细菌鉴定流程概述PPT(44张)
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细菌—细菌的鉴定(水产微生物课件)
）细菌鉴定的主要方法 1. 经典分类方法 （1）形态学特征检测：涂片、染色和显微镜技术检测细菌的基本形态、大小、染色性、基本构造、 特殊构造等。 （2）生理生化特性和生态条件测定：应用人工培养技术、生理生化反应测定细菌的培养特性、呼吸 类型、对盐度、pH值得耐受性以及对碳源、氮源等的利用和代谢等。
任务五 细菌的鉴定
一、细菌的鉴定 （三）细菌鉴定的主要方法 2. 分子分类法 （1）氨基酸顺序和蛋白质分析 （2）DNA碱基序列 （3）核酸杂交
任务五 细菌的鉴定
一、细菌的鉴定 （三）细菌鉴定的主要方法 3. 血清学试验和噬菌体分型 （1）血清学试验：生物体外进行不同细菌之间抗原与抗体反应试验，主要适用于抗原结构同源程度 高的细菌种内以及个别属内血清型的分类鉴定。 （2）噬菌体分型：噬菌体对宿主的感染和裂解作用常具有高度的特异性。
任务五 细菌的鉴定
二、细菌的分类与命名 （二）细菌的命名 采用生物学双命名法，用属名（在前，第一个字母大写）和种名（在后，小写）进行命名。如结核 分枝杆菌的学名是Mycobacterium tuberculosis
作业
1. 名词解释：荚膜，芽孢，菌落，纯培养，培养基。 2. 细菌的基本结构和特殊结构有哪些？ 3. 按照培养基的物理状态，培养基分为哪几种类型？ 4. 试述细菌各个生长时期的特点。 5. 培养基制备的原则。
任务五 细菌的鉴定
一、细菌的鉴定 （一）鉴定的依据
1. 形态特征 2. 生理生化特征 3. 血清学反应 4. 遗传学特征
任务五 细菌的鉴定
一、细菌的鉴定 （二）细菌的鉴定步骤
1. 获得该菌种的纯培养物 2. 查找权威的鉴定手册 目前国际上公认和普遍采用的细菌分类系统是《伯杰氏细菌学鉴定手册》1923年出版，至1994 年经过几次修订，已经出版了第九版。详细列出了细菌生态学、增值、分离培养和保藏等方法。
任务五 细菌的鉴定
一、细菌的鉴定 （三）细菌鉴定的主要方法 2. 分子分类法 （1）氨基酸顺序和蛋白质分析 （2）DNA碱基序列 （3）核酸杂交
任务五 细菌的鉴定
一、细菌的鉴定 （三）细菌鉴定的主要方法 3. 血清学试验和噬菌体分型 （1）血清学试验：生物体外进行不同细菌之间抗原与抗体反应试验，主要适用于抗原结构同源程度 高的细菌种内以及个别属内血清型的分类鉴定。 （2）噬菌体分型：噬菌体对宿主的感染和裂解作用常具有高度的特异性。
任务五 细菌的鉴定
二、细菌的分类与命名 （二）细菌的命名 采用生物学双命名法，用属名（在前，第一个字母大写）和种名（在后，小写）进行命名。如结核 分枝杆菌的学名是Mycobacterium tuberculosis
作业
1. 名词解释：荚膜，芽孢，菌落，纯培养，培养基。 2. 细菌的基本结构和特殊结构有哪些？ 3. 按照培养基的物理状态，培养基分为哪几种类型？ 4. 试述细菌各个生长时期的特点。 5. 培养基制备的原则。
任务五 细菌的鉴定
一、细菌的鉴定 （一）鉴定的依据
1. 形态特征 2. 生理生化特征 3. 血清学反应 4. 遗传学特征
任务五 细菌的鉴定
一、细菌的鉴定 （二）细菌的鉴定步骤
1. 获得该菌种的纯培养物 2. 查找权威的鉴定手册 目前国际上公认和普遍采用的细菌分类系统是《伯杰氏细菌学鉴定手册》1923年出版，至1994 年经过几次修订，已经出版了第九版。详细列出了细菌生态学、增值、分离培养和保藏等方法。
细菌鉴定的一般步骤幻灯片PPT
细胞壁脂肪酸（与模式种同步试验）
测定G+C含量
DNA-DNA杂交同源性测定
API实验进行生理生化的特性的获得 “Biolog”鉴定系统进行糖代谢的特性研究
生理生化特性总结
Lm et al. IJSEM (2006), 56, 2409–2414
总结数据，文章撰写
选择模式种进行实验
菌种 15561 Angulomicrobium amanitifo
