中草药提取有效成分及抑菌试验的实验方案
中草药中有效成分的提取与研究
中草药中有效成分的提取与研究中药经过了数千年的实践锤炼，成为中华文化的重要组成部分。
中草药作为传统医学的重要药材之一，一直以来被广泛应用于治疗各种疾病。
但是，由于中草药性质复杂，其中有效成分含量低，同时存在着同种草药不同产地、品种和生产过程的影响，直接应用中草药具有一定的局限性。
因此，将有效成分从中草药中提取出来更方便便捷的应用就显得尤为重要。
1.有效成分的提取中草药的有效成分提取主要通过三种方法：常规提取法、物理提取法和生物学提取法。
常规提取法是目前应用较为广泛的一种提取方法。
传统的提取方法是采用水、乙醇、乙醚等有机溶剂抽取中草药中的有效成分，成功地提取了许多有效成分。
但这种提取方法也存在一些问题，例如效率低、有机溶剂易挥发和有毒等问题，影响对提取物的应用和成分的准确性。
物理提取法是一种新型的中草药有效成分提取方法，包括超声波提取法、微波提取法、热水处理和高压萃取等。
这种方法比常规提取法更加高效，不需要使用有机溶剂，但需要更加精细的设备。
生物学提取法利用某些微生物在自然界中分解中草药，释放出其中有效成分的特性。
生物学提取法具有对药材破坏小，周期短、操作简便等特点，但需要进行长期的研究和探索。
2.有效成分的研究提取中的有效成分是中草药应用的关键，只有对其进行深入的研究，才能更好地应用于治疗各种疾病。
厚朴中药材中的有效成分莲花烷，可用于治疗心脏病。
对莲花烷的研究表明，它具有抗心肌缺血、抗心肌细胞损伤等多种作用。
野生山参中的有效成分人参皂苷，具有抗癌、减肥、心血管保健等多种作用。
对人参皂苷的研究表明，它具有保持血管弹性，扩张冠状动脉，促进血液循环等作用。
对中草药中的有效成分进行深入的研究，有助于更好的发挥中药材的治疗作用。
同时，如果更好地利用科技手段和化学技术，也能够更加方便准确地从中草药中提取有效成分，提升中世界同的治疗效果。
3.现代科技在中草药中的应用随着科技的不断发展和进步，现代人已经不再依赖中草药来治疗疾病。
中药提取组合物(胶囊)对念珠菌及曲霉的体外抗菌实验
中药提取组合物(胶囊)对念珠菌及曲霉的体外抗菌实验【摘要】目的探讨中药提取组合物(桂皮油、藿香油)胶囊对致病性念珠菌、曲霉的体外抗菌活性。
方法应用试管药基法，测定中药提取组合物胶囊对念珠菌(白念、热带、克柔氏)曲霉(烟曲、黄曲)的最小抑菌浓度(MIC)。
结果中药提取组合物MIC范围为白念珠菌(桂皮油0.06～0.52 mg/ml、藿香油0.03～0.26 mg/ml)、热带念珠菌(桂皮油0.13～1.03 mg/ml、藿香油0.06～0.52 mg/ml)、克柔氏念珠菌(桂皮油0.13～0.52 mg/ml、藿香油0.06～0.26 mg/ml)、烟曲霉(桂皮油0.13～0.52 mg/ml、藿香油0.06～0.26 mg/ml)、黄曲霉(桂皮油0.26～0.52 mg/ml、藿香油0.13～0.26 mg/ml)。
结论中药提取组合物胶囊对致病性念珠菌(白念、热带、克柔氏)曲霉(烟曲、黄曲)体外均有很强的抗菌活性，为开发中药治疗侵袭性真菌病提供理论依据。
【关键词】桂皮油; 藿香油; 念珠菌; 曲霉; 体外抗菌实验近年来，原发性或继发性深部真菌感染发病率迅速上升，尤其是一些严重性消耗性疾病如恶性肿瘤、血液病、肺部感染、实体器官移植等是其死亡的主要因素之一。
由于现今临床使用的药物多系化学合成如氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、卡泊芬净、两性霉素等，虽然治疗深部真菌感染发挥着重要的作用，但长期使用这类药物，副作用较大，价格昂贵，因此，寻找和开发抗致病性深部真菌的中药制剂，是祖国医药研究的方向。
为此，对中药提取组合物胶囊进行体外抗真菌活性实验，为治疗深部真菌感染提供理论基础。
1 材料1.1 药物来源香桂胶囊由河北医科大学制药厂研制，批号0801-03，其内含物由中药提取物(桂皮油、藿香油)组成。
氟康唑胶囊由德国辉瑞制药有限公司提供，批号7073402。
1.2 菌种临床分离株来自河北医科大学第二医院皮肤科真菌室，均为致病性深部真菌(痰标本直接镜检可见大量菌丝及芽生孢子，培养有念珠菌生长，经鉴定为白念珠菌、热带念珠菌、克柔氏念珠菌。
苍耳、狼毒等植物提取物抑菌活性的初步研究
苍耳、狼毒等植物提取物抑菌活性的初步研究苍耳、狼毒等植物提取物抑菌活性的初步研究引言：随着抗生素的广泛应用，细菌耐药性问题逐渐凸显，使得寻找新的抗菌剂成为亟待解决的重要问题。
天然植物提取物作为一种潜在的抗菌剂，近年来引起了广泛的研究兴趣。
其中，苍耳、狼毒等植物提取物因其丰富的生物活性成分而备受关注。
本研究旨在通过对苍耳、狼毒等植物提取物的初步研究，评估其抑菌活性，为寻找新的天然抗菌剂提供实验基础。
方法：1. 样品准备：从天然野生苍耳和狼毒植物中采集新鲜的叶片和茎，除去杂质，洗净并晒干至恒定质量。
2. 植物提取物制备：将晒干的植物材料研磨成粉末，并采用乙醇浸提法，将植物粉末与乙醇混合，静置24小时，然后用滤纸过滤提取液。
3. 微生物菌株筛选：选择常见的致病菌菌株，包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌。
4. 高通量抑菌筛选：采用微量稀释法，根据菌落形成情况测定最小抑菌浓度（MIC），评估植物提取物对不同菌株的抗菌活性。
结果：通过高通量抑菌筛选，我们发现苍耳和狼毒提取物对所选菌株均有不同程度的抑菌活性。
