 水疱期已破损
➢用无菌拭子沾取渗出液，每2个拭子放在一个15ml无 菌离心管中，手持部分折去，盖盖，在管上标记编号 等信息。最后用碘酒消毒处理以免细菌扩散。
炭疽采样与检测
2019/11/26
.
1
了解炭疽病原
• 生物危害程度
➢国际：生物危险分类属于III类
➢中国：危害程度分类属于第二类
炭疽介绍PPT培训课件
临床表现
皮肤炭疽的典型表现为迅速坏死的无 痛性痈，伴局部化脓性淋巴结炎；吸 入性炭疽表现为急性起病，出现寒战 、高热、呼吸困难、胸痛及咳嗽，可 迅速出现昏迷和死亡；肠炭疽可表现 为急性肠炎型或急腹症型，前者症状 较轻，后者病情凶险，常并发败血症 和感染性休克。
实验室检查
皮肤损害的分泌物、呕吐物、粪便、 脑脊液等标本中可检出炭疽杆菌。
炭疽患者及其家属可能因病情严重而产生恐惧、焦虑等心理问
题。
社会经济影响及防控策略
社会经济影响
炭疽疫情爆发可能导致社会恐慌，影响社会稳定和经济发展。同时，炭疽患者 的治疗和康复需要耗费大量医疗资源和费用。
防控策略
加强炭疽疫情的监测和报告，及时发现和控制传染源；加强宣传教育，提高公 众对炭疽的认识和防范意识；加强动物检疫和监管，防止动物炭疽传播给人类 ；加强医疗救治能力建设，提高炭疽患者的救治成功率。
发病机制
炭疽杆菌通过皮肤接触、吸入或食入等方式进入人体后，在 局部繁殖并产生毒素，引起组织坏死和全身毒血症。炭疽杆 菌还可进入血液循环，引起败血症和炭疽性脑膜炎等严重并 发症。
流行病学特点
传染源
易感人群
患病的草食动物，如牛、羊、马等， 是炭疽的主要传染源。
人群对炭疽普遍易感，但职业人群如 牧民、农民、屠宰工人等由于接触患 病动物的机会较多，因此感染风险更 高。
提高应急处理能力
加强应急处理能力，确保在疫情爆发 时能够迅速、有效地采取应对措施， 保障公众健康和安全。
XX
REPORTING
2023 WORK SUMMARY
THANKS
感谢观看
PART 05
国内外研究现状及展望
国内外研究进展概述
病原学研究
炭疽演示课件
肠炭疽与急性菌痢、出血性肠炎等鉴别
肠炭疽的临床症状与这些肠道疾病相似，但治疗方法不同，需通过实验室检测和临床表现 进行鉴别。
03
治疗与预防措施
治疗方案及原则
早期治疗
抗生素治疗
炭疽感染后应尽早开始治疗，以降低死亡 率。
首选青霉素类抗生素，如阿莫西林、氨苄 西林等。若对青霉素过敏，可选用其他抗 生素，如四环素、氯霉素等。
炭疽
汇报人：XXX 2024-01-19
目录
• 炭疽概述 • 诊断与鉴别诊断 • 治疗与预防措施 • 并发症与危害程度评估 • 患者教育与心理支持 • 总结与展望
01
炭疽概述
定义与病原学
定义
炭疽是由炭疽杆菌引起的一种急 性、热性、败血性人兽共患病。
病原学
炭疽杆菌为革兰氏阳性粗大杆菌 ，两端平齐，排列如竹节状，无 鞭毛，不能运动，在人体内有荚 膜形成并具较强致病性。
1 2 3
加强炭疽疫苗研发与应用
随着生物技术的不断发展，未来有望研发出更加 安全、有效的炭疽疫苗，提高人群的免疫保护水 平。
推动炭疽治疗手段创新
针对炭疽治疗手段有限的问题，未来将加大研发 力度，探索新的药物和治疗方法，提高患者治愈 率。
完善炭疽疫情监测与报告体系
借助大数据、人工智能等先进技术，完善炭疽疫 情的监测和报告体系，实现疫情的及时发现和快 速处置。
05 患者教育与心理支持
患者教育内容
炭疽的基本知识
01
向患者解释炭疽的病因、传播途径、症状、治疗及预防等相关
知识。
治疗方案和药物使用
02
详细介绍炭疽的治疗方案，包括使用的药物、剂量、用法及可
能产生的副作用等。
自我护理和预防措施
肠炭疽的临床症状与这些肠道疾病相似，但治疗方法不同，需通过实验室检测和临床表现 进行鉴别。
03
治疗与预防措施
治疗方案及原则
早期治疗
抗生素治疗
炭疽感染后应尽早开始治疗，以降低死亡 率。
首选青霉素类抗生素，如阿莫西林、氨苄 西林等。若对青霉素过敏，可选用其他抗 生素，如四环素、氯霉素等。
炭疽
汇报人：XXX 2024-01-19
目录
• 炭疽概述 • 诊断与鉴别诊断 • 治疗与预防措施 • 并发症与危害程度评估 • 患者教育与心理支持 • 总结与展望
01
炭疽概述
定义与病原学
定义
炭疽是由炭疽杆菌引起的一种急 性、热性、败血性人兽共患病。
病原学
