丛毛单胞菌CNB_1合成PHA及相关基因的研究
丁香假单胞菌极毛蛋白hrpA基因的克隆与表达
树脂购 自 Ｎ ｖｇｎ ｏａｅ 公司 ， Ｎ Ｄ Ａ聚合酶 、 限制性内切酶、 连接酶、 氨苄青霉素为 Ｔ ｋｒ 公司产品 ， ａａ ａ 异丙基硫代一 ＢＤ半乳糖苷（Ｐ Ｇ 和蛋 白酶 Ｋ购 自Ｓ ｍ 公 司，ｒ ｔ ｅ Ｙ ａｔ ｘ ａｔ Ｏ ＯＤ公司产 品， 。 Ｉ ） Ｔ ｉ ａ ｇ Ｔｙ ｏ 和 ｅｓＥ ｔ ｃ为 Ｘ Ｉ ｐｎ ｒ 其它常规 药 品为国产分析纯． 引物 由生工生物工程（ 上海 ） 有限公司合成 ， 测序 由上海博 尚生物技术有限公司完成．
ｗｔ ｃｍ ｉａｔ ｘｒｓ ｏ ｌｓ ｉ Ｅ ３ ａ 一ｈ Ａ ｐｏ ｕｅ ｓ ｎｐｏ ｉ ｆ ｒＡ Ｈ ｐ ｉ ｏｒｓｏ ｄｎ ｏ ｕａ ｉ ｒ ｏ ｂｎ ｐ ｓ ｎｐａｍ ｄｐ Ｔ ２ （＋ ｈｅ ｎ ｅ ｅ ｉ ｒ ｒｄ ｃｄａｆ ｉ ｒ ｅ ｏ ｘ － ｒＡ ｗｔ ｃｒ ｐ ｎｉｇｍ ｌ ｌ ｒ ｐ ｕｏ ｔｎ Ｔ ｈ ｅ ｃ ｅ
ｗ ｉ ｔｏ ２ ｕ ｅＳ ｆ ８ ｋ ．Ｆ ｒ ｅ ｍｏ ｅ ｈ ｕ ｔ ｒ ｒ ，ｍ ｐ ｒｃ ｍｂ ｎ ｔ ｎ ｐ ｏｅ ｎ ｗ ｓｐ ｒ ｅ ｌ Ｉ ｈ Ａ ｏ ｉａｉ ｒ ｔｉ ａ ｕ ｉ ｄ ｔ ｒ Ｉ ｅ ｏ ｉ ｆ ｌ）
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收稿 日期：０２— ５—１ ２１ ０ ７
修回 日期 ：０ ２—０ ２ ２１ ８— ０
基金项 目： 国家 自然科学基金资助 项 目（０ ７ ４０ ； ３７ １ ） 福建省 自然科 学基金资助项 目（０ ９０ ０ ８２ １Ｊ５４ ） ０ ２０ Ｊ６０ ， １ ０ ９ ． ０ ０ 作者简介： 军（９ ９ ， ， 袁 １７ 一） 女 博士 。 讲师． 研究方向： 微生物分 子生物学． ｍ ｉ ｙ ａ２ ０ ＠１６ ｃ ． 讯作者 汪世华（ ９ ６ ， 教授 ， Ｅ ａ ：ｍ ｉ０８ ２．ｏ 通 ｌｊ ｌ ｎ ｒ １７ 一） 男， 博士生导师． 究方向： 研 微生物学与分子免疫学． ｍ ｉ ｗｈ ｙ ｉ ．ｏ ． Ｅ ａ ： ｓ ｌ ｎ ｃｒ ｌ ｙ ＠ｓ ａ ｎ
PHA对小鼠淋巴细胞的遗传学效应
PHA对小鼠淋巴细胞的遗传学效应赵跃华;卓晓光【期刊名称】《实验动物与比较医学》【年(卷),期】1992(000)001【摘要】植物血凝素(Phytohemagglutinin,PHA)具有刺激淋巴细胞转化的作用,目前已被广泛应用于各类动物和人的末梢血淋巴细胞体外培养的细胞学和细胞遗传学研究,但在实际应用中效果还极不稳定。
目前对小型哺乳动物细胞遗传学的研究,多半采用骨髓细胞直接制备染色体。
我们采用小鼠活体注射PHA,刺激淋巴细胞转化,同时研究了PHA对活体小鼠淋巴细胞的遗传毒理学效应。
在取材上既取骨髓,也取血淋巴细胞,并将血、骨髓观察数据进行了分析比较。
材料和方法1.材料实验动物选用“上生白”小鼠(由安徽省医学科学研究所动物室提供)。
体重20克左右,均为雄性。
试剂为植物血凝素(上海生物制品研究所产)和【总页数】3页(P11-13)【作者】赵跃华;卓晓光【作者单位】[1]皖南医学院;[2]皖南医学院【正文语种】中文【中图分类】R【相关文献】1.长期冻存对毛冠鹿(Elaphodus cephalophus)肺细胞株的细胞遗传学效应 [J], 孔亚慧;张锡然;曹祥荣;薛建丽2.脉冲电磁场对家猪淋巴细胞的细胞遗传学效应 [J], 邹方东;徐柳;王子淑;王喜忠3.应用3H—TdR掺入法检测苷草酸铵对PHA激活小鼠淋巴细胞的影响 [J], 姜国枢;张彤4.应用3H—TdR掺入法检测甘草酸铵对PHA激活小鼠淋巴细胞的影响 [J], 姜国枢;张彤5.接触低浓度甲苯、二甲苯及其混合物对人体血液淋巴细胞的细胞遗传学效应 [J], 王颖;常继增;顾祖维因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
牙龈卟啉单胞菌菌毛融合抗原基因果实特异表达载体的构建及意义