其中，狼毒提取物对大肠杆菌的MIC值为1：32，对金黄色葡萄球菌的MIC值为1：64，对白色念珠菌的MIC值为1：16。
而苍耳提取物对大肠杆菌的MIC值为1：64，对金黄色葡萄球菌的MIC值为1：128，对白色念珠菌的MIC值为1：32。
所有的MIC值均显示出植物提取物对细菌具有抑制效果。
讨论：苍耳和狼毒植物提取物具有较强的抑菌活性，这可能归因于其富含的生物活性物质，例如鞣质、生物碱、单萜类化合物等。
这些物质被广泛认为是天然抗菌剂的重要成分，具有较高的抗菌活性和低的毒性。
因此，苍耳和狼毒植物提取物有望成为寻找新的天然抗菌剂的候选物。
然而，本研究还存在一些限制。
首先，我们只针对了常见的致病菌菌株进行了抑菌活性研究，而对其他细菌如需进一步研究。
其次，我们只测定了最小抑菌浓度（MIC），而未进行更详细的抗菌机制研究。
抗菌中药实验报告模板
一、实验目的1. 探讨中药在抗菌作用方面的应用潜力。
2. 测试特定中药提取物对常见致病菌的抑制作用。
3. 分析中药提取物的最小抑菌浓度（MIC）和最大抑菌浓度（MBC）。
二、实验材料1. 中药材：[药材名称]2. 培养基：[培养基类型]3. 致病菌：[细菌/真菌名称]4. 实验仪器：[实验仪器列表，如无菌操作台、恒温培养箱、比浊仪、显微镜等]5. 实验试剂：[试剂列表，如无菌水、生理盐水、pH试纸、抗生素标准品等]三、实验方法1. 中药提取物的制备- 称取干燥的[药材名称]粉末，按照[提取方法]进行提取。
- 提取液过滤、浓缩，得到中药提取物。
2. 致病菌的培养- 将[细菌/真菌名称]接种于[培养基类型]，置于[温度]℃的恒温培养箱中培养[时间]小时。
3. 抑菌实验- 将培养好的菌液用生理盐水调整至[浓度]。
- 在无菌操作台中，将中药提取物按照不同浓度梯度加入菌液中。
- 对照组加入等量的生理盐水。
- 将含有中药提取物的菌液均匀涂布于[培养基类型]平板上。
- 置于[温度]℃的恒温培养箱中培养[时间]小时。
4. MIC和MBC测定- 观察并记录菌落生长情况，计算不同浓度中药提取物的MIC和MBC。
四、实验结果1. 中药提取物对[细菌/真菌名称]的抑菌效果- [描述抑菌圈大小、颜色等特征]2. MIC和MBC结果- [列出不同浓度中药提取物的MIC和MBC]五、实验讨论1. [分析实验结果，如抑菌效果与浓度关系、与其他抗生素比较等]2. [探讨中药提取物的抗菌机制]3. [评估中药提取物的应用前景]六、实验结论1. [总结实验结果，如[药材名称]提取物对[细菌/真菌名称]具有显著的抑菌作用]2. [提出进一步研究的建议]七、实验记录1. 实验日期：[年月日]2. 实验人员：[姓名]3. 实验指导老师：[姓名]4. 实验设备：[设备列表]5. 实验材料：[材料列表]八、参考文献[列出实验过程中参考的文献]九、附录1. 实验数据表格2. 实验图片---本模板仅供参考，具体实验内容和结果需根据实际情况进行调整。
中草药抗菌实验实验报告
一、实验目的1. 了解中草药的抗菌作用；2. 探究不同中草药对细菌的抑制作用；3. 分析中草药抗菌成分及其作用机制。
二、实验材料1. 实验菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌；2. 中草药：金银花、黄连、大蒜、黄芩、板蓝根等；3. 试剂与仪器：营养肉汤、生理盐水、细菌接种环、无菌试管、培养箱、显微镜、电热恒温水浴锅等。
三、实验方法1. 中草药提取：将中草药洗净、晾干，用粉碎机粉碎成粉末。
取适量粉末，加入一定量的蒸馏水，煮沸30分钟，过滤，浓缩至一定浓度。
2. 菌株培养：将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌分别接种于营养肉汤中，37℃培养箱中培养18小时。
3. 中草药抗菌实验：将培养好的菌株分别用无菌生理盐水洗涤，制成菌悬液。
取无菌试管若干，每管加入0.1mL菌悬液，再加入不同浓度的中草药提取液，对照管加入等量的生理盐水。
37℃培养箱中培养24小时。
4. 观察结果：观察各试管中菌落生长情况，以无菌生理盐水为对照，记录菌落数。
5. 数据处理：对实验数据进行统计分析，比较不同中草药对细菌的抑制作用。
四、实验结果1. 金银花提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌均有抑制作用，其中对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强。
2. 黄连提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌均有抑制作用，其中对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强。
3. 大蒜提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌均有抑制作用，其中对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强。
4. 黄芩提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌均有抑制作用，其中对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强。
5. 板蓝根提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌均有抑制作用，其中对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强。
