裂解液配制方法

裂解液配制方法 The manuscript was revised on the evening of 2021

1、红细胞裂解液（去除红细胞）

配制试剂所需材料：

1. Ammonium Chloride x10 Lysing Concentrate Solution

a) NH4Cl (1.5 M) 80 g

b) KHCO3 (100 nM) 10 g

c) Na4EDTA (10 nM) 3.7 g

d) Distilled H2O 1000 mL

2. 1N HCl or 1N NaOH（调节pH值用）

配制步骤：

1. 将以上a、b、c试剂溶于900ml 去离子水中；

2.调节溶液pH值到，加去离子水定容到1000ml；

3.在制备工作液时，将此储存液稀释10倍后使用。

保存：

储存液储存于2-8°C不能超过半年（六个月）；

2.在使用前，工作液每天都应该新鲜配制放置于室温，当日用不完的弃掉。

2、ripa裂解液

NP-40 or Triton-100 1%

TrisHCl (pH 50mmol/L

NaCl 150mmol/L

PMSF（苯甲基磺酰氟） L(100μg/ml)

Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 μmol/Lμg/ml)

Leupeptin（亮抑制肽） ml

Aprotinin（抑蛋白酶肽）μmol/L(1μg/ml)

（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即ml于异丙醇中；

Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于LHEPES；

Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；

Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）

3、细胞裂解液（Tris－HCL）

1．1M Tris 溶液的配置

取Tris242.2g，加ddH2O至1600ml，加热溶解。

2．1M Tris－HCL Ph=溶液的配置

取 1M Tris 溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=（需浓盐酸约），加ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用。

3. 0.5M EDTA溶液的配置

称EDTA－Na2 37.2g 先用140ml ddH2O溶解，加入14ml NaOH（10M）使EDTA－Na2溶解，再用NaOH（10M）溶液调至Ph=，加ddH2O定容至

200ml，高压灭菌备用。

4. 细胞裂解液的配制

称15gCTAB（Hexadecyltrimethylammonium bromide）（先用约600ml ddH2O 加热溶解）放入烧杯中，加入75ml 1M Tris－HCL（Ph=），58.5g NaCL（先用少量ddH2O溶解），30ml 0.5M EDTA，定容至1000ml，混合均匀备用。

4、组织裂解液配方：`

7M Urea(60. 06)

4.2042 g

2M thiourea g

100mM DTT? g

4% CHAPS

g

0.5mM EDTA? 0.00146 g

40Mm Tris? g

2%(v/v) NP-40

ml

1%(v/v) Triton X-100

ml

5mM PMSF用前加

0.00871 g

2% pharmalyte

共10ml分装成400μl/每管（可应用于30-80毫克组织裂解）

蛋白质的定位与蛋白质裂解液的选择：

全细胞：NP-40或RIPA

细胞质（可溶）：Tris-HCl

细胞质（细胞骨架）：Tris-Triton

细胞膜：NP-40或RIPA

细胞核：RIPA

线粒体：RIPA