实验八.中性粒细胞吞噬功能检测
中性粒细胞吞噬功能测定 PPT课件
(1)仔细消毒后，每个班取5ml静脉血于肝素抗凝管内（轻轻摇匀）。
合液”置于洁净载玻片上，用另一载玻片推片，制成血涂片。
(4)待血涂片自然凉干后，用瑞氏染液染色。
瑞氏染色
瑞氏染液数滴覆盖血涂片上 染色1min 再加等量的
PH6.8 PBS与染液混合，染色10~15minΒιβλιοθήκη 用蒸馏水冲洗自然干燥
（平持玻片，在一端加水，使染料“漂走” ）
中性粒细胞：
A.在抗化脓性细菌感染中起重要防御作用；
B.引起感染部位急性炎症反应； C.参与超敏反应（如III型超敏反应），引 起机体免疫病理损伤。
细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功能 ——小吞噬实验
将新鲜血液和细菌混合，经合适时间后涂片 染色，即能观察到被吞噬到中性粒细胞内但还未 被消化掉的细菌。
擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。
油镜观察
首先寻找中性粒细胞——观察胞质中有无吞噬的细菌。如染
色正确，可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色，而中性粒细
胞胞浆染成淡红色。
计算吞噬百分率和吞噬指数
注意事项
(1) 人类白细胞的吞噬活性在 37 ℃时最好，温度过高过低均 会使其吞噬能力减低。 (2)个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能力亦不同。 (3)掌握好细菌与中性粒细胞的作用时间。 中性粒细胞对细菌的吞噬是一个非常迅速的过程，吞噬5min 时吞噬率达45%，10min时接近80%，20min 即达平台。 (4)取“细菌－全血”涂片时，要混匀后再取；制作血涂片要 求推出尾部，过厚或过薄，均不利观察。
生命周期短，不能分裂，靠“造血”补充；
胞核呈多叶状；胞质内有多种颗粒；
内含髓过氧化物酶、防御素、溶菌酶、组织蛋白酶、乳铁 蛋白、碱性磷酸酶等。 中性粒细胞特有，巨噬细胞没有这种酶， 为中性粒细胞在细胞化学上的标志。
吞噬能力实验报告
一、实验目的1. 了解吞噬细胞的基本功能及其在免疫应答中的作用。
2. 观察和分析中性粒细胞和巨噬细胞的吞噬能力。
3. 掌握吞噬细胞吞噬实验的基本操作和结果分析方法。
二、实验原理吞噬细胞是免疫系统的重要组成部分，能够识别、摄取和消化病原体、衰老细胞等异物。
中性粒细胞和巨噬细胞是两种常见的吞噬细胞，它们通过吞噬作用参与机体的非特异性免疫和特异性免疫。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠2. 试剂：鸡红细胞、中性粒细胞吞噬试剂、巨噬细胞吞噬试剂、生理盐水、染色剂等3. 仪器：显微镜、离心机、培养箱等四、实验方法1. 实验分组将实验动物分为三组：中性粒细胞吞噬实验组、巨噬细胞吞噬实验组和对照组。
2. 中性粒细胞吞噬实验- 将小鼠血液分离出中性粒细胞，加入鸡红细胞混匀。
- 将混合液在37℃下孵育一定时间。
- 加入染色剂，进行染色处理。
- 在显微镜下观察中性粒细胞对鸡红细胞的吞噬情况。
3. 巨噬细胞吞噬实验- 将小鼠腹腔巨噬细胞分离出来，加入鸡红细胞混匀。
- 将混合液在37℃下孵育一定时间。
- 加入染色剂，进行染色处理。
- 在显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况。
4. 结果分析- 计算吞噬百分率和吞噬指数，比较不同实验组的吞噬能力。
- 分析吞噬能力与细胞种类、实验条件等因素的关系。
五、实验结果1. 中性粒细胞吞噬实验- 吞噬百分率：实验组A（中性粒细胞）的吞噬百分率显著高于对照组B（未处理的中性粒细胞）和实验组C（巨噬细胞）。
- 吞噬指数：实验组A的吞噬指数也显著高于对照组B和实验组C。
2. 巨噬细胞吞噬实验- 吞噬百分率：实验组C的吞噬百分率略高于对照组B，但差异不显著。
- 吞噬指数：实验组C的吞噬指数略高于对照组B，但差异不显著。
六、实验分析1. 中性粒细胞具有较强的吞噬能力，能够有效吞噬鸡红细胞。
2. 巨噬细胞的吞噬能力略低于中性粒细胞，但在一定程度上也能吞噬鸡红细胞。
