水产品中氯霉素的快速检测胶体金免疫层析法
浅谈水产品中氯霉素的快速测定
浅谈水产品中氯霉素的快速测定蒙君丽;刘阁兴【摘要】氯霉素（Chloramphenicol，CAP），是一种有效的广谱抗生素，常用于动物各种传染性疾病的治疗，对多种病原菌有较强的抑制作用，曾在水产养殖业中得到广泛应用，同时也带来了水产品中氯霉素残留的严重问题。
氯霉素存在严重的毒副作用，能抑制人体骨髓造血功能，引起人类的再生障碍性贫血、粒状白细胞缺乏症、新生儿、早产儿灰色综合症等疾病，低浓度的药物残留还会诱发致病菌的耐药性，因此氯霉素残留问题已引起国际组织和世界上许多国家和地区的高度重视，【期刊名称】《河北渔业》【年(卷),期】2009(000)001【总页数】2页(P40-41)【作者】蒙君丽;刘阁兴【作者单位】唐山市水产技术推广站,河北,唐山,063000;丰南区发展改革局,河北,丰南,063300【正文语种】中文【中图分类】S9氯霉素(Chloramphenicol，CAP)，是一种有效的广谱抗生素，常用于动物各种传染性疾病的治疗，对多种病原菌有较强的抑制作用，曾在水产养殖业中得到广泛应用，同时也带来了水产品中氯霉素残留的严重问题。
氯霉素存在严重的毒副作用，能抑制人体骨髓造血功能，引起人类的再生障碍性贫血、粒状白细胞缺乏症、新生儿、早产儿灰色综合症等疾病，低浓度的药物残留还会诱发致病菌的耐药性，因此氯霉素残留问题已引起国际组织和世界上许多国家和地区的高度重视，欧盟、美国等均在法规中规定CAP残留限量标准为“零允许量”，即不得检出。
我国是一个水产养殖大国，养殖规模不断扩大，但养殖过程中滥用抗生素，已成为一个严重的水产品安全问题。
自2003年以来，我国出口水产品频频被进口国检出氯霉素残留，欧盟因氯霉素残留问题将中国产冻虾产品纳入其食品快速预警机制。
针对这种情况，农业部已将氯霉素从《中国兽药典》中删除，此药重新进入安全评价体系，在《动物性食品兽药残留规定》中规定可食部分不得检出，并且在出口的日常检测中，将其列为必检项目，一旦发现超标，一律禁止出口。
胶体金免疫层析技术在水产品药残快速检测中的应用
胶体金免疫层析技术在水产品药残快速检测中的应用摘要近年来发展成熟的胶体金免疫层析快速检测技术，能从养殖到销售的各个环节对水产品中的药残进行监管。
阐述了胶体金免疫层析技术的原理、优点以及在水产品药残检测中的应用，以供参考。
关键词胶体金免疫层析技术；快速检测；水产品；药残我国是水产养殖和水产品消费大国，水产品的质量安全直接关系到消费者的生命健康，随着生活水平的不断提高，人们对水产品质量安全提出了越来越高的要求。
水产品中具有代表性的药物残留种类主要包括氯霉素、硝基呋喃类、孔雀石绿等[1-3]，是目前中国水产品最为严重的危害因素之一，对广大消费者造成了巨大损害。
因此，努力提高水产品质量安全水平，对于保护消费者合法权益和促进渔业经济可持续发展具有重大意义。
近年来，一些生物科技公司纷纷研发出了基于胶体金免疫层析技术的水产品药残快速检测试剂盒，本文对胶体金免疫层析技术的原理、优点以及在水产品药残检测中的应用做了简要的综述，现将其介绍如下。
1 胶体金免疫层析技术的原理胶体金免疫层析技术是胶体金标记技术结合免疫层析技术一种应用形式。
其原理是分别将药物抗原和二抗呈条带状固定在试纸膜上，形成2条固定的隐形线，分别为检测线（T线）和对照线（C线）。
当样品加入加样孔后，样品借助微孔膜的毛细管作用，慢慢沿着膜运动，样品中的残留药物与药物抗原发生特异性的结合，使该条形带显示一定的颜色[4]，用肉眼即可直观地判断检测结果：阴性（-）：T线（检测线）比C线（对照线）深或一样深，表示样品中被测物浓度低于检测限或不含被测物残留。
阳性（+）：T线比C线浅，或T线无显色，表示样品中被测物浓度高于检出限；T线相比C线越浅，表示样品中被测物浓度越高。
无效：未出现C线，表明检测失败或试剂条已变质失效。
2 胶体金免疫层析技术的优点2.1 快速胶体金免疫层析技术最大的优势就是快速耗时少，样品处理过程一般需要40 min左右，检测过程及结果判读需要10 min左右。
水产品中氯霉素残留检测方法
水产品中氯霉素残留检测方法氯霉素（Chloramphenicol，简称CAP）是一种广谱抗菌药物，在水产品中的残留对人体健康具有潜在风险。
因此，准确快速地检测水产品中的氯霉素残留是非常重要的。
目前，常用的氯霉素残留检测方法包括高效液相色谱法、液相色谱-质谱法、酶联免疫吸附测定法等。
高效液相色谱法（HPLC）是目前最常用的氯霉素残留检测方法之一、它利用色谱柱进行分离，通过比色法或荧光法进行检测。
具体步骤如下：首先，将待测样品进行提取，常用的提取剂包括乙腈、甲醇等。
然后，将提取液通过色谱柱进行分离，同时通过流动相的携带进行样品的洗脱。
最后，通过比色法或荧光法对洗脱液进行检测和定量。
HPLC方法具有准确、灵敏、高效的优点，但是需要较昂贵的设备和试剂，并且操作复杂，对操作人员的技术要求较高。
液相色谱-质谱法（LC-MS）是一种结合了液相色谱和质谱的分析技术，可以实现对氯霉素残留的准确定量和结构鉴定。
与HPLC相比，LC-MS具有更高的灵敏度和特异性。
它可以通过质谱仪对分离出的化合物进行分析，从而实现对氯霉素残留的快速检测。
然而，LC-MS方法需要昂贵的设备和试剂，并且需要经验丰富的操作人员进行操作。
酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种基于免疫学原理的检测方法，可以实现对氯霉素残留的高效筛查。
ELISA方法的原理是将待检样品与特异性抗体结合，然后通过酶标记二抗进行检测。
具体步骤如下：首先，将待测样品和抗体溶液进行孵育，使得残留的氯霉素与抗体结合。
然后，通过酶标记的二抗与结合的复合物发生反应，产生可观测的信号。
最后，通过比色法或发光法对信号进行检测和定量。
ELISA方法具有灵敏度高、操作简便、成本低等优点，但是其结果可能受到其他因素的干扰，需要进一步的确认。
综上所述，水产品中氯霉素残留的检测方法有高效液相色谱法、液相色谱-质谱法和酶联免疫吸附测定法。
这些方法各有优缺点，选择适合的检测方法需要根据实际情况进行评估和决策。
水产品快速检测卡检测原理
水产品快速检测卡检测原理我国是水产品生产和消费的大国，在渔业取得飞速发展的同时，渔业病害情况也频繁发生，由此导致了水产养殖过程中药物滥用现象产生。
水产品质量安全事件不断发生，水产品安全越来越被政府与人民高度关注。
目前，水产养殖过程中主要使用的药物有孔雀石绿、氯霉素等，长期摄入此类药物对人体有致癌，致畸形等危害。