ｅｚｍｅｄｇｓｏ ．Ｔ ｅｒｃｍｂ ａｔ ｅｔ ＢＥ －Ｔ ・ｉ （６ － ７ ａ ｂａ ｅ ｆ ｒ ｍ ｉｇｔｅｒｓｉｔ ｎｅｚｍｅ ｎｙ ｉｅｔ ｎ ｈ ｏ ｉ ｎ ｃ ｏ ｐ Ｉ８Ｃ Ｂ ＦｍＡ ２ ６３ ）Ｗ ｏｔｉｄ ａ ｅ ｎｎ ｔｃ ｏ ｎｙ — ｉ ｅ ｎ ｖ ｒ ３ ｓ ｎ ｔ ｊ ｈ ｅ ｒｉ
疫苗包括全菌疫苗、 菌体成分及核酸疫苗等 ， 转基因
［ ］孟焕新． １ 牙周病学 ［ ． 版 ． Ｍ］３ 北京 ： 民卫 生出版社 ， ０ ：５ 人 ２ ８５． ０
植物疫苗与其相 比有其特有的优势 ， 如可食用 ， 保存
和运输方 便 ， 可大规模种植 等。 自 １９ ９２年 ， ａｏ Ｍ ｓｎ 等－报道 了在转基 因植物中表达 乙肝表面抗原 ， ４ 提 出了转基 因植物生产可食疫苗 的概念 ， 近年来转基 因植物疫苗的研制取得了巨大进步。 目 前利用转基 因植物表达的重组疫苗已有多种 ： 在番茄 中表达狂 犬病毒核蛋 白、 表达 口蹄疫病毒多聚蛋 白及蛋 白酶 等 Ｊ 。更可喜的是乙肝植物疫苗已有人体食用的
Ｃ Ｂ Ｆｍ （ ６ －３ ）ｆ ｇ ｅｔ ｗ ｃ ｅ ｇｔｅ ｉｌ ｅｐａ ｔ ｘ ｒ ｓ ｎｖｃｏ Ｂ １ １ｕ ｄｒｅ ｔ ｏｂｅｒｓ ｉｔｎ Ｔ －ｉ Ａ ２ ６３７ ｒ ｍ ｎ ， ｈ ｈｔ ｎｔ ｅ ｒ ｔ ｌ ｐｅ ｉ ｅｔｒ Ｉ２ ｎ ｅｗ ｎ ｕ ｌ ｅｔｃ ｏ ａ ｉ ｈ ｏ ｈ ｗ ｌｔ ｈ ｎ ｅ ｓｏ ｐ ｄ ｒｉ
基金项 目： 海南省 自然科学基金 资助项 目（０ ０ ６ 。 ８７ ９ ） ・ 通讯作者
２ ２
基 因的番茄果实特异表达载体 ， 并提高抗原基因的 表达量和免疫原性 ， 旨在为研制有效 的转基 因植 物
牙周炎疫苗奠定基础 。 １ 材 料 与方 法
2009年度南京师范大学国家自然科学基金资助项目清单
2009年度南京师范大学国家自然科学基金资助项目清单学院姓名申请项目名称资助类别金额(万元)数科院（6项）纪春岗L-函数，二次域以及其它数论问题面上项目27魏加群有限维猜测及其相关问题与理论研究面上项目24陈二才动力系统中的拓扑压与维数理论面上项目26曹海涛二维光正交码及相关设计的研究面上项目25王丽大型稀疏非对称线性方程组的预处理及高效算法研究面上项目26赫海龙辛几何中的开“格罗莫夫-威腾”不变量青年基金16物科院（4项）童培庆准周期与非周期系统的若干动力学和相关问题的研究面上项目34马青玉基于声偶极振动矢量的磁感应磁声衍射层析成像技术研究面上项目36肖振军B介子物理高阶QCD修正计算和唯象研究面上项目36张宁异型（复合）铁磁∕铁电复合材料中的电致变磁导效应与微振发电面上项目42化科院（7项）黄晓华稀土作用于辣根细胞膜的若干生物无机化学行为研究面上项目35孙培培高活性纳米金属的制备及其催化有机反应的研究面上项目35魏少华酞菁/二氧化硅靶向给药体系的构建及其光动力活性研究面上项目35杨维本不同结构吸附树脂对典型抗生素类有机物的吸附行为与机理面上项目36韩敏金属纳米晶的可控合成、组装及多功能异质纳米结构的构筑青年基金18李卉卉环境中有机污染物分子与人类肿瘤相关DNA作用机制的研究青年基金19张卉纳米界面上蛋白质构象及其电化学性能青年基金20生科院（11项）陈双林黏菌代表种的DNA标识区段及遗传多样性的研究面上项目25戴亦军不同共代谢基质控制嗜麦芽寡养单胞菌的吡虫啉代谢途径的机理研究面上项目35邵蔚蓝一株嗜冷菌及镶嵌其细胞壁的大型颗粒的研究面上项目35蒋国芳黄脊雷篦蝗的种群遗传结构和系统地理格局研究面上项目31马飞脊椎动物miRNA基因的起源与进化分析面上项目32杨州微囊藻表型转化的野外原位研究面上项目32戴传超广谱植物内生菌优化花生连作土壤微生物区系的研究面上项目30陈龙镉激活神经细胞mTOR通路诱导凋亡及雷帕霉素靶向调控抗凋亡分子机理面上项目31陈华群内皮细胞肌球蛋白轻链激酶调节小鼠肾脏发育及其机制面上项目31裴建军嗜热厌氧乙醇杆菌中还原力感应蛋白介导乙醇代谢调控的分子机理青年基金20陈玉清抗菌肽CM4对癌细胞与正常细胞的选择性与机理青年基金20地科院（17项）汤国安基于DEM的黄土高原地貌形态空间格局研究重点项目150汪涛基于知识网络视角的高科技园区产业空间集聚研究——以苏南为例面上项目30黄震方基于文化视角的区域旅游发展机制与模式研究