实验三 小鼠脾细胞的分离制备及其活力检测

实验二小鼠脾细胞的分离制备及其

活力检测

材料

1、器材：离心机、手术剪、镊子、平皿、10ml离心管，5ml 注射器等

2、动物：昆明小鼠（25g左右，雄性）

3、试剂：碘伏、红细胞裂解液、Hank’s 液、0.4%台盼兰染液

方法

1、取小鼠一只，置于蜡盘上，颈椎脱臼处死，用碘伏消毒小鼠腹部后，打开腹腔，取出脾，去除周围的结缔组织，放入含有5ml Hank’s的平皿中。

2、用眼科剪将脾一端剪一小口后，将含有5ml Hank’s液的注射器从脾的另一端刺入脾，缓缓注入Hank’s液，即可见脾细胞悬液流入平皿，注意在注射Hank＇s液同时不断转动针头方向，直至脾变苍白为止。

3、将平皿倾斜静置10 min后，用干净吸管吸取细胞液到10ml离心管中，平衡后，离心（1500rpm 10min），将

离心管盖子打开，快速弃上清液，往管底的细胞中加入1ml的红细胞裂解液，充分混匀20秒，立即加入9ml的Hank’s液，混匀，离心（1500rpm 10min），弃上清，将细胞定容到1ml。

4、吸取0.1ml的细胞悬液到干净的试管中，加入等量的0.4%台盼兰染液，混匀，吸取1滴的细胞液到玻片上，加上盖片，显微镜观察：死亡细胞染成蓝色，活细胞不染色。正常情况下，活细胞数应达到95%以上。