广州瑞森生物科技股份有限公司针对水产安全检测推出了检测卡和试剂盒等快速检测产品，为广大百姓提供食品安全保障。
水产品快速检测卡检测原理：氯霉素(CAP)j胶体金快速检测卡检测原理氯霉素检测卡应用竞争抑制免疫层析的原理，样品中的氯霉素在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线(T)上氯霉素-蛋白偶联物的结合。
如果样品中氯霉素含量大于0.3ppb，检测线(T)线显色比C线浅，结果为阳性;反之，检测线(T)显色比质控线(C)深或者一样深，结果为阴性。
孔雀石绿(MG)快速检测卡检测原理孔雀石绿快速检测卡应竞争抑制免疫层析的原理，样本中的孔雀石绿在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线(T线)上MG-BSA偶联物的结合。
如果样本中孔雀石绿含量大于1ppb，检测线(T)线显色比C线浅，或T线无显色、 T 线明显显为绿色的，结果为阳性;检测线(T)线显色比C 线(对照线)深或一样深，结果为阴性。
呋喃唑酮代谢物快速检测卡呋喃唑酮代谢物快速检测卡应用竞争抑制免疫层析的原理，样品中的呋喃唑酮代谢物在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线(T)上呋喃唑酮代谢物-蛋白偶联物的结合。
如果样品中呋喃唑酮代谢物含量大于检测限，检测线(T)线显色比C线浅，结果为阳性;反之，检测线(T)显色比质控线(C)深或者一样深，结果为阴性。
磺胺类药物(SAs)快速检测卡磺胺类药物检测卡应用了竞争抑制免疫层析的原理，样品中的磺胺类药物在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线(T)上磺胺类药物-蛋白偶联物的结合。
胶体金免疫层析方法快速检测食品中氯霉素的残留研究
论文作者签名：＿＿＿＿＿
论文导师签名：＿＿＿＿＿ 日 期： 年 月 日
广东药学院硕士研究生学位论文
序言
1. 氯霉素残留检测研究发展
氯霉素(Chloramphenicol，CAP)是由 Ehrlich 等在 1947 年首次从微生物代谢物中 分离的一种广谱抗生素。目前可用人工方法合成，已广泛用于动物各种传染性疾病的 治疗[1]。氯霉素对革兰阳性、阴性细菌均有抑制作用，且对后者的作用较强。其中对 伤寒杆菌、流感杆菌、副流感杆菌和百日咳杆菌的作用比其他抗生素强，对立克次体 感染如斑疹伤寒也有效，但对革兰阳性球菌的作用不及青霉素和四环素。
广东药学院 硕士学位论文 胶体金免疫层析方法快速检测食品中氯霉素的残留研究 姓名：徐欢 申请学位级别：硕士 专业：中药学 指导教师：田素娟
20100501
广东药学院硕士研究生学位论文
胶体金免疫层析方法快速检测食品中氯霉素的残留研究
徐欢(中药学) 导师:田素娟 教授
摘要
目的：氯霉素作为一种高效广谱的抗生素，广泛用于动物各种传染性疾病的治疗，但 是因其毒副作用较强，许多国家和地区相继禁止或严格限制使用氯霉素，传统的氯霉 素残留分析方法需要昂贵的仪器和专业技术人员，且周期长、成本高，不能满足现场 和快速检测的要求。因此，建立高效、灵敏、经济的氯霉素残留分析方法是很有必要 的。胶体金免疫层析试纸条检测法是利用抗原和抗体的特异性结合反应对微量抗原或 抗体进行测定的方法，本论文旨在研制氯霉素免疫胶体金层析试纸条，应用于畜产品 中氯霉素残留的快速检测，具有重要的现实意义和极高的商业开发价值。 方法：通过体外扩大培养杂交瘤细胞，将细胞接种到小鼠体内，采用体内诱生法制备 出含抗氯霉素特异性单克隆抗体的腹水。腹水经辛酸-硫酸铵法、亲和柱层析法进行纯 化。纯化后用全抗原对三株单抗从蛋白浓度、效价以及交叉反应等指标进行质量鉴定； 采用柠檬酸三钠还原法制备了不同粒径的胶体金，将具有氯霉素特异性的免疫胶体金 均匀灌注在 BT50 型玻璃纤维膜，烘干后即为胶体金垫。经比较试验选用 Whatman 公 司的 AE98Fast 硝酸纤维素膜作为层析膜；控制线采用 20 倍稀释的羊抗鼠 IgG；用浓 度为 1mg/mL 的氯霉素包被原（CAP-BSA）喷涂检测线，最后组装成试纸条。 结果：选取 4D10 作为制备探针抗体，其蛋白浓度为 2.89mg/mL，经 ELISA 法测定抗 体效价为 1：1.024×106，利用改良竞争 ELISA 法测定单抗与各抗生素的交叉反应，抗 氯霉素单克隆抗体(CAP-McAb)与氯霉素琥珀酸钠有交叉反应而与青霉素、链霉素、 磺胺二甲嘧啶、甲砜霉素等抗生素无交叉反应，与各抗生素、类似物的交叉率均小于 0.01%，具有较高的特异性和亲和力。通过紫外分析和外观观察试验确定了胶体金标 记抗体的最适蛋白质浓度为 48µg/mL，最适 pH 在 8.2 左右。用制得的免疫层析试纸 条检测已知的含有氯霉素的样品，灵敏度为 100ng/mL，在其灵敏度范围内重现性为 100%，试纸条在 5min 左右出现清晰的条带。 结论：对制备的氯霉素的免疫胶体金层析试纸条的验证试验表明，该试纸条检测时间
胶体金快速检测法测定水产品中兽药
分析检测胶体金快速检测法测定水产品中兽药残留丘韶麟1,2，龚晓莹1,2，司徒茵1,2，朱明智1,2，刘俊威1,2，陈 苑1,2（1.广东省食品工业研究所有限公司，广东广州 511442；2.广东省食品质量监督检验站，广东广州 511442）摘 要：以农贸市场销售的水产品为调查对象，针对高风险品种进行抽检，采用胶体金免疫层析法对水产品进行快速检测。
结果显示，8 178批次水产品中检出阳性样品227批次，阳性检出率为2.78%，其中问题比较突出的品种是贝类（花甲、白贝）、鱼类（泥猛鱼、黄骨鱼），主要问题项目为氯霉素、孔雀石绿。
本文通过对水产品中兽药残留进行快速检测分析，筛查出重点检测品种、项目，为提升水产品的质量安全提供参考。