3. 吞噬能力受到细胞种类、实验条件等因素的影响。
中性粒细胞吞噬功能测定 PPT课件
中性粒细胞：
A.在抗化脓性细菌感染中起重要防御作用；
B.引起感染部位急性炎症反应； C.参与超敏反应（如III型超敏反应），引 起机体免疫病理损伤。
细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功能 ——小吞噬实验
将新鲜血液和细菌混合，经合适时间后涂片 染色，即能观察到被吞噬到中性粒细胞内但还未 被消化掉的细菌。
中性粒细胞吞噬功能测定 ——细菌计数 法
一、实验内容
1. 细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功能 (小组做)
2. 录相《免疫反击战》
二、目的与要求
1.了解中性粒细胞生物学特性及其意义。 2.熟悉“细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功 能”试验的原理、方法及用途。
[实验原理]
中性粒细胞——来源于骨髓造血干细胞； 占白细胞总数的60%~70%；
擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。
油镜观察
首先寻找中性粒细胞——观察胞质中有无吞噬的细菌。如染
色正确，可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色，而中性粒细
胞胞浆染成淡红色。
计算吞噬百分率和吞噬指数
注意事项
(1) 人类白细胞的吞噬活性在 37 ℃时最好，温度过高过低均 会使其吞噬能力减低。 (2)个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能力亦不同。 (3)掌握好细菌与中性粒细胞的作用时间。 中性粒细胞对细菌的吞噬是一个非常迅速的过程，吞噬5min 时吞噬率达45%，10min时接近80%，20min 即达平台。 (4)取“细菌－全血”涂片时，要混匀后再取；制作血涂片要 求推出尾部，过厚或过薄，均不利观察。
中性粒细胞吞噬作用
中性粒细胞吞噬作用
实验目的
1.熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法。
2.通过本实验理解机体的非特异性免疫机制。
实验原理
血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞，通过趋化、调理、吞入和杀菌等几个步骤，能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物，是机体非特异性免疫的重要组成部分。
实验材料
1.葡萄球菌18h孵育的斜面或肉汤培养物。
2.抗凝人血（
3.8%柠檬酸钠一滴加于无菌小试管中）、瑞氏染液、双蒸水
3.试管、玻片、采血针、酒精棉球、吸管、滴管、显微镜、香柏油
实验方法
1.取小试管一支，用滴管加入一滴3.8%柠檬酸钠溶液。
2..用酒精棉球消毒手指和采血针，从消毒部位采取2～3滴血加入试管中。
3..取一滴菌液加入小试管中，用吸管混匀。
4.置37℃水浴箱水浴15分钟，中途混匀一次。
5. 取出小试管，用吸管将试管中血液打匀后取血半滴于载玻片上，用另一载玻片推成薄血片。
6.待血片自干后，用瑞氏染液染色。
瑞氏染色法：取瑞氏染液数滴滴于上述血片上先染1分钟。
然后加等量蒸馏水，
轻轻晃动混匀，继续染5分钟，水洗，用吸水纸吸干后镜检。
结果观察
油镜检查：寻找中性粒细胞，如果染色结果正确，可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色，而
粒细胞的细胞浆则为淡红色。
计数：1.吞噬百分率：观察100个中性粒细胞，计算其中吞噬有细菌的中性粒细胞数，计算出吞噬细胞百分率。
2.吞噬指数：观察100个中性粒细胞，计算其中被吞噬的细菌总数，平均每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为吞噬指数。
中性粒细胞_实验报告
一、实验目的1. 了解中性粒细胞吞噬功能的原理和实验方法。
2. 观察中性粒细胞对红细胞的吞噬现象，评估中性粒细胞的吞噬能力。
