细菌鉴定流程概述PPT(44张)
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矛盾实验
革兰阳性细菌鉴定卡GP -VITEK-2
• 局限性:VITEK-2 GP卡不能直接用于临床标本或含有
混合菌的样本，对过程的改变或修改都可能影响结果。 新的说明或罕见菌株不包含在GP数据库中，
当所选菌株可获得时可加入数据库，但对没有记录的种类 进行检测时可能导致不被识别或错误鉴定
• 质控：每月以及更换批号时用相应的质控菌株（依说 明书，可选铅黄肠球菌ATCC700327或金葡ATCC29213 等）在仪器的质控通道下进行操作。
试验 氧化酶 6.5% Nacl生长 赖氨酸 150mg O/129纸片 10mg O/129纸片
弧菌属 ＋ d d s d
气单胞菌 ＋ － V R R
• 用血清凝集方法鉴定的准确性接近100%
无乳链球菌-CLSI
• 血平板上常表现为边缘光滑的窄的"溶血环" • 革兰阳性球菌成对或成链,触酶阴性; • 快速马尿酸盐水解试验阳性或快速CAMP因子
斑点试验阳性均可准确鉴定无乳链球菌 • 商用凝集试验鉴定该菌准确性接近100%
肠球菌
• 触酶试验阴性 • 七叶苷试验阳性 • 6.5%NaCl肉汤生长（高盐+）
变形杆菌-CLSI
• 菌落一定是有迁徙生长现象. • 奇异变形杆菌吲哚-,普通变形杆菌+ • 彭氏变形杆菌与奇异变形杆菌的鉴别
菌种
麦芽糖 鸟氨酸脱羧酶
彭氏变形杆菌 阳性 阴性
奇异变形杆菌 阴性 阳性
非发酵菌
试验
菌属
假单胞菌属 无色杆菌属
黄杆菌属
不动杆菌属 产碱杆菌属
丛毛菌属
摩拉菌属
氧化酶试 验
+
• 4h快速试管凝固酶试验阳性 注意：1.试管法应该至少每小时判读一次直至4h.试管法的最后读取应在4h 后. 2.中间葡萄球菌和猪葡萄球菌可在12-24h 试管凝固酶试验为阳性. 3.凝固酶试验仅推荐用无菌乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝兔血浆.
* 商用乳胶凝胶试剂 腐生葡萄球菌在某些情况下可表现为阳性,但其玻片凝固酶及试管凝固酶试验 通常为阴性. 因此,商用凝集试验阳性结果不能用来鉴别尿中的非溶血葡萄球菌
肠杆菌科细菌
• 沙门菌属： KIA（克氏双糖铁）-/+，M
（动力）+，H2S（硫化氢）+（但甲型副 伤寒H2S-）
• 志贺菌属：KIA（克氏双糖铁）-/+，M
（动力）-
• 耶尔森菌属：鼠疫耶尔森菌—烈性传染病鼠
疫的病原菌；小肠结肠炎耶尔森菌— 37℃,动力- ； 但25℃，动力＋ ；假结核耶尔森菌—人兽共患性 疾病
化脓性链球 A 菌
敏感
CAMP —
无乳链球菌 B
耐药
+
C群、G群 C、G
耐药
—
SMZ R
R S
β溶血链球菌
• 化脓性链球菌 • B群链球菌
杆菌肽试验
CAMP试验
化脓链球菌-CLSI
• BAP上孵育24H 后出现ß溶血,菌落直径 >=0.5mm,干燥,凸起或有边缘清晰的溶血 环.
• 革兰阳性球菌,成双或成链排列,触酶阴 性,PYR（吡咯烷酮酶）试验阳性可确认 为化脓链球菌
• 局限性,极少数气单胞菌属分离菌株可与铜绿假单胞菌形 态相似(缺乏典型气味),可通过斑点吲哚试验区分(气单胞 菌属阳性,铜绿假单胞菌阴性).