关键词：胶体金免疫层析法；兽药残留；水产品Determination of Veterinary Drug Residues in Aquatic Products by Colloidal Gold Rapid DetectionQIU Shaolin1,2, GONG Xiaoying1,2, SI Tuyin1,2, ZHU Mingzhi1,2, LIU Junwei1,2, CHEN Yuan1,2(1.Guangdong Food Industry Institute, Guangzhou 511442, China; 2.Guangdong Food Quality Supervision andInspection Station, Guangzhou 511442, China)Abstract: The aquatic products sold in the farmers’ market were investigated as objects, and the high-risk varieties were randomLy examined. Colloidal gold immunochromatography was used to detect the aquatic products quickly, and the veterinary drug residues in aquatic products were analyzed. The results showed that 8 178 batches of aquatic products were sampled and 227 batches of positive samples were detected, with a positive detection rate of 2.78% , among them the more prominent problem species are shellfish (armored shell, white shell) , fish (mud predatory fish, yellow bone fish), the main problem items are chloramphenicol and malachite green. Through the rapid detection and analysis of veterinary drug residues in aquatic products, key test varieties and items were screened, in order to improve the quality and safety of aquatic products and ensure the safety of people’s dinner tables.Keywords: colloidal gold immunochromatography; veterinary drug residue; aquatic products水产品的兽药残留问题一直都是人们关注的焦点，随着水产养殖业的持续发展，其呈现出规模化及高密度养殖态势，极大程度地满足了消费者对水产品的日常需求。
氯霉素残留检验实验报告
一、实验目的本实验旨在通过胶体金免疫层析法对食品中的氯霉素残留进行快速、准确的检测，为食品安全监管提供技术支持。
二、实验原理氯霉素残留检验实验采用胶体金免疫层析法，该方法基于抗原抗体特异性结合的原理。
当氯霉素样品与标记有抗氯霉素单克隆抗体的胶体金颗粒混合时，如果样品中含有氯霉素，则氯霉素会与抗氯霉素单克隆抗体结合，形成抗原抗体复合物。
复合物在层析膜上通过毛细作用向前移动，与固定在层析膜上的抗氯霉素抗体结合，形成金标记的抗原抗体复合物，最终在层析膜上形成两条色带：控制线（C）和测试线（T）。
如果样品中氯霉素浓度超过检测限，则在测试线上形成明显的色带；如果样品中氯霉素浓度低于检测限，则测试线上无色带。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）氯霉素标准品（2）阴性对照样品（3）阳性对照样品（4）氯霉素残留样品（5）胶体金免疫层析试纸条（6）试剂：缓冲液、洗涤液、封闭液等2. 实验仪器：（1）电子天平（2）恒温培养箱（3）移液器（4）微量加样器（5）一次性无菌手套四、实验方法1. 样品处理（1）准确称取氯霉素残留样品0.1g，加入1ml缓冲液，涡旋混匀，室温下放置10min。
（2）取1ml样品溶液，加入1ml洗涤液，涡旋混匀，室温下放置5min。
（3）重复步骤（2）两次。
2. 检测（1）取一条胶体金免疫层析试纸条，将样品加样孔浸入样品溶液中，室温下放置5min。
（2）取出试纸条，观察结果。
五、实验结果与分析1. 阳性对照实验阳性对照样品在测试线上形成明显的色带，说明试纸条的性能良好。
2. 阴性对照实验阴性对照样品在测试线上无色带，说明试纸条对阴性样品具有良好的检测效果。
3. 样品检测根据实验结果，氯霉素残留样品在测试线上形成明显的色带，说明样品中氯霉素残留量超过检测限。
六、实验结论本实验采用胶体金免疫层析法对食品中的氯霉素残留进行检测，结果表明该方法具有快速、简便、准确的特点，适用于食品中氯霉素残留的现场快速检测。
胶体金免疫层析技术在水产品药物残留检测中的应用
与鱼体颜色极为相近 ，很难发现 ，后来将鱼体放在盛
有清水 的盆里 ，便发现大 量的鲺 从鱼 体游 离到水 中。 在显微镜 下 ，鉴 定为 日本鲺 （ 中插 ２ 。根据病鱼 症 彩 ）
状 及 镜 检 结 果 ，确 诊 该 试 验 基 地 鲤 鱼 患 的 是 鲺 病 ，于
是立 即 制定 了防 治方案 ：用 ０ ５ ． 克／ 。 晶体 ． ～０ ７ 米 的 敌 百虫 （ 量 为 ９ ％ 全 池 泼 洒 ， 间 隔 ７ 后 ，再 用 含 ０） 天 ０ ５克／ 。 ． 米 的敌 百 虫 全 池泼 洒 一 次 。在第 一 次 用 药 后 ，病症 明显减轻 ，第二 次用药后 ，症状完 全消 失。
金 免 疫 层 析 技 术 （ｏ ｌ ｉａ ｏ ｄ Ｉｍ ｎ ｃｒ ｍ ｔ— Ｃ ｌｏ ｄ ｌ Ｇ ｌ ｍ ｕ ｏ ｈ ｏ ａ ｏ
（） １ 阴性 （） 一 ：在测试 区和质控 区各 出现 一条红色 色带 时，Ｔ （ 线 测试 线 ，靠近 加入样 品溶液的一端） 比
ｃ （ 线 对照线） 或一样深 ，表示样 品中被测物浓度 低 深
水 产 品质 量 安全 问题 关 系到人 民群众 的身 体健
头丸等 毒品 的快 速检测 。其具有快 速 、灵敏 、特异 、
康 、渔 民增收和 社会稳 定，关系 到国 内外两 个市场 。 药物残 留是 目前 中 国水 产 品最 为严重 的危 害 因素之
一
简便等优点 。 目前 ，国内外 的一些 生物科 技公司纷纷 研 发出水产品药物残 留检测 的胶体金快速检测试 剂条 或试剂盒 ，胶体金免疫层析技术开始逐渐应用 于水产
采取 了有效治疗措施 ，基本控制 了鲺病 的危害 。 ７ 月初， 岗位 专家王桂 堂研究员接 到 中科 院水生
水产品中氯霉素残留胶体金免疫层析法快速检测技术
性结果 ，表明不含氯霉素或者氯霉素残 留量低于检
出限 （ ４０ ． ３ ￣ ｔ ｇ ／ ｋ ｇ ） 。 ６ ． ３ 阳性结 果
（ ２ ） 用 塑 料 吸管 将无 气 泡 的待检 样 品垂直 滴 加 ３滴 （ 约 Ｉ Ｏ ０ ￣ Ｌ ） 于加样 孔 中 ， 具体 见 图 ｌ 。
０ ． ２ ｍＬ下 层溶 液 ， 为 待检样 品 。
５ ． ３ 测 定
待 检试 样 检 测 线 （ Ｔ线 ） 出现红 色 条 带 ， 且 颜 色 比控制 线 （ ｃ线 ） 深（ 如图 ４ ） 或一样 深 （ 如图 ５ ） ， 为 阴
（ １ ） 从包装袋中取出氯霉素胶体金免疫层析试
剂板 ， 置于平 整 的台面 上待测 。检 测试 剂板 取 出后 ，
试 样提 取液作 为 空 白对 照 ， 加 样方 法 同样 品 。 （ ４ ） 加样 后 开 始计 时 ， 结果应在 ３ ５ ｍｉ ｎ读 取 ， 其 他 时间判读 无效 。
４ 仪 器 设 备
氯霉素残留胶体金免疫层析法快速检测技术适
用的主要仪器设备为 ： 电子天平 （ 感量 ０ ． ０ １ ｇ ） 、 小型
２ ０ １ ６年 第 ６期 一
均质器 、 离心机 （ 最大转速 Ｉ ＞４ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ ） 、 氮 气 吹 干 仪 或空 气 吹干仪 。
待 检试 样 检 测 线 （ Ｔ线 ） 出现红 色 条 带 ， 但 颜 色 比控制 线 （ Ｃ线 ） 浅（ 如图 ６ ） ， 或 检测 线 （ Ｔ线 ） 未 出现 红 色 条带 （ 如图 ７ ） ， 为 阳性 结果 ， 表示 样 品 中氯霉 素
（ ３ ） 每批样品需做 １ 孑 Ｌ 空 白对照 ， 以复溶液代替
水产品中氯霉素残留快速检测产品的质量分析和评价
（ ．中国水产科 学研 究院 质量与标 准研 究 中心 北京 １０４ ；．国家水产 品质 量监督检验 中心 青岛 ２６ ７ １ ０ １ １２ ６ ０ １）
摘要： 为推动快速检测产 品在水产 品药物残留监管领域 的应用 ， 立 了一套 “ 样检测 式” 物残 留快速检测 产品筛 建 盲 药 选评价方法 ， ４种市售 的国产氯霉素胶体 金快 速检测产品 的假 阳性率 、 对 假阴性率 、 出率等指标进行 验证。验证结 检 果显示 ， 仅有 １ 种产 品能 １０ ０ ％准确检测出 ６ ８个鱼糜样 品中是否残 留氯霉素 ， １种产 品的假 阳性率 达 ３ ％ ， 有 ５ ２种产 品的最低检 测浓 度值与商标标识最低检 出限不相符 ， 明产 品的质量 参差不齐 。胶 体金快速 检测产 品作 为质量安全 说
监管工具 ， 投入使用前 ， 必要 对其 最低 检 出 限、 阳性 率 、 阴性率 等参 数进 行验 证 。［ 国渔业 质量 与标 准 ， 在 有 假 假 中
２ １ ，（ ） ５ ０ ２ ２ ３ ：５—６ ］ １
关键词 ： 氯霉素 ； 胶体 金快速检测产 品； 分析评价 ； 最低检 出限 ； 阳性率 ； 阴性率 假 假 中图分 类号 ：９ ￥４ 文献标 志码 ： Ａ 文章 编号 ： ０ ５—１３ （０ ２ ０ ０ ５ ０ ２９ ８３ ２ １ ）３— ０５— ７
要 卜 。 目前 ， Ｊ 国外 已经 有 相 当 成 熟 的 商 品 化 试 纸条 ， 如美 国 的 Ｃ ｒｍ Ｓｉ ｃ ｎ． 司研 发 的一 系 ｈａ ｃｅ ｅＩｃ 公 ｎ 列 用 于 检 测 牛 奶 中各 种 抗 生 素 的 免 疫 纸 层 析 胶 体
金 试 纸 条 Ｒ Ｓ 系列 ，但 用于 检测 水 产 品 中禁 用 兽 ＯＡ 药 及 有 毒有 害 物 质残 留的试 纸 条 产 品 尚不 多 见 。 由于 免 疫胶 体 金 快 速 检 测 产 品 尚属 新 兴 行 业 ， 于 用 检 测 水 产 品 中兽 药 及 有 毒 有 害 物 质 残 留 的 产 品 技
水产品肌肉组织中氯霉素残留量检测方法的对比分析
水产品肌肉组织中氯霉素残留量检测方法的对比分析引言：氯霉素是一种广谱抗生素，常用于水产养殖中的疾病治疗和预防。
然而，由于氯霉素在人体中可以引起苯甘氮类药物引起的无异位脂肪移植症，因此世界各国都对水产品中的氯霉素残留量有严格的限制。
针对水产品肌肉组织中氯霉素残留量的测试，现有许多不同的方法和技术。
本文将对其中一些常用的方法进行对比分析，并评估它们的优缺点。
方法一：高效液相色谱法（HPLC）检测氯霉素残留量HPLC是一种常用的分离和定量分析方法，可以快速准确地检测氯霉素残留量。
该方法通过将水产品肌肉组织样品提取液经过色谱分离，利用紫外或荧光探测器测量不同物质的峰值面积，从而定量检测氯霉素的含量。
该方法的优点是操作简便、准确性高，可以同时检测多种氯霉素类药物。
然而，HPLC方法的缺点是设备昂贵、操作复杂，对操作人员的技术要求较高。
方法二：酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测氯霉素残留量ELISA是一种常用的生物学分析方法，可以通过酶标记的抗体与目标物质结合来检测氯霉素残留量。
该方法操作简便，具有高通量性和准确性。
ELISA方法的优点是对样品处理较少，检测时间短，适用于大批量样品分析。
然而，ELISA方法的缺点是可能存在交叉反应和假阳性结果，对操作人员技术要求较高。
此外，ELISA方法只能定性或半定量检测氯霉素残留量，不能提供准确的定量结果。
方法三：气相色谱质谱联用法（GC-MS）检测氯霉素残留量GC-MS是一种常用的分析方法，可以通过将水产品肌肉组织样品提取液经过气相色谱分离，然后利用质谱检测器对不同物质进行鉴定和定量。
GC-MS方法准确性高，可以进行定量检测，具有良好的选择性和灵敏性。
然而，GC-MS方法的缺点是操作复杂，需要较长的分析时间，设备昂贵，对操作人员的技术要求较高。
综合对比分析：从操作简便性、准确性、成本和设备要求等方面考虑，HPLC方法适合进行氯霉素残留量的定量检测。
而ELISA方法适合进行大批量样品的快速筛查，但不能提供准确的定量结果。
胶体金免疫层析法快速检测食品和兽药中的氯霉素残留
胶体金免疫层析法快速检测食品和兽药中的氯霉素残留潘嘉慧;田峻;赵亮亮;沈国权;朱海云【期刊名称】《兽医导刊》【年(卷),期】2014(000)012【总页数】3页(P19-21)【作者】潘嘉慧;田峻;赵亮亮;沈国权;朱海云【作者单位】佛山市质量计量监督检测中心，广东佛山 528225;佛山市质量计量监督检测中心，广东佛山 528225;佛山市质量计量监督检测中心，广东佛山528225;佛山市质量计量监督检测中心，广东佛山 528225;佛山市质量计量监督检测中心，广东佛山 528225【正文语种】中文氯霉素（Chloramphenicol，CAP）是一种广谱抗生素，其抗菌效果好，价格低廉，曾广泛应用于预防和治疗动物疾病。