培养基编号： 1 830
菌种 5895 Angulomicrobium tetraedrale
培养基编号： 628
菌种 18406 Starkeya novella
培养基编号： 830
菌株送国际菌种保藏中心保藏
细菌鉴定的一般步骤幻灯片PPT
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一、确保菌株的纯度
在鉴定菌株之前首先确保菌株的纯度。 假若菌株没有纯化好，将会做大量的无用功
二、PCR扩增16S rRNA片段
菌落直接PCR 菌体新鲜、加菌量少、阴性菌较阳性菌容易、 退火温度要高点
DNA扩 PCR 高盐法或CTAB法提取细菌总DNA DNA量不要加太多
三、16S rRNA片段测序
PCR产物直接测序 条带特异，注意产物的浓度要足够，不要纯化
PCR产物克隆测序 挑单菌落，菌液测序或质粒测序。
四、系统发育树的构建
首先将所获得的16S rRNA片段序列在NCBI数据 库中进行序列的比对（序列提交GenBank 获得 登录号）
从相关数据库下载相关模式种16S rRNA片段序 列
采用MEGA 软件邻近ห้องสมุดไป่ตู้做树
细菌鉴定流程
细菌鉴定流程细菌鉴定细菌形态学鉴定16S rDNA 鉴定生理生化鉴定一、细菌形态学鉴定1.从-80˚Ϲ冰箱中取出菌株放4˚Ϲ复苏，轻柔混匀后用接种环接一环菌液在培养基平板上划线活化，根据菌株来源选择适宜的培养基。
2.放入培养箱倒置培养，实验室一般采用28˚Ϲ培养，特殊菌株依据该菌最适条件（时间、温度）培养24-48h。
3. 纯化：从活化培养基平板上挑取单菌落继续划板培养。
4. 观察记录菌落形态特征：大小（mm）、形状、干湿、透明度、颜色、边缘整齐还是，，，，，，，形状干湿透明度颜色边缘细菌大小（mm）注意事项：①接种划线应在酒精灯旁边操作②培养时应倒置培养，防止污染二、革兰氏染色1.涂片固定将纯化后的菌株进行革兰氏染色，滴一滴生理盐水于载玻片上，无菌条件下用接种环挑取少量菌落均匀涂布水滴中，使其自然干燥，菌面向上，经火焰固定。
注意事项：菌液涂片时不可过于浓厚，干燥、固定。
固定时通过火焰1~2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2.染色一般包括初染、没染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：（1）加上结晶紫后，染色1分钟，水洗。
（2）加上碘液染色1分钟，水洗。
（3）加上95%酒精，摇动玻片，根据涂片厚度，脱色约20~60秒，水洗，吸去水分。
（4）加上蕃红后，染色1分钟，水洗。
（5）吸干或在空气中晾干后，油镜镜检。
3.结果观察：革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。
以均匀分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，都常呈现假阳性。
注意事项：①标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。
若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不再出现紫色为止。
②玻片通过火焰温度不能太高。
③碘液变透明，则不能使用。
④水洗时动作要轻，沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗，以免把菌体冲掉。
三、16S rDNA 鉴定（16S rDNA只能鉴定到属，需进行生理生化、药敏实验等鉴定到种）1. 细菌复苏、活化、纯化同细菌形态学鉴定3. 挑取单菌落至少2-3个接到含有1ml灭菌纯水的1.5ml离心管中混匀。
细菌检验技术ppt课件
+ 原理：某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐 作为唯一的碳源，也能利用其中的铵盐 作为唯 一氮源，细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生碳 酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱，是 指示剂呈碱性反应。
+ 培养基：枸盐酸盐培养基（淡绿色）
+ 试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色， pH7.6以上呈蓝色）
3、玻璃器材的清洗
★新购置的玻璃器材：1％～2％盐酸浸泡－→清水 清洗
★用过的无污染器皿：洗涤剂洗刷－→清水清洗 细菌污染的器材：消毒灭菌后再洗刷
★盛培养基试管和平皿：高压灭菌－→趁热倒出－ →洗涤剂洗刷－→清水冲洗
★吸管：3％来苏浸泡－→清水冲洗 ★玻片和盖玻片：3％来苏和清洁液浸泡－→清水
冲洗；染色后的玻片，应肥皂水煮沸10min再洗 涤
★含油脂的器皿：单独灭菌
（四）培养箱
1、电热恒温培养箱 2、二氧化碳培养箱 3、厌氧培养箱
（五）培养基 培养基：是指人工配制的适合细菌生长繁殖 的综合营养基质。 1、培养基的成分及作用
+ 营养物质：肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血 液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐
+水 + 凝固剂：琼脂、明胶 + 抑制剂 + 指示剂
调配 溶化 矫正pH 过滤澄清 分装 灭菌
培养基灭菌
★ 基础培养基：121℃高压蒸汽灭菌15分钟 ★ 含糖培养基：113 ℃灭菌15分钟 ★ 鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天3次 ★ 不耐高温的液体成分：滤过除菌
检定
保存
二、细菌接种与培养技术 （一）无菌技术 1、细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台
+ 糖发酵试验 + 葡萄糖氧化／发酵试验（O/F试验） + 甲基红试验 + V-P试验 + 七叶苷水解试验 + Β－半乳糖苷渗透酶试验
菌种鉴定流程课件
菌种鉴定是微生物学研究的重要基础工作 ，对于揭示微生物的生态和进化关系、探 索生命科学的基本问题具有重要意义。
02
菌种采集
采集方法
01
02
03
采集方式
根据菌种类型和特性，选 择合适的采集方式，如表 面涂抹、深层挖掘等。
采集工具
根据采集需求，准备适当 的采集工具，如铲子、刀 具、试管等。
采集环境
选择适当的采集环境，如 土壤、水源、动物粪便等 ，并确保环境无污染。
ABCD
稀释分离法
将菌液进行稀释，然后涂布在培养基上，使菌落 分散生长，达到分离纯化的目的。
温度、pH等物理因素分离法
通过调节培养温度、培养基pH等物理因素，使 特定微生物生长繁殖，达到分离纯化的目的。
分离纯化的步骤
采集样品
选择适当的样品，并确保样品无 菌操作。
选择培养基
根据分离的微生物种类选择适宜 的培养基。
采集注意事项
采集安全
在采集过程中，注意个人 安全和卫生，避免交叉感 染。
采集代表性
确保采集的菌种具有代表 性，能够反映该地区的菌 种分布和特点。
采集量控制
根据需求适量采集，避免 过度采集和破坏生态环境 。
采集后的保存
保存容器
选择适当的保存容器，如密封袋 、试管等，并确保容器无菌。
保存环境
选择适当的保存环境，如干燥、阴 凉、避光等，以保持菌种的活性。
和鉴别。
结果分析的注意事项
1 2
准确性
确保鉴定结果的准确性，避免误差和偏差。
完整性
确保鉴定结果的完整性，涵盖菌种的所有相关信 息。
3
可重复性
确保鉴定结果的可重复性，以便于验证和复现。
临床细菌培养鉴定流程及报告 PPT
⑵报告方式 由于检验结果报告的时效性,下呼吸道标本 细菌学检验结果分为初步和最终结果报告。 ▲ 初步报告:当标本涂片革兰氏染色细胞学 和细菌学镜检发现有临床诊断意义的结果时,应 及时发出描述性的初步报告。 ▲最终报告:镜检结果与分离培养结果相一致 时,最终报告规范的细菌名称和药敏试验结果。 若分离培养结果与镜检结果不一致时,仅报告分 离鉴定结果,不做药敏试验。若分离培养未检出 优势菌,可报“未培养出病原菌”。
⒋结果分析及报告
⑴结果分析 痰及下呼吸道分泌物标本易受到 定植在上呼吸道的正常菌群污染。当从送检标 本中分离出多种细菌时,确定那一种分离细菌是 引起下呼吸道感染的病原菌,这对临床诊断与治 疗至关重要。当在同一培养基上分离出1种以 上的病原菌(复合菌)时,要结合患者的临床症状, 涂片染色镜检情况及患者近期细菌分离培养结 果等,综合判断所分离的多种细菌中那一种细菌 估计为致病菌,通常多为优势菌。当分离的优势 菌与涂片染色镜检结果一致时,要做药敏试验。 若分离培养结果与涂片染色镜检结果不一致时, 可不进行药敏试验,以免误导,仅报告分离鉴定 结果,由临床大夫定夺是否重试。
(二)痰(即下呼吸道感染标本)
临床通常将正常人喉以上部位称为上呼吸道, 上呼吸道定植有大量的正常菌群,而气管以下包 括气管、支气管和肺泡称下呼吸道,通常无菌。 下呼吸道感染包括急性气管～支气管炎、慢性 支气管炎急性发作,支气管扩张继发感染及肺实 质感染(肺炎、肺脓肿)等。病原体有细菌、病 毒、衣原体、支原体、真菌、立克次氏体和原 虫等。
(2)报告方式
初步报告:在分离出细菌后,进行革兰氏染 色,作出初步报告。
最终报告:有意义的阳性结果报告,应报告 菌落计数、细菌种名及药敏结果。
无意义的阳性结果报告,报告菌落数、 革兰氏染色形态特征,并注明是纯培养或 是混合菌生长。
细菌的培养及鉴定 ppt课件
细菌的培养及鉴定
抗酸染色步骤
1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
细菌的培养及鉴定
抗酸染色步骤
2、染色包括初染、脱色、复染三步。
初染
脱色
复染
冲洗
冲洗
石炭酸复红维持 3-5’ 3%盐酸酒精30 ’’ ~1’
冲洗
干燥 油镜观察
细菌的培养及鉴定
美蓝复染1 ’
抗酸染色结果
抗酸菌呈红色， 常堆积成团， 排列无序， 偶呈分枝状生长。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。
细菌培养及鉴定
细菌的培养及鉴定
标本采集原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.标本容器须无菌，但不得有消毒剂 5.采样后立即送检 6.送检标本应注明细菌来的培源养及和鉴定检验目的
咳痰方法
病人先漱口，清洁口腔，去除表面的菌群 病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液 无痰可用3％～5％NaCl 5ml雾吸约5min导痰 以清晨第二口痰为佳 标本采集后放置时间不超过2小时
细菌的培养及鉴定
清洁中段尿液
尽量取早晨第一次尿液 嘱患者留取标本的前一天晚上少饮水 女性病人 ➢收集标本前用肥皂水冲洗外阴，再以灭菌清水
冲洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿 男性病人 ➢翻转包皮，清洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流,采集中段尿
采集标本后立即送检！
细菌的培养及鉴定
常用的培养基种类和用途
细菌的培养及鉴定
革兰染色步骤
涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
细菌的培养及鉴定
固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固； 可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。
抗酸染色步骤
1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
细菌的培养及鉴定
抗酸染色步骤
2、染色包括初染、脱色、复染三步。
初染
脱色
复染
冲洗
冲洗
石炭酸复红维持 3-5’ 3%盐酸酒精30 ’’ ~1’
冲洗
干燥 油镜观察
细菌的培养及鉴定
美蓝复染1 ’
抗酸染色结果
抗酸菌呈红色， 常堆积成团， 排列无序， 偶呈分枝状生长。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。
细菌培养及鉴定
细菌的培养及鉴定
标本采集原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.标本容器须无菌，但不得有消毒剂 5.采样后立即送检 6.送检标本应注明细菌来的培源养及和鉴定检验目的
咳痰方法
病人先漱口，清洁口腔，去除表面的菌群 病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液 无痰可用3％～5％NaCl 5ml雾吸约5min导痰 以清晨第二口痰为佳 标本采集后放置时间不超过2小时
细菌的培养及鉴定
清洁中段尿液
尽量取早晨第一次尿液 嘱患者留取标本的前一天晚上少饮水 女性病人 ➢收集标本前用肥皂水冲洗外阴，再以灭菌清水
冲洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿 男性病人 ➢翻转包皮，清洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流,采集中段尿
采集标本后立即送检！
细菌的培养及鉴定
常用的培养基种类和用途
细菌的培养及鉴定
革兰染色步骤
涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
细菌的培养及鉴定
固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固； 可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。
《细菌鉴定》PPT课件
特殊气味等
形态学观察
* 营养需求（血琼脂、巧克力、营养琼脂生长 情况）
* 胆盐耐受（麦康凯生长情况） * 万古霉素耐受（含万古霉素巧克力生长情况） * 液体培养基生长现象（菌膜、上半部生长、
均匀浑浊、下半部生长、沉淀） * 半固体动力现象（清晰、毛刷样、倒伞状）
生化反应
* OF试验 * 各种糖发酵试验、糖氧化试验 * 糖衍生物发酵（α/β-甲基葡萄糖、β-葡萄糖胺、
不同种群的细菌根据培养的难易以及实际操作 时的难度而采用不同的鉴定手段
* 目前技术能培养的细菌采用传统手段
* 难培养细菌采用分子生物学手段（如麻风分支杆菌、 肺炎支原体、肺炎衣原体等）
* 而传统手段难以进一步鉴定的细菌则采用抗原抗体 血清学分类（如军团菌、沙门菌、志贺菌等）、细 胞壁脂肪酸结构和组成分类（如棒状杆菌相关属）、 挥发性代谢产物（如厌氧菌挥发性脂肪酸）指纹分 析
血清学试验（不常用）
* 铜绿假单胞菌生物分型血清 * 脑膜炎奈瑟菌分型血清 * 隐球菌可溶血抗原血清 * 脑膜炎5种可溶性抗原复合乳胶
* b型流感嗜血杆菌乳胶 * 肺炎链球菌乳胶（含83个血清型的多价血清） * A群脑膜炎奈瑟菌乳胶 * B群脑膜炎奈瑟菌/大肠埃希菌K1乳胶 * C群脑膜炎奈瑟菌乳胶
然耐药反证法鉴定
形态学试验
G+菌 BA生长、Choc不生长、MecK不生长，——Gram染色： 分G+co（革兰阳性球菌） ,G+ b（革兰阳性杆菌）
G+co—依靠溶血特征，菌落形态、菌落颜色、菌体形 态区分:
▲葡萄球菌：淡黄色/白色，中等大小，较凸，规则 圆形，β/γ溶血，较湿润，除金黄色葡萄球菌外， 一般不具有临床意义；
血清学试验（不常用）
形态学观察
* 营养需求（血琼脂、巧克力、营养琼脂生长 情况）
* 胆盐耐受（麦康凯生长情况） * 万古霉素耐受（含万古霉素巧克力生长情况） * 液体培养基生长现象（菌膜、上半部生长、
均匀浑浊、下半部生长、沉淀） * 半固体动力现象（清晰、毛刷样、倒伞状）
生化反应
* OF试验 * 各种糖发酵试验、糖氧化试验 * 糖衍生物发酵（α/β-甲基葡萄糖、β-葡萄糖胺、
不同种群的细菌根据培养的难易以及实际操作 时的难度而采用不同的鉴定手段
* 目前技术能培养的细菌采用传统手段
* 难培养细菌采用分子生物学手段（如麻风分支杆菌、 肺炎支原体、肺炎衣原体等）
* 而传统手段难以进一步鉴定的细菌则采用抗原抗体 血清学分类（如军团菌、沙门菌、志贺菌等）、细 胞壁脂肪酸结构和组成分类（如棒状杆菌相关属）、 挥发性代谢产物（如厌氧菌挥发性脂肪酸）指纹分 析
血清学试验（不常用）
* 铜绿假单胞菌生物分型血清 * 脑膜炎奈瑟菌分型血清 * 隐球菌可溶血抗原血清 * 脑膜炎5种可溶性抗原复合乳胶
* b型流感嗜血杆菌乳胶 * 肺炎链球菌乳胶（含83个血清型的多价血清） * A群脑膜炎奈瑟菌乳胶 * B群脑膜炎奈瑟菌/大肠埃希菌K1乳胶 * C群脑膜炎奈瑟菌乳胶
然耐药反证法鉴定
形态学试验
G+菌 BA生长、Choc不生长、MecK不生长，——Gram染色： 分G+co（革兰阳性球菌） ,G+ b（革兰阳性杆菌）
G+co—依靠溶血特征，菌落形态、菌落颜色、菌体形 态区分:
▲葡萄球菌：淡黄色/白色，中等大小，较凸，规则 圆形，β/γ溶血，较湿润，除金黄色葡萄球菌外， 一般不具有临床意义；
血清学试验（不常用）
细菌检验技术PPT课件
维持实验室温度在20-25℃，湿度在 50%-70%，以保证实验结果的稳定性。
设备配置
根据实验需求，配置相应的仪器和设 备，如显微镜、培养箱、灭菌器等， 确保其性能良好、准确可靠。
实验操作规范与注意事项
实验前准备
实验前确保实验材料。
实验操作流程
细菌免疫学检测技术是利用抗原-抗体反应的特异性进行细菌检测和鉴定的方法 。该方法具有较高的灵敏度和特异性，常用于临床诊断和流行病学调查等领域。 常见的免疫学检测技术包括凝集试验、沉淀试验和酶联免疫吸附试验等。
细菌核酸检测技术
总结词
通过检测细菌的核酸序列，进行快速、准确的细菌鉴定。
详细描述
随着分子生物学技术的发展，细菌核酸检测技术已成为一种快速、准确的细菌鉴定方法。该方法通过 检测细菌的核酸序列，利用基因测序或实时荧光定量PCR等技术，可以快速地鉴定出细菌的种类和耐 药基因等。常见的核酸检测技术包括16S rRNA测序和多重PCR等。
酶联免疫吸附试验
发展新型酶标记抗体和抗原，提高检测特异性和 灵敏度。
个性化诊疗与精准医疗的结合
耐药性检测
通过对细菌耐药基因的检测，为临床提供精准的抗生素选择依据， 降低耐药性的产生。
病原体分型
通过对病原体基因型别的检测，为临床提供个性化的诊疗方案，提 高治疗效果。
个体化免疫治疗
利用个体化免疫治疗策略，针对不同病原体感染制定个性化的免疫 治疗方案，提高治疗效果和病患生存率。
01
辅助以对症治疗，如止咳、化痰 、平喘等。
02
加强患者护理，提高免疫力，预 防并发症。
案例二：食品安全检测中的细菌检验技术应用
食品安全检测的重要 性
提高食品行业的信誉， 促进国际贸易。
细菌鉴定流程概述(PPT44页)
关键试验
• 触酶 • OF（氧化发酵）试验 • 血浆凝固酶：玻片法，试管法
链球菌科细菌
• α溶血：肺炎链球菌 • β溶血：化脓性链球菌
B群链球菌 C、G群链球菌 • γ溶血：肠球菌
肺炎链球菌
• 菌落形态 • Optochin试验：注意耐药菌株 • 胆汁溶菌试验
β溶血链球菌鉴定
β溶血链球菌
• 化脓性链球菌 • B群链球菌
• 4h快速试管凝固酶试验阳性 注意：1.试管法应该至少每小时判读一次直至4h.试管法的最后读取应在4h 后. 2.中间葡萄球菌和猪葡萄球菌可在12-24h 试管凝固酶试验为阳性. 3.凝固酶试验仅推荐用无菌乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝兔血浆.
