组织学技术与方法 ppt课件

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一、组织标本的取材
• 1. 来源： 组织标本主要取之于活组织检查标 本、手术切除标本、动物模型标本以及尸体解 剖标本等。前三者均为新鲜组织，后者是机体 死亡2h以上的组织，可能有不同程度的自溶， 其抗原可能有变性消失，严重弥散现象，因此， 尸检组织应尽快固定处理，以免影响免疫组化 标记效果。但有些较稳定性抗原，如HBsAg、 HBcAg等在尸检标本中，抗原显示仍较好。
制作光镜组织学标本最常用的方法是 石蜡包埋切片法,即用石蜡把组织块包起 来，使组织变硬，便于切薄。其主要步 骤如下：
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1.取材、固定
取材一般在动物死后2小时以内取。 将取下的新鲜的组织块迅速投入固定液 中进行固定。固定液的种类很多，常用 的有：福尔马林、酒精、丙酮及一些混 合固定液。固定的目的在于使组织中的 蛋白质迅速凝固，以停止其死亡前的变 化，从而保持标本的结构接近于其生前 的正常状态。
用固定液固定进行脱水、浸蜡、包埋、石蜡切片。
如不能迅速制片，可贮存于 -196℃液氮罐内或-80℃
冰箱内备用。
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二、细胞和组织的固定
• 为了更好的保持细胞和组织原有的
形态结构，防止组织自溶，有必要对细 胞和组织进行固定。固定的作用不仅是 使细胞内蛋白质凝固，终止或抑制外源 性和内源性酶活性，更重要的是最大限 度的保存细胞和组织的抗原性，使水溶 性抗原转变为非水溶性抗原，防止抗原 弥散。
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• 取材的先后：应根据动物死后组织结构改变的 速度的快慢而定。首先打开腹腔，取出消化管， 因为消化管在血液循环停止后，黏膜很快发生 自溶现象；其次为肝脏、脾脏等多血器官及神 经组织；再其次才是其他脏器。
• 取材的大小：切取的组织块应小而薄，大小一 般以2cm×1.5cm×0.3cm为好，但有些特殊要 求的可视情况而定。
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2.脱水、透明、浸蜡
固定后的组织用水冲洗后，组织中
充满水分，妨碍石蜡的侵入，必须用不
同浓度的酒精将组织中的水分脱净，这
一过程称为脱水。脱水后组织中含有酒
精，仍不能与石蜡相融，要用二甲苯或
氯仿替代酒精，组织经过二甲苯后呈现
透明状态，这一过程称为透明。把透明
• 取材时要注明取材时间、组织名称、固定液名 称、组织块数量，以备查。
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2.各种因素对组织标本的取材的影响
•
如各种内窥镜钳取的组织，常因过度挤压
而变形，严重者组织结构被破坏。大组织标本
病变分布广泛，抗原在组织中分布不均一，常
出现人为的组织取材不准确。为了避免上述缺
包埋器
蜡块
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粘好的 木块
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载玻 片
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4.染色、封固
贴好的切片，经过脱蜡、酒精侵水等过程后，即可进行染色。常 用的染色方法是苏木素伊红染色法（Hematoxylin Eosin stain），简称Ｈ&
Ｅ染色法。苏木素是一种碱性染料，可使组织细胞中的酸性物质（ 又称嗜碱性物质）染成紫蓝色，如细胞核中的染色质等；伊红是一 种酸性染料，可使组织细胞中的碱性物质（又称嗜酸性物质）染成 红色，如多数细胞的细胞质、核仁等在H&E染色的切片中均呈红色
后的组织块投入融化的石蜡中浸润，使
组织内的空隙充满石蜡，产生一定的硬
度，这叫浸蜡。
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3 .包埋、切片 浸蜡后，把组织块放入装有溶化的固体石蜡的包埋器中，待
石蜡凝固后，组织块便被包埋在里面，成为蜡块，这一过程称 为包埋。把包埋好的蜡块修好，粘在木块上，便可放到切片机 上，切成5—6μm厚的薄片，然后贴在干净的载玻片上，置于 60℃左右的温箱内烤干。
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（一）、固定剂
1．醛类固定剂（单纯固定剂）双功能交联剂，其作用是使组织 之间相互交联，保存抗原于原位，其特点是对组织穿透性强， 收缩性小。有人认为它对IgM、IgA、J链、K链和λ链的标记 效果良好，背景清晰，是常用的固定剂。
（1）10%钙-福尔马林液 （40%甲醛10ml，饱和碳酸钙水溶液90ml）。
组织学技术与方法
组织学与胚胎学的研究技术
常用技术 [1].石蜡切片(paraffin sectioning)术 取材固定→脱水包埋→切片染色→封片 [2].冰冻切片(freezing sectioning) 取材→速冻→冰冻切片→染色→封固 [3].其他:涂片-血液、磨片-牙、铺片-CT等。
精品资料
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• 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你 是否会认为老师的教学方法需要改进？
• 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭
• “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
组织学切片标本制作技术简介
，很易跟细胞核区别。另外，还有硝酸银染色、三色或多色染色等 ，在此不作介绍。染色后，经酒精脱水、二甲苯透明，即可封固。 封固时,在切片标本上滴一滴树胶，盖上盖玻片，干后即成为既可
以在镜下观察又能够长期保存的标本。
标签
载玻片 盖玻片
三、切202片1/3/观3 察:
HE染色、封固后的切片
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点，组织取材时应注意：①活检钳的刃口必须
锋利，以免组织受挤压；②取材部位必须是主
要病变区；③必须取病灶与正Байду номын сангаас组织交界区；
④必要时取远距病灶区的正常组织作对照。
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3.取材后的处理
•
为充分保存组织的抗原性，标本离体后应立即
作处理，或立即速冻成冻块进行冰冻切片，或立即
组织标本
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显 微 镜 模 式 图
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德国莱卡手动切片机
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苏木素伊红染色法（Hematoxylin Eosin stain）
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