裂解液配制方法

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组织裂解液和细胞裂解液如何配制

组织裂解液和细胞裂解液如何配制组织裂解液和细胞裂解液是在实验室中用于将组织或细胞中的生物分子（如蛋白质、核酸等）裂解或溶解的溶液。

这些液体通常包含一系列试剂和缓冲液，以帮助维持理想的酸碱平衡和溶解条件。

以下是组织裂解液和细胞裂解液常见的配制方法。

1. 常用的组织裂解液配方为RIPA裂解液（RIPA lysis buffer），其成分包括：- 50 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）-150mM氯化钠（NaCl）- 1% NP-40或Triton X-100-0.5%钠脱氧胆酸或SDS-0.1%SDS-1mMEDTA-1mM苯甲硫酸酯（PMSF）2.配制方法：a. 称取所需量的Tris-HCl缓冲液和NaCl溶解于蒸馏水中；b. 加入适量的PMSF和其他表面活性剂（如NP-40、Triton X-100）；c.配制完毕后，pH应调整至理想值；d.将裂解液过滤或使用高速离心去除悬浮物。

细胞裂解液的配制：1.常用的细胞裂解液配方为RIPA裂解液（同组织裂解液配方）或RIPA缓冲液（不含表面活性剂），以避免破坏裂解液中的蛋白质。

2.配制方法：a.同组织裂解液的步骤1；b.不加入表面活性剂，方便后续蛋白质的分析。

同时，裂解液的配制可以根据实验需要做出适当更改，以满足特定的研究目的和条件。

在裂解液的配制过程中，需要注意以下几点：1.所选择的缓冲液的pH应调整到适合所需实验的范围内，以确保溶液的稳定性；2.表面活性剂的添加量应适中，以满足蛋白质溶解的需要，但过多的添加会造成裂解液的稀释和稳定性下降；3.裂解液的配制应注意在低温下进行，以防止试剂的降解和活性的损失；4.在裂解液的使用过程中，最好将裂解液与细胞/组织充分接触，并且较长时间地孵育，以满足完整的裂解过程。

组织裂解液

1.组织裂解液(500ml)：1MTris.Cl (PH=8) 25ml;0.5M EDTA(PH=8) 100ml; 2M Nacl 25ml;加入这三者后再加双蒸水定容至450ml,再进行高压灭菌，等冷却后再加入10%SDS(PH=7.2) 50ml（SDS不能高压灭菌）配成500ml组织裂解液。

2.1M Tris.Cl (PH=8)：称取60.57g Tris溶于400ml双蒸水，用Hcl调PH至8.0，定容至500ml，高压灭菌。

3.0.5M EDTA:称取EDTA.Na2.2H2o 93.05g溶于400ml双蒸水中，用氢氧化钠调PH至8.0，定容至500ml，高压灭菌。

4.10% SDS称取SDS50g,溶于500ml双蒸水中，高压灭菌。

5.2M Nacl:称取Nacl58.44g，溶于500ml双蒸水中，高压灭菌。

您好！这周已经过去了，在这里向你汇报下这个礼拜的工作情况及甲基化实验的一般思路。

本周工作情况：1.帮洪渊做了PCR实验，有关SOX9的，其中有两个有问题，做完洪渊拿去测序。

2.帮助徐盼提取RNA(十一期间抚州采的样）26个样3.对肝、脾、肾、膀胱、大脑、小脑（赵雪艳的样）进行匀浆，准备做ELISA试验。

甲基化实验：目的：转FSHb基因猪甲基化水平是否异常，对转基因猪有什么影响（对于具体目的有点不清楚）方法：转FSHb基因阴性猪与阳性猪甲基化水平进行对比实验思路：1.对转FSHb基因阴性猪与阳性猪脏器（心肝脾肺肾等，选取有关脏器还是？）做甲基化水平检测。

2.选取不同日龄（同一猪）进行甲基化水平检测，看随日龄的增加，甲基化水平发生怎样变化（正相关或负相关）？3.转FSHb基因猪外源FSHb基因甲基化异常（高甲基化，导致FSHb基因沉默，功能缺失）与转入外源基因后是否引起内源基因甲基化异常（某些功能异常）？4..转FSHb基因猪发生低甲基化还是高甲基化？过表达还是基因沉默？5.外源基因整合位点甲基化水平？6.启动子区域甲基化？7.CPG岛不易发生甲基化，转基因猪会否发生高甲基化？实验操作：1.DNA的提取及亚硫酸氢盐转化基因组 DNA（ EZ DNAMethylation-Gold TM Kit 试剂盒处理）2.使用数据库寻找CPG岛，设计亚硫酸盐测序 PCