检定菌种观察记录
标准菌种管理规程
标准菌种管理规程目的：规范药品微生物学检定用菌的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。
职责： QC 主管负责菌种的申购、接受、保存、分发，微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
范围：本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁等。
内容：1术语标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。
传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。
工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0 代。
2.标准：2.1 检定菌的申购QC主管每年根据检定菌种的使用情况（包括临时检验需要），提出购买计划，交由质量管理部部长审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌种）；也可以直接向省（市）药检所购买传代用菌种，购买时，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制代数。
2.2 检定菌的接收菌种到达实验室后，由QC主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《检定菌接收记录》（附表 1）上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，贴好标签并储存于 2-8?C直到需要使用时。
储存期最长不超过 5 年。
2.3 检定菌的保存2.3.1 工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。
将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至2～8℃冰箱中保存。
此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。
保存时间根据菌种种类而不同，细菌： 1 个月；酵母菌： 2 个月；霉菌及芽胞： 3 个月。
菌种记录表格
操作人
数量
编号
有效期
保存
方法
数量
编号
有效期
保存
方法
分离与纯化过程
附表3：《检定菌种使用登记台账》
记录名称
检定菌种保存、领用登记台账
代码
页次
1
共1页
收到日期
名称及编号
数量
接收人
移交人
领用日期
用途
数量
发放人
领用人
附表4：《检定菌种观察记录》
记录名称
检定菌种观察记录
代码
页次
1
共1页
日期
冰箱温度（℃）
塞子是否松动
是否霉变
处理措施
观察人
附表5：《检定菌种鉴定记录》
记录名称
检定菌种鉴定记录
代码
页次
1
共1页
菌种名称及编号
鉴定原因
开始鉴定日期
鉴定人
复核人
年月日
鉴定项目
菌落形态
革兰染色
显微镜下形态
典型生化反应特征
鉴定结论
日期：年月日
附表6：《检定菌种使用登记台账》
记录名称
检定菌种使用登记台账
代码
页次
1
共1页
领用日期
名称及编号
数量
使用人
制备菌悬液浓度
(CFU/ml)
用于检验的
产品批号
记录名称
废弃菌种（物品）销毁处理记录
代码
页次
1
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日期
被处理菌种（物品）名称
销毁原因
处理方式
批准人
操作人
监督人
备注：废弃菌种要标明编号、数量（支）
菌种鉴定记录
油镜观察镜检结果：
2.生化特征鉴定试验
生化试验
鉴别现象
结果
精品文档
3.结果判断
根据中国药典Βιβλιοθήκη ？伯杰氏系统细菌学手册？的现行版进行结果判断。
确认结果 ：
鉴定结果：
检验人：
检验时间：
精品文档
标准储备菌种纯度特性确认记录
菌种来源：
检验日期：
菌种纯度、形态的确认
操作方法
所用培养基
培养条件
菌落形态特征
取接种环轻轻沾取
名称：
温度：
菌落菌液于琼脂平
皿上或斜面琼脂培
养基上
批号：
时间：
1.革兰染色
操作方法：取洁净载玻片，用接种环沾取1〜2滴纯水至于载玻片上，再沾取少 许培养物菌苔，于纯化水仔细研匀，使涂片上的菌悬液均匀并微显浑浊， 待干后 进行革兰染色，镜检。结果说明：菌体呈蓝紫色，即为革兰氏阳性菌（G+）;菌
检验用菌种管理制度
检验用菌种管理制度编制人/日期：审核人/日期：批准人/日期：修订页目录1. 目的 (4)2. 适用范围 (4)3. 职责 (4)4. 程序 (4)5. 相关文件 (11)6. 记录表样 (11)1.目的规范公司微生物实验使用的检验用菌种的管理。
2.适用范围适用于检验用菌种的管理，包括菌种的采购，保存，传代，使用及销毁。
3.职责检验员负责本制度的执行。
质管部负责人对检验员的实际执行情况进行监督。
4.程序4.1菌种的定义4.1.1标准菌种指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌；4.1.2 传代用菌种指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种；4.1.3工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面、半固体培养基培养后，作为日常工作使用的菌种。
工作用菌种的传代次数应严格控制，不得超过5代（从菌种保藏机构获得的标准菌种为第0代）；4.1.4本文中检定菌种包括传代用菌种和工作用菌种。
4.2菌种的采购和验收4.2.1微生物检测人员根据菌种的使用情况，提出年度购买计划，交质管部经理审批；4.2.2向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌种）或传代用菌种，购买时，需确定菌种的代数，以便控制传代代数；4.2.3菌种到达实验室后，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《检定菌种接收记录》，并将其暂贮存于2-8℃冰箱中，在一周内必须完成转种。
4.3菌种的保存4.3.1 斜面低温保存法操作方法：将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至2-8℃冰箱中；4.3.2半固体石蜡低温保存法操作方法：将菌种穿刺接种到硫乙醇酸盐流体培养基中，待菌生长充分以后，经培养箱培养后取出，用无菌液体石蜡滴加到半固体琼脂菌种管表层约0.5cm高度,转移至2-8℃冰箱中；4.3.3 甘油冷冻管保存法操作方法：4.3.3.1用无菌接种环轻轻刮取经冷冻复溶增菌后并接种至平板或琼脂斜面的菌苔，并通过接种环与试管壁之间的轻轻摩擦而使细菌充分扩散到预先装入试管中的0.9%无菌生理盐水；4.3.3.2调整菌液浓度，向已制备好的菌悬液中加入等体积的无菌含20%甘油的0.9%无菌生理盐水，即为10%甘油菌悬液；4.3.3.3轻轻振摇，使内容物充分混合，分装于无菌小试管，转移至-20℃冷冻条件下；4.3.4各菌种的保存方法、条件及期限，见下表1表1 传代用菌种保存方法、保存温度、保存期限4.4标准菌种的复苏和确认4.4.1标准菌种的复苏4.4.1.1在生物安全柜内用75%的酒精擦拭冻干菌种管（安瓿）的外表面并让其自然风干。
菌种记录表格
检定菌种使用登记台账
代码
页次
1
共1页
领用日期
名称及编号
数量
使用人
制备菌悬液浓度
(CFU/ml)
用于检验的
产品批号
记录名称废弃菌种（物品）销源自处理记录代码页次1
共1页
日期
被处理菌种（物品）名称
销毁原因
处理方式
批准人
操作人
监督人
备注：废弃菌种要标明编号、数量（支）
附表7：《废弃菌种（物品）销毁记录
传代用菌种
工作用菌种
操作人
数量
编号
有效期
保存
方法
数量
编号
有效期
保存
方法
分离与纯化过程
纯度
检查结果
操作人： 复核人：
附表3：《检定菌种使用登记台账》
记录名称
检定菌种保存、领用登记台账
代码
页次
1
共1页
收到日期
名称及编号
数量
接收人
移交人
领用日期
用途
数量
发放人
领用人
附表4：《检定菌种观察记录》
记录名称
检定菌种观察记录
附表1：《检定菌接收记录》
记录名称
检定菌种接收记录
代码
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1
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名称及编号
数量
代数
来源
接收日期
接收人
检查情况
保存条件
附表2：《检定菌种传代、分离、保存记录》
记录名称
检定菌种传代、分离记录
代 码
页次
1
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名称及编号
购进（领取）日期
年 月 日
来源
传代前菌种保存方法
疾控中心检定菌保存、传代、使用、销毁标准操作规程
检定菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程1．目的：为规范微生物学检定用菌的管理，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。
2．范围：本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁等。
3、定义：标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。
传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。
工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。
4．职责：4.1检验科负责提出菌(毒)种的购买申请，并按国家有关生物安全法规的要求做好使用管理和销毁工作。
4.2总务科负责实施采购，检验科负责保存、验收。
5.规程：5.1．检定菌的申购检验科每年根据检定菌种的使用情况（包括临时检验需要），提出购买计划，交由中心分管主任审批后，向中检所菌种保藏中心购买冻干菌种（标准菌种）；也可以直接向省（市）疾控部门申请提供传代用菌种，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制代数。
5.2．检定菌的接收菌种到达实验室后，由菌（毒）种保管人接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《检定菌种接收记录》（附表1）上，并将其暂贮存于4～8℃冰箱中，在一周内必须完成转种。
5.3．检定菌的保存5.3.1．工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。
将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至2～8℃冰箱中保存。
此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。
保存时间根据菌种种类而不同，细菌：1个月；酵母菌：2个月；霉菌及芽胞：3个月。
5.3.2．传代用菌种的保存采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡保存法。
标准菌株质量控制溯源程序
1.目的对微生物菌种进行严格管理和使用，为确保量值传递的溯源性、稳定性、统一性、准确性和确保检验数据的可靠性，具有重要作用。
2.范围适用于对检定用标准储备菌株和工作菌株的使用和控制，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁等3.职责采购人员负责菌种的申购、接收、分发。
