三七素的止血活性及其神经毒作用实验研究_张玉萍

蛋白等前纤维蛋白溶酶抑制物的分泌，减少胶原的降解［7］，因此，Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原和TGF-β1的动态变化是判断抗肝纤维化程度的重要参数。对于肝纤维化的治疗，国内学者多以中药或中西药物联合应用为主，动物实验和临床应用均显示出较好趋势。

半枝莲为唇形科植物半枝莲（Scutellaria barbata D.Don）的全草。微苦，凉。有清热解毒、活血祛瘀、消肿止痛、利尿和抗癌等作用。用于咽喉肿痛、肿瘤、阑尾炎、肝炎、肝硬化腹水、肺脓疡、吐血、衄血、血淋、肾炎水肿等［8］。据《中华肿瘤治疗大成》载，半枝莲主治原发性肝癌等消化道肿瘤、肺癌及子宫颈癌等。本实验采用CCl4复合因素大鼠肝纤维化模型，其发生机制与人类肝炎肝硬化的形成有相似之处。实验结果显示，半枝莲水煎液能改善肝功能，降低CCl4肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及TGF-β1的水平，减轻肝内炎症细胞浸润及肝细胞坏死和胶原沉积。其抗肝纤维化的机制可能与保护肝细胞、提高肝脏抗氧化能力、调节细胞因子水平、抑制胶原纤维增生、促进胶原纤维降解等因素有关，其临床疗效还有待进一步深入研究。

［参考文献］

［1］刘强，李凯凤.肝纤维化动物模型的研究概述［J］.云南中医中药杂志，2005，26（2）：61-62.

［2］王宝恩，张定凤.现代肝脏病学［M］.北京：科学出版社，2003：181-203.

［3］张盈涛，苌新明.螺内脂对肝纤维化大鼠Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白表达的影响［J］.世界华人消化杂志，2001，9（10）：1120-1124.

［4］辛绍杰，邹正升.细胞外基质的代谢［J］.世界华人消化杂志，2002，10（1）：54-56.

［5］YZ，Park EJ，Sohn DH.Curcumin inhibit collagen synthesis and hepatic stellate cells activation in-vivo and invitro［J］.Pharm Pharmacol，2002，54（1）：119-126.

［6］Derynck R，Zhang YE.Smad-dependent and Smad-independent pathways in TGF-β1family signaling［J］.Nature，2003，425（9）：577-584.

［7］张治新.IL-10对实验性肝纤维化大鼠转化生长因子β1表达的影响［J］.中西医结合肝病杂志，2002，12（2）：92-94.

［8］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：化学工业出版社，2005：77-78.

三七一直作为治疗出血性疾患的止血活血化瘀药应用。日本学者小菅卓夫等［1］首先从三七根中分离并鉴定了三七的主要止血活性成分是一种特殊的氨基酸，即三七素。本实验旨在将三七中提取的三七素进行止血活性的药理研究，以证明三七素可通过缩短凝血时间、凝血酶原时间等发挥止血作用。另外，许多研究发现三七素具有神经毒作用，本实验研究其毒性的强弱及出现神经毒性的剂量，以期为下一步制备合适剂型的新药奠定基础。1仪器与试药

1.1仪器FA100L电子天平（上海天平仪器厂生产），MPG-3E型多能血液凝聚仪（上海斯隆医电设备有限公司生产），离心机（江苏国华仪器厂生产）。

1.2试药5’-ADP·Na2（上海博奥生物科技有限公司生产，0℃以下保存），凝血酶（上海医科大学华山医院计协生物制剂，批号040112），凝血活酶三七素对照品（上海医科大学华山医院计协生物制剂，批号040202），活化部分凝血活酶（上海医科大学华山医院计协生物制剂，批号040108），三七素对照品（天津市药物研究院提供），戊巴比妥钠（德国进口分装，批号020919），

2.5%止血敏溶液（天津金耀氨基酸有限公司产品，批号040116），胶原自制。

1.3动物SPF级昆明种小鼠，雌雄各半，体质量

三七素的止血活性及其神经毒作用实验研究

张玉萍，余琼

（天津中医药大学，天津300193）

［摘要］目的：研究三七素止血活性的药理作用及其神经毒作用，为新药开发提供依据。方法：小鼠腹腔注射三种不同浓度的三七素，30min后观察其生理活动的异常情况；采用玻片法测定三种不同浓度的三七素对小鼠凝血时间的影响；大鼠腹腔注射三种不同剂量的三七素，30min后腹主动脉取血，应用MPG-3E型多能血液凝聚仪，测定三七素对血小板的凝聚作用及凝血因子（TT、PT、APTT）的影响。结果：三七素能明显缩短凝血时间、凝血酶原时间和凝血酶时间，提高血小板数和黏附率；但剂量达到一定量时，也会出现严重的运动失调。结论：三七素具有止血作用，虽有神经毒作用，但在安全剂量下不会出现。

［关键词］三七素；止血作用；神经毒作用

［中图分类号］R285.5［文献标识码］A［文章编号］0257-358X（2010）01-0043-03

［收稿日期］2009-09-28

［基金项目］天津市高等学校科技发展基金项目（编号：01-21015）

［作者简介］张玉萍（1963-），女，天津人，理学硕士，教授，主要从

事分析化学及药物分析研究。

表1三七素对小鼠凝血时间的影响（x ±s ，n =10）

给药剂量（m /mg ·kg -1）

凝血时间（t /s ）

空白对照组0198.0±42.9低剂量组12.5143.7±55.5*中剂量组2578.5±38.7**高剂量组5047.0±21.6**止血敏组

250

60.0±31.6**

与空白对照组比较*P ＜0.05，**P ＜0.01

20±2g ；Wistar 大鼠，雌雄各半，体质量200±40g ；

均购于天津药物研究院。

2三七素的神经毒作用

2.1受试药物及配制三七素注射液的配制：取1g 三七粉末（含三七素0.75g/g ），分别配制成浓度为0.05、0.1、0.2g/ml 的注射液，供小鼠腹腔注射用。