炭疽杆菌为革兰氏阳性粗大杆菌 ，两端平齐，排列如竹节状，无 鞭毛，不能运动，在人体内有荚 膜形成并具较强致病性。
1 2 3
加强炭疽疫苗研发与应用
随着生物技术的不断发展，未来有望研发出更加 安全、有效的炭疽疫苗，提高人群的免疫保护水 平。
推动炭疽治疗手段创新
针对炭疽治疗手段有限的问题，未来将加大研发 力度，探索新的药物和治疗方法，提高患者治愈 率。
完善炭疽疫情监测与报告体系
借助大数据、人工智能等先进技术，完善炭疽疫 情的监测和报告体系，实现疫情的及时发现和快 速处置。
05 患者教育与心理支持
患者教育内容
炭疽的基本知识
01
向患者解释炭疽的病因、传播途径、症状、治疗及预防等相关
知识。
治疗方案和药物使用
02
详细介绍炭疽的治疗方案，包括使用的药物、剂量、用法及可
能产生的副作用等。
自我护理和预防措施
炭疽实验室检测技术-杨发莲教材
二、炭疽病原检验程序 图1示。
皮肤渗出物、血液、 粪便或呕吐物、土 壤或动物标本
直接涂片 （革兰氏染色）
细菌培养
必要时做PCR
见到革兰氏阳性大 杆菌，可定为临床 诊断病例
未见到革兰氏阳性 大杆菌，继续别的 试验
直接划平板
直接划平板后的标 本可增菌培养
培养12~24h，选可疑 菌落做青霉素敏感和 噬菌体裂解试验
2.注意事项：ELISA实验的结果受操作影响 很大，每个步骤包括加样、温育、洗涤、显色、 酶标仪读数均应认真负责才能充分发挥ELISA 的高灵敏、强特异的优点。因此，应建立实验 项目的标准操作程序(SOP)。报告方式以定量 分析结果的滴度单位表示；检测时应以接种疫 苗前或初报告病例地方的人或动物的血清作为 阴性血清，如有可能也可设阳性血清对照。阴 性血清每次都要和待测标本同时做。
五、实验方法 （一）标本采集 1.采集标本时应遵循的原则:尽可能在抗生素治疗 开始前采集标本，除必要时并在具备操作病毒细菌条 件的实验室内，不得用解剖的方式获得标本。所需的 血液与组织标本，均应以穿刺方式取得。所有标本均 置无菌容器中 2.血液标本：所有疑似病例，采取血液标本510ml（不加抗凝剂）。 3.皮肤损害处标本：玻片直接在皮肤破损处压蘸； 再用棉签采皮肤损害处渗出物，（不加增菌肉汤）。 4. 粪便与呕吐物标本：有消化道症状的采粪便或 呕吐物标本，注意选取其中混有血液的部分。 5. 痰与咽拭子标本：有呼吸道症状的收集痰液及 咽拭子标本。
（三）具体程序 1.包被抗原：用包被缓冲液将已知抗原稀释至0.3 μg／ml，每孔加0.1 ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶 液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。 洗涤缓冲液配方为：Tris 2.42克，1mol/L HCI 13mL,吐温-20（0.05%）0.5mL, 加蒸馏水至1000mL。 2.待检血清反应：加1:8稀释(稀释液为生理盐水) 的待检样品0.1 ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育60分钟，洗涤3次，每次3分钟。(同时做空白、阴 性及阳性孔对照)
炭疽20190915-PPT课件
病原学特性
抵抗力： – 炭疽杆菌对外界理化因素抵抗力不强，但芽孢 的 抵抗力很强。在干燥的状态下可存活50年以 上，干热150℃60分钟内杀死，鬃毛上芽孢 121℃高压需15分钟。
流行病学特征
易感动物：
–本病多种家畜、野生动物易感，草食兽（如 黄牛、水牛、骆驼、象等）易感性最高，猪 次之，家禽一般不感染，犬猫最低。
扑灭措施： – 隔离和封锁：确诊后，早上报疫情，划定 疫区（点），进行封锁，隔离病畜，治疗 – 紧急接种：假定健康畜群紧急免疫接种 – 治疗：青霉素、磺胺嘧啶等或抗血清 – 消毒：焚烧死亡动物尸体或深埋；地面
公共卫生
皮肤炭疽： – 主要兽医人员，屠宰厂工人，经皮肤伤口感 染。临床表现主要为感染处皮肤先瘙痒红肿， 后为无痛性麻木丘疹，再变成浆液性或血性 水疱，以后变成暗红色痂皮，附近淋巴结肿 大，疼痛。并伴有头痛，发热，关节痛、呕 吐、乏力等症状。
肺炭疽
– 多羊毛、鬃毛和皮革厂工人，病程急剧，早期 恶寒、发热、咳嗽、咳血、呼吸困难等
肠炭疽
– 常因吃病畜肉类所致，发病急、发热、呕吐腹 泻、血样便、腹痛、腹膜炎等
临诊症状