3. 掌握显微镜观察技术，提高实验操作技能。
二、实验原理中性粒细胞是人体内最丰富的白细胞，具有吞噬、杀伤病原微生物和参与免疫调节等功能。
中性粒细胞吞噬功能实验通过观察中性粒细胞对红细胞的吞噬现象，评估中性粒细胞的吞噬能力，进而反映机体的非特异性免疫功能。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜血液、生理盐水、鸡红细胞悬液、0.1%台盼蓝染色液、计数板、载玻片、盖玻片、显微镜等。
2. 仪器：恒温培养箱、离心机、移液器、显微镜等。
四、实验方法1. 制备中性粒细胞悬液：取新鲜血液，用生理盐水洗涤3次，去除红细胞和血小板，制成中性粒细胞悬液。
2. 制备鸡红细胞悬液：取鸡红细胞，用生理盐水洗涤，制成鸡红细胞悬液。
3. 吞噬实验：将中性粒细胞悬液和鸡红细胞悬液按一定比例混合，置于37℃恒温培养箱中培养一段时间。
4. 染色：取培养后的细胞悬液，加入0.1%台盼蓝染色液，染色5分钟。
5. 计数：用计数板计数中性粒细胞和吞噬红细胞的数量，计算吞噬指数。
五、实验结果1. 中性粒细胞数量：每高倍镜视野下中性粒细胞数量为100个。
2. 吞噬指数：中性粒细胞吞噬红细胞的百分比为30%。
六、实验分析1. 中性粒细胞对鸡红细胞的吞噬能力较好，吞噬指数为30%，说明中性粒细胞具有较好的吞噬功能。
2. 本实验结果表明，中性粒细胞在人体非特异性免疫中发挥着重要作用。
七、实验讨论1. 本实验通过观察中性粒细胞对鸡红细胞的吞噬现象，评估了中性粒细胞的吞噬能力，为研究中性粒细胞在人体免疫中的作用提供了实验依据。
2. 吞噬指数是评估中性粒细胞吞噬功能的重要指标，但并非唯一指标。
在实际研究中，还需结合其他指标进行综合评价。
八、实验总结1. 本实验成功观察了中性粒细胞对鸡红细胞的吞噬现象，掌握了中性粒细胞吞噬功能实验的方法。
中性粒细胞吞噬实验报告
中性粒细胞吞噬实验报告篇一：小吞噬实验报告篇一：巨噬细胞吞噬实验&沉淀实验实验报告实验二一巨噬细胞吞噬功能实验【原理】巨噬细胞是单核吞噬细胞系统的主要细胞，局域活跃的吞噬功能。
吞噬细胞受抗原刺激后活化，可使吞噬功能明显增强。
在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡血红细胞，30min后处死小鼠，取出腹腔液，以冷亚甲蓝染色，显微镜下计数吞噬红细胞的百分数，及观察吞噬细胞内鸡红细胞的数目，以判断吞噬细胞的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异性免疫水平。
【方法】体内法：（1）实验前3小时，小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
（2）实验时，每只小鼠注射鸡红细胞1ml，轻柔腹部，使其在腹腔中分布均匀，利于吞噬。
（3）30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用载玻片轻擦腹腔，使腹腔液均匀涂于载玻片过，再滴一滴0.03%冷亚甲蓝溶液，盖上盖玻片。
（4）高倍镜下进行观察，计数。
【结果】【分析】在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液，可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，并且可看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。
二沉淀反应双向琼脂扩散实验【原理】将可溶性抗原与相应抗体分别加入琼脂板上的孔内，二者均可发生扩散，并且随扩散距离的增大浓度降低，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。
本实验是定性实验，常用于分析抗原抗体的纯度关系以及相互关系。
【方法】（1）制板：将熔化的1%琼脂加在载玻片上约5ml（2）打孔：待琼脂凝固后，将载玻片置于打孔样板上，用打孔器打孔（3）加样：在中央孔内加抗体，上下两孔加抗原1，左右加抗原二，每孔加10μl（4）结果观察：将琼脂板置于湿盒，37℃一天后观察结果。
【结果】在中央孔与添加抗原1的孔之间出现沉淀线，有抗原抗体反应，为阳性反应，说明抗原1与抗体相对应。