微生物检验员负责菌种的确认、保存、传代、使用及销毁。
4.活动4.1 定义标准菌种是指由微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。
传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。
工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。
4.2 申购根据菌种使用情况提出申购需求向微生物菌种保藏中心购买，购买时需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制代数4.3接收菌种到达实验室后，由检验人员接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《菌种接收记录》（附表1）上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，贴好标签并储存于2-8˚C直到需要使用时。
储存期最长不超过5年。
4.4 保存4.4.1工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。
将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至2～8℃冰箱中保存。
此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。
保存时间根据菌种种类而不同，细菌：1个月；酵母菌：2个月；霉菌及芽胞：3个月。
4.4.2传代用菌种的保存采用甘油冷冻管保藏法、液体石蜡保存法和定期移植法。
4.4.2.1甘油冷冻管保藏法用无菌接种环轻轻刮取经冷冻复溶增菌后并接种至平板或琼脂斜面的菌苔，并通过接种环与试管壁之间的轻轻摩擦而使细菌充分扩散到预先装入试管中的无菌纯化水中，调整菌液浓度，使其等同于10号比浊管，向已制备好的菌悬液中加入等体积的无菌甘油（浓度20%），即为10%甘油菌悬液，轻轻振摇，使内容物充分混合，分装于无菌小试管，在-20℃冷冻条件下保存。
白色念珠菌检查原始记录
白色念珠菌检查原始记录
1.培养基及菌种
沙氏葡萄糠液体培养基配制批号：
念珠显色培养基配制批号：
沙氏葡萄糖琼脂培养基配制批号：
菌种编号：
2.增菌预培养
取1：供试液ml(相当于1g或1ml供试品),接种至ml（经方法适用性试验确认）的沙氏葡萄糖液体培养基中，混匀，30-35℃培养3-5天。
3.选择和分离培养
取上述培养物划线接种于沙氏葡萄糖琼脂平板上，30-35℃培养24-48小时
4.鉴定：
若有疑似菌落则进一步鉴定：
用接种针挑去疑似菌落于念珠显色培养基平板上，培养24-48小时（必要时延长至72小时）
结果判定：□检出□未检出
检查人/日期：复核人/日期：。
微生物限度验证观察记录
沉香化滞丸微生物限度方法学验证及报告1、供试品检品名称：沉香化滞丸规格：6g/袋×10袋/盒产品批号：1304230 1304240 1304210生产单位：河南爱民药业集团股份有限公司检验依据：《中国药典》2010年版一部2、微生物限度验证所用菌种大肠埃希菌〔CMCC(B)44102〕枯草芽孢杆菌〔CMCC(B)63501〕白色念球菌〔CMCC(F) 98001〕金黄色葡萄球菌〔CMCC(B)26003〕3、方法：《中国药典》2010年版一部微生物限度检查中薄膜过滤法验证（附录XⅢC）3.1菌液制备(1) 取经37℃培养18~24h，金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌的营养肉汤培养物1ml+9ml0.9%盐水，10倍稀释至10-5~10-7，细菌数约为50~100cfu/ml，做活菌计数备用。
(2) 经25 ℃培养18~24小时的白色念珠菌霉菌液体培养物1ml +9ml0.9%盐水10倍稀释至10-5~10-7，菌数约为50~100cfu/ml，做活菌计数备用。
3.2结果见表1、表2表1 细菌计数结果菌种大肠埃希菌（10-7）金黄色葡萄球菌（10-6）枯草芽孢杆菌（10-5）计数（CFU）72 76 85 91 76 78均值（CFU）74 88 77表2 霉菌计数结果菌种白色念球菌（10-5）计数（CFU）69 71均值（CFU）704、供试液的制备4.1取供试品10g，置研钵中研细，慢慢加入45℃PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，作为1：10的供试液，分别人工污染上述四种代表试验菌株。
5、回收率测定：5.1试验组取1ml 1：10供试液，分别加入含菌数为50～100cfu的试验菌1ml，分别注入平皿中，立即倾入营养琼脂培养基（细菌）与玫瑰红钠培养基（霉菌），细菌：33℃培养72小时，霉菌、酵母菌：26℃培养120小时。
5.2菌液组取含菌数为50～100cfu的试验菌各1ml，分别注入平皿中，立即倾入营养琼脂培养基（细菌）与玫瑰红钠培养基（霉菌），细菌：33℃培养72小时，霉菌、酵母菌：26℃培养120小时。
检定菌管理规程
检定菌管理规程1. 目的规范检定菌种的管理与使用程序，确保菌种的溯源性和稳定性，保证微生物限度检查的结果准确可靠，保证检验人员的安全。
2.范围检定菌的申购、接收、保存、传代、使用与销毁等。
3.术语或定义3.1标准菌株：来自认可的国内或国外菌种保藏机构，其复苏、复壮或培养物的制备应按供应商提供的说明或按已验证的方法进行。
3.2 标准储备菌株：从国内或国外菌种保藏机构获得的标准菌株经过复活并在适宜的培养基中生长后，即为标准储备菌株。
标准储备菌株应进行纯度和特性确认。
3.3 工作菌株：是指用标准储备菌种接种至普通琼脂斜面培养基上，作为以后工作使用的菌株。