——以长江三角洲地区为例面上项目30方斌我国东部地区耕地利用的综合优化模式研究——以浙江省浦江县为例面上项目30李云梅面向湖泊水色遥感的多源数据融合与生成研究面上项目35刘学军融合地形结构的DEM质量分析研究面上项目35张雪英面向GIS的文本空间关系解析机制研究面上项目35赵媛中国石油资源流动空间格局演化规律与形成机制研究面上项目36吴江滢辽宁暖和洞年纹层状石笋全新世东亚季风气候记录与驱动机制研究面上项目49张茂恒中更新世以来大九湖盆地泥炭沉积的气候地层学研究面上项目50刘金娥互花米草对苏北盐沼沉积物有机碳库功能格局影响机理面上项目49齐相贞不同繁殖方式的外来入侵植物的扩散机制研究青年基金18周年兴旅游地景观格局演变机制及优化研究：以武陵源为例青年基金18刘会玉植物入侵对不同尺度栖息地时空变异的响应及其预测青年基金20杨昕基于DEM的黄土高原流域边界剖面谱研究青年基金18吴明光基于庞加莱对偶的三维自由拓扑模型青年基金18张卡基于非下采样Contourlet变换的多源影像自动匹配方法研究青年基金18电自院（1项）田恩刚网络控制系统的随机建模、分析与综合面上项目19动院（2项）杨宏旻烟气中单质汞的等离子放电协同光催化氧化特性研究面上项目30王延华生态土壤污水处理系统温室气体的量化和产生机制研究—太湖流域为例面上项目20请项目主持人按照国家自然科学基金项目及经费管理办法，填报项目计划书。
铜绿假单胞菌中一个新的吩嗪合成调节基因
铜绿假单胞菌中一个新的吩嗪合成调节基因孔丽萍;梁海华;董兆麟;段康民;沈立新【期刊名称】《微生物学报》【年(卷),期】2008(48)9【摘要】[目的]在次抑制浓度四环素条件下,研究铜绿假单胞菌phzAl操纵子的调节基因及调节途径.[方法]对转座突变库中phaAl操纵子表达发生变化的突变体,进行随机PCR、基因测序及比对,确定突变位点.并以发光杆菌的荧光素酶基因操纵子luxCDABE为报道基因,研究基因调节作用及调节路径.[结果]在两株突变体PAM0487和PAM0487R中phzAl操纵子的表达降低,这两株突变体的突变基因确定为假定钼元素转运蛋白调节子PA0487基因.[结论]PA0487是phzAl操纵子表达的一个新的正向调节子,并对密度感应系统相关基因的表达有凋节作用.【总页数】6页(P1154-1159)【作者】孔丽萍;梁海华;董兆麟;段康民;沈立新【作者单位】西北大学生命科学学院,西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室,西安,710069;西北大学生命科学学院,西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室,西安,710069;西北大学生命科学学院,西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室,西安,710069;西北大学生命科学学院,西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室,西安,710069;西北大学生命科学学院,西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室,西安,710069【正文语种】中文【中图分类】Q933【相关文献】1.完全被水淹没的深水稻幼苗中一个新的ACC合成梅基因的快速诱导 [J], ZhongyiZhou;邱敦莲;等2.烟草中一条新的S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆及表达分析 [J], 余涛;支立峰;彭论;李阳生;朱英国3.香蕉中一个新的S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆及采后表达分析 [J], 贾彩红;林水玉;张建斌;刘菊华;金志强;徐碧玉4.多源信息融合中一种新的证据合成算法 [J], 李昌玺;周焰;王盛超;苏俊生5.蒿甲醚合成母液中一个新成分的分离和鉴定 [J], 谢笑天;郑萍;张光耀;杨明惠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