中央孔与添加抗原2的孔之间没有沉淀线，说明抗原2与抗体之间不相对应。
中性粒细胞吞噬实验报告
中性粒细胞吞噬实验报告篇一：小吞噬实验报告篇一：巨噬细胞吞噬实验&沉淀实验实验报告实验二一巨噬细胞吞噬功能实验【原理】巨噬细胞是单核吞噬细胞系统的主要细胞，局域活跃的吞噬功能。
吞噬细胞受抗原刺激后活化，可使吞噬功能明显增强。
在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡血红细胞，30min后处死小鼠，取出腹腔液，以冷亚甲蓝染色，显微镜下计数吞噬红细胞的百分数，及观察吞噬细胞内鸡红细胞的数目，以判断吞噬细胞的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异性免疫水平。
【方法】体内法：（1）实验前3小时，小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
（2）实验时，每只小鼠注射鸡红细胞1ml，轻柔腹部，使其在腹腔中分布均匀，利于吞噬。
（3）30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用载玻片轻擦腹腔，使腹腔液均匀涂于载玻片过，再滴一滴0.03%冷亚甲蓝溶液，盖上盖玻片。
（4）高倍镜下进行观察，计数。
【结果】【分析】在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液，可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，并且可看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。
二沉淀反应双向琼脂扩散实验【原理】将可溶性抗原与相应抗体分别加入琼脂板上的孔内，二者均可发生扩散，并且随扩散距离的增大浓度降低，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。
本实验是定性实验，常用于分析抗原抗体的纯度关系以及相互关系。
【方法】（1）制板：将熔化的1%琼脂加在载玻片上约5ml（2）打孔：待琼脂凝固后，将载玻片置于打孔样板上，用打孔器打孔（3）加样：在中央孔内加抗体，上下两孔加抗原1，左右加抗原二，每孔加10μl（4）结果观察：将琼脂板置于湿盒，37℃一天后观察结果。
【结果】在中央孔与添加抗原1的孔之间出现沉淀线，有抗原抗体反应，为阳性反应，说明抗原1与抗体相对应。
中央孔与添加抗原2的孔之间没有沉淀线，说明抗原2与抗体之间不相对应。
中性粒细胞吞噬检测
中性粒细胞吞噬功能缘有一圈白线， 并刻有100×、或oil字样。
二、油镜的使用
检查染色标本时，光度宜强。 显微镜亮度开关调至最亮，光圈完全打开， 集光器上升与载物台相平。
三、油镜的使用原理
光线通过玻片与油镜头之 间的空气时，因介质密度不 同发生折射，使物象显现不 清。
显微镜亮度开关调至最亮光圈完全打开二油镜的使用目录三油镜的使用原理光线通过玻片与油镜头之间的空气时因介质密度不同发生折射使物象显现不若在油镜与载玻片之间滴香柏油则物象明亮清晰
天然免疫功能测定
检测机体天然免疫功能的状态，是评价机体 免疫功能的重要组成部分。
天然免疫功能测定
常用方法：
中性粒细胞吞噬功能检测 巨噬细胞吞噬功能检测 溶菌酶的测定 补体参与的反应
中性粒细胞吞噬功能的检测
中性粒细胞吞噬细菌的现象称为小吞噬 现象，可以通过体外实验观察其吞噬细菌的 情况并测定吞噬功能。
中性粒细胞吞噬功能的检测
材料:
1.抗凝人血 2.葡萄球菌18小时肉汤培养物 3.其他 玻片、注射器、瑞氏染色液、
pH6.8PBS。
步骤:
取肝素抗凝血2滴（约0.2ml）
+
取葡萄球菌培养物1滴（0.1ml，12亿/ml）
Thanks
3.使推片与载玻片呈30～40°角，向另一端平 稳地推出。
瑞氏染色:
血涂片干燥后，涂面上滴瑞 氏染液7~8滴，3分钟。
+
等量pH6.8PBS混匀10分钟
勿使染液干涸
用水冲洗
平持玻片，在一端 加水，使染料“漂” 走。
待干，镜检。
油镜观察结果：
可见中性粒细胞吞噬葡萄球菌。 如染色正确，可见细胞核及被吞噬细菌染成 紫色，而中性粒细胞的细胞浆则为淡红色。
小吞噬实验_实验报告
1. 熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法。
2. 观察中性粒细胞在小吞噬实验中的吞噬现象。
3. 分析实验结果，了解中性粒细胞吞噬功能的变化。
二、实验原理中性粒细胞（又称小吞噬细胞）是血液中的主要吞噬细胞，具有吞噬和消化细菌、病毒、细胞碎片等异物的作用。
小吞噬实验通过观察中性粒细胞吞噬异物的过程，了解其吞噬功能的强弱。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜血液、生理盐水、2%中性红溶液、2%亚甲蓝溶液、载玻片、盖玻片、显微镜等。
2. 实验仪器：离心机、移液器、恒温箱、显微镜等。
四、实验步骤1. 取新鲜血液1ml，加入等量生理盐水，混匀后离心，取上清液作为实验用血液。
2. 将2%中性红溶液和2%亚甲蓝溶液按1:1的比例混合，作为吞噬剂。
3. 取2ml混合液加入实验用血液中，混匀后置于37℃恒温箱中培养30分钟。
4. 取1滴混合液滴于载玻片上，盖上盖玻片。
5. 在显微镜下观察中性粒细胞的吞噬现象，记录吞噬百分率和吞噬指数。
五、实验结果与分析1. 实验结果实验结果显示，中性粒细胞在小吞噬实验中能够有效吞噬中性红和亚甲蓝颗粒，吞噬百分率和吞噬指数分别为80%和1.5。
2. 结果分析实验结果表明，中性粒细胞具有较强的吞噬功能。
吞噬百分率和吞噬指数的升高，说明中性粒细胞在小吞噬实验中能够有效地吞噬吞噬剂，具有一定的免疫防御能力。
通过小吞噬实验，我们了解到中性粒细胞在小吞噬实验中具有较强的吞噬功能，能够有效吞噬中性红和亚甲蓝颗粒。
这一实验结果有助于我们更好地了解中性粒细胞在人体免疫系统中的作用，为临床诊断和治疗提供理论依据。
七、实验反思与体会1. 实验过程中，需要注意无菌操作，防止污染。
2. 实验结果受多种因素影响，如实验材料、实验条件等，需要严格控制实验条件，提高实验结果的可靠性。
3. 通过本次实验，加深了对中性粒细胞吞噬功能原理的理解，提高了实验操作技能。
八、实验总结小吞噬实验是一种常用的细胞生物学实验，通过观察中性粒细胞在小吞噬实验中的吞噬现象，了解其吞噬功能的强弱。
小吞噬实验报告
小吞噬实验报告篇一：中性粒细胞吞噬功能试验(小吞噬试验)中性粒细胞吞噬功能试验（小吞噬试验）实验目的1.熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法。
实验原理血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞，通过趋化、调理、吞入和杀菌等几个步骤，能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物，是机体非特异性免疫的重要组成部分。
实验材料实验方法片。
瑞氏染色法：取瑞氏染液数滴滴于上述血片上先染1分钟。
然后加等量蒸馏水，轻轻晃动混匀，继续染5分钟，水洗，用吸水纸吸干后镜检。
结果观察油镜检查：寻找中性粒细胞，如果染色结果正确，可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色，而粒细胞的细胞浆则为淡红色。
中性粒细胞吞噬试验计数：1.吞噬百分率：观察100个中性粒细胞，计算其中吞噬有细菌的中性粒细胞数，计算出吞噬细胞百分率。
2.吞噬指数：观察100个中性粒细胞，计算其中被吞噬的细菌总篇二：吞噬细胞吞噬功能检测实验-----吞噬细胞吞噬功能检测实验实验概要本文介绍了吞噬细胞吞噬功能检测（Assay of the Phagocytic Function of Phagocyte）实验的基本原理、操作步骤及注意事项等。
实验原理吞噬细胞具有对异物(细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等)吞噬和消化的功能，在机体非特异性免疫中发挥重要作用。
小鼠腹腔内注射硫代乙醇酸钠，可刺激巨噬细胞的聚集。
四日后小鼠腹腔内注入羊红细胞悬液，一小时后解剖收集腹腔吞嗜细胞，染色、镜检可观察对羊红细胞的吞嗜现象。
通过计算吞嗜百分比或吞噬指数可测定吞噬细胞的吞嗜功能。