• 分离于囊性纤维化患者的菌株应仔细鉴别,因为形态不典 型的铜绿假单胞菌很常见,而且某些洋葱伯克霍尔德分离 菌株与铜绿假单胞菌形态相似.
弧菌属与气单胞菌，邻单胞菌鉴别
肠球菌鉴定-CLSI
血平板上菌落大于1mm,BAP上非溶血且触 酶阴性 革兰染色形态为阳性球菌或球杆菌成对或成 链 PYR（吡咯烷酮酶）试验阳性可鉴定为肠 球菌属. 增加亮氨酸氨肽酶(LAP)试验可更好地鉴定 α溶血肠球菌
革兰阳性细菌鉴定卡GP-VITEK-2
注意事项： • 细菌的要求：新鲜；纯培养菌落 • 无菌盐水：0.45%-0.50%NaCL,pH 4.5-7.0 • 浊度：0.50-0.63 • 悬浮接种物接种于卡前，不能超过30min • 可能性百分率：可接受>85% • 附加信息：补充实验
大肠埃希菌-CLSI
• 革兰阴性杆菌,不迁徙生长 • 斑点吲哚试验阳性,氧化酶阴性, 有以上特征并且血平板上
形成溶血菌落,即可报告为大肠埃希菌. • 或吲哚阳性,血平板菌落不溶血且麦康凯或伊红美兰(EMB)
平板上的菌落乳糖分解阳性,快速吡咯烷酮芳基酰胺酶 (PYR) 试验阴性可确认为大肠埃希菌。 • 或BAP菌落不溶血,乳糖分解阴性,4-甲基伞型酮β-D-葡糖 苷酸酶(MUG) 试验阳性也可确证为大肠埃希菌
+
+/－
－
+
+
+/－
葡萄糖发酵试 验（O/F）
O/－
O
O
O/－
－
－
－
动力
+/－
+/－
+/－
－
+
+
－
铜绿假单胞菌-CLSI
• 革兰阴性杆菌.氧化酶阳性,菌落有典型的气味(康科德葡萄 或玉米饼)和形态特征(金属或珍珠般光泽,粗糙,产色,有时 极其黏稠).
• 黏液型菌株革兰染色时在革兰阴性杆菌的周围常常可见橙 色区域.
革兰阴性杆菌
肠杆菌科细菌主要生化反应
• 发酵葡萄糖（产酸或产酸产气） ： KIA（克
氏双糖铁试验）或三糖铁试验
•Fra Baidu bibliotekH2O2 （触酶）+ • OX （氧化酶）-
肠杆菌科细菌
• 大肠埃希菌：动力“+”；但某些菌株动力“—” • 克雷伯菌属：动力-，脲酶＋ • 肠杆菌属，泛菌属，哈夫尼菌属： • 枸橼酸杆菌属：生化反应不定 • 沙雷菌属： • 变形杆菌属，普罗威登菌属，摩根菌属：
细菌鉴定流程
葡萄球菌
金黄色葡萄球菌
• 血平板上生长的由白色至黄色,奶酪样,不透 明,革兰阳性球菌.