豚鼠气单胞菌CB101的GIcNAc利用系统及调控蛋白NagC对chil转录的调控
Ｎ ｃ另 外 ， Ａ． 这两 株 突变株 均不需胶 体几 丁质 的诱 导 即可 在液 体 Ｌ Ｂ培 养基 中分 泌大 量 的几 丁质 酶 ． ａ—Ｃ ＴｉＰ Ｒ ｌ 和 基 因测 序结 果表 明 ，８和 Ｌ Ｏ转座 子 的插 入 突变位 置发 生在 凡 基 因中 ． Ｌ Ｉ 经分 析 得知 ， 眦 基 因 的突
始转录表达 ， Ｇｃ Ａ 进行降解利用．ａＤ功能仍是未知 ． 对 ｌ ｃ Ｎ ｎｇ 豚 鼠气单 胞 菌 Ｃ １１ Ｂ ０ 是从 厦 门海域筛 选 出来 的几 丁质 高效 降解菌 ． 可 以 以几 丁质 为惟 一 营养 源进 行 它
生长 ． 们 已经成 功克 隆表达 了其 中一种 分子 量 为 ９ ｋ 我 ２ ｄ的几 丁质 酶 ｃｉ ５． 了能筛 选 到 具 有不 同几 丁质 ｈＩ 为 ＿ Ｊ
变导 致 了 Ｇ ｃ Ａ ｌＮ ｃ在胞 内不能被 脱 乙酰基 而利 用 ， 而 在 添加 几 丁 质液 பைடு நூலகம்培 养 基 中 Ｇｃ Ａ 从 ｌＮ ｃ大 量 积 累． 由于 Ｐｕ ｂｉ ｌ ｒ ｅ的研 究证 明了大肠杆 菌 Ｎ ｇ ｍ ｇ ａＣ蛋 白对很 多功 能 基 因 的转 录有 调控 作 用 ， Ｌ Ｏ几 丁质 酶 由原来 需 而 Ｉ
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第２ ７卷
第 ３期
台
湾
海
峡
Ｖ ０． ７． Ｎｏ ３ １２ ． Ａｕ ｇ．， ０ ２ ０８
２０ ０８年 ８月
Ｊ ＯＵＲＮ ＣＥ ＡＬ ＯＦ Ｏ ＡＮＯＧＲ ＨＹ Ｎ Ｔ ＷＡＮ Ｔ Ｉ ＡＰ Ｉ ＡＩ Ｓ ＲＡ Ｔ
Ｇｃ Ａ 是一种与葡萄糖 同样优秀的碳源 ， ｌ ｃ Ｎ 并且 由于氨基的存在， 也发挥着氮源的作用…． 大肠杆菌吸收和降
解 Ｎ 乙酰基葡 萄 糖胺 的基 因有 ５个 ：ａ Ｅ ｎｇ ｎｇ 、ａＣ和 ｎｇ 首先 通过 专一 的 ｐ 一 ｎｇ 、ａＢ、ａＡ ｎｇ ａＤ． 如转 运 系统 Ｎ ｇ ａＥ磷
产电基因工程菌的构建、菌株及其应用[发明专利]
![产电基因工程菌的构建、菌株及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/10a610e0e87101f69f3195ce.png)
专利名称：产电基因工程菌的构建、菌株及其应用
专利类型：发明专利
发明人：陈怡露,郑涛,施冬艳,许琳,雍晓雨,沈海波,曹琳,徐俊申请号：CN201310033013.4
申请日：20130129
公开号：CN103184185A
公开日：
20130703
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一株产电基因工程菌菌株，分类命名为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）PAO1-phzM，已保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCC NO：M：2013001。
该菌株以铜绿假单胞菌PAO1菌株为宿主菌，将甲基转移酶基因phzM插入
pBBR1MCS-5载体的EcoRI和SpeI酶切位点之间，再将重组质粒导入表达宿主Pseudomonas aeruginosa PAO1中获得。
本发明采用基因工程手段将绿脓素合成途径中关键基因-甲基转移酶基因phzM在铜绿假单胞菌中进行重组表达，使重组铜绿假单胞菌能够多产绿脓素2.7倍，从而大幅提高产电能力，与原始菌株相比输出电压提高了2倍。
申请人：南京工业大学
地址：211816 江苏省南京市浦口区浦珠南路30号
国籍：CN
代理机构：南京经纬专利商标代理有限公司
代理人：李纪昌
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一株具有抗真菌活性的食酸丛毛单胞菌的分离和鉴定
© 1994 Electronic Publishing House. All rights reserved.
