--微生物检验教学课件(扬州大学)第六节 链球菌检验

– 草酸钾人血浆配制： 草酸钾0.01 g放入 灭菌小试管中，再 加入5 ml人血，混 匀，经离心沉淀， 吸取上清液即为草 酸钾人血浆。
四、生化特性
1. 能发酵简单的糖类，产酸不产气，分解葡萄 糖，但对乳糖、甘露醇、水杨酸、山梨醇等 的分解，随菌株不同而不同。
2. 链球菌一般不分解菊糖。
胆汁溶菌试验
• 原理 胆盐能通过活化肺炎链球菌的自溶酶而溶解 肺炎链球菌，但不能溶解草绿色链球菌。这两个特 性可用来鉴别肺炎链球菌与α溶血性链球菌。
• 引起猪链球菌病的病原，至少有三种：马链 球菌兽疫亚种、猪链球菌2型、猪链球菌1型 等。
马链球菌兽疫亚种，过去又叫兽疫链球菌，可致 猪急性败血症及关节炎，该菌呈β溶血，兰氏血 清学分群属C群，对各种动物有致病性，人工感 染可致死小白鼠，但未见感染人并致死的报道。
猪链球菌不仅可致猪败血症、肺炎、脑膜炎、关节炎及心内膜炎，尤其
3.8%柠檬酸钠溶液
• 成分
– 柠檬酸钠 – 蒸馏水
3.8g 100ml
• 121℃，15min灭菌备 用
成分
– 含1%胰蛋白胨的牛心浸液 – 1：25000结晶紫盐水溶液 – 1：800三氮化钠溶液 – 脱纤维兔血（或羊血）
匹克氏肉汤
200 ml 10 ml 10 ml 10 ml
• 将上述已灭菌的各种成分，用无菌手 续依次混合，分装于无菌试管内，每 管内约2 ml，保存于冰箱内备用。
是其中的猪链球菌2型致病性最强，可感染特定人群并致死，是一种
人畜共患病病原。
1998年江苏分离株即为此菌。根据兰氏血清学分群，猪链球菌2型属 于R群，1型属于S群。猪链球菌2型的溶血性不甚典型，因条件而异，
可表现为α溶血或β溶血。
• 虽然鉴定链球菌一般难度不大，但要确定是否为猪链球菌就比较困难， 确诊要用专门实验室提供的猪链球菌2型或1型的抗血清作凝集试验等。 近年来，分子生物学的手段已引入链球菌的鉴定。
马链球菌马亚种 马链球菌兽疫亚种
猪链球菌2型
猪链球菌1型
3、根据抗原结构分类：（主要是
Lancefield分类法）
• 根据链球菌细胞壁中的多糖抗原的不同，将链球菌 分成A、B、C、D、E、F、G、H、K、L、M、N、 O、P、Q、R、S、T、U、V [A—H，K—V]等20 个血清群。
• 鉴于同血清群的不同种链球菌在生理生化特性上差 异较大，因此在鉴定链球菌时，不能单凭血清群的 检查，还须结合生理生化特性综合判定。
检样：25g（ml）+225ml灭菌生理盐水
葡萄糖肉浸液肉汤或匹克氏 肉汤
血平板 血平板（分纯培养）
链激酶试验
杆菌肽敏感试验
观察溶血
均为阳性 报告
革蓝氏染色
链激酶(溶纤维蛋白酶)试验
链激酶能激活正常人体血液中的血浆蛋白酶 原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。
实验步骤： 吸取草酸钾血浆0.2 ml，加0.8 ml灭菌 生理盐水，混匀， 再加入链球菌培养物0.5 ml及0.25%氯 化钙0.25 ml，震荡混匀，37 ℃水浴10 min，血浆混合物自行凝固（凝固程度至 试管倒置，内容物不流动） 然后观察凝固块完全溶解的时间，完全 溶解为阳性，如24 h不溶解即为阴性。
链球菌属分类的演变
• 原来属于链球菌属，在分类上属于 • D群的肠球菌→肠球菌属 • 和N群链球菌的乳球菌→乳球菌属。
• 根据链球菌在血平板上的溶血现象将其分类，以及 Lancefield血清学分类等传统方法仍是临床实验室 鉴定链球菌时常规使用的方株为厌氧菌； 2. 对营养要求较高，在普通培养基上生长不良，需加有血液
第六节 链球菌检验
一、形态特性
1、本属细菌呈圆形或卵圆形，直径0.5~1m，呈链状排列，
但菌链的长短与菌种及生长环境有关。 一般来说 ➢固体培养基上多为短链、成对或聚集成丛似葡萄球 菌样，而在液体培养基中常排列成长链状； ➢自败血症猪体分离的菌株多为成双或短链状；
2、G+，但老龄培养物常转呈G－。
• 试验方法
– 在1mL待鉴定菌1824h培养液中加入2滴10%去氧胆酸 钠，35℃孵育15min后鉴定管由浑浊变为透明为阳性。同 时在另一管中加无菌生理盐水为阴性对照。
CAMP试验
• 用于B群的无乳链球菌 的鉴定。
• 它能产生一种CAMP 因子，能增强金色葡 萄球菌溶血素的活性， 在两菌划线接种邻近 处出现箭头状的扩大 溶血区。
性炎症；
（2）β溶血性链球菌：致病力强，常引起人和动物
的各种链球菌病，大部分致病性链球菌属于此类；
（3）γ溶血性链球菌：一般不致病。
2、根据生理生化特性分类：
《伯吉氏系统细菌学手册》（1986，第2卷），将
本属细菌分为六大类29个正式种：
兰氏分群 A B C
R S
种名 化脓链球菌
无乳链球菌
停乳链球菌 停乳链球菌类马亚种
（或血清）、葡萄糖等才能生长良好。 3. 最适生长温度为37℃，最适生长pH7.4-7.6； 4. 在血清肉汤中形成粘稠或絮状沉淀，上液清朗； 5. 在血琼脂平板上，各种链球菌菌落基本相似，多呈细小或
露滴状、灰白色、圆而微凸、表面光滑、边缘整齐、半透 明或不透明的菌落，菌落直径大小0.5-0.75mm。
3、均无芽胞；除D群一些菌株外，也都无鞭毛不运 动；
4、A、B、C、D群中大多数菌株在血清培养基上 的幼龄培养菌或病料中的菌体常见荚膜。
二、分类
链球菌分类，迄今尚没有统一，多以其 溶血性、生理生化特性和抗原结构等加以 分类。
1、根据链球菌对绵羊红细胞的 溶血能力分为：
（1）α溶血性链球菌：致病力弱，多引起局部化脓
金色葡萄球菌
血 平 板
链球菌
重要的链球菌种
无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌 化脓链球菌 肺炎链球菌 马链球菌兽疫亚种 马链球菌马亚种
猪链球菌病的病原
猪链球菌病是世界各国常见的一种猪传染病，危害 严重。
在我国也有流行，1998年夏，江苏省等地暴发猪 病引起大批生长猪死亡，与之接触的屠宰人员，也 因伤口感染而发病死亡，经确诊为猪链球菌病，从 而再次引起人们对此病的关注。