• 触酶阳性 • 凝固酶试验阳性 • 或商用乳胶凝胶试剂阳性
金葡鉴定注意事项
• 玻片凝固酶 注意：施葡萄球菌和路邓葡萄球菌也可为阳性，但凝集反应呈片状或块状。 可通过PYR（吡咯烷酮酶）试验与金黄色葡萄球菌鉴别。 施葡萄球菌和路邓葡萄球菌为PYR（吡咯烷酮酶）强阳性,立即产生红紫色,而 金黄色葡萄球菌为阴性或弱阳性,
关键试验
• 触酶 • OF（氧化发酵）试验 • 血浆凝固酶：玻片法，试管法
链球菌科细菌
• α溶血：肺炎链球菌 • β溶血：化脓性链球菌
B群链球菌 C、G群链球菌 • γ溶血：肠球菌
肺炎链球菌
• 菌落形态 • Optochin试验：注意耐药菌株 • 胆汁溶菌试验
β溶血链球菌鉴定
菌种
血清分群 杆菌肽
革兰阳性细菌鉴定卡GP -VITEK-2
• 局限性:VITEK-2 GP卡不能直接用于临床标本或含有
混合菌的样本，对过程的改变或修改都可能影响结果。 新的说明或罕见菌株不包含在GP数据库中，
当所选菌株可获得时可加入数据库，但对没有记录的种类 进行检测时可能导致不被识别或错误鉴定
• 质控：每月以及更换批号时用相应的质控菌株（依说 明书，可选铅黄肠球菌ATCC700327或金葡ATCC29213 等）在仪器的质控通道下进行操作。
试验 氧化酶 6.5% Nacl生长 赖氨酸 150mg O/129纸片 10mg O/129纸片
弧菌属 ＋ d d s d
气单胞菌 ＋ － V R R
• 用血清凝集方法鉴定的准确性接近100%
无乳链球菌-CLSI
• 血平板上常表现为边缘光滑的窄的"溶血环" • 革兰阳性球菌成对或成链,触酶阴性; • 快速马尿酸盐水解试验阳性或快速CAMP因子
斑点试验阳性均可准确鉴定无乳链球菌 • 商用凝集试验鉴定该菌准确性接近100%
肠球菌
• 触酶试验阴性 • 七叶苷试验阳性 • 6.5%NaCl肉汤生长（高盐+）
变形杆菌-CLSI
• 菌落一定是有迁徙生长现象. • 奇异变形杆菌吲哚-,普通变形杆菌+ • 彭氏变形杆菌与奇异变形杆菌的鉴别
菌种
麦芽糖 鸟氨酸脱羧酶
彭氏变形杆菌 阳性 阴性
奇异变形杆菌 阴性 阳性
非发酵菌
试验
菌属
假单胞菌属 无色杆菌属
黄杆菌属
不动杆菌属 产碱杆菌属
丛毛菌属
摩拉菌属
氧化酶试 验
+
• 4h快速试管凝固酶试验阳性 注意：1.试管法应该至少每小时判读一次直至4h.试管法的最后读取应在4h 后. 2.中间葡萄球菌和猪葡萄球菌可在12-24h 试管凝固酶试验为阳性. 3.凝固酶试验仅推荐用无菌乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝兔血浆.
* 商用乳胶凝胶试剂 腐生葡萄球菌在某些情况下可表现为阳性,但其玻片凝固酶及试管凝固酶试验 通常为阴性. 因此,商用凝集试验阳性结果不能用来鉴别尿中的非溶血葡萄球菌
肠杆菌科细菌
• 沙门菌属： KIA（克氏双糖铁）-/+，M
（动力）+，H2S（硫化氢）+（但甲型副 伤寒H2S-）
• 志贺菌属：KIA（克氏双糖铁）-/+，M
（动力）-
• 耶尔森菌属：鼠疫耶尔森菌—烈性传染病鼠
疫的病原菌；小肠结肠炎耶尔森菌— 37℃,动力- ； 但25℃，动力＋ ；假结核耶尔森菌—人兽共患性 疾病
化脓性链球 A 菌
敏感
CAMP —
无乳链球菌 B
耐药
+
C群、G群 C、G
耐药
—
SMZ R
R S
β溶血链球菌
• 化脓性链球菌 • B群链球菌
杆菌肽试验
CAMP试验
化脓链球菌-CLSI
• BAP上孵育24H 后出现ß溶血,菌落直径 >=0.5mm,干燥,凸起或有边缘清晰的溶血 环.
• 革兰阳性球菌,成双或成链排列,触酶阴 性,PYR（吡咯烷酮酶）试验阳性可确认 为化脓链球菌
• 局限性,极少数气单胞菌属分离菌株可与铜绿假单胞菌形 态相似(缺乏典型气味),可通过斑点吲哚试验区分(气单胞 菌属阳性,铜绿假单胞菌阴性).