* 商用乳胶凝胶试剂 腐生葡萄球菌在某些情况下可表现为阳性,但其玻片凝固酶及试管凝固酶试验 通常为阴性. 因此,商用凝集试验阳性结果不能用来鉴别尿中的非溶血葡萄球菌
• 血平板上常表现为边缘光滑的窄的"溶血环" • 革兰阳性球菌成对或成链,触酶阴性; • 快速马尿酸盐水解试验阳性或快速CAMP因子
斑点试验阳性均可准确鉴定无乳链球菌 • 商用凝集试验鉴定该菌准确性接近100%
肠球菌
• 触酶试验阴性 • 七叶苷试验阳性 • 6.5%NaCl肉汤生长（高盐+）
肠球菌鉴定-CLSI
血平板上菌落大于1mm,BAP上非溶血且触 酶阴性 革兰染色形态为阳性球菌或球杆菌成对或成 链 PYR（吡咯烷酮酶）试验阳性可鉴定为肠 球菌属. 增加亮氨酸氨肽酶(LAP)试验可更好地鉴定 α溶血肠球菌
革兰阳性细菌鉴定卡GP-VITEK-2
注意事项：
• 细菌的要求：新鲜；纯培养菌落 鉴定一定要有全局的观念
脑膜炎奈瑟氏菌在血平板上形成有光泽、浅灰色菌落，为革兰阴性双球菌，氧化酶和γ-谷氨酰氨肽酶阳性 局限性,极少数气单胞菌属分离菌株可与铜绿假单胞菌形态相似(缺乏典型气味),可通过斑点吲哚试验区分(气单胞菌属阳性,铜绿假单胞 菌阴性). 氧化酶阳性,菌落有典型的气味(康科德葡萄或玉米饼)和形态特征(金属或珍珠般光泽,粗糙,产色,有时极其黏稠). 革兰阳性球菌,成双或成链排列,触酶阴性,PYR（吡咯烷酮酶）试验阳性可确认为化脓链球菌
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革兰阴性杆菌
肠杆菌科细菌主要生化反应
• 发酵葡萄糖（产酸或产酸产气） ： KIA（克
氏双糖铁试验）或三糖铁试验
• H2O2 （触酶）+ • OX （氧化酶）-
肠杆菌科细菌
• 大肠埃希菌：动力“+”；但某些菌株动力“—” • 克雷伯菌属：动力-，脲酶＋ • 肠杆菌属，泛菌属，哈夫尼菌属： • 枸橼酸杆菌属：生化反应不定 • 沙雷菌属： • 变形杆菌属，普罗威登菌属，摩根菌属：
细菌鉴定流程
葡萄球菌
金黄色葡萄球菌
• 血平板上生长的由白色至黄色,奶酪样,不透 明,革兰阳性球菌.
• 触酶阳性 • 凝固酶试验阳性 • 或商用乳胶凝胶试剂阳性
金葡鉴定注意事项
• 玻片凝固酶 注意：施葡萄球菌和路邓葡萄球菌也可为阳性，但凝集反应呈片状或块状。 可通过PYR（吡咯烷酮酶）试验与金黄色葡萄球菌鉴别。 施葡萄球菌和路邓葡萄球菌为PYR（吡咯烷酮酶）强阳性,立即产生红紫色,而 金黄色葡萄球菌为阴性或弱阳性,
+
+/－
－
+
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葡萄糖发酵试 验（O/F）
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动力
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铜绿假单胞菌-CLSI
• 革兰阴性杆菌.氧化酶阳性,菌落有典型的气味(康科德葡萄 或玉米饼)和形态特征(金属或珍珠般光泽,粗糙,产色,有时 极其黏稠).
• 黏液型菌株革兰染色时在革兰阴性杆菌的周围常常可见橙 色区域.
• 4h快速试管凝固酶试验阳性 注意：1.试管法应该至少每小时判读一次直至4h.试管法的最后读取应在4h 后. 2.中间葡萄球菌和猪葡萄球菌可在12-24h 试管凝固酶试验为阳性. 3.凝固酶试验仅推荐用无菌乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝兔血浆.
* 商用乳胶凝胶试剂 腐生葡萄球菌在某些情况下可表现为阳性,但其玻片凝固酶及试管凝固酶试验 通常为阴性. 因此,商用凝集试验阳性结果不能用来鉴别尿中的非溶血葡萄球菌
矛盾实验
革兰阳性细菌鉴定卡GP -VITEK-2
• 局限性:VITEK-2 GP卡不能直接用于临床标本或含有
混合菌的样本，对过程的改变或修改都可能影响结果。 新的说明或罕见菌株不包含在GP数据库中，
当所选菌株可获得时可加入数据库，但对没有记录的种类 进行检测时可能导致不被识别或错误鉴定