然而氯霉素具有严重的毒副作用，会引起动物机体正常菌群失调，同时可能引起人的再生障碍性贫血，粒状白细胞缺乏症等疾病。
欧盟2377/90/EEC法规、美国FDA、日本的“肯定列表制度”等均明确规定氯霉素不能在任何动物制食品，以及动物的饲料和生长环境中使用。
2002年我国农业部发布235号公告《动物性食品中兽药最高残留量》，规定氯霉素及其盐、酯（包括：琥珀氯霉素）在所有食品动物、所有可食组织中不得检出。
对氯霉素的标准检测方法有色谱分析法和免疫检测法。
色谱分析法需要先进检测设备、样品前处理步骤繁琐，费用高、耗时长、对操作人员要求较高。
免疫分析法具有快速、灵敏度高、高通量的特点。
其中免疫分析方法有酶联免疫法、胶体金免疫层析技术等。
酶联免疫分析法操作相对繁琐，对操作人员的专业知识要求较高，相比之下，胶体金免疫层析技术基于肉眼水平的检测，不需任何仪器设备和试剂，比酶联免疫法省略了加显色剂和终止液的步骤，更简化的操作，体积小，易携带，几分钟就可用肉眼观察到颜色鲜明的实验结果，并可保存实验结果。
近年来已有制备氯霉素胶体金免疫层析试纸条的报道，但仍存在适用样品单一、灵敏度不够等不足，本研究特别从优化免疫抗原、包被抗原的结构及优化偶联技术角度出发，提高抗体的特异性、亲和力，从而增加检测的灵敏度和特异性。
DB1301_T281-2018水产品中氯霉素的快速检测荧光免疫层析法
ICS67.050B 50 DB1301 石家庄市地方标准DB 1301/T 281—2018水产品中氯霉素的快速检测荧光免疫层析法Determination of chloramphenicol in aquatic products—Fluorescence immunochromatography2018-05-18发布2018-07-20实施前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由石家庄市农业畜牧局提出。
本标准起草单位：石家庄市畜产品质量监测中心。
本标准主要起草人: 李云、赵义良、宋瑞、刘松雁、张梦雪、张彩云、桂蕴、武治云。
水产品中氯霉素的快速检测荧光免疫层析法1 范围本标准规定了水产品中氯霉素（Chloroamphenicol，CAP）的荧光免疫层析快速检测方法。
本标准适用于水产品中氯霉素的快速筛选检测，本方法的检出限为0.1μg/kg。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理本法应用竞争抑制免疫层析原理。
样品中残留的氯霉素经乙酸乙酯提取、正己烷净化后，样品溶液中的氯霉素与铕乳胶标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素膜检测线上氯霉素-BSA 偶联物的结合，使检测线荧光强度低于控制线荧光强度或检测线无荧光。
4 试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
4.1 浓盐酸(HCl)。
4.2 氯化钠（NaCl）。
4.3 氯化钾（KCl）。
4.4 磷酸氢二钠（Na2HPO4）。
4.5 磷酸二氢钾（KH2PO4）。
4.6 乙酸乙酯（C4H8O2）。
4.7 正己烷（C6H14）。
4.8 甲醇（CH4O）。
4.9 吐温-20（C58H114O26）。
水产品中氯霉素的检测标准
水产品中氯霉素的检测标准水产品中氯霉素的检测标准氯霉素是一种广泛应用于畜禽养殖中的抗生素，也被用于水产养殖中。
然而，氯霉素对人体健康有一定的危害，因此被世界卫生组织列为二类致癌物质。
为了保障消费者的健康，各国都制定了严格的水产品中氯霉素的检测标准。
我国水产品中氯霉素的检测标准主要包括以下几个方面：1. 检测方法目前，我国常用的氯霉素检测方法主要有高效液相色谱法、气相色谱法、荧光免疫分析法等。
这些方法不仅能够快速、准确地检测出氯霉素的含量，而且能够同时检测出多种抗生素残留物质，具有较高的检测灵敏度和准确性。
2. 检测对象我国水产品中氯霉素的检测对象主要包括鱼类、虾类、贝类等水产动物及其制品。
其中，对于进口水产品，我国要求检测对象范围更广，包括所有水产品及其制品。
3. 检测标准我国对于水产品中氯霉素的检测标准分为限量和禁止两种。
其中，限量标准是指在一定重量范围内允许残留的最高含量，而禁止标准则是指在任何情况下都不允许出现氯霉素残留。
目前，我国对于水产品中氯霉素的限量标准如下：鱼类及其制品：0.3mg/kg虾类及其制品：0.5mg/kg贝类及其制品：0.3mg/kg对于进口水产品，我国要求检测出氯霉素残留物质即视为不合格。
4. 监督管理为了保障水产品中氯霉素的检测质量，我国建立了完善的监督管理体系。
各级食品药品监管部门对于生产、经营、使用水产品的企业进行定期监督检查，并对不合格企业进行处罚。
同时，我国还建立了食品安全快速预警机制，一旦发现问题及时采取措施，确保消费者的健康安全。
总之，水产品中氯霉素的检测标准是保障消费者健康安全的重要措施。
我们应该加强监督管理，严格执行检测标准，切实保障人民群众的饮食安全。
水产品中氯霉素残留检测技术的研究进展
水产品中氯霉素残留检测技术的研究进展摘要:介绍了水产品中氯霉素残留检测分析方法的研究进展,并阐述了各检测方法的特点及检出限,以期为水产品氯霉素残留检测提供参考。
关键词:氯霉素;检测;水产品氯霉素(chloramphenicol,CAP)于1947年从委内瑞拉链霉菌(Streptomyces venezuela)的培养滤液中分离出的结晶性抗菌素,是第一个采用化学合成法生产的抗生素,它是一种有效的广谱抗生素,对多种病原菌有较强的抑制作用。
在水产养殖业中,也常用氯霉素治疗各种传染性疾病。
但研究表明,氯霉素存在严重的毒副作用,能抑制人体骨髓造血功能,引起人类的再生障碍性贫血,粒状白细胞缺乏症,新生儿、早产儿灰色综合症等疾病,低浓度的药物残留还会诱发致病菌的耐药性,因此氯霉素残留问题已引起国际组织和世界上许多国家和地区的高度重视,欧盟、美国等均在法规中规定CAP残留限量标准为“零允许量”。
我国是一个水产养殖大国,养殖规模不断扩大,但养殖过程中滥用抗生素,已成为一个严重的水产品安全问题[1]。
氯霉素残留检测方法的建立始于20世纪70年代,随着新技术的不断出现,氯霉素的检测方法有很多种,大致可分为3类,即微生物法、化学分析法、免疫学检测法。