4. 职责4.1 质量控制部主任负责菌种的申购。
4.2 微生物检验人员负责菌种的验收、保管、传代、使用及销毁等。
4.3 质量管理负责人负责菌种申购计划的批准。
5. 程序5.1 检定菌种的购买质量控制部主任根据菌种使用情况（包括临时检验需要），提出申购计划，由质量管理负责人批准后，申购记录（附件1）交给物供部负责人购买。
5.2 检定菌种的接收菌种到达实验室后，由微生物检验人员验收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在检定菌种接收记录（附件2）上，内容包括：菌种名称、数量、编号、代数、来源、接收日期、接收人等。
5.3 检定菌种的保管5.3.1 菌种保管应有专人负责，保存于加锁的冰箱中，将购进的试管斜面菌种放入（2～8℃）冷藏保存，有效期为3个月。
确保菌种安全，因工作变动时，必须做好交接工作。
5.3.2 工作用菌种采用斜面低温保存法。
5.3.3 检定菌种的定期检查在菌种的保存期间，应每周检查保存菌种冰箱的温度、菌种管的塞子是否松动或生霉，并及时填写《检定菌种观察记录》（附件3），如有异常应及时灭活处理后销毁。
5.3.4 所保管的菌种，不能随意转让其他单位和个人，需要时应有单位证明和批准手续方可供应。
5.4 检定菌种的传代5.4.1 1代是指将活的培养物接种到微生物生长的新鲜培养物中培养，任何形式的转种均被认为是传代1次，从菌种保藏机构获得的标准菌种为第0代。
培养基适用性检查记录
培养基适用性检查记录质量部培养基名称：沙氏葡萄糖琼脂培养基来源：批号：对照培养基：来源：批号：检验依据：检验人：检验日期：一、实验菌种：白色念珠菌[CMCC(F)98 001]第代黑曲霉[CMCC(F)98 003]第代二、菌液制备将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养5～7天；取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。
将黑曲霉接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养5～7天。
加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。
三、培养基适用性检查取5个无菌平皿，分别接种白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌适宜浓度），另一皿接种1ml PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液作为空白对照，倾注对照沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀。
凝固后倒置培养，20-25℃培养5天计数。
被检培养基同法操作。
四、结果判断五、结论本品按《中国药典》2015年版“非无菌产品微生物检查：微生物计数法”及培养基适用性检验操作规程检验，结果：□符合规定□不符合规定。
培养基名称：胰酪大豆胨琼脂培养基来源：批号：对照培养基：来源：批号：检验依据：检验人：检验日期：一、实验菌种：金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]第代铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104]第代枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]第代白色念珠菌[CMCC(F)98 001]第代黑曲霉[CMCC(F)98 003]第代二、菌液制备将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24 小时；取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。
将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养5～7天；取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。
无菌检验、观察记录
1.无菌检验操作记录
样品名称
批 号
柜 次
规格
检验数量
检验方法
薄膜过滤法
检验依据
报告日期
仪器型号及编号
无菌检验隔离系统 型号：编号：
一次性使用集菌过滤培养器 型号：批号：
细菌培养（30~35℃）培养箱 编号：
霉菌培养（20~25℃）培养箱 编号：
无菌检验
隔离系统
环境监测
结果
室温：℃ 相对湿度：%
2.无菌检验观察记录
培养
时间（天）
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
供试品
FTM
TSB
阴性对照
FTM
TSB
阳性对照
FTM
／
TSB
／
观 察 者
无菌检验观察情况：“－”表示阴性；“＋”表示阳性
检验结果：
┄┄┄┄┄┄以下空白┄┄┄┄┄┄
检 验 者：复 核 者：
检验日期：复核日期：
监测项目
结果（cfu）
平均数
标准
监测结果
沉降菌
＜1 cfu/皿
□是□否符合规定
表面微生物
＜1 cfu/碟
□是□否符合规定
手套
＜1 cfu/碟
□是□否符合规定
培养基
配制批号
硫乙醇酸盐流体培养基胰酪大豆胨液体培养基
0.1%蛋白胨-水溶液
培养基适用性检查
硫乙醇酸盐流体培养基适用性检查
胰酪大豆胨液体培养基适用性检查
供试品的无菌检查：取支（瓶），□直接过滤□加入适量0.1%蛋白胨-水溶液的无菌容器中，混匀，立即过滤。1个集菌器加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基(以下简称FTM）另1个集菌器加入100ml胰酪大豆胨液体培养基(以下简称TSB)。将上述接种供试品后的培养基容器分别按各培养基规定的温度培养14天。