• 质控：每月以及更换批号时用相应的质控菌株（依说 明书，可选铅黄肠球菌ATCC700327或金葡ATCC29213 等）在仪器的质控通道下进行操作。
肠球菌鉴定-CLSI
血平板上菌落大于1mm,BAP上非溶血且触 酶阴性 革兰染色形态为阳性球菌或球杆菌成对或成 链 PYR（吡咯烷酮酶）试验阳性可鉴定为肠 球菌属. 增加亮氨酸氨肽酶(LAP)试验可更好地鉴定 α溶血肠球菌
革兰阳性细菌鉴定卡GP-VITEK-2
注意事项： • 细菌的要求：新鲜；纯培养菌落 • 无菌盐水：0.45%-0.50%NaCL,pH 4.5-7.0 • 浊度：0.50-0.63 • 悬浮接种物接种于卡前，不能超过30min • 可能性百分率：可接受>85% • 附加信息：补充实验
变形杆菌-CLSI
• 菌落一定是有迁徙生长现象. • 奇异变形杆菌吲哚-,普通变形杆菌+ • 彭氏变形杆菌与奇异变形杆菌的鉴别
菌种
麦芽糖 鸟氨酸脱羧酶
彭氏变形杆菌 阳性 阴性
奇异变形杆菌 阴性 阳性
非发酵菌
试验
菌属
假单胞菌属 无色杆菌属
黄杆菌属
不动杆菌属 产碱杆菌属
丛毛菌属
摩拉菌属
氧化酶试 验
+
试验 氧化酶 6.5% Nacl生长 赖氨酸 150mg O/129纸片 10mg O/129纸片
弧菌属 ＋ d d s d
气单胞菌 ＋ － V R R
大肠埃希菌-CLSI
• 革兰阴性杆菌,不迁徙生长 • 斑点吲哚试验阳性,氧化酶阴性, 有以上特征并且血平板上
形成溶血菌落,即可报告为大肠埃希菌. • 或吲哚阳性,血平板菌落不溶血且麦康凯或伊红美兰(EMB)
平板上的菌落乳糖分解阳性,快速吡咯烷酮芳基酰胺酶 (PYR) 试验阴性可确认为大肠埃希菌。 • 或BAP菌落不溶血,乳糖分解阴性,4-甲基伞型酮β-D-葡糖 苷酸酶(MUG) 试验阳性也可确证为大肠埃希菌
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ杆菌科细菌
• 沙门菌属： KIA（克氏双糖铁）-/+，M
（动力）+，H2S（硫化氢）+（但甲型副 伤寒H2S-）
• 志贺菌属：KIA（克氏双糖铁）-/+，M
（动力）-
• 耶尔森菌属：鼠疫耶尔森菌—烈性传染病鼠
疫的病原菌；小肠结肠炎耶尔森菌— 37℃,动力- ； 但25℃，动力＋ ；假结核耶尔森菌—人兽共患性 疾病
关键试验
• 触酶 • OF（氧化发酵）试验 • 血浆凝固酶：玻片法，试管法
链球菌科细菌
• α溶血：肺炎链球菌 • β溶血：化脓性链球菌
B群链球菌 C、G群链球菌 • γ溶血：肠球菌
肺炎链球菌
• 菌落形态 • Optochin试验：注意耐药菌株 • 胆汁溶菌试验
β溶血链球菌鉴定
菌种
血清分群 杆菌肽
化脓性链球 A 菌
敏感
CAMP —
无乳链球菌 B
耐药
+
C群、G群 C、G
耐药
—
SMZ R
R S
β溶血链球菌
• 化脓性链球菌 • B群链球菌
杆菌肽试验
CAMP试验
化脓链球菌-CLSI
• BAP上孵育24H 后出现ß溶血,菌落直径 >=0.5mm,干燥,凸起或有边缘清晰的溶血 环.
• 革兰阳性球菌,成双或成链排列,触酶阴 性,PYR（吡咯烷酮酶）试验阳性可确认 为化脓链球菌
• 用血清凝集方法鉴定的准确性接近100%
无乳链球菌-CLSI
• 血平板上常表现为边缘光滑的窄的"溶血环" • 革兰阳性球菌成对或成链,触酶阴性; • 快速马尿酸盐水解试验阳性或快速CAMP因子
斑点试验阳性均可准确鉴定无乳链球菌 • 商用凝集试验鉴定该菌准确性接近100%
肠球菌
• 触酶试验阴性 • 七叶苷试验阳性 • 6.5%NaCl肉汤生长（高盐+）
• 局限性,极少数气单胞菌属分离菌株可与铜绿假单胞菌形 态相似(缺乏典型气味),可通过斑点吲哚试验区分(气单胞 菌属阳性,铜绿假单胞菌阴性).
• 分离于囊性纤维化患者的菌株应仔细鉴别,因为形态不典 型的铜绿假单胞菌很常见,而且某些洋葱伯克霍尔德分离 菌株与铜绿假单胞菌形态相似.
弧菌属与气单胞菌，邻单胞菌鉴别