• 分离于囊性纤维化患者的菌株应仔细鉴别,因为形态不典 型的铜绿假单胞菌很常见,而且某些洋葱伯克霍尔德分离 菌株与铜绿假单胞菌形态相似.
弧菌属与气单胞菌，邻单胞菌鉴别
肠球菌鉴定-CLSI
血平板上菌落大于1mm,BAP上非溶血且触 酶阴性 革兰染色形态为阳性球菌或球杆菌成对或成 链 PYR（吡咯烷酮酶）试验阳性可鉴定为肠 球菌属. 增加亮氨酸氨肽酶(LAP)试验可更好地鉴定 α溶血肠球菌
革兰阳性细菌鉴定卡GP-VITEK-2
注意事项： • 细菌的要求：新鲜；纯培养菌落 • 无菌盐水：0.45%-0.50%NaCL,pH 4.5-7.0 • 浊度：0.50-0.63 • 悬浮接种物接种于卡前，不能超过30min • 可能性百分率：可接受>85% • 附加信息：补充实验
大肠埃希菌-CLSI
• 革兰阴性杆菌,不迁徙生长 • 斑点吲哚试验阳性,氧化酶阴性, 有以上特征并且血平板上
形成溶血菌落,即可报告为大肠埃希菌. • 或吲哚阳性,血平板菌落不溶血且麦康凯或伊红美兰(EMB)
平板上的菌落乳糖分解阳性,快速吡咯烷酮芳基酰胺酶 (PYR) 试验阴性可确认为大肠埃希菌。 • 或BAP菌落不溶血,乳糖分解阴性,4-甲基伞型酮β-D-葡糖 苷酸酶(MUG) 试验阳性也可确证为大肠埃希菌
+
+/－
－
+
+
+/－
葡萄糖发酵试 验（O/F）
O/－
O
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动力
+/－
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铜绿假单胞菌-CLSI
• 革兰阴性杆菌.氧化酶阳性,菌落有典型的气味(康科德葡萄 或玉米饼)和形态特征(金属或珍珠般光泽,粗糙,产色,有时 极其黏稠).
• 黏液型菌株革兰染色时在革兰阴性杆菌的周围常常可见橙 色区域.
革兰阴性杆菌
肠杆菌科细菌主要生化反应
• 发酵葡萄糖（产酸或产酸产气） ： KIA（克
氏双糖铁试验）或三糖铁试验
•Fra Baidu bibliotekH2O2 （触酶）+ • OX （氧化酶）-
肠杆菌科细菌
• 大肠埃希菌：动力“+”；但某些菌株动力“—” • 克雷伯菌属：动力-，脲酶＋ • 肠杆菌属，泛菌属，哈夫尼菌属： • 枸橼酸杆菌属：生化反应不定 • 沙雷菌属： • 变形杆菌属，普罗威登菌属，摩根菌属：
细菌鉴定流程
葡萄球菌
金黄色葡萄球菌
• 血平板上生长的由白色至黄色,奶酪样,不透 明,革兰阳性球菌.
• 触酶阳性 • 凝固酶试验阳性 • 或商用乳胶凝胶试剂阳性
金葡鉴定注意事项
• 玻片凝固酶 注意：施葡萄球菌和路邓葡萄球菌也可为阳性，但凝集反应呈片状或块状。 可通过PYR（吡咯烷酮酶）试验与金黄色葡萄球菌鉴别。 施葡萄球菌和路邓葡萄球菌为PYR（吡咯烷酮酶）强阳性,立即产生红紫色,而 金黄色葡萄球菌为阴性或弱阳性,
关键试验
• 触酶 • OF（氧化发酵）试验 • 血浆凝固酶：玻片法，试管法
链球菌科细菌
• α溶血：肺炎链球菌 • β溶血：化脓性链球菌
B群链球菌 C、G群链球菌 • γ溶血：肠球菌
肺炎链球菌
• 菌落形态 • Optochin试验：注意耐药菌株 • 胆汁溶菌试验
β溶血链球菌鉴定
菌种
血清分群 杆菌肽