收稿日期 : 2002 07 08 基金项目 : 国家自然科学基金资助项目 (30070016) ; 国家 863 攻关课题 (2001AA234051) 作者简介 : 秦磊 (1974 ) , 在读博士 。导师 : 赵国屏 (1948 ) , 教授 , 从事分子微生物学研究 。E2mail : guoping z @hotmail1com
笔者从土壤中分离到一株对玉米小斑病菌具有明显抑制作用的细菌 , 其抑制作用甚至强于对玉米小 斑病菌有较强抑制作用的吸水链霉菌应城变种10 22[7] 。本文通过 16S RNA 序列测定和生化指标等测 定 , 鉴定其为食酸丛毛单胞菌 ( Delftia acidovorans , 又称 Comamonas acidovorans ) [8] 。
以细菌生化试验鉴定仪及配套革兰氏阴性菌检测试验卡进行生化特性鉴定 , 共检测 31 项生化指标 。 并参照《伯杰氏细菌鉴定手册》第九版[10]进行了补充生化试验 。 115 STR A ( G + C) %的测定
参照《常见细菌系统鉴定手册》[11]方法进行 ( G + C) %测定 。 116 16S RNA 的 PCR 扩增 、序列测定和细菌分类地位的初步确定
© 1994-2007 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
第 4 期 秦磊等 : 一株具有抗真菌活性的食酸丛毛单胞菌的分离和鉴定
·73 ·
2 结 果
211 STR A 的培养特性 STR A 可以在 MM、LA 、SFM、PDA 等多种固体培养基上生长 , 液体培养可以适应 MM、LB 等培养 基 , 可以在较宽温度范围下生长 , 最适生长温度 30 ℃。在含脯氨酸的 MM 培养基上生长丰润 , 菌落黄 色半透明 , 边缘不整齐 , 菌落中心有一点状突起 。随着培养时间延长 , 点状突起会扩散成环 , 老年菌落 对光观察可见 “年轮状”生长痕迹 。菌落生长无明显中止现象 。在无脯氨酸的 MM 培养基上生长贫瘠 ,
一种水丛毛单胞菌菌株、生防菌剂及其制备方法与应用[发明专利]
![一种水丛毛单胞菌菌株、生防菌剂及其制备方法与应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/7e2ff5e8b52acfc788ebc9d4.png)
专利名称：一种水丛毛单胞菌菌株、生防菌剂及其制备方法与应用
专利类型：发明专利
发明人：张磊,韩先旭,丁浩然,郭威,牛冬冬,李根
申请号：CN202011584657.9
申请日：20201228
公开号：CN112831430A
公开日：
20210525
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种水丛毛单胞菌菌株，命名为水丛毛单胞菌Ca30，保藏日期为2020年11月9日，保藏编号：CGMCC NO.21152；本发明的水丛毛单胞菌Ca30，生产工艺简单、培养时间短、成本低，且该菌株可以通过简单、快捷低成本的制备方法获得防治水稻纹枯病的生防菌剂，经过试验证明，本发明提供的生防菌剂在离体条件下处理水稻叶片后使得水稻纹枯病的发病面积减少了
94.57％，温室条件下对水稻纹枯病的防治效果达到了65.26％，其防治效果与常用化学农药噻呋·苯醚甲持平，其抑菌效果非常明显。
申请人：镇江敖来生物科技有限公司
地址：212000 江苏省镇江市新区丁卯经十五路99号科技产业园发展区中心研发区11号楼YFQ-11-0201室
国籍：CN
代理机构：镇江基德专利代理事务所(普通合伙)
代理人：邓月芳
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PHA产生菌的筛选与鉴定
PHA产生菌的筛选与鉴定作者：何宗均田阳梁海恬来源：《天津农业科学》2017年第04期摘要：从15个污泥样品中分离筛选出5株PHA产生菌，其中A-0603-11为产PHA最好菌株，经苏丹黑染色镜检发现有2～3个PHA颗粒，黑色部分的体积占菌体50%以上。
生理生化试验表明，该菌为革兰氏阴性杆状，单鞭毛运动，好氧，氧化酶阳性，接触酶阳性，不发酵D-葡萄糖和其它糖类。
经分子生物学鉴定，该菌为Delftia sp.，属于Comamonadaceae丛毛单胞菌科。
关键词：PHA；菌株；筛选；鉴定中图分类号：Q93-331 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2017.04.006Screening and Identification of PHA Producing BacteriaHE Zongjun， TIAN Yang，LIANG Haitian（Tianjin Institute of Agriculture Resources and Environmental Science， Tianjin 300192，China）Abstract： A test was conducted in that 5 PHA producing bacterium strains isolated from 15 samples of sludge， and the A-0603-11 strains was the best for PHA production among them. By microscopy with staining on Sudan black dye， the A-0603-11 strains was found that they had two or three particles of PHA， and the black part volume accounted for over 50% of the bacteria. The physiological and biochemical experiments showed that the bacteria was in gram-negative rods，single flagella， aerobic， not fermentation d-glucose and other sugars， and oxidase was positive. According to the molecular biology， the A-0603-11 bacteria was Delftia sp. and it was belong to the Comamonadaceae fetlock division of bacterium.Key words： PHA；bacteria；screening；identificationPHA（聚羟基脂肪酸酯，Polyhydroxyalkanoate）是广泛存在于多种微生物及其它生物体内的一种细胞内涵物。