五、实验结论1. 金银花、黄连、大蒜、黄芩、板蓝根等中草药具有抗菌作用，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等细菌均有抑制作用。
2. 不同中草药对细菌的抑制作用存在差异，其中金银花、黄连、大蒜、黄芩、板蓝根等对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强。
中药生物实验报告
一、实验名称中药有效成分的提取与鉴定二、实验目的1. 学习中药有效成分的提取方法。
2. 掌握中药有效成分的鉴定技术。
3. 了解中药在生物医学研究中的应用。
三、实验原理中药是中医药学的重要组成部分，具有独特的疗效和广泛的临床应用。
本实验旨在通过提取中药中的有效成分，并对其进行鉴定，以探讨中药在生物医学研究中的应用。
四、实验器材及试剂1. 器材：中药粉碎机、索氏提取器、旋转蒸发仪、高效液相色谱仪（HPLC）、紫外-可见分光光度计等。
2. 试剂：甲醇、乙醇、水、盐酸、氢氧化钠、硫酸铜、氯化钠等。
五、实验过程1. 中药样品的处理：将中药样品粉碎、过筛，备用。
2. 有效成分的提取：采用索氏提取法，以甲醇为溶剂，提取中药中的有效成分。
3. 有效成分的纯化：将提取液进行旋转蒸发，浓缩后得到粗提物。
采用柱层析法对粗提物进行纯化，得到纯化的有效成分。
4. 有效成分的鉴定：采用HPLC法对纯化的有效成分进行鉴定，确定其结构。
六、实验结果1. 提取：索氏提取法提取得到的甲醇提取物中，总提取物含量为5.0%。
2. 纯化：柱层析法纯化得到的纯化物中，目标成分含量为95.0%。
3. 鉴定：HPLC法鉴定得到的纯化物为中药中的一种生物活性成分。
七、讨论1. 中药提取：本实验采用索氏提取法提取中药中的有效成分，该方法具有操作简便、提取效率高等优点。
2. 纯化：柱层析法是一种常用的中药有效成分纯化方法，本实验中采用该方法纯化得到的纯化物纯度较高。
3. 鉴定：HPLC法是一种高效、灵敏的中药有效成分鉴定方法，本实验中采用该方法鉴定得到的纯化物为中药中的一种生物活性成分。
八、结论本实验通过中药有效成分的提取、纯化和鉴定，成功得到了一种中药中的生物活性成分。
这为中药在生物医学研究中的应用提供了实验依据。
九、参考文献[1] 张三，李四. 中药提取与分离技术[M]. 北京：化学工业出版社，2010.[2] 王五，赵六. 中药有效成分鉴定方法[M]. 北京：人民卫生出版社，2015.[3] 孙七，周八. 中药在生物医学研究中的应用[J]. 中国中医药现代远程教育，2018，16（2）：128-130.十、致谢感谢导师的悉心指导和实验室同学的帮助。
抗菌中药实验报告
一、实验目的1. 学习抗菌中药的提取方法，掌握常用提取溶剂及提取工艺。
2. 了解抗菌中药活性成分的检测方法，评估其抗菌活性。
3. 分析不同提取工艺对抗菌中药活性的影响。
二、实验原理抗菌中药的提取主要是通过溶剂法将植物中的有效成分提取出来。
根据植物成分的溶解性质，常用的提取溶剂有水、醇、酸、碱等。
本实验采用水提醇沉法提取抗菌中药，该方法能较好地保留有效成分，同时降低杂质含量。
抗菌中药的活性成分检测方法有多种，本实验采用抑菌圈法测定抗菌中药的抗菌活性。
该方法简单易行，结果准确可靠。
三、实验材料1. 药材：金银花、黄连、黄芩、连翘等。
2. 试剂：氯化钠、硫酸铜、氢氧化钠、乙醇等。
3. 仪器：电热恒温水浴锅、显微镜、抑菌圈测定仪等。
四、实验方法1. 提取工艺（1）取金银花、黄连、黄芩、连翘等药材，粉碎成粗粉。
（2）将粗粉置于提取罐中，加入适量水，加热提取1小时。
（3）过滤，取滤液，加入乙醇，使醇沉。
（4）过滤，收集沉淀，晾干，得到抗菌中药提取物。
2. 抗菌活性测定（1）将抗菌中药提取物溶解于无菌生理盐水中，配制成一定浓度的溶液。
（2）取无菌琼脂平板，加入金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等菌株，均匀涂布。
（3）将抗菌中药溶液滴加于平板表面，直径约为6mm。
（4）37℃恒温培养24小时，观察抑菌圈大小。
五、实验结果与分析1. 不同提取工艺对抗菌中药活性的影响（1）水提醇沉法：提取得到的抗菌中药提取物在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等菌株的抑菌圈直径分别为10mm、8mm。
（2）醇提水沉法：提取得到的抗菌中药提取物在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等菌株的抑菌圈直径分别为7mm、5mm。
（3）酸提碱沉法：提取得到的抗菌中药提取物在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等菌株的抑菌圈直径分别为6mm、4mm。
结果表明，水提醇沉法提取的抗菌中药活性成分含量较高，抗菌活性较强。
2. 抗菌中药提取物对不同菌株的抗菌活性（1）金黄色葡萄球菌：水提醇沉法提取的抗菌中药提取物在金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为10mm，具有较好的抗菌活性。
关于药草的实验报告
一、实验目的1. 了解药草的提取方法；2. 掌握药草活性成分的鉴定方法；3. 分析不同药草的活性成分及其含量。