潜伏期： – 很短，一般为1～3天。
病型：发病经过因动物种类不同而有差异，据病 程经过，可分为 – 最急性型 – 急性型 – 亚急性型
临诊症状
最急性型：
– 多发动物：羊（绵羊、山羊)多发，牛、马 也发生。
– 症状：常突然发病，动物站立不稳倒地，呼 吸困难，体表可视粘膜呈蓝紫色，全身颤抖， 天然孔（口、鼻、肛门、阴门等）流出带泡 沫血样液体，不凝固，多发病后半小时到1 小时死亡。有时病畜在放牧或使役中突然倒 地死亡；
临诊症状
亚急性型： – 多发动物：马、猪 – 症状：病情较缓和，常在体表（如喉部、颈部、 胸前、肩胛和乳房）各部皮肤、直肠、口腔粘膜 发生炭疽痈 • 初期其硬固，有热痛，后变冷而无痛，中央部 可发生坏死，有时可形成溃疡。 – 转归： 可经数周痊愈或转为急性 – 病程：数日至一周以上
炭疽临床表现ppt课件
病变多见于面、颈、肩、手和脚等裸 露部位皮肤。初为斑疹或丘疹，次日出 现水疱，内含淡黄色液体，周围组织硬 而肿胀。第3～4日中心呈现出血性坏死 稍下陷，四周有成群小水泡，水肿区继 续扩大。
2019 3
皮肤炭疽
第5～7日坏死区溃破成浅溃疡，血样 渗出物结成硬而黑似炭块状焦痂，痂下 有肉芽组织生成(即炭疽痈)。焦痂坏死 区直径大小不等，其周围皮肤浸润及水 肿范围较大。由于局部末梢神经受压而 疼痛不显著，稍有痒感，无脓肿形成， 这是炭疽的特点。以后随水肿消退，黑 痂在1～2周内脱落，逐渐愈合成疤。
肺炭疽 因暴露于芽胞或吸入污染芽胞尘埃所 致。急性起病。多在暴露后2～5天出现 低热、疲劳和心前区压迫等，持续2～3 天后，症状突然加重，轻者表现为胸闷、 胸痛、发热、咳嗽、咯带血黏液痰。
2019
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8
肺炭疽 重者寒战、高热、由于纵膈淋巴结肿 大、出血并压迫支气管造成呼吸窘迫、 气急喘鸣、咳嗽、紫绀、血样痰等，并 可伴有胸腔积液。肺部体征与病情常不 相符。听诊肺部仅可闻及散在的细小湿 罗音或有摩擦音、呼吸音降低等胸膜炎 体征。
断和鉴别诊断有重要的参考价值。
2019
-
23
皮肤炭疽 1、皮肤感染及蜂窝织炎：痈、疖和蜂窝织炎均为局
部皮肤感染而有局部红肿热痛，重者亦伴有全身中 毒症状，血白细胞亦可明显增高。鉴别点：①局部 疼痛明显，皮损处无焦痂及周围水肿；而皮肤炭疽 局部形成焦痂，周围明显水肿，病灶处呈坏死出血 而非化脓性炎症特点，但局部无明显疼痛，此为重 要鉴别点。②引起病变之致病菌不同，局部取材做 涂片及培养可得不同细菌。
炭疽的临床表现、诊断与治疗
自治区CDC疾病预防控制与应急处理办公室
2019
炭疽的病原学与实验室检测PPT课件
条件下亦可产生，为炭疽毒素的组成成分之一， 具有免疫原性，能使机体产生抗炭疽杆菌的保 护力。
23
抗原结构
庄汗澜、牟兆钦等探讨了保护性抗原（PA） 的免疫机制，发现： 1、PA免疫后，动物产生抗PA抗体、血中吞噬 细胞被激活，抗PA抗体除中和作用外，在体 内能直接杀灭炭疽芽孢杆菌； 2、PA免疫动物抑制入侵的炭疽芽孢出芽，在 炭疽强毒芽孢攻击后1-3天内，PA免疫兔的肝、 脾、淋巴结切片中只见少量芽孢而无繁殖体， 而对照兔组织内细菌以繁殖体为主；
17
培养特性与生化反应
在某些培养基上，炭疽杆菌在培养6h 开始产生紫红色色素，在碱性条件下为 红色，24h达高峰，色素的生物学功能 不详，据认为与培养基的硫酸亚铁含量 有关。
18
抗原结构
炭疽芽孢杆菌的抗原组成主要包 括荚膜抗原、菌体抗原、芽孢抗原及 保护性抗原等四种成分。
19
抗原结构
荚膜多肽抗原：
3
4
5
6
病原学
形态与染色 炭疽杆菌在机体内或含血清或碳酸氢钠特殊培
养基中可形成荚膜。荚膜抗腐败能力大于菌体，因 此在腐尸检片中可见到称为菌影的无内容物的荚膜。 荚膜是由质粒DNA编码，无毒菌株不产生荚膜。
荚膜成分为D-多聚谷氨酸，由荚膜质粒控制，与 炭疽杆菌治病力有关，在体内能抑制白细胞的吞噬 和消化，在体外能阻断菌体胞壁上的噬菌体受体， 有助于病菌在体内繁殖扩散和建立感染。
21
抗原结构
芽孢抗原： 由芽孢的外膜、芽孢壳等组成的芽孢特异
性抗原，具有免疫原性和血清学诊断价值。最 新研究发现炭疽芽孢抗原在炭疽芽孢感染、致 病和免疫上也起作用。芽孢外膜的胶原样糖蛋 白是免疫显性抗原，能刺激机体产生强烈免疫 应答。