一种来源于人苍白杆菌的EPSP合酶基因及其应用[发明专利]
![一种来源于人苍白杆菌的EPSP合酶基因及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/c8b16210941ea76e59fa0435.png)
专利名称：一种来源于人苍白杆菌的EPSP合酶基因及其应用专利类型：发明专利
发明人：夏勉,李毅,徐海英,徐沫文,张斌,何峰,郑辰
申请号：CN201310233524.0
申请日：20130613
公开号：CN103290036A
公开日：
20130911
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种对草甘膦具有高抗性的来源于苍白杆菌的EPSP合酶基因及其应用。
本发明还提供了这个基因的基因工程中间体（如，表达盒、载体和细胞等），获得具有草甘膦抗性的植物的方法和应用，并提供了判断植物是否具有草甘膦抗性的鉴定方法，这将在抗草甘膦植物的研究和开发中发挥重要作用。
申请人：北京未名凯拓作物设计中心有限公司
地址：100085 北京市海淀区上地西路39号北大生物城
国籍：CN
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丛毛单胞菌菌株CNB-1在基因和蛋白质组学水平对砷酸盐压力的反应
译文丛毛单胞菌菌株CNB-1在基因和蛋白质组学水平对砷酸盐压力的反应原文来源：Yun Zhang,Ying-Fei Ma, Su-Wei Qi,Bo Meng,Muhammad Tausif Chaudhry,Si-Qi Liu Shuang-Jiang Liu. Responses to arsenate stress by Comamonas sp. strain CNB-1 at genetic and proteomic levels. Microbiology .2007,153:3713–3721目录译文 (1)1引言 (3)2方法 (4)2.1细菌菌株，质粒和生长条件 (4)2.2基因操作 (5)2.3通过丛毛单胞菌菌株CNB-1和大肠杆菌突变株的互补作用确定砷酸盐的抗性。
(6)2.4RNA分离和RT-PCR (6)2.5双向电泳和图像分析 (6)2.6胰蛋白酶胶内酶解 (7)2.7通过基质辅助激光解析电离飞行质谱技术（MALDI-TOF/TOF MS）鉴定蛋白质 (7)2.8序列分析 (8)3结论 (8)3.1生物信息学分析ars 操纵子在质粒pCNB1上的直系同源基因和丛毛单胞菌菌株CNB-1在砷酸盐存在下的生长情况 (8)3.2基因arsPCom, arsBCom和arsCCom的存在增加了大肠杆菌对砷酸盐的抗性，并且蛋白质ArsPCom代表了一种新的砷酸盐还原酶。
(9)3.3基因arsPCom 和arsCCom在砷酸盐存在下都转录并且属于同一转录单元 (10)3.4砷酸盐存在和不存在下培养的菌株CNB-1细胞的蛋白质指纹图谱以及差异表达蛋白质的鉴定 (11)3.5压力反应，蛋白质再次折叠和核糖体蛋白质 (12)3.6碳水化合物代谢和能量产生。
(12)3.7膜运输系统 (13)4讨论 (13)鸣谢 (14)参考文献 (14)丛毛单胞菌菌株CNB-1是一株能降解氯硝基苯的细菌，已被证明具有比突变株CNB-2更高的砷抗性。
牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白fimA基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化二
牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白fimA基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化（二）5）金属螯合亲和层析用于蛋白质的复性在基因工程技术中，表达的重组蛋白多以包涵体形式存在，蛋白质经常会错误折叠而丧失活性，这一难题长久以来都没有得到很好的解决。
高浓度的变性剂可以溶解包涵体，然后控制变性剂除去的速度，有时需要添加适当的氧化/还原试剂，蛋白质可以逐步折叠复性。
通常使用的复性方法有三种，分别是稀释复性、透析复性和层析复性。
（1）稀释复性：直接把溶解的蛋白质稀释于复性缓冲液中。
这种方法操作简单，适于小规模使用，但只适于浓度极低的蛋白质复性，否则会有大量聚集体形成。
（2）透析复性：采用透析膜通过逐渐降低外透液浓度来控制变性剂去除速度。
这种方法速度慢、耗时长，不适合大规模使用，有时易形成无活性蛋白聚集体。
（3）层析复性：使蛋白质可逆吸附在固相介质上，例如离子交换层析介质、金属螯合亲和层析介质等，可以避免伸展的多肽分子之间形成聚集体。
金属螯合亲和层析(IMAC)是一种有效的纯化和复性蛋白质的层析方法。
在高浓度变性剂存在的情况下，组氨酸尾仍旧具有吸附在金属螯合亲和层析介质上的能力，所以可在IMAC介质上同时实现复性与纯化[112-116]。
蛋白质吸附在IMAC介质后，先逐步降低变性剂的浓度，使蛋白质折叠，然后提高咪唑浓度把折叠后的蛋白质洗脱出来。
对于TNF蛋白，使用IMAC获得了90%的复性收率[73]。
2.6 小结大肠杆菌系统由于其遗传学、生物化学和分子生物学方面已充分被人们了解而成为表达许多异源蛋白质的首选表达系统。
在过去的20多年中，用各种载体系统在大肠杆菌中表达了数百种重组蛋白。
融合标签不但可提高重组蛋白的产量，还可增强重组蛋白质的可溶性。
融合标签技术的发展使重组蛋白质的纯化更加快速、简便。
随着金属螯合亲和层析技术的不断发展和改进，目前，固定化金属螯合亲和层析技术已成为蛋白质，特别是基因重组蛋白和多肽分离纯化最有效的工具之一。
3_脱氢莽草酸生物合成的代谢工程
中国生物工程杂志 China B iotechnology, 2007, 27 (12) : 109～113