二、实验原理药草中含有多种生物活性成分，如生物碱、黄酮、皂苷等，具有抗炎、抗菌、抗氧化等作用。
本实验采用溶剂提取法提取药草中的活性成分，并利用薄层色谱法对活性成分进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：不同种类的药草（如金银花、黄芪、人参等）；2. 仪器：电热恒温水浴锅、旋转蒸发仪、分析天平、层析缸、毛细管、展开剂等。
四、实验方法1. 药草提取（1）将药草洗净、晾干，粉碎成粉末；（2）取一定量的药草粉末，加入适量的溶剂（如乙醇、水等），置于电热恒温水浴锅中加热提取；（3）提取液过滤，收集滤液；（4）将滤液旋转蒸发至近干，得到药草提取物。
2. 活性成分鉴定（1）将药草提取物点样于薄层板上；（2）选择合适的展开剂进行展开；（3）取出薄层板，晾干；（4）喷上显色剂，观察颜色变化，记录活性成分的位置。
五、实验结果与分析1. 药草提取本实验采用乙醇作为溶剂，提取了金银花、黄芪、人参等药草的活性成分。
结果显示，不同药草的提取物颜色、味道等特征有所不同，说明不同药草的活性成分存在差异。
2. 活性成分鉴定通过薄层色谱法，我们对药草提取物中的活性成分进行了鉴定。
结果显示，金银花提取物中含有黄酮类化合物，黄芪提取物中含有皂苷类化合物，人参提取物中含有人参皂苷等活性成分。
3. 活性成分含量分析本实验对提取得到的药草活性成分进行了含量分析。
结果显示，金银花提取物中黄酮类化合物含量较高，黄芪提取物中皂苷类化合物含量较高，人参提取物中人参皂苷含量较高。
六、实验结论1. 本实验采用溶剂提取法成功提取了药草中的活性成分；2. 通过薄层色谱法对活性成分进行了鉴定，确定了不同药草的活性成分及其含量；3. 为进一步研究药草的药理作用提供了实验依据。
七、实验注意事项1. 提取过程中，注意控制溶剂的用量和提取温度，以确保提取效果；2. 点样时，注意控制点样量，以免影响活性成分的鉴定；3. 展开剂的选择对活性成分的鉴定至关重要，需根据实际情况进行选择；4. 实验过程中，注意安全操作，防止发生意外。
中_草药水提取物抑菌活性的测定
李永刚, 文景芝3
(东北农业大学农学院植物保护系 黑龙江 哈尔滨 150030)
摘要: 以辣椒疫霉菌、立枯丝核菌、番茄枯萎病菌、番茄早疫病菌、禾谷镰刀菌、大豆疫霉菌、番茄叶霉菌、烟草赤星
病菌及玉米小斑病菌为供试菌种, 用 30 种中、草药的水提取物对其进行了抑菌活性测定。结果表明, 大蒜提取液对 立枯丝核菌、辣椒疫霉菌丝生长抑制率达 100% ; 猪胆汁对辣椒疫霉菌丝生长抑制率达 93122% , 对大豆疫霉菌丝 生长抑制率达 80194% ; 金银花提取液对大豆疫霉菌丝生长抑制率达 100% ; 连翘提取液对大豆疫霉菌丝生长抑制 率达 76110% ; L S- 1 为本课题组自行研制, 由苦参、黄柏、蛇床子等 10 余种中药组成, 其对番茄早疫病菌、禾谷镰 刀菌及大豆疫霉菌丝生长抑制率为 100% , 对辣椒疫霉菌丝生长抑制率达 81146% 以上, 在病菌孢子萌发的抑制作 用中对番茄枯萎病菌、番茄叶霉及玉米小斑病菌孢子萌发抑制率分别达到 90171% , 85171% 和 77114%。
9169
2183 31114
地丁 (10% )
4176 27138 3190 - 1192 3143
6163
1155 46106
银杏叶 (10% )
4199
23182 3159
6102
2197
19107
1172
40128
蛇床子 (10% )
5130 19103 3120 16132 3128 10172 1130 54186
2180
5192 18162
6117 15108
4180 27160
3195 40147
4180 44187
4129 50170
关于筛选抗耐药性大肠杆菌的中草药抑菌实验
关于筛选抗耐药性大肠杆菌的中草药抑菌实验中草药作为我国特有的中医药理论与实践的产物，对细菌有一定的抑制作用，以其低毒、无药物残留、耐药性发生率低的独特优势，被广泛地应用于临床上，用来治疗各种感染性疾病。
因此中草药的抑菌效果研究是目前医学研究的主要方向之一，我们通过筛选有效抑菌实验抑制耐药性大肠杆菌生长，为选择敏感中草药治疗耐药性大肠杆菌引起的疾病奠定基础。
1 材料与方法1．1 材料：（1）中药：黄芩购自广西一心药业百色连锁店。
（2）菌种：耐药性大肠杆菌由右江民族医学院微生物学教研室分离、鉴定、保存。
经青霉素和红霉素的标准药敏纸片（购自杭州天和生物有限公司）测定为耐药。
（3）试剂：M-H培养基、NS购自杭州天和生物有限公司。
（4）其他材料：滤纸、培养皿、棉签等购自杭州天和生物有限公司。
1．2 方法1.2.1 煮沸法提取药液[1]：黄芩50 g加水过药面，文火煎煮，煎煮时间第一次1.5 h，第二次40 min，第三次30 min。
将3次药液合并后浓缩为100 ml（相当于每毫升0.5 g生药），再取第一次浓缩液10 ml，将其浓缩为5 ml的二次浓缩液（相当于每毫升1.0 g生药）。
将第二次浓缩液保存备用。
1.2.2 自制药敏纸片：制作直径6 mm的滤纸纸片，高压灭菌后烘干，然后把滤纸片浸泡于第二次浓缩液中过夜，60 ℃烘干箱烘干，无菌保存备用。
1.2.3 K-B法药敏试验[2]：(1)按每1000 ml蒸馏水称取Muller-hinton Agar 38 g配备M-H琼脂，按每个平皿(直径9 mm)25 ml进行分装。
(2)将孵育16～24 h 的菌种分别接种生理盐水试管中，校正浓度至0.5麦氏标准(相当于 1.0×108 CFU/ml)。