生理盐水的配制：取NaCl 0.9g ，溶于100ml 蒸

馏水中，摇匀即得。

2.2方法及结果小鼠40只，雌雄各半，体质量20±2g ，分成空白对照、低剂量、中剂量、高剂量四

组，用苦味酸标记。空白对照组腹腔注射生理盐水

10ml/kg 。低剂量组注射0.05g/ml 三七注射液10ml/kg （0.5g/kg ）；中剂量组注射0.1g/ml 三七注射液10ml/kg （1g/kg ）；高剂量组注射10g/ml 三七注射液10ml/kg （2g/kg ）。注射20～30min 后观察变化。

结果表明，通过小鼠腹腔注射较高剂量的三七素注射液后，20～30min 即可产生神经毒作用。低剂量组（0.5g/kg ），腹腔注射30min 后可见小鼠眼微睁，时动时静，行动不便，约1h 后基本恢复正常；中剂量组（1g/kg ），腹腔注射30min 后可见小鼠眼闭，喜静，不能站立，颈部僵硬，在1～2h 后基本恢复正常；高剂量组（2g/kg ），腹腔注射30min 后可见小鼠眼闭，不能站立，颈部僵硬，腿伸长肌麻痹，2h 以后可见好转。空白对照组腹腔注射生理盐水后，活动正常。

3三七素的止血作用

3.1三七素对小鼠凝血时间的影响（玻片法）

3.1.1受试药物及配制三七素注射液的配制：取1g 三七粉末（含三七素0.75g/g ），分别配制成浓度为1.25、2.5、5.0g/ml 的注射液，供小鼠腹腔注射用。3.1.2方法与结果小鼠50只，雌雄各半，体质量20±2g ，分成空白对照、低剂量、中剂量、高剂量、止

血敏五组，用苦味酸标记。

空白对照组腹腔注射生理盐水10ml/kg 。低剂量组注射1.25mg/ml 三七注射液10ml/kg （12.5mg/kg ）；中剂量组注射2.5mg/ml 三七注射液

10ml/kg （25mg/kg ）；高剂量组注射5mg/ml 三七注射液10ml/kg （50mg/kg ）；止血敏组注射2.5%止血敏注射液10ml/kg 。30min 后，用眼科弯镊迅速摘去一侧眼球，即有血液流出。于载玻片上滴2～3滴血，血滴直径约为5mm ，滴血同时用秒表计时，每隔30s 用清洁针头自血滴边缘向里轻轻挑动1次，观察有无

血丝挑起，记录凝血时间（从采血开始到挑起血丝止，所历时间为凝血时间），见表1。

三七素注射液中，高剂量组与空白对照组比较，

均有非常显著性差异（P ＜0.01），低剂量组与空白对照组比较有显著性差异（P ＜0.05）。结果表明，小鼠腹腔注射三种不同剂量的三七素注射液能明显缩短凝血时间；三七注射液与阳性组比较，其止血效果更好。凝血时间随给药剂量的增加而缩短。

3.2血小板凝聚实验

3.2.1受试药物及配制三七素注射液的配制：取1g 三七粉末（含三七素0.75g/g ），分别配制成浓度为18、36、72mg/ml 浓度的溶液，供大鼠腹腔注射。二磷酸腺苷（ADP ）；取ADPXmg （3～6mg ），溶于1.17X 的蒸馏水中，摇匀即可。胶原：去大鼠腹部皮，除毛去膜，称重，再剪碎，以0.1mg 鼠皮：1ml 生理

盐水的比例置组织磨器中，研磨至乳白色液体，既得胶原（需新鲜配制）。抗凝剂的配制：柠檬酸钠3.28g ，溶于100ml 蒸馏水中，摇匀即可。

3.2.2方法与结果大鼠24只，雌雄各半，体质量20±2g ，分成空白对照、低剂量、中剂量、高剂量

四组，用苦味酸标记。空白对照组腹腔注射生理盐水10ml/kg 。低剂量组注射18mg/ml 三七注射液

1ml/kg （18mg/kg ）；中剂量组注射36mg/ml 三七注射液1ml/kg （36mg/kg ）；高剂量组注射72mg/ml 三七注射液1ml/kg （72mg/kg ）。30min 后腹腔注射3%的戊巴比妥那1ml/kg ，麻醉后由腹腔主动脉取血4.5ml ，血液以3.28%的柠檬酸钠溶液抗凝（血∶抗凝剂=9∶1）。置离心机内以500r/min 离心5min ，取上清液即为富血小板血浆（PRP ），剩余部分再以3000r/min 离心，取上清液即为贫血小板（PPP ）。PRP 中血小板计数为（2～2.8）×105/mm 3。

3.2.2.1血小板凝聚用MPG -3E 型多能双通道血

液凝聚仪测定血小板聚集率。按光电比浊法，将盛有200μl PRP 及磁性小棒的比浊管置于血液凝聚仪中，37℃保温1min 。经PPP 调节零点，在搅拌情况下，分别测定有ADP 5μl ，胶原10μl 诱导的聚集率。根据仪器自动打印所得的聚集曲线及最大聚集率分析药物对血小板聚集的影响，结果见表2。

胶原诱导的血小板聚集作用的数据表明，三七素注射液中，高剂量组可明显降低胶原诱导的血小