32脱氢莽草酸生物合成的代谢工程
毛赟赟 1, 2 张部昌 2 梁 龙 13
(1 军事医学科学院生物工程研究所 北京 100071 2 安徽大学生命科学学院 合肥 230039)
收稿日期 : 2007208204 修回日期 : 2007210217 3 通讯作者 ,电子信箱 : ll@ bioinf. bm i. ac. cn
但真正有商业价值的高产生物合成途径 DHS是莽草酸途径的中间代谢产物 ,莽草酸途径 广泛存在于植物 、微生物中 , 但在哺乳动物中未曾发 现 。在大肠杆菌中 ,莽草酸途径生物合成 DHS 见图 1: 葡萄糖经糖酵解和磷酸戊糖途径分别产生磷酸烯醇式 丙酮酸 ( PEP)和赤藓糖 242磷酸 ( E4P) , PEP 和 E4P 缩 合形成 32脱氧 2D 2阿拉伯庚酮糖 272磷酸 (DAHP) ;然后 DAHP 在 32脱氢奎尼酸合成酶催化作用下生成 32脱氢 奎尼酸 (DHQ ) ;最后 DHQ 在 32脱氢奎尼酸脱水酶作用 下形成 DHS。 1. 2 D HS 生物合成涉及的酶及其编码基因 [ 7] 在大肠杆菌中 DHS 的生物合成途径共涉及 3 种 酶 : 32脱氧 2D 2阿拉伯庚酮糖 272磷酸 (DAHP)合成酶 、32 脱氢奎尼酸合成酶 、32脱氢奎尼酸脱水酶 。DAHP 合成 酶由 a roF、a roG 和 a roH分别编码的 3个 DAHP 合成酶 同工酶组成 ,且它们分别受到代谢终产物芳香族氨基 酸的反馈抑制 。 aroB 编码 32脱氢奎尼酸合成酶 ,负责 将 DAHP转化为 DHQ。32脱氢奎尼酸脱水酶则由 a roD 基因编码 ,催化 DHQ 脱水形成 DHS。
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47卷 4期2007年8月4日微生物学报Acta Microbiologica Sinica47(4):616～6214August 2007基金项目:中国科学院院长青年基金项目资助3通讯作者。
T el :86210264807581;Fax :86210264807421;E 2mail :jiangcy @作者简介:应娇妍(1978-),女,宁波人,博士,从事环境微生物应用研究工作。
E 2mail :enjoybd @ 收稿日期:2006211210;接受日期:2007201212;修回日期:2007206206丛毛单胞菌CNB 21合成PHA 及相关基因的研究应娇妍1,2,杨苏声2,刘双江1,姜成英13(1中国科学院微生物研究所 北京 100101) (2中国农业大学生命科学学院 北京 100083)摘 要:分析了丛毛单胞菌(Comamonas sp.)C NB 21菌株在不同条件下合成聚羟基烷酸(polyhydroxyalkanoic acids ,PH As )的组分和含量,同时克隆了与PH A 合成相关的基因。
结果表明,该菌可以多种短链有机酸及醇类为碳源合成PH A 多聚物或共聚物,以戊酸和1,42丁二醇为底物时,可达菌体干重的57%;同时发现小分子醇类的存在能显著促进PH A 的合成,推测与醇类氧化过程中提供了更多的还原力有关。
为了克隆相关基因,利用已知phaC 的保守区简并引物筛选基因组文库,将得到的阳性克隆质粒测序,发现phaC 、phaA 、phaB 组成一个基因簇phaC 2A 2B 。
将phaC 、phaA 、phaB 连接到pET 载体在E .coli 中共表达,重组E .coli 菌株能合成PH A ;将这3个基因单独连接到pET载体,在E .coli 中表达后检测到相应酶活,分别约为原始菌株的411、71和2882倍。
关键词:丛毛单胞菌(Comamonas );聚羟基烷酸(PH A );生物塑料;高分子聚酯中图分类号:Q75;Q93 文献标识码:A 文章编号:000126209(2007)0420616206 聚羟基烷酸(polyhydroxyalkanoic acids ,PH As )是存在于很多微生物体内的一种高分子聚酯物质,作为高分子材料具有多方面的优点,尤其是其可降解性和生物相容性引起了很大的关注[1]。
许多原核微生物都可以在碳源过剩而其它生长条件受限制的情况下在体内合成PH A ,目前已经在90多个属的微生物体内发现PH A ,约150种不同结构的羟基脂肪酸可以作为PH A 的单体,已从40多个菌株中克隆到了PH A 聚合酶的基因[2]。
PH A 单体结构的多样性使得PH A 具有多种多样的性能,可以适应不同的需要。
但是由于生产PH A 的成本较高,目前得到大规模生产的品种主要为聚羟基丁酸PH B (polyhydroxybutyric acid ,PH B )和聚羟基丁酸-戊酸共聚物[poly (hydroxybutyrate 2co 2hydroxyvalerate ),PH BV ][3,4],同这些已有的PH A 聚合物相比,含有42羟基丁酸(4H B )的PH A 多聚物具有抗张强度强、断裂伸长率高等优点,因此关于这类聚合物的研究受到了格外的重视。
已有报道,Delftia acidovorans (原Comamonas acidovorans )和睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni )可以合成含有4H B 的聚合物[5～11],但是关于它们合成PH A 代谢途径的研究很少。
本实验室分离得到一株降解氯代硝基苯的菌种Comamonas strain C NB 21[12],随后的研究进一步发现C NB 21菌株还能合成PH A 。
本文报道C NB 21菌株不同情况下C NB 21合成PH A 的能力,并克隆了PH A合成相关基因,结果如下。
1 材料和方法111 材料11111 主要试剂和仪器:DNA 聚合酶、T4连接酶、DNA 凝胶回收试剂盒均购自北京经科宏达生物科技有限公司;PCR 产物纯化试剂盒购自鼎国公司;T 2easy vecter 购自Promega 公司;其它化学试剂均为分析纯。
BH 22光学显微镜(Olym pus 公司),H 2600A 透射电镜(Hitachi 公司),UV 22010紫外分光光度计(Shimadzu 公司),DU800T M 分光光度计(Beckman 2coulter 公司),T 2G radient PCR 仪(Biometra 公司)。