(3)用无菌棉签拭蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液后在M-H 琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1周。
(4)平板在室温下干燥3～5 min后用无菌镊子将药物纸片紧贴于琼脂表面，置35 ℃孵育16～18 h。
5种常见中草药提取液的抑菌试验
2015年第06期随着配合饲料的大量饲喂及抗生素的普遍滥用,导致产业化饲养的畜禽肠道微生态失调及抗病力差,耐药菌株不断变异,肉、蛋、奶等产品抗生素严重残留的后果。
原始粗放饲养的畜禽由于能够采食一定量的药食同源的中草药,因而抗病力强,其产品的营养价值较高。
畜禽养殖,如能筛选当地常见的廉价的具有抗菌活性的中草药进行科学配伍,适量添加到配合饲料里,使畜禽的食物接近原生态,对提高畜禽的抗病力,减少抗生素的残留,提高产品的营养价值具有重要的意义。
1材料与方法鸡大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌种、普通营养肉汤、普通营养琼脂培养基、大肠杆菌和沙门氏菌微量生化反应管均由吉林农业科技学院生物制药教研室提供。
蒲公英、草、马齿苋、败酱草、巴天酸模等根和地上茎叶部分,2012年4~6月份采自吉林农业科技学院左家自然保护区天然林里,无农药和化肥污染,40℃左右通风干燥后,用万能粉碎机粉碎备用。
分别将上述中药材置于37℃温箱烘干至易于研磨为止,准确称取50g 中药材于250mL 蒸馏水中混匀,浸泡4h ,用微火加热煮沸30min ,收集煎液,用无菌滤纸过滤,继续加水250mL ,同法煎制,30min 后收集。
将两次煎液收集合并,应用加热的方法将药液浓缩至最终质量浓度为1g/mL 。
将鸡大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌,分别接种普通肉汤、普通琼脂培养基35℃孵育24h ,进行菌落形态观察并进行生化反应再次鉴定后备用。
菌液浓度的配制方法为,挑取菌落用2～3mL 无菌生理盐水校正至0.5麦氏比浊单位,使其含菌量为1~1.5×108cfu/L 左右。
将中草药提取液灭菌处理后,用无菌的生理盐水将提取液分别稀释为0.9、0.8、0.7、0.6…0.01g/mL 。
用灭菌的5mm 圆形干燥滤纸片饱和浸透不同稀释度的药液,做好标记,每个滴度做3个重复,每个重复做3个琼脂平板,同时设提取液、生理盐水、培养基、细菌等空白对照,无菌操作将制备好的浸药滤纸片贴附制备好的已接菌的琼脂平板上,35℃孵育24h ,室温放置48h 后,观察上述不同中草药提取物的MIC 结果。
多种常见鲜中草药抑菌效果测定
（2）干中草打孔法药敏试验结果。平皿恒温 37℃培 养 24h 后，观察发现，试验用葡萄球菌对干品酢浆草、 金银花和蒲公英高度敏感，对苦荬菜、车前草、板蓝根、 苍耳子和鱼腥草不敏感 ( 如图 3，并且表 3 显示，酢浆草 对葡萄球菌抑菌圈直径约为 18.41 mm，判定为高度敏感；
71
药物 酢浆草 苦荬菜 车前草 板蓝根 金银花 苍耳子 鱼腥草 蒲公英
抑菌圈直径 (mm) 18.41±0.24 0 0 0 17.12±0.32 0Байду номын сангаас0 17.50±0.23
敏感性 ++++
++++ ++++
注：“-”表示不敏感；“++”表示中度敏感；“++++”表示 高度敏感。
三、结论
鲜中草药药敏试验：新鲜酢浆草药物原液对大肠杆 菌和葡萄球菌均有较强的抑制作用，但对葡萄球菌的抑 制作用更为显著；新鲜苦荬菜、车前草、板蓝根、金银花、 苍耳子、鱼腥草和蒲公英的药物原液对葡萄球菌和大肠 杆菌均没有抑制作用。
单位，此时肉汤中细菌数约 1.5×l08 CFU/mL。并且将 两种细菌接种于 pH 为 1.7 和 4.5 的普通营养肉汤中， 培养 24 h。
（4） 鲜中草药药敏试验。打孔法：以无菌操作用无 菌棉签蘸取稀释好的菌液，在普通琼脂平扳表面涂布均 匀。在已涂布细菌的普通琼脂平板培养基表面用打孔， 打孔后用酒精灯封底，在孔中加入各药液 80μL 勿使其 外溢，每种药汁做 3 个平行，置恒温箱 37℃培养 24 h， 取出观察，使用游标卡尺用十字交叉法量取抑菌圈的直 径。重复测量三次取平均值。根据药敏试验抑菌圈直径 (mm) 标准判断其对药物的敏感性。抑菌圈小于 10 mm 的 为 不 敏 感，11 ～ 15 mm 之 间 的 为 中 度 敏 感， 大 于 15 mm 的为高度敏感。
商洛黄芩叶部黄芩苷的提取及抑菌效果试验
收稿日期：2018-11-07 修回日期：2018-11-15 基金项目：2016 年国家级大学生创新训练项目“黄芩有效成分的提取及抑菌效果的初步探究”（ 201611396012） ； 2018 年国家级大学生
创业训练项目“芩芬复方天然食品保鲜剂研发有限责任公司”（ 201811396002X） ； 商洛市 2016 年科学技术研究发展计划项 目“中国秦岭‘五大商药’系列专用肥配方研制”（ SK2016 － 49） 。 第一作者简介：张晓虎（ 1962-） ，男，陕西商洛人，教授，硕士，主要从事农业教育、科研和推广工作。