1微生物法微生物检测氯霉素法可大体分为2种:一种是基于抗生素对微生物生长的抑制作用,主要有棉签法、杯碟法、纸片法、TTC法、戴尔沃检测、BY法等;另一种是由于微生物对氯霉素敏感而引起生化特性的变化,如氯霉素对鳆发光杆菌的抑光作用,通过检测发光强度的变化来检测氯霉素的含量。
(1)棉签法。
棉签法是检测动物体中抗生素残留的现场试验方法。
该方法是用棉签(拭子)采取动物体内的组织液,然后将其放置于涂满枯草杆菌的培养基中保温过夜。
根据棉签周围的抑菌圈有无以及大小来判断抗生素残留。
梅先之等(1997)曾用该法检测鲤鱼中的CAP残留含量,该方法的检测限是1mg/kg,但容易造成漏检。
(2)杯碟法。
水产品中氯霉素残留快速检测产品的质量分析和评价_刘欢
免疫快速检测方法
， 并在人体医学、 兽医及在食品 ［5 － 7 ］ 。近几年， 安全检测等领域广泛应用 基于胶体金
［4 ］
GI免疫层析技术（ Gold immunochromatographic assay， CA） 开发 出 的 兽 药 残 留 快 速 诊 断 试 纸 条 / 卡 （ 简 称 “胶体金试纸条 / 卡” ） 已经逐渐商品化［8 － 10］。商品化 的兽药残留胶体金试纸条 / 卡便于携带， 可直接在生 产或销售现场出具检测结果， 且可肉眼判断， 较为满 足行业主管 部 门 开 展 兽 药 残 留 监 控 管 理 的 工 作 需 ［11 － 12］ 。 目前 ， 要 国外已经有相当成熟的商品化试 纸条 ， 如美国的 Chram Science Inc． 公司研发的一系 列用于检测 牛 奶 中 各 种 抗 生 素 的 免 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 纸 层 析 胶 体 金试纸条 ROSA 系列 ，但用于检测水产品中禁用兽
1． 2
试剂与设备
实验中所用试剂包括： 氯霉素标准品 （ Sigma， 纯 度 99% ） 、 氯霉素 d5 内标标准品 （ Cambridge Isotope Laboratories， Inc， 纯度 98% ） 、 乙酸乙酯、 甲醇和正己 （ ） ， 烷 均为色谱纯 等 其余试剂均为分析纯。 准 确 称 取 氯 霉 素 标 准 品， 用甲醇定容配成 1 mg / mL的标准储备液， － 18 ℃ 下可稳定 6 个月。储 备液用甲醇稀释为 1． 0 μg / mL 的标准使用液， 然后 将标准使用液稀释配制成相应浓度的标准工作溶液 。 内标溶液使 用 前 用 甲 醇 稀 释 为 1 μg / mL 的 标 准 工 作液。 主要仪器和设备： Thermo Finnigan TSQ Quantum Access 液相色谱一高分辨串联四极杆质谱联用仪 、 电 子分 析 天 平 （ 德 国 Sartorius 公 司 ） 、 离心机（ 美国 Thermo 公司） 、 （ Talboys 旋涡振荡器 美国 公司） 、 氮吹 （ Organomation ） 。 仪 美国 公司
《水产品中氯霉素的快速检测 胶体金免疫层析法》江西省地方标准编制说明
包括的主要内容和技术参数。 2013年4月：按GB/T1.1‐2000标准要求起草标准征求意见稿，撰写《编制说明》
及有关材料。 2013年5月，对主要技术内容进行实验室间试验验证。 2013年6月~8月，发给有关单位征求意见，总结意见，修改标准。 2013年9月，提交标准送审材料，根据审查意见，修改标准，提交标准报批稿。
表1 氯霉素免疫胶体金试剂条检出限判定 （单位：µg/kg，“＋”代表阳性，“—”代表阴性）
添加浓度
样本
0
0.1
0.2
0.3
0.5
1.0
2.0
草鱼
——— ——— ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋
鳙鱼
— — — — — — ＋ —— ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
鲫鱼
——— ——— ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋
无交叉反应。
5.5 胶体金免疫层析法和仪器确证方法检测实际样品结果比较
随机抽取18份草鱼、鳙鱼、鲫鱼、南美白对虾、螃蟹、甲鱼、鳜鱼、黄鳝、鲶
鱼9个品种样品，分别用胶体金免疫层析方法和仪器方法GB/T 22338‐2008《动物源
性食品中氯霉素类药物残留量测定》进行检测，检测结果见表4。检测结果表明，胶
体金免疫层析方法和仪器方法测定结果一致，符合度达到100%，适用于样本中氯霉
素残留的检测。
水产品中氯霉素的快速检测 胶体金免疫层析法
水产品中氯霉素的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201905）1 范围本方法规定了水产品中氯霉素的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于水产品中氯霉素的快速测定。
2 原理本方法的测定以竞争抑制免疫层析原理为基础。
样品中的氯霉素经有机试剂提取，固相萃取小柱净化，浓缩复溶后，氯霉素与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和微孔膜检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线颜色深浅比较，对样品中氯霉素含量进行定性判定。
3 试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的二级水。
3.1 试剂3.1.1 正己烷。
3.1.2 丙酮。
3.1.3 乙酸乙酯。
3.1.4乙腈3.1.5磷酸二氢钠，NaH2PO4·2H2O。
3.1.6磷酸氢二钠，Na2HPO4·12H2O。
3.1.7 氯化钠3.1.8 复溶液：称取0.12 g磷酸二氢钠(3.1.5)置于100 mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成溶液A；称取磷酸氢二钠7.16 g (3.1.6)置于100 mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成溶液B。
取溶液A 2.8 mL、溶液B 7.2 mL、氯化钠(3.1.7)0.85 g，用水溶解并稀释至100 mL，得磷酸盐缓冲液，即为复溶液。
3.1.9丙酮-正己烷（1+9）：丙酮（3.1.2）、正己烷（3.1.1）按体积比1：9混匀。