22
23
抗原结构
庄汗澜、牟兆钦等探讨了保护性抗原（PA） 的免疫机制，发现： 1、PA免疫后，动物产生抗PA抗体、血中吞噬 细胞被激活，抗PA抗体除中和作用外，在体 内能直接杀灭炭疽芽孢杆菌； 2、PA免疫动物抑制入侵的炭疽芽孢出芽，在 炭疽强毒芽孢攻击后1-3天内，PA免疫兔的肝、 脾、淋巴结切片中只见少量芽孢而无繁殖体， 而对照兔组织内细菌以繁殖体为主；
17
培养特性与生化反应
在某些培养基上，炭疽杆菌在培养6h 开始产生紫红色色素，在碱性条件下为 红色，24h达高峰，色素的生物学功能 不详，据认为与培养基的硫酸亚铁含量 有关。
18
抗原结构
炭疽芽孢杆菌的抗原组成主要包 括荚膜抗原、菌体抗原、芽孢抗原及 保护性抗原等四种成分。
19
抗原结构
荚膜多肽抗原：
3
4
5
6
病原学
形态与染色 炭疽杆菌在机体内或含血清或碳酸氢钠特殊培
养基中可形成荚膜。荚膜抗腐败能力大于菌体，因 此在腐尸检片中可见到称为菌影的无内容物的荚膜。 荚膜是由质粒DNA编码，无毒菌株不产生荚膜。
荚膜成分为D-多聚谷氨酸，由荚膜质粒控制，与 炭疽杆菌治病力有关，在体内能抑制白细胞的吞噬 和消化，在体外能阻断菌体胞壁上的噬菌体受体， 有助于病菌在体内繁殖扩散和建立感染。
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抗原结构
芽孢抗原： 由芽孢的外膜、芽孢壳等组成的芽孢特异
性抗原，具有免疫原性和血清学诊断价值。最 新研究发现炭疽芽孢抗原在炭疽芽孢感染、致 病和免疫上也起作用。芽孢外膜的胶原样糖蛋 白是免疫显性抗原，能刺激机体产生强烈免疫 应答。
22
炭疽病的检疫及处理PowerPoint课件
内容引入 观看幻灯片，请同学们判断是什然 孔 流 血 ， 肛 门 突 出 ， 流
急性：脾不肿大，被膜散在出血点
脾肿大，质软，呈紫黑色
脾切面紫黑，脾髓软化呈糊状，似煤焦油
皮下结缔组织呈出血性胶样水肿
以肿大、出血和坏死的淋巴小结为中心， 形成局灶性、出血性、坏死性病变
归纳总结
能力
①能通过临诊检疫法诊断炭疽病 ②能够通过显微镜检查法诊断炭疽病 ③能够通过环状沉淀法诊断炭疽病 ④能够对患病动物、病死动物及污染的
环境进行妥善处理。
知识
①炭疽病的临诊检疫 ②实验室检疫 ③炭疽病检疫后处理
训练巩固 拓展检验
某乡动物防疫人员在做疫情监测过程中， 发现该乡有2村共有4头牲畜疑似炭疽病， 请问如果你作为防疫人员，应怎样确诊及 处理？
深化
临诊检疫 初步检疫
实验室检疫 准确检疫
镜检法 环状沉淀法
学生分组操作
炭疽病病料采集、镜检 环状沉淀法操作技术
炭疽病病料采集、镜检
疑为炭疽动物，除慢性者外，其他不论是最急性者或急性者均予生前将耳部消 毒后取血液，病变部取水肿液或渗出液等直接涂于载玻片上，自然干燥后，将玻片 涂面相对叠好，中间用火柴杯隔开，以线捆扎，外用塑料纸包好。或用灭菌脱脂棉 滤纸、布片吸取血液等放于小试管中，待检。
染疫动物的处理
一、染疫动物的扑杀：烈性传染病或烈性人畜共患病的染疫动物立即扑杀；新 发生的某种传染病，将最初疫点内的患病与可疑患病动物全部扑杀；疫区解除 封锁前，为了尽快拔除疫点，可将带病原的或检疫阳性的动物扑杀；某些慢性 传染病，如结核、布病等每年检疫，阳性动物扑杀。
二、畜禽尸体无害化处理 工作人员做好自身防护工作。运送尸体应用特制的运尸车。装车前将尸体各天 然孔用蘸有消毒液的湿纱布、棉花严密填塞，小动物和禽类可用塑料袋盛装， 以免流出粪便、分泌物、血液等污染周围环境。尸体污染的环境彻底消毒。 1、掩埋法：选择远离住宅、农牧场、水源、草原及道路的僻静之处，土质干 而多孔、地势高，水位低处，尸体上、下都应铺石灰。 2、焚烧法：毁灭尸体最彻底的方法，可在焚尸炉中进行。如无焚尸炉，则可 挖掘焚尸坑。 3、化制法：不仅对尸体做到无害化处理，并保留了有价值的畜产品，如工业 用油脂及骨肉粉。需在有一定设备的化制站进行，恶性传染病高压灭菌、普通 传染病切块后煮沸。 4、发酵法：利用生物热发酵进行。
炭疽采样与检测PPT课件
别放入高压袋或器皿中，及时高压处理；
✓炭疽常用消毒液：含氯消毒剂，1%次氯酸钠。
✓使用高压灭菌器处理，当压力达到0.12MPa，温度达到121℃时，开 始计时灭菌。有可疑炭疽污染的物品时，需高压1h。
2019/11/26
.