黄芩苷系黄酮衍生物，在黄芩中以羧酸盐存 在，连有葡萄糖醛酸结构，水解后产生黄芩素和葡 萄糖醛酸，在常见脂溶性溶剂中均具有一定的溶 解度，但只能微溶于热水。黄芩苷的提取有水提 酸沉提取法、碱醇胶胨提取法、超声提取法、超滤 提取法、双水相分配提取法、超高压提取法、微波 预处理提取法等多种方法［6，7］； 其精制方法也有 很多，如重结晶法、沉淀分离法、高速逆流分离法、 大孔树脂分离法等［8］。已有研究表明，黄芩苷除 常用解毒作用外，还具有清除氧自由基、抗氧化、 免疫功能调节、抗菌及抗病毒、抗肿瘤、脑组织保 护和保肝等功效； 此外，黄芩苷具有广泛的抗菌 谱，可以抑制白念珠菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假 单胞 菌、溶 血 性 链 球 菌、大 肠 埃 希 氏 菌 和 沙 门 氏 菌等［9 － 12］。
1 材料与方法
1． 1 材料与仪器 1． 1． 1 材料与试剂 主要有：
材料： 两年生黄芩叶（ 2017 年 10 月采摘于陕 西省商洛市商州区黄芩种植基地） 。
试剂： 黄芩 苷 标 准 品； 活 性 炭； 甲 醇，95% 乙 醇，均为分析纯； 盐酸，氢氧化钠等。
菌种： 大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌。 1． 1． 2 仪器设备 研究所用主要仪器设备见 表 1。 1． 2 研究方法 1． 2． 1 原 料 预 处 理 鲜 黄 芩 叶 105℃ 杀 青 30 min，40℃ 恒温鼓风烘干 48h 至恒重，粉碎后 40 目筛过筛处理，备用。
73种中草药提取物对香蕉炭疽病菌的抑菌试验
７３种中草药提取物对香蕉炭疽病菌的抑菌试验香蕉采后极易腐烂，其中由芭蕉炭疽菌［Colletotrichum musae (Berk．Curt．) Arx．］引起的香蕉炭疽病、轴腐病是香蕉采后腐烂的重要病害，该病菌可潜伏侵染，在幼果期即可侵入果皮内，以附着胞及菌丝形式潜伏于果皮中，在香蕉后熟之后症状才逐渐显现，造成香蕉果实在贮运过程中的大量腐烂。
刘秀娟、杨叶等曾对海南、广东香蕉上的潜伏芭蕉炭疽菌进行研究，在田间未发现对苯并咪唑类杀菌剂产生高抗的菌株。
我们近年来对采自广东、海南、云南、广西四省区的芭蕉炭疽菌进行对多菌灵的敏感性测定时发现，田间存在高抗的菌株。
植物源杀虫剂研究相对深入，并取得了一些显著的成果[4-5]，但植物源杀菌剂的开发研究相对滞后，真正投入到市场的不多，应用于采后病害防治的植物源杀菌剂则更少[6-9]。
由于中草药对人类毒性小，用中草药来防治果蔬采后病害，可大大减少农药残留对人类的影响。
本研究选取了73种中草药，采用生长速率法测定其丙酮提取物对2株对多菌灵敏感性不同的芭蕉炭疽菌的抑制作用，旨在探索中草药在香蕉防腐保鲜中的应用前景。
1 材料和方法1．1 材料香蕉炭疽菌来源为﹕排砂3和中坦3，前者2004年9月采自云南省红河市；后者2004年9月采自广东省中山市。
排砂3多菌灵的EC50为0．07 μg/mL；中坦3多菌灵的EC50为44．13 μg/mL，二者的EC50之比为1∶630。
中草药购于中药店或采自中国热带农业科学院植物园。
将收集的中草药于70 ℃左右的条件下烘干，并用植物粉碎机磨成粉状备用。
对照药剂为98％多菌灵原药（苏化集团新沂农化有限公司生产）。
中草药种类及提取部位见表1。
1．2 方法（1）植物活性物质的提取准确称取25 g中草药粉末，用丙酮提取3次，提取时间分别为48、24、24小时，滤液合并，并在50 ℃下用__A 4001-efficient旋转蒸发仪浓缩并定容至25 mL，即质量浓度为1 000 mg/mL，然后置于4 ℃冰箱中保存备用。
艾蒿中黄酮的提取纯化及抑菌实验
采用 Ａ ８大 孑 树 脂 对 黄 酮 进 行 纯 化 ｎ’］ Ｂ一 Ｌ ， ”
用 ９ ％乙醇洗脱 ， ５ 旋转蒸发 回收乙醇 ，用三倍体 积的乙酸 乙酯萃 取三次 ，合 并滤液 ，真 空浓缩 ，
按 照 １３ １ 法测 定其 吸光 度 。 ．． 方 １３５ 不 同浓度 黄酮 的抑 菌实 验 ．． 将 高 氏合成 １号 培养基 ，察 氏培 养基 倒平 板 ，
０ ２ ｍ￣ｍ ．５ Ｌ和 ０ １ ５ ．２ ｍ￣ｍ 的 浓 度 ，浸 入 ｄ＝ Ｌ
Ｓ ａ ｈ ｌ ｃ ｃ ｕ ｕ ｅ ｓ Ａ ｐ ｉｉ ｕ ｉ ｅ ， ａ ｄ Ａｓ ｅ ｇｌ ｓ ｃ ｎ ｉ ｕ ． Ｔ ｅ ｍｉｉ ｍ ｎ ｉｉ ｒ ｏ ｃ ｎ ｒ ｔ ｎ ｏ ａ ｔ ｐ ｙ ｏ ｏ ｃ ｓ ａ ｒ ｕ ， ｓ ｅｇｌ ｓ ｎ ｇ ｒ ｌ ｎ ｐ ｒ ｉ ｕ ａ ｄｄ ｓ ｌ ｈ ｎ ｍｕ ｉ ｈ ｂ ｔ ｙ ｃ ｎ ｅ ｔ ｉ ｆ ｆ － ｏ ａｏ ｌ
取率为 ９． ％。用 Ａ １５ Ｂ一８大孔树脂将 其纯化 。将纯化后 的黄酮进行抑菌试验 。采用二倍稀释 法 ，用滤纸 片法
测 量艾 蒿中黄酮对大肠杆菌 、金黄色葡萄球菌 、黑 曲霉 菌 、白曲霉 菌的最低抑 菌浓度 。黄酮对 大肠杆 菌和金
黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度 为 ０ ２ ｍｇｍ ． ５ ／ Ｌ，对黑 曲霉菌 和 白曲霉 菌 的最 低抑菌 浓度 为 ｌ ｇ ｍ ｍ ／ Ｌ，从 而确定 大肠杆 菌和金黄色葡萄球菌对黄酮较敏感 。
关键词 ：艾 蒿 ；黄酮 ；超声 波 ；抑菌 中图分 类号 ：Ｔ ２ １２ Ｓ ０ ． 文献标识码 ：Ａ 文章编 号 ：１０ ２ １ （０ １ ０ ０ ６— ５３ ２ １ ）２—０７ ０ ０ １— ８
中药金银花药用成分的提取及抑菌实验的研究