3.1.10丙酮-正己烷（6+4）：丙酮（3.1.2）、正己烷（3.1.1）按体积比6：4混匀。
3.2 标准物质氯霉素标准物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分之式、相对分子质量见表1，纯度≥98.6%。
注：或等同可溯源物质。
3.3标准溶液配制3.3.1 氯霉素标准储备液（1 mg/mL）：精密称取氯霉素标准物质（3.2）10 mg，置于10 mL容量瓶中，用乙腈（3.1.4）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1 mg/mL的氯霉素标准储备液。
水产品中氯霉素检测方法的比较与分析
水产品中氯霉素检测方法的比较与分析
柳爱春;李锋;余霞奎;徐晓丹
【期刊名称】《安徽农学通报》
【年(卷),期】2009(015)016
【摘要】对胶体金免疫层析法、酶联免疫法、气相色谱法和气质联用法4种水产品氯霉素检测方法进行比较和分析.酶联免疫法因灵敏度高、特异性强、高通量、成本低,适合于水产品中氯霉素日常检测;气相色谱法和气质联用法结果可靠,但分析速度慢、成本高,可作为确证方法使用;而胶体金免疫层析法因分析速度快,但灵敏度低,可用作粗筛快速检测.根据多年的ELISA检测经验:r-Biopharm、ED、C.E.R试剂盒质量稳定,检测结果较理想,适合于氯霉素日常检测.
【总页数】3页(P36-38)
【作者】柳爱春;李锋;余霞奎;徐晓丹
【作者单位】杭州市农业科学研究院实验中心,浙江,杭州,310024;杭州市农业科学研究院实验中心,浙江,杭州,310024;杭州市农业科学研究院实验中心,浙江,杭州,310024;杭州市农业科学研究院实验中心,浙江,杭州,310024
【正文语种】中文
【中图分类】R978.1+3
【相关文献】
1.水产品中氯霉素药物残留检测方法分析 [J], 卓二妹
2.水产品中氯霉素检测方法的比较与探讨 [J], 赵芸;余霞奎;柳爱春
3.水产品肌肉组织中氯霉素残留量检测方法的对比分析 [J], 李荣;徐进;艾晓辉;邹世平;伍刚;王鹏
4.水产品肌肉组织中氯霉素残留量检测方法的对比分析 [J], 李荣;徐进;艾晓辉;邹世平;伍刚;王鹏
5.水产品中氯霉素残留检测方法 [J], 李梓建
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胶体金免疫层析法快速检测水产品中氯霉素的应用与验证
文章编号：1006-3188（2016）05-0021-05胶体金免疫层析法快速检测水产品中氯霉素的应用与验证刘文珍1 王振国2 田飞焱1 谢世红1（1.江西省水产品质量安全检测中心，江西 南昌 330046；2.浙江杭州南开日新生物技术有限公司，浙江杭州 310022）摘要：应用胶体金免疫层析法快速检测水产品中残留的氯霉素。
实验结果表明，该快检法检出限为0.3μg/kg；方法具有良好的稳定性，假阳性率和假阴性率均为0%；对其他药物无交叉反应，特异性较好；重复性良好，对实际样品采用胶体金免疫层析法和国标方法进行检测，实验结果基本一致。
用胶体金免疫层析法检测氯霉素残留具有操作便捷、直观、低成本的特点，可用于水产品的初步筛查。
关键词：胶体金免疫层析法；水产品；氯霉素中图分类号：S94 文献标识码：A基金项目：江西省科技计划项目（20152ACG70006）作者简介：刘文珍，女，工程师，从事水产品质量安全、渔业病害方面研究。
E-mail：liuwenzhen518@ 通信作者：谢世红，女，高级工程师，从事水产品质量安全、环境监测方面研究。
E-mail：xsh-00@氯霉素（Chloramphenicol ，CAP ）是一种广谱抑菌性抗生素，对许多病原微生物有较强的抑制作用，可用于治疗水产品的各种传染性疾病。
但其残留对人体血液系统的毒性较大，能引起粒细胞及血小板减少、再生障碍性贫血等，低浓度的药物残留还会诱发致病菌的耐药性[1]。
研究表明，氯霉素在食品中的残留浓度高达1mg/kg 以上时对食用者有严重威胁[2]。
因此，美国食品与药品管理局（FDA）规定，在进口动物源性食品中禁止使用氯霉素。
而在欧盟理事会96/23/EC 号指令中，则将氯霉素列入动物性食品中禁用药物，禁止其在经济鱼类（观赏鱼除外）养殖过程中使用。
中国农业部于2002年12月24日发布235号公告《动物性食品中兽药残留最高限量》，公告中也将氯霉素列为禁用药物[3]。
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附件5
水产品中氯霉素的快速检测
胶体金免疫层析法
（征求意见稿）
1 范围
本方法规定了水产品中氯霉素的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于水产品中氯霉素的快速测定。
2 原理
本方法的测定以竞争抑制免疫层析原理为基础。
样品中的氯霉素经有机试剂提取，固相萃取小柱净化，浓缩复溶后，氯霉素与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和微孔膜检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线颜色深浅比较，对样品中氯霉素含量进行定性判定。
3 试剂和材料
除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的二级水。
3.1 试剂
3.1.1 正己烷。
3.1.2 丙酮。
3.1.3 乙酸乙酯。
3.1.4乙腈
3.1.5磷酸二氢钠，NaH2PO4·2H2O。
3.1.6磷酸氢二钠，Na2HPO4·12H2O。
3.1.7 氯化钠
3.1.8 复溶液：称取0.12g磷酸二氢钠(3.1.5)置于100ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成溶液A；称取磷酸氢二钠7.16g (3.1.6)置于100ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成溶液B。
取溶液A 2.8ml、溶液B 7.2ml、氯化钠(3.1.7)0.85g，用水溶解并稀释至100ml，得磷酸盐缓冲液。
3.1.9丙酮-正己烷（1+9）：丙酮（3.1.2）、正己烷（3.1.1）按体积比1：9混匀。
3.1.10丙酮-正己烷（6+4）：丙酮（3.1.2）、正己烷（3.1.1）按体积比6：4混匀。
3.2 标准物质