主要试剂1. PBS 缓冲液2. 3％硫代乙醇酸钠3. 1％羊红细胞悬液4. 瑞氏染液5. 甲醇主要设备1. 解剖器材2. 注射器3. 尖吸管4. 橡皮吸头5. 小试管6. 载玻片实验材料ICR 小鼠实验步骤1. 实验准备：用无菌注射器吸取3％硫代乙醇酸钠3ml，注射于小鼠腹腔内。
2. 四日后，注射1％羊红细胞悬液1ml 于小鼠腹腔内。
小吞噬实验
擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。
油镜观察
首先寻找中性粒细胞——观察胞质中有无吞噬的细菌。如染
色正确，可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色，而中性粒细
胞胞浆染成淡红色。
计算吞噬百分率和吞噬指数
注意事项
(1)人类白细胞的吞噬活性在37℃时最好，温度过高过低均 会使其吞噬能力减低。 (2)个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能力亦不同。 (3)掌握好细菌与中性粒细胞的作用时间。 中性粒细胞对细菌的吞噬是一个非常迅速的过程，吞噬5min 时吞噬率达45%，10min时接近80%，20min 即达平台。 (4)取“细菌－全血”涂片时，要混匀后再取；制作血涂片要 求推出尾部，过厚或过薄，均不利观察。
(1)仔细消毒后，每个班取5ml静脉血于肝素抗凝管内（轻轻摇匀）。
合液”置于洁净载玻片上，用另一载玻片推片，制成血涂片。
(4)待血涂片自然凉干后，用瑞氏染液染色。
瑞氏染色
瑞氏染液数滴覆盖血涂片上
染色1min
再加等量的 用蒸馏水冲洗 自然干燥
PH6.8 PBS与染液混合，染色10~15min
（平持玻片，在一端加水，使染料“漂走” ）
吞噬痢疾杆菌
吞噬炭疽杆菌
小 吞 噬 细 胞 吞 噬 的 细 菌
中性粒细胞：
A.在抗化脓性细菌感染中起重要防御作用；
B.引起感染部位急性炎症反应； C.参与超敏反应（如III型超敏反应），引 起机体免疫病理损伤。
细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功能 ——小吞噬实验
将新鲜血液和细菌混合，经合适时间后涂片 染色，即能观察到被吞噬到中性粒细胞内但还未 被消化掉的细菌。
• 油镜使用的原理
1. 香柏油的折射率与玻璃接 近，提高了视野的照明度。 2 . 提高了显微镜的分辨率
吞噬细胞的功能检测的意义_1
吞噬细胞的功能检测的意义1.中性粒细胞吞噬功能的检测较早应用的方法为N试验，即中性粒细胞在杀菌过程中能量消耗剧增、耗氧量增加、糖代谢增强，致使糖代谢的中间产物6-磷酸葡萄糖增多，并在己糖途径中氧化脱氢，脱下的氢可被胞浆中的硝基蓝四氮唑（nitroblue tetrazolium，N）所接受，使原来淡黄色的N还原成蓝黑色的沉淀物，沉积在胞浆内。
试验时取抗凝血与等体积N混合，37℃温育一定时间后推片，经瑞氏染色后镜下计数百分率，正常人为10%左右，全身性细菌感染患者可见升高。
此外，根据细胞的吞噬作用，将抗凝血与等量5times;107/ml的菌液混合，经37℃温育一定时间后推片、染色，于油镜下观察细胞吞噬细菌的情况并计算吞噬率和吞噬指数医学|教育网搜集整理。
吞噬率＝【吞噬细菌的细胞数/中性粒细胞总数（200个）】times;100%吞噬指数＝（200个粒细菌吞菌总数/200个中性粒细胞）times;100%2.大吞噬细胞的检测①巨噬细胞吞噬功能的检测：巨噬细胞具有吞噬大颗粒异物的特性，因此常选用鸡红细胞、白色念珠菌、酵母菌等作为吞噬颗粒。
将通过斑蟊发泡法获得的细胞与鸡红细胞悬液于体外37℃温育一定时间，离心后取细胞涂片染色，镜检计算吞噬百分率和吞噬指数即可估计病人巨噬细胞的吞噬功能。
②巨噬细胞其他功能的测定：巨噬细胞具有多种胞内和胞外酶，也可分泌一些可溶性因子，这些物质在一定程度上可反映该细胞的功能状态。
胞内酶通过细胞化学染色法检测，例如最常用的酸性磷酸酶及特异性酯酶的测定医学|教育网搜集整理。
溶菌酶是巨噬细胞的一种胞外酶，其可在体外溶解细菌，若将血清与一定量细菌悬液混匀于比色杯内，经光电比色后记录每分钟光密度变化百分率，与标准曲线相比即可得出标本中血清溶菌酶的含量。
实验 中性粒细胞功能测定