11112 菌株、质粒和培养条件:本实验中用到的菌株及质粒见表1。
C NB 21菌株的基因组文库为本研究室构建[13]。
如无特殊说明,大肠杆菌(E scherichia coli )各菌株所用培养基为LB 培养基,根据质粒不同,添加50mg ΠL 的氨苄或卡那霉素,37℃培养。
菌株C NB 21在液体培养时摇床转速为150r Πmin ,培养温度为30℃。
11113 PCR 引物:本实验用到的PCR 引物的序列和用途见表2。
表1 本实验中使用的菌株及质粒T able1 Bacterial strains and plasmids used in this studyBacterial strains or plasmid Relevant phenotype S ource or referenceComamonas B21Separated from Activated S ludge Wu et al1[11]E.coli BL21(DE3)Express host S tratagenepET221a(+)Express vector N ovagenpET228a(+)Express vector N ovagenpET212C1pET221a(+)connected with phaC gene1this studypET212AB pET221a(+)connected with phaAB gene this studypET212C2AB pET221a(+)connected with phaC、phaAB this studypET282C2pET228a(+)connected with phaC gene2this studypET212A pET221a(+)connected with phaA gene this studypET212B pET221a(+)connected with phaB gene this study表2 本实验使用的PCR引物T able2 Primers used in this experimentsNames of primer Characteristics and utilities S equences of primer(5′→3′)P1Degenerate primer of phaC upstream conservative region CC(CΠG)CC(CΠG)TGG A T C AA(TΠC)AAG T(TΠA)(TΠC)T A(TΠC)A T C P2Degenerate primer of phaC d ownstream conservative region(GΠC)AG CC A(GΠC)G C(GΠC)G T CC A(AΠG)T C(GΠC)GG CC ACC A) CP1U pstream primer1of phaC A T AGG A T CCCCGG T CG CTTG CCTTG ACP2D ownstream primer1of phaC AGGG AG CT CT C AGG CTTTTG AC AG AACCPF U pstream primer2of phaC CG CGG A T CCA TGAA TTTTG ACCCG AG CTGA BP1U pstream primer of pha A2B T CGG AG CT CA TGG AAG AC A T CG TT A T CA BP2D ownstream primer of pha A2B A T CT AAG CTTTTG CTG AACCG AG TTTTBP1U pstream primer of phaB CG CGG A T CCA TGGG T C AG AAAG T AG CGBP2U pstream primer of phaB CG CGG A T CCTG CTG AA TG CCTG AAAA N ote:The start codons are Underlined.112 CNB21中合成的PHA分析11211 培养方法:分为一步培养法和二步培养法。
一步培养时,以矿物盐(MS)培养基[6]为基础培养基,添加015%的碳源,接种培养2d后测定PH A组分及含量。
二步培养时,C NB21首先在100m L NB[9]培养基中培养12h,然后离心收集菌体,转入无氮MS培养基2d后测定PH A组分及含量。
11212 PH A组分与含量的分析:取适量干菌体或标准PH A样品,添加01025%的苯甲酸钠作为内标,溶解到2m L氯仿中,加入等体积的硫酸(15%):甲醇(85%)溶液,95℃酯化2～3h,用2m L水萃取,取下层氯仿相,过滤,取1μL进样,用岛津2010气相色谱仪测定PH A组分及含量。
113 基因组文库的筛选及测序分析利用PH A聚合酶基因的保守区简并引物P1和P2[14]从C NB21基因组中扩增phaC片断,以其为对照,用菌落PCR的方法筛选基因组文库。
菌落PCR 模板采用碱裂解法制备。
为减少PCR的数量,先以10个克隆为一组进行筛选,再将阳性组进行逐一筛选。
将得到的阳性克隆测序,测序结果在NC BI上进行BLAST比对分析。
114 基因的克隆和表达为了分析各基因功能,根据测序结果,从阳性质粒中PCR扩增目的片段并引入酶切位点,将各基因单独或一起连接到pET221a(+)或pET228a(+)载体,转化E.coli BL21(DE3)菌株进行表达。
构建质粒见表1,所用PCR引物见表2。
115 重组E.coli菌株合成PHA能力的分析重组E.coli BL21(DE3)菌株在LB培养基中37℃培养至OD600为016左右,加入011mm olΠL IPTG, 30℃诱导3h,之后加入1%葡萄糖,继续培养2d。
PH A的产量测定如前所述。
116 酶活测定和SDS2PAGE11611 粗酶液制备:C NB21在100m L的LB培养基中30℃培养12h,重组E.coli菌株在100m L LB培养基中37℃培养至OD600为016左右,加入不同浓度IPTG(0,011,1mm olΠL)30℃诱导3h,离心30m L菌液收集菌体,019%NaCl洗涤后悬浮于1m L pH810的10mm olΠL的P BS缓冲液中,超声破碎后,13000rΠmin 离心10min,上清液即为粗酶液。