25
炭疽菌株和样本的包装
卫生部《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或 样本运输管理规定》（卫生部第45号令）
备工作。采样物品务必带全。
2019/11/26
.
9
皮肤炭疽病例采集标本类型
一、疑似病例（尽可能在使用抗生素前采集） 1、皮肤病灶处样品（不放过散在瘀血点） 水疱渗出液：采样拭子蘸取或注射器抽取 焦痂表面：拭子稍用力反复涂抹 样品用途： A：玻片涂片(革兰氏染色查炭疽杆菌） B：涂血平板（炭疽杆菌分离培养） C：炭疽杆菌细菌DNA核酸检测
2019/11/26
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7
标本类型
• 病患标本
➢血液 急性期和恢复期双份留取血清，检测抗体 ➢皮损渗出液 分离病原、检测毒力基因、细菌核
酸、玻片染色 ➢痰液、鼻腔拭子、排泄物、脑脊液等
• 动物标本
➢腐烂尸体、动物产品、皮毛、骨头、脏器、干血 块等。
• 环境标本
➢可疑污染土壤、污水、食物，可疑邮件粉末等
2、生物安全防护用品、消毒用品（足量、用出诊箱或黄袋子装）：
一次性防护服、乳胶手套、帽子、鞋套、防护眼镜、口罩、一次性中单 、多个耐高压医疗废物袋
3、采样用品（放出诊箱里）：
无菌采样拭子、无菌生理盐水、剪刀、无菌15ml离心管、试管架、真空 采血管、注射器、一次性静脉采血针（蝶形）、75%酒精、镊子、络合碘、 1%次氯酸钠（临去采样现场前稀释好，用大瓶装）、50ml离心管（样品管外 层包装用）、无菌1.5mlEP管、显微镜载玻片和载玻片放置架、 血平板和接 种环（如果在当地能进行初步培养的话可带）、压舌板、无菌小匙；采集环 境标本时应使用宽口的容器；
✓炭疽常用消毒液：含氯消毒剂，1%次氯酸钠。
✓使用高压灭菌器处理，当压力达到0.12MPa，温度达到121℃时，开 始计时灭菌。有可疑炭疽污染的物品时，需高压1h。
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炭疽菌株和样本的包装
卫生部《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或 样本运输管理规定》（卫生部第45号令）
备工作。采样物品务必带全。
2019/11/26
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9
皮肤炭疽病例采集标本类型
一、疑似病例（尽可能在使用抗生素前采集） 1、皮肤病灶处样品（不放过散在瘀血点） 水疱渗出液：采样拭子蘸取或注射器抽取 焦痂表面：拭子稍用力反复涂抹 样品用途： A：玻片涂片(革兰氏染色查炭疽杆菌） B：涂血平板（炭疽杆菌分离培养） C：炭疽杆菌细菌DNA核酸检测
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标本类型
• 病患标本
➢血液 急性期和恢复期双份留取血清，检测抗体 ➢皮损渗出液 分离病原、检测毒力基因、细菌核
酸、玻片染色 ➢痰液、鼻腔拭子、排泄物、脑脊液等
• 动物标本
➢腐烂尸体、动物产品、皮毛、骨头、脏器、干血 块等。
• 环境标本
➢可疑污染土壤、污水、食物，可疑邮件粉末等
2、生物安全防护用品、消毒用品（足量、用出诊箱或黄袋子装）：
一次性防护服、乳胶手套、帽子、鞋套、防护眼镜、口罩、一次性中单 、多个耐高压医疗废物袋
3、采样用品（放出诊箱里）：
无菌采样拭子、无菌生理盐水、剪刀、无菌15ml离心管、试管架、真空 采血管、注射器、一次性静脉采血针（蝶形）、75%酒精、镊子、络合碘、 1%次氯酸钠（临去采样现场前稀释好，用大瓶装）、50ml离心管（样品管外 层包装用）、无菌1.5mlEP管、显微镜载玻片和载玻片放置架、 血平板和接 种环（如果在当地能进行初步培养的话可带）、压舌板、无菌小匙；采集环 境标本时应使用宽口的容器；
炭疽实验室检测技术
检测方法的比较和选择
