两种方法纯化兔抗绵羊肺炎支原体IgG的比较_武薇

中国动物检疫2010年第27卷第2期

免疫球蛋白尤其ＩｇＧ现已广泛应用于生命科学的许多领域，特别是在医学诊断和基础研究中起着越来越重要的作用。随着人们对免疫球蛋白性质认识的深入以及蛋白质检测技术的发展，免疫球蛋白纯化技术也在不断改进。ＩｇＧ主要来源于血清和动物的腹水，常常在不同程度上混杂非抗体蛋白和脂类物质，所以为消除干扰，必须对其进行纯化。在提纯ｌｇＧ过程中，不但要保证除去绝大多数杂蛋白而且不影响ＩｇＧ生物活性，这就需要一种好的硫酸铵法提纯兔抗绵羊肺炎支原体ＩｇＧ，并从纯度，回收率，蛋白质含量等方面比较这两种纯

化方法的提纯效果［１］，旨在为抗体纯

化提供一种简便实用的方法。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1主要试剂

琼脂粉（Ｓｏｌａｒｂｉｏ批号０６０８１５）；

正辛酸（成都科龙化工试剂厂批号

２００６１２０１）；硫酸铵（天津市化学试剂

三厂批号２００６０６２８）；丙烯酰胺（Ｓｏ－

ｌａｒｂｉｏ批号０７０６１１）；Ｎ，Ｎ－亚甲基双

丙烯酰胺（Ｓｏｌａｒｂｉｏ批号０７０２１６）；

ＥＤＴＡ（Ｓｏｌａｒｂｉｏ批号０７０９１１）。

1.1.2主要仪器

透析袋（Ｓｏｌａｒｂｉｏ）；ＴＤＬ－５０Ｂ台

式离心机（上海安亭科学仪器厂）；

３Ｋ３Ｏ型高速冷冻离心机离心机（Ｓｉｇ－

ｍａ）；ＳＷ－ＣＪ－１Ｆ超净工作台（苏州净

化设备有限公司）；ＡＲ１４０电子天平

（美国ＯＨＡＵＳ公司）；ＵＶ２０００型分光光

度计（尤尼柯（上海）仪器有限公司）；

６８１型磁力加热搅拌器（上海南汇电

讯器材厂）；ＤＹＹ－５型电泳仪（北京六

一仪器厂）；Ｋｏｄａｋ１Ｄ凝胶成像系统

（Ｋｏｄａｋ公司）。

1.1.3实验动物

９０日龄健康日本大耳白兔（清洁

级，北京兴隆实验动物饲养厂）。

1.2方法

1.2.1兔抗绵羊肺炎支原体ＩｇＧ血

清的制备

按照裴艳涛[2]的免疫程序对兔子

进行免疫，抗体效价合格后无菌采集

血液１０ｍＬ，置３７℃作用１ｈ，再经

两种方法纯化兔抗绵羊肺炎支原体IgG的比较

武薇，韩克光

（山西农业大学动物科技学院，山西太谷030801）

摘要：目的：比较两种方法纯化兔抗绵羊肺炎支原体I gG的效果。方法：采用饱和硫酸铵和辛酸-硫酸铵两种方法分离纯化兔抗绵羊肺炎支原体抗体，并用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SD S-PA G E)、分光光度计和琼脂扩散（A G P）试验对纯化产物进行相对分子质量、蛋白质含量及免疫活性进行鉴定。结果：纯化后抗体的蛋白含量基本相同；产物纯度和效价以辛酸-硫酸铵法较高。结论：辛酸硫酸铵法是一种简便、快速、高效的抗体纯化方法。

关键词：绵羊肺炎支原体；抗体纯化；辛酸硫酸铵法；饱和硫酸铵法

中图分类号：S852.62文献标识码：B文章编号：1005－944X（2010）02－0031－02

Comparison of two methods of purifying the rabbit-anti-sheep Pneumonia Mycoplasma IgG

Wu Wei,Han ke-guang

(College of Animal Science and Technology,Shanxi Agricultural University,Taigu,Shanxi030801) Abstract:Objective:To compare the effects of two methods for purifying the rabbit-anti-sheep Mycoplasma pneumonia IgG.Method:Separate and purify the rabbit-anti-sheep Mycoplasma pneumonia IgG using saturated ammonium sulfate(AS)method and caprylic acid-ammonium sulfate(CA-AS)method respectively,and then test the relative molecular weight,protein content and immune activity by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis(SDS-PAGE),spectrophotometer and agar gel precipitation(AGP)assay.Results:Protein content of purified antibody is almost the same with the two methods;the purity and titer with CA-AS method are both higher than that with AS method.Conclusion:The caprylic acid-ammonium sulfate method is a simple,rapid and efficient method for antibody purification

山西省科技攻关项目资助，项目编号：

2006031058-1

通讯作者：韩克光

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