将上述细菌菌种在超净工作台上接种于肉 汤培 养基中， 真菌菌种接种于察氏培养基中， ３ ℃的 在 ２ 生化培养箱中培养４ ｈ备用。 ８ ， １ ． 菌种的筛选 ．３ ２ 将上述各１ 种菌种划线接种于琼脂培养平板 １ 上， 在有菌液的地方放多张大约１ 小滤纸， ｍ ｍ的 同 时 在小滤纸上滴灭过菌的金银花提取液， 然后将培 养盘放在３ ℃的生化培养箱中培养４ ｈ 观察实 ２ ８ 。 验现象： 在滴过金银花提取液的培养盘中， 金黄色葡 萄 球菌和大肠杆菌在滤纸周围无明显的生长， 而其 他菌 种的 生长情况良 好。 这种现象表明 金银花的提 取液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有一定的抑制作 用， 对其他细菌和真菌无明显的抑制作用。 而 １ ． 最低抑菌浓 ＭＩ） ｌ定 ．４ ２ 度（ Ｃ 的ａ ｌ 取试管数支， 以肉汤培养基将被测金银花提取
参考文狱
杆菌其ＭＣ ２５ ／ ｌ Ｉ为１． ｍ ｍ。说明金银花对金黄色 ｇ 葡萄球菌和大肠杆菌有较强的抑菌作用。
表 １ 金银花提取液对金黄色窗萄球菌和大肠杆菌的 ＭＩ Ｃ的测定
Ｔ ｂ １ ｈ ＭＩ ｏ ｅｔ ｃｏ ｆ ｍ ｌ Ｌ ｎ ｅ 昭ａ ａｌ Ｔ ｅ Ｃ ｘｒ ｔｎ Ｆｏ ｏｉｒ ｅ ｆ ａ ｉ ｒ ｏ ｓ ｃ ｕ ｎｔ ｓ ｐｙ ｏｃｓ ｅ ｃｌｏ ｎ ｏｆｒ ｔ ｈｌ ｃ ａｒ ａｄ ｉｒ ａ ｏ ｕ ｕ ｎ ｃ
主。 本实验结果表明金银花提取物浓度在 ６２ ．５ ｍ ／】 ｇｍ 时对金黄色葡萄球菌可达到抑制作用。而 金银花提 取物的浓度在 １． ｍ ／ ｌ ２５ ｍ 对大肠杆菌可 ｇ
达到较强的 抑制作用。为确定金银花的提取液对上 述两种菌种的 抗菌作用是抑菌还是杀菌， 我们同时 做 最低杀菌浓度（ Ｂ ） Ｍ Ｃ 的测定， 其结果为 Ｍ Ｃ Ｉ＝ Ｃ Ｂ Ｎ 占 所试菌 株的 １％一３９。 ５ ５６ 在提高药物浓度
中药提取物的组方及其对致病性大肠杆菌的抑菌试验
中药提取物的组方及其对致病性大肠杆菌的抑菌试验作者：贺泂杰贺奋义郭慧琳来源：《国外畜牧学·猪与禽》2014年第06期摘要：通过试验，筛选出毒性低，具有止泻、退热作用的中草药黄连、黄芩、白头翁、秦皮、铁苋菜、四季青、苦参和穿心莲等。
根据其有效成分的性质，对各药有效成分进行提取。
将提取物按照一定的比例组成不同的配方，采用琼脂平板稀释法，对仔猪致病性大肠杆菌标准毒株K99和本试验室分离鉴定的O1、O2、O8、O138、O141、O78、K89进行体外抑菌试验，结果表明，配方四所含各提取物的含量最小，抑菌效果最佳。
关键词：中药提取物；组方；致病性大肠杆菌；体外抑菌中图分类号：S853 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2014）06-0050-02大肠杆菌（Escherichia coli，Elcoli）又称为大肠埃希菌，属革兰氏阴性杆菌，由Escherich 在1885年发现的。
大肠杆菌主要寄居在人体的大肠内，常引起严重腹泻，甚至败血症。
当它侵入人体其他一些部位时，可引起感染，如腹膜炎、胆囊炎等。
目前临床抑杀大肠杆菌仍以抗生素为主。
但近年来大肠杆菌对多种抗生素表现出耐药性，特别是产生超广谱β-内酰胺酶的大肠杆菌，其耐药率逐年有升高的趋势。
许多中草药天然具有对大肠杆菌的抑制杀灭作用，其抗菌作用日益受到重视。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 试验药材黄连、黄芩、白头翁、秦皮、四季青、铁苋菜、苦参和穿心莲，均购自兰州市医药超市。
将购买的中草药用蒸馏水洗净风干，然后用电动粉碎机将其粉碎后备用。
1.1.2 试验菌种大肠杆菌标准毒株（K99），购于中国兽药监察所。
仔猪致病性大肠杆菌（O1、O2、O8、O138、O141、O78、K89）由平凉猪场采集病料分离鉴定。
1.1.3 供试菌种培养基普通营养琼脂培养基，一般选用LB琼脂培养基。
1.1.4 主要仪器生化培养箱，不锈钢手提式压力蒸汽灭菌器，手动可调试移液器，电子天平，粉碎机，单人双面净化工作台，电热恒温水浴锅，电热恒温干燥箱。
20种中草药水提物的体外抑菌实验
ｎ ／ ｌ ｉ ｔ ｆ ｔ ｏ ｗ ｔ ｘ ａ ｔ ｏ Ｆ ｒ ｔｉ ｓ ｐ ｎｅ ａ ｄ ｐ ｍ ｇａ ａｅｐ ｅ ｗ ｒ ｓｃｎ ａｙ ｉ Ｃ ｏ ０ ｍ ／ｍ ．１ ｅｈ ｅ ｒ ｓ ｔ ｆ ｃ ｏ ｇ ｍ ｄ ｈ ｅ ｅ ｓ ｆ ａ ｒｅｔ ｃｓ ｆ ｏｓ ｈａ ｕ ｅ ｓ ｎ ｏ ｅｒｎ ｔ ｅ ｌ ｅ ｅ ｏ ｄ ｒ ．ｗｔ ＭＩ ｆ ５ ｇ １ １ ｔ ｉ ｔ ｉ ｅ ｅｔ ｆ ｍ ｅ ｃ ｅ ｒ ｙ ｓ ｅ ｈ ２ １ ａ ｅｏａｃ
维普资讯
安 徽 农 业 科 学 。ｏｒ ｏ Ａ ｌ Ａ ．ｃ．０８ ３ （９ ：１４ １５ Ｊｕｔ ｆ ｎ Ｓｉ ０ ，６ １）８０ —８０ Ｍ １ ２
责任 编辑
孙 红 忠 责 任 校 对 张 士敏
２ ０种 中草药 水 提 物 的体 外抑 茵 实验
ｒｏｔｔ ｆ ｃ ｎ ｓ ｎ ｉｓａｉ ｅ ｅ ｔｏ ｗｉｅ Ｅ ｃ ｅ ｏ １１ ｔｒｅ ｔ ｃｓｏ ｏ ｓ ａｋ ａ ｄ ｐ ｒｌｎ ａ ｅｔｒｈ ｅｅｉｓａｉ ｆ ｔｏ ｗ ｎ ．ｃ 如， １ｅｗａｅ ｘｒ ｔ ｆｂ ｔ ａｈ ｂ ｒ ｎ ｕ ｓａ ｅ ｈｄ ｂ ｔ ｔｒ ｔｔ ｅ ｅ ｎ ｓ ｅ Ｅ ａ ｈ ｅ ａ ｏ ｅ ｃ ｉ ｏ ｔ ｈ Ｍ ｏ ２ ｆｌ ５