实验三中性粒细胞功能测定Assay for Phagocytosis of Polymorphonuclear Leukocyte【目的要求】掌握中性粒细胞吞噬功能试验的原理；熟悉中性粒细胞吞噬功能试验的操作方法。
【原理】血液中的中性粒细胞通称小吞噬细胞，具有吞噬细菌和异物颗粒的能力，在体外将中性粒细胞与细菌或异物颗粒在一定条件下共同孵育后，显微镜观察可见中性粒细胞内有细菌或异物颗粒。
计数吞噬有细菌或异物颗粒的中性粒细胞占中性粒细胞总数的百分率和每个中性粒细胞平均吞噬的细菌或异物颗粒，可反映中性粒细胞的吞噬功能。
有助于对疑有吞噬细胞功能障碍的疾病作出诊断。
该试验常用白色葡萄球菌作为中性粒细胞的吞噬物。
【材料和试剂】1.待测样本新鲜抗凝静脉血。
（肝素溶液浓度为25U/ml，以生理下水配制）2.被吞噬物白色葡萄球菌。
3.试剂肉汤培养基，琼脂，无菌生理盐水，甲醇，瑞氏－吉姆萨染液。
4.器材血红蛋白吸管，采血针，试管，EP管，平皿，75%酒精棉球、载玻片，微量移液器、恒温箱，显微镜（香柏油，二甲苯）等。
【方法】1.白色葡萄球菌液的制备用无菌生理盐水洗下白色葡萄球菌接种于普通斜面18～24h 培养物，置100℃水浴15min杀死细菌，经菌液计算后用生理盐水调整至 6×108/ml，置 4℃备用。
2.待测样本制备于洁净的0.5mlEP管内加20μl肝素溶液，用75%酒精棉球对受试者耳垂或指腹消毒，干燥后用采血针针刺，轻轻揉挤出血，用血红蛋白吸管吸取40μl，与EP管内的肝素溶液轻轻吹吸混匀。
3.孵育待测样本中加入白色葡萄球菌液20μl轻轻吹吸混匀，放入恒温箱37℃孵育30min，期间每隔10min摇匀一次。
4.制片取一小滴孵育后的待测样本于洁净载玻片上，用另一载玻片推成薄血膜，晾干后甲醇固定4～5min。
5.瑞氏－吉姆萨染色滴加瑞氏－吉姆萨染液染色1～2min，水洗，晾干。
6.镜检置油镜下观察计数，计算吞噬率和吞噬指数。
中性粒细胞吞噬实验报告
本文介绍了吞噬细胞吞噬功能检测（assay of the phagocytic function of phagocyte）实验的大体原理、操作步骤及注意事项等。
实验原理
吞噬细胞具有对异物(细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等)吞噬和消化的功能，在机体非特异性免疫中发挥重要作用。
3）杀伤和降解：吞噬溶酶体形成以后，吞噬细胞通过溶酶体酶（溶菌酶、杀菌素、酸性水解酶、乳铁蛋白等）可破坏细菌菌膜或菌体代谢噬细胞代谢产物如氧代谢活性产物和酸性代谢产物也具有杀伤和降解细菌作用。
【方式】
（1）制板：将熔化的1%琼脂加在载玻片上约5ml
（2）打孔：待琼脂凝固后，将载玻片置于打孔样板上，用打孔器打孔
（3）加样：在中央孔内加抗体，上下两孔加抗原1，左右加抗原二，每孔加10μl
（4）结果观看：将琼脂板置于湿盒，37℃一天后观看结果。
【结果】
在中央孔与添加抗原1的孔之间显现沉淀线，有抗原抗体反映，为阳性反映，说明抗原1与抗体相对应。中央孔与添加抗原2的孔之间没有沉淀线，说明抗原2与抗体之间不相对应。
2. 用尖吸管吸取腹腔液时，尽可能躲开腹腔脏器，幸免损伤血管引发出血，阻碍实验结果。
篇二：中性粒细胞吞噬功能实验(小吞噬实验)
中性粒细胞吞噬功能实验（小吞噬实验）
实验目的
1.熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方式。
实验原理 血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞，通过趋化、调理、吞入和杀菌等几个步骤，能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物，是机体非特异性免疫的重要组成部份。 实验材料
中性粒细胞吞噬实验报告
篇一：小吞噬实验报告
篇一：巨噬细胞吞噬实验&沉淀实验实验报告
实验二
项目十九 吞噬细胞功能检测
项目十九 吞噬细胞功能检测一、中性粒细胞吞噬功能测定 (Neutrophil phagocytosis assay)(一)吞噬试验【实验原理】中性粒细胞具有吞噬功能，当与颗粒物质(如金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌等)混合孵育一定时间后，颗粒物质被吞噬。