氯霉素参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分之式、相对分子质量见表1，纯度≥98.6%
表1 氯霉素参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量
注：或等同可溯源物质。
3.3标准溶液配制
3.3.1 氯霉素标准储备液（1 mg/mL）：精密称取氯霉素标准品（3.2）适量，置于10 mL 容量瓶中，用乙腈（3.1.4）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1 mg/mL 的氯霉素标准储备液。
4℃避光保存，有效期6个月。
3.3.2 氯霉素标准中间液A（10μg/mL）：精密量取氯霉素标准储备液（1 mg/mL）（3.3.1）0.1 mL，置于10 mL 容量瓶中，用乙腈（3.1.4）稀释至刻度，摇匀，制成10 μg/mL的氯霉素标准中间液A。
4℃避光保存，有效期3个月。
3.3.3 氯霉素标准工作液（0.01μg/mL）：精密移取氯霉素标准中间液A（10μg/mL）（3.3.2）0.01 mL 分别置于10mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.01μg/mL的氯霉素标准工作液。
临用新配。
3.4材料
3.4.1固相萃取小柱：Cleanert Silica，200mg/6ml。
LOT：0170198
3.4.2免疫胶体金试剂盒（在2℃～30℃、干燥阴凉条件下保存，在产品有效期内使用）。
3.4.2.1 金标微孔。
3.4.2.2 试纸条或检测卡。
4 仪器和设备
4.1 移液器：200 μL、1 mL 和5 mL。
4.2 涡旋混合器。
4.3 离心机：转速≥4000 r/min。
4.4 电子天平：感量为0.01 g。
4.5 振荡器。
4.6 样品浓缩仪：如有需要。
4.7环境条件:温度：15℃～25℃，相对湿度：≤60%。
5分析步骤
5.1试样制备
取具有代表性样品约500 g，充分粉碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样和留样，密封，标记，于常温保存。
5.2试样提取和净化
准确称取试样6g（精确至0.01g）置于50mL具塞离心管中，依次加入4mL水和8mL乙酸乙酯（3.1.3），涡旋提取5min，以4000r/min 离心5min。
转移全部乙酸乙酯层于50mL具塞离心管中，加入正己烷25ml，氯化钠1g涡旋混匀，4000r/min 离心1min，上清液待净化。
5ml丙酮-正己烷（1+9）（3.1.9）淋洗LC-Si硅胶小柱，弃去淋洗液，将待净化溶液转移到固相萃取小柱上，弃去流出液，用5ml丙酮-正己烷（6+4）（3.1.10）洗脱，收集洗脱液，洗脱液于40℃氮气吹干，精密加入600µL复溶液（3.1.8），涡旋混合1min，作为待测液。
5.3 测定步骤
5.3.1 检测卡与金标微孔测定步骤
吸取150µL样品待测液于反应微孔（3.4.2.1）中，抽吸5～10 次使混合均匀，室温温育3 min；温育结束后，将金标微孔中溶液滴加到检测卡（3.4.2.2）上的加样孔中，室温温育5～8 min，对结果进行判定。
5.3.2 试纸条与金标微孔测定步骤
吸取150µL样品待测液于反应微孔（3.4.2.1）中，抽吸5～10 次使混合均匀，室温温育3 min；温育结束后，将检测试纸条（3.4.2.2）吸水海绵端垂直向下插入反应微孔中，室温温育3 min，
从微孔中取出试纸条，去掉试纸条下端的吸水海绵，并于5 min内进行结果判定。
5.3.3 检测卡测定步骤
吸取150µL样品待测液滴加到检测卡（3.4.2.2）上的加样孔中，室温温育5～8 min，对结果进行判定。
5.4质控试验
每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。
5.4.1 空白试验
称取空白试样，按照5.2和5.3 步骤与样品同法操作。
5.4.2 加标质控试验
准确称取空白样品 6 g 或适量（精确至0.01g）置于50 mL 具塞离心管中，加入60 μL氯霉素标准工作液（0.01μg/mL）（3.3.3），使氯霉素浓度为0.1 μg/kg，一式2份，按照 5.2和5.3 步骤与样品同法操作。
6 结果判定要求
通过对比控制线和检测线的颜色深浅进行结果判定。
由于长时间放置会引起检测线颜色的变化，需在规定时间内进行结果判定。
目视结果判读依据如图1所示。
6.1 无效
控制线（C线）不显色，表明不正确操作或试纸条/检测卡无效。
6.2 阳性结果
检测线（T线）不显色或检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色浅，表明样品中氯霉素含量高于方法检测限，判定为阳性。
6.3 阴性结果
检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色深或者检测线（T线）颜色与控制线（C线）颜色相当，表明样品中氯霉素含量低于方法检测限，判定为阴性。
6.4质量控制要求
空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。
7 结论
如被测样品中氯霉素检测结果为阳性时，应采用确证方法进行确证检测。
8 性能指标
8.1 检测限：氯霉素为0.1 μg/kg。
8.2 灵敏度：灵敏度应≥98%。
8.3 特异性：特异性应≥90%。
8.4 假阴性率：假阴性率应≤1%。
8.5 假阳性率：假阳性率应≤10%。
注：性能指标计算方法见附录A
9其他
本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定。
方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前，须对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。
本方法参比标准为GB/T 22338-2008 动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定(包括所有
修改单)。
附录A
定性方法性能计算表
本方法负责起草单位：山西省食品药品检验所。
验证单位：陕西省食品药品检验所、广东省药品检验所、四川省食品药品检验检测院。
主要起草人：李倩、阎安婷、陈煜、杨国伟。