ｂ ｏ ｆ ｄ ｄｌｔ ｎ ｅｕ １ ａ ｒ ｘ ａ ｔ ｏ ２ ｈｎ ｓ ｅｂ ａ ｏ ｅｂ ｃｅｉ ｔｔ ｆ ｃ ｎｓ ｉｅ Ｓ ｕｓａ ｄｓ ｆ ａ ｒ ｘ ａｔ ｈ ｄ ｂ ｅ － ｙ ｔ － ｌ ｉ ｉ ．Ｉ ｓ ｈｌ １ ｗ ｔ ｔ ｃ ｆ Ｃ ｉ ｅ ｈｒ ｓ ｄ ｓｍ ａ ｔ ｏ ａｉ ｅ ｅ ｔ ｎ ．ｓ ｉ ｎ ｏ ｉ ｗ ｔ ｔ ｃ ａ ｔ ｗ ｏ ｕｏ Ｒ １ｅ ｅｅ ｒ ｓ ０ ｅ ｈ ｒｓ ｅ ｏ ｗ ｔ ｅ ｅ ｅ ｒ ｓａ ｅ
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
题目：中草药提取有效成分及抑菌试验的实验方案
顾建凯，李威，宗凯，唐勇，吴杰
（生物技术0901）
一、问题的提出
西药抗生素的抗菌作用不容置疑，但其毒副作用、所引起的过敏反应、二重感染及细菌的耐药性等使其应用受到一定限制;单味中药抗菌谱一般较窄，其效用难以适应复杂而多变的病情;中药复方制剂因含多种有效成分，具有多方位的综合效用，抗菌谱广，且高效、低毒、不易产生耐药性等特点与优势，日渐受到学者们的重视。
我小组想通过单味中药与中药复方制剂抑菌效果的对比，来验证中药复方的效果。
二、实验假设与理论依据
中医复方的抗菌作用所以优于单味药，主要在于通过配伍发挥了药物间的相辅相成作用，从而明显增强复方的抗菌效能。
三、实验目标
1.了解中药的抑菌作用
2.学习中药有效成分的提取方法
3.验证中药复方制剂的抑菌效果优于单味中药;
四、实验对象、方法及手段
1.实验对象
实验室中老师所准备的各种微生物
2.实验方法
目前中药包括复方制剂杭菌作用的测定方法大部分是沿用抗菌素的研究方法，主要分为体外抗菌作用和体内抗菌作用两个方面。
体外抗菌作用的测定方法又分为三类:一是连续稀释法，包括肉汤连续稀释法即试管两倍稀释法，肉汤琼脂斜面连续稀释法，肉汤琼脂平板连续稀释法;二是扩散法，包括纸片法，小杯法、打孔法等;三是熏蒸法，因其只限于挥发性物质抗菌作用研究，所以在复方制剂抗菌研究中很少使用。
体内抗菌作用的测定多用动物实验性感染治疗模型，该模型均系注射大量细菌引起暴发型感染如小鼠致死性感染，家兔腹膜炎等。
五、实验内容（实验步骤）
1.中草药提取液的制备。
将各中草药烘干、粉碎，用35%的酒精于50℃萃取48h，将提
取液离心后，减压浓缩．用35%酒精定容，使最终质量浓度为1g/ml。
置于0-4℃冰箱中，备用；
2.培养基制备。
○1按改良液体
马丁培养基常规制备方法
配制，用于测定中药M IC
值的培养基加入微量酚红(0
001%)。
○2牛肉膏蛋白胨琼
脂培养基，马铃薯葡萄糖琼脂培养基（配制方法见微生物学书后）
3.菌悬液的配置。
将供试菌种移接入相应的斜面培养基上．细菌置于36-37℃恒温培养箱
中培养24h，酵母菌置于28℃恒温培养箱中培养48h，挑选单个菌落接种于5 mL改良马丁培养基内，37 ℃培养16-18h使菌液浓度相当于lx108个/m L。
用生理盐水稀释500倍、1000倍和10000倍，使稀释后的菌液浓度约为2x105个mL、1x105个/mL和104个/mL
4.纸片扩散法（以前做过的实验）
5.抑菌率的测定。
将中草药提取液稀释至质量浓度为0.1g/ml，待用。
将固休培养基加热
至熔化，待冷却至50℃时，每加20ml固体培养基加人预定量的中草药提取液（0.5、
1.5ml），再加入0.2mL104个/mL的菌液（稀释后菌液浓度为103个/ml），混合均匀，
先倒入无菌培养皿中，每处理3次重复，另用35%的酒精作为对照。
上述操作在超净工作台内进行。
将做好的细菌平板放入37℃的恒温箱中培养48h，将酵母菌平板放入28℃的恒温培养箱中培养48h后，统计菌落个数，计算抑菌率。
抑菌率=（对照菌落数一处理菌落数）／对照菌落数×100%。
6.中草药提取液定量杀菌试验。
试验时，茵悬液浓度为104个/ml，将中草药提取液稀释
至质量浓度为0.1g/ml。
取0.5ml菌悬液与4.5ml稀释后的提取液混匀（对照组35%的酒精）。
作用至预定时间（5、15min）后，取0.2ml菌药混合液接种于培养皿中，用涂布器涂布均匀，各处理3次重复：将做好的细菌平板放入37℃恒温箱中培养36h，将酵母菌平板放入28℃的恒温培养箱中培养48h，统计菌落个数，计算杀菌率。
杀菌率=（对照菌落数—处理菌落数)／对照菌落数×100%。
7.MIC值测定。
用试管两倍稀释法测定中草药提取液对供试菌种的M IC。
取无菌试管12
支，于第1管中加入1. 0 mL浓度为2x105个/mL的菌液，在2～10管中每管加入1. 0 mL 浓度为1×105个/mL菌液，在第1管内加入中药浓缩液1. 0mL充分混匀后取1. 0 mL 放入第2管，混匀后再取1. 0 mL放入第3管，第1管内的药物浓度为原液的1/2，第2管为第1管的1/2，其余类推，直至第10管，每种药物第11管作阳性对照(仅加菌液不加中药，培养后细菌生长，利用葡萄糖可产酸，使含酚红培养液颜色变黄)，第12管作阴性对照(仅加中药不加菌液，培养后颜色仍为红色)，试验重复两次，结果取其平均值，以能抑制细菌生长(培养后仍为红色)的最小药物浓度为其M IC。
单方抗菌药M IC的测定，按普通试管二倍稀释法进行。
六、实验效果及其分析
摆事实，讲道理，对研究内容进行分析。
这块是结题报告的主体部分，应按原来设计的内容，分几个部分把自己已做的工作加以描述分析出来。
这些事情做后得到什么启发，得出什么规律性的东西，可以有数据分析、案例分析等。
效果的分析最好是对比分析，通过前测、中测、后测得到三组数据，最能反映表面出成效。
也可以通过具体案例的描述看出效果，如某个学生行为的变化，研究之前什么样的行为，通过一年的干预发生了怎样的变化，把他们的行为描述出来。
八、问题与建议。