培养法虽然特异性较高，但耗时较长，不能满足快速诊断的需求；免疫学方法具 有较高的灵敏度，但可能出现交叉反应；分子生物学方法和生物传感器技术具有 高特异性和高灵敏度，适用于早期诊断和快速检测。
根据检测需求选择合适的检测方法，如需快速诊断可选择现代检测方法，对于大 量样本筛查可选择传统检测方法。
炭疽实验室检测技术
目录ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 引言 • 炭疽检测技术概述 • 实验室检测流程 • 实验室检测技术的挑战与展望 • 案例分析
01
引言
目的和背景
炭疽是一种由炭疽芽孢杆菌引起的动 物传染病，主要通过接触病畜或染菌 物品传播。
实验室检测技术是炭疽防治的重要手 段，旨在快速、准确地检测炭疽病原 体，为及时诊断、隔离和治疗提供依 据。
免疫学方法
利用抗原-抗体反应原理，通过检 测样品中的炭疽毒素或抗原，如 ELISA、免疫荧光等方法，具有较 高的灵敏度。
现代检测方法
分子生物学方法
基于DNA或RNA的检测技术，如 PCR、基因测序等，具有高特异性和 高灵敏度，能够快速准确地检测炭疽 病原体。
生物传感器技术
利用生物传感器将生物分子识别与信 号转换相结合，实现对炭疽病原体的 快速、实时监测。
实验室检测步骤
抗原检测
利用免疫学方法检测样本中是否存在 炭疽毒素或其组分，如酶联免疫吸附 试验（ELISA）、免疫荧光技术等。
核酸检测
细菌分离培养
将样本接种于选择性培养基上，在适 当的温度和环境下培养，观察是否有 炭疽杆菌的生长。
通过聚合酶链式反应（PCR）技术扩 增炭疽相关基因片段，进行基因诊断。
技术突破
某研究机构开发出新型炭 疽检测技术，提高了灵敏 度和特异性。
炭疽病演示课件
预防措施及策略
加强个人防护
避免接触炭疽病源，如病死动物 及其制品。从事畜牧业、屠宰业 等工作的人员应做好个人防护，
如佩戴口罩、手套等。
严格动物检疫
对动物进行定期检疫，及时发现并 处理患病动物，防止疫情扩散。
加强食品卫生监管
加强对肉类、乳制品等食品的生产 、加工、运输等环节的卫生监管， 确保食品安全。
治疗方案及原则
早期治疗
炭疽病的治疗应遵循早期、足量、全程的原则，以提高治 愈率。
抗感染治疗
首选青霉素类抗生素，如阿莫西林、哌拉西林等，对炭疽 杆菌具有较好的抗菌活性。同时，可根据病情联合使用其 他抗生素，如氨基糖苷类、四环素类等。
对症治疗
针对不同症状采取相应的治疗措施，如高热者可给予物理 降温或药物降温，疼痛者可使用镇痛药物等。
后遗症风险评估及干预措施
神经系统后遗症
炭疽病可侵犯神经系统，导致头痛、眩晕、失眠等后遗症 。需进行神经系统评估，给予营养神经、改善睡眠等药物 治疗。
心血管系统后遗症
炭疽病可引起心肌炎、心包炎等心血管系统并发症。需进 行心血管系统评估，给予保护心肌、改善心功能等药物治 疗。
呼吸系统后遗症
炭疽病可引起肺炎、肺脓肿等呼吸系统并发症。需进行呼 吸系统评估，给予抗炎、化痰等药物治疗，必要时进行氧 疗或机械通气治疗。
发病机理及病理变化
发病机理
炭疽杆菌从皮肤侵入，引起皮肤炭疽，使皮肤坏死形成焦痂溃疡与周围脓肿和毒血症，也可引起吸入性炭疽或胃 肠炭疽，均可并发败血症。
病理变化
主要为各脏器、组织的出血性浸润、坏死和水肿。皮肤炭疽呈痈样病灶，皮肤上可见界限分明的红色浸润，中央 隆起呈炭样黑色干痂，周围为凝固性坏死区。镜检可见上皮组织呈急性浆液性出血性炎症，间质水肿显著，组织 结构离解，坏死区及病灶深处均可找到炭疽杆菌。
《炭疽》ppt课件-2024鲜版
撒漂白粉）。
2024/3/27
严格管理传染源
加强个人防护，避免接触炭疽动物 及其产品。对可能被炭疽杆菌污染 的物品和环境进行消毒处理。
切断传播途径
对从事畜牧业、屠宰业等高风险职 业人群进行疫苗接种，提高人群免 疫力。
22
06 总结与展望
2024/3/27
23
本次课程重点内容回顾
炭疽病的病原学特性
2024/3/27
18
05 治疗方案与预防 措施
2024/3/27
19