根据吞噬率和吞噬指数可反映该细胞的吞噬功能。
【试剂和器材】1．试剂 20%FCS RPMI-1640培养液、pH6.4 0.015mol/L PBS 、Wright 染液、金黄色葡萄球菌培养物、抗凝剂(4g/L 柠檬酸钠溶液)。
2．器材 37℃温箱、显微镜、滴管、一次性采血针、微量细胞培养板、无菌干棉球、酒精棉球、碘酒棉球、接种环等。
【步骤和方法】1．热灭活葡萄球菌悬液配制 取金葡菌24h 琼脂斜面培养物，用无菌生理盐水洗下菌苔，用PBS 洗涤2次，100℃加热15min 灭活。
取热灭活金黄色葡萄球菌混悬于20% FCS RPMI-1640培养液中, 用比浊法调整浓度至6×107/ml 。
4℃保存，备用。
2．于微量细胞培养板孔内加1滴(约50μl)抗凝剂，无菌采人末梢血2滴(约100μl)与抗凝剂混匀。
3．向孔内加6×107/ml 金黄色葡萄球菌悬液2滴(约100μl)，混匀。
4．置37℃烛缸或5% CO 2孵箱内培养30min 。
5．取1滴培养液推片，自然干燥，Wright 染色，水洗，干燥，油镜镜检。
【结果判定】计数200个中性粒细胞，并分别记下吞噬细菌的细胞数和各个细胞吞入的细菌数。
计算吞噬率和吞噬指数：％菌的中性粒细胞数个中性粒细胞中吞噬细吞噬率＝100 200200 200200菌总数个中性粒细胞吞噬的细吞噬指数＝ 【注意事项】1．所用器材要洁净。
2．越接近片子末梢细胞数越多，计数时应取片子前、中、后三段计数，以提高准确性。
3．抗凝剂用量要适当，过高则抑制吞噬功能，过低使血液凝固。
【方法评价】此法易操作、不需特殊设备，省时，费用低廉。
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答：这和人外周血中各类成分密度有关。 血小板： 1.030-1.035，淋巴细胞： 1.0751.090，粒细胞 : 1.092，红细胞： 1.093， 因此将血液叠加在1.077土0.002的分层液上面， 经离心会单个核细胞会处于血浆和分离液中间， 从而达到分离目的。
经瑞-吉染色后易出现深蓝色背景；EDTA影响
白细胞的吞噬功能；构椽酸钠抗凝最合适。 2.细菌的浓度和孵育温度： 3.血涂片的质量：
七、应用与评价
本试验可用于检测有吞噬功能障碍的病症，如结合 NBT（硝基蓝四氮唑还原试验），在一定程度上可 反映机体的免疫功能状态，也可用于有免疫调节活 性药物的筛选。
五、结果判断
中性粒细胞核深染且分叶，胞浆淡红色，细菌呈紫色
-
பைடு நூலகம்吞噬百分率（%）=
吞噬细菌的中性粒细胞数
计数的中性粒细胞总数
×100％
吞噬指数=
计数的中性粒细胞吞噬细菌总数 计数的中性粒细胞总数
参考区间：吞噬率（91
+ - 5.8）%；吞噬指数大于1
六、注意事项
1.抗凝剂的选择：肝素抗凝时白细胞着色不佳，
此法操作简便，不需特殊设备，省时，费用低廉。
但光学显微镜分辨率低，有时难以计数吞入的细菌
颗粒。
八、思考题
绘制中性粒细胞吞噬细菌的镜下形态。
实验八
中性粒细胞吞噬功能检测
临床微生物及免疫学检验教研室
一、实验目的
1.
掌握中性粒细胞吞噬功能试验的原理。
2.
熟悉中性粒细胞吞噬功能试验的操作方法。
二、实验原理
• 中性粒细胞具有吞噬细菌和异物颗粒的能力。 • 在体外将中性粒细胞与细菌或异物颗粒共同孵育
后，即可被中性粒细胞吞噬、摄入，显微镜观察可
器材：枸橼酸钠抗凝管、试管、载玻片、
恒温箱、显微镜等。
四、实验步骤
1.
制备被吞噬物：金葡菌接种于肉汤培养
基中培养12h后，置4℃备用。
2. 准备被检测标本：枸橼酸钠抗凝血1ml。
实验步骤
3. 混合培养：在1ml抗凝血中加入金葡菌悬 液3-5滴，混匀，置37 ℃水浴箱中，孵育 30min，期间每10min摇匀1次。 4. 制备细胞推片，瑞-吉染色： 5. 油镜观察：计数200个中性粒细胞，记录 吞噬细菌的细胞数和每个中性粒细胞吞入 的细菌数。
见中性粒细胞内有细菌或异物颗粒。
二、实验原理
计算吞噬有细菌或异物颗粒的中性粒细胞数占
中性粒细胞总数的百分率和每个中性粒细胞平
均吞噬细菌或异物颗粒数，可反应中性粒细胞 的吞噬功能。
三、实验器材
1. 2. 3.
标本：人抗凝血
被吞噬物 ： 金黄色葡萄球菌
培养基：肉汤培养基
4.
5.
试剂：瑞－吉氏染液、无菌生理盐水