药物治疗方案选择
抗生素治疗
青霉素为首选药物，早期、足量、长疗程使用是关键。对于皮肤炭疽，成人通常每日注射青霉素，疗程一般为710天。对于肺炭疽、肠炭疽等严重病例，需加大剂量并延长疗程。
其他药物
如患者对青霉素过敏，可选用其他抗生素，如四环素、氯霉素等。同时，可根据患者病情给予对症治疗药物，如 解热镇痛药、抗惊厥药等困难、咳 嗽、胸痛等急性肺炎症状，严重者可出现呼吸衰竭和休克。
2024/3/27
03
肠炭疽
可表现为急性肠炎型或急腹症型。急性肠炎型表现为恶心、呕吐、腹痛、
腹泻等；急腹症型表现为剧烈腹痛、腹胀、呕吐等，易并发败血症和感
染性休克。
16
实验室检查项目选择
2024/3/27
20
支持治疗及护理要点
2024/3/27
局部处理 对皮肤炭疽的局部病灶，切忌挤压及切开引流，以防感染 扩散。可用1:2000高锰酸钾液或0.1%雷佛奴尔液湿敷， 然后涂以抗生素软膏。
营养支持 给予患者高蛋白、高热量、高维生素的易消化饮食，以增 强机体抵抗力。对于不能进食的患者，可给予静脉营养支 持。
疽病的意识。
25
未来研究方向探讨
2024/3/27
严格管理传染源
加强个人防护，避免接触炭疽动物 及其产品。对可能被炭疽杆菌污染 的物品和环境进行消毒处理。
切断传播途径
对从事畜牧业、屠宰业等高风险职 业人群进行疫苗接种，提高人群免 疫力。
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06 总结与展望
2024/3/27
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本次课程重点内容回顾
炭疽病的病原学特性
2024/3/27
18
05 治疗方案与预防 措施
2024/3/27
19
药物治疗方案选择
抗生素治疗
青霉素为首选药物，早期、足量、长疗程使用是关键。对于皮肤炭疽，成人通常每日注射青霉素，疗程一般为710天。对于肺炭疽、肠炭疽等严重病例，需加大剂量并延长疗程。
其他药物
如患者对青霉素过敏，可选用其他抗生素，如四环素、氯霉素等。同时，可根据患者病情给予对症治疗药物，如 解热镇痛药、抗惊厥药等困难、咳 嗽、胸痛等急性肺炎症状，严重者可出现呼吸衰竭和休克。
2024/3/27
03
肠炭疽
可表现为急性肠炎型或急腹症型。急性肠炎型表现为恶心、呕吐、腹痛、
腹泻等；急腹症型表现为剧烈腹痛、腹胀、呕吐等，易并发败血症和感
染性休克。
16
实验室检查项目选择
2024/3/27
20
支持治疗及护理要点
2024/3/27
局部处理 对皮肤炭疽的局部病灶，切忌挤压及切开引流，以防感染 扩散。可用1:2000高锰酸钾液或0.1%雷佛奴尔液湿敷， 然后涂以抗生素软膏。
营养支持 给予患者高蛋白、高热量、高维生素的易消化饮食，以增 强机体抵抗力。对于不能进食的患者，可给予静脉营养支 持。
疽病的意识。
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未来研究方向探讨
炭疽检验技术ppt课件
（一）炭疽病原学检查——
标本采集和样品处理
1、血液标本 所有的疑似病例和病畜，都应采取 血液标本5-10ml，标本量至少应满足下列检查 的需要：
涂片进行显微镜检查； 接种培养基进行细菌分离培养； 分离血清检查抗体； 常规血液检查。 荧光定量PCR检测
2、皮肤溃疡标本 在皮肤炭疽病人溃疡边缘用 棉拭子擦拭，沾取分泌物。
食草动物
经口 食入
发病、 死亡
食肉动物 偶尔感染
污染环境 形成芽胞
一、病原——炭疽杆菌（Bacillus anthracis）
革兰氏染色阳性；
长而直的大杆菌，菌体两端平直；
大小为1.0～1. 5um×3～5um，致病菌中最大的； 无鞭毛，不能运动。
一、病原——炭疽杆菌（Bacillus anthracis）
细菌培养 涂片、革兰染色、荚膜染色、光镜检查 Ascoli试验 动力检查 噬菌体裂解和青霉素敏感性试验 串珠试验 生化试验
炭疽PCR基因检测
五、炭疽实验室检查
炭疽血清学检查
标本采集和样品处理
血清中抗炭疽芽胞和毒素IgG水平检测
（酶联免疫吸附实验ELISA） 血清中抗炭疽荚膜抗体胶体金检测
炭疽病原检验程序
标本 处理（方法根据标本情况选择） 直接涂片、 革兰染色、 荚膜染色、 光镜检查 接种培养 （可用选择性培养基、血培养基） 37℃，16~48 h Ascoli试验 基因检测
可疑菌落（形态） 初检 培养性鉴定试验 深入鉴定
涂片、革兰 染色、荚膜 染色、 光镜检查
动 力 检 查
液 体 培 养
四、抵抗力
芽胞抵抗力强
煮沸40min或干热140ºC 3h灭活；
炭疽PPT课件
06
炭疽病例分享与讨论
典型病例介绍
病例一
患者男性，45岁，农民。因接触病畜后出现高热、皮肤焦痂等 症状就诊。经实验室检查确诊为炭疽。给予青霉素等抗生素治 疗后痊愈。
病例二
患者女性，32岁，牧民。因食用未煮熟的病畜肉后出现呕吐、 腹泻、发热等症状就诊。经实验室检查确诊为肠炭疽。给予环 丙沙星等抗生素联合治疗后康复。
与皮肤病鉴别
皮肤炭疽需与痈、蜂窝织炎等皮肤病进行鉴别，主要观察皮损的形态、颜色和疼痛程度等特 征。
与其他疾病引起的呼吸困难鉴别
肺炭疽需与哮喘、慢性阻塞性肺疾病等引起的呼吸困难进行鉴别，主要依据患者的病史、体 征和影像学检查结果进行综合判断。
04
炭疽治疗与护理
药物治疗方案
抗生素治疗
首选青霉素类药物，如病情严重 可考虑联合用药，确保覆盖可能
诊疗经验总结
早期诊断是关键
炭疽的早期症状不典型，易被误诊。因此，对于疑似炭疽的患者， 应尽早进行实验室检查，以便及时确诊和治疗。
抗生素治疗有效
青霉素、环丙沙星等抗生素对炭疽杆菌具有较好的抗菌效果，是治 疗炭疽的首选药物。
隔离防护措施
炭疽具有传染性，患者应单间隔离，医护人员需做好防护措施，避免 交叉感染。
THANKS
感谢观看
特异性抗原检测
利用免疫学方法检测样本中是 否存在炭疽杆菌的特异性抗原。
血清学检测
检测患者血清中是否存在针对 炭疽杆菌的特异性抗体，以辅
助诊断。
影像学检查应用
X线检查
CT检查
对于肺炭疽患者，X线检查可显示肺部浸润、 胸腔积液等征象。
CT检查可更清晰地显示肺部病变的范围和程 度，有助于肺炭疽的诊断和鉴别诊断。
炭疽实验室检测技术杨发莲(共36张PPT)
墨汁负染时可见菌体周围有肥厚的荚膜，多色美兰染色时菌体染
成蓝色、荚膜染成红色。在固体培养基上，于大气条件下可形成
芽胞，芽胞体染不上颜色(革兰氏)，位于细菌中央，呈卵圆形，
不膨胀图8示；石炭酸复红染色，芽胞为红色，菌体为蓝色图9示
。
图3
图4
图5
图6
0的TE溶液，用无菌镊子挤压拭子几次，用移液器或吸管吸液体放入1. 痰与咽拭子标本：有呼吸道症状的收集痰液及咽拭子标本。 R: AGACCGTGACAATGATGGAA （五）工作人员必须预先接受免疫预防。 5ml 蒸馏水或pH8. 将菌种管置于菌种保藏盒中 ， 4 ℃ 保存。 0的TE溶液，用无菌镊子挤压拭子几次，用移液器或吸管吸液体放入1. 1mol/L枸橼酸(19. （五）工作人员必须预先接受免疫预防。 所需的血液与组织标本，均应以穿刺方式取得。 革兰氏染色阳性，细菌呈链状排列，菌体两端平齐，呈竹节状图5,6,7示。 特殊病原一般要求在生物安全2~4级实验室生物安全柜（Biosafety Level X）内操作，炭疽要求2或3级。 皮肤损害处标本：玻片直接在皮肤破损处压蘸； 革兰氏染色阳性，细菌呈链状排列，菌体两端平齐，呈竹节状图5,6,7示。 疑似病例的渗出液标本，直接涂布平板后，剩余标本可放入肉汤增菌液中增菌。
2痰2与μm咽滤拭器子过标滤本除：菌有，呼滤吸液本道用症一置状个的新于收离集心1痰管液.收5及集m咽即拭为l子离模标板本心。。 管中，加入蒸馏水或pH8.0的TE溶液至
0.5ml，用移液器轻轻搅动，使其悬浮，盖严盖子。 将上述可疑菌落挑出，划线接种于平板之上，在划线区内一处滴一滴诊断用炭疽噬菌体，另一处贴一片青霉素纸片。
拭子标本。
6. 脑脊液标本：表现脑膜刺激症状的病人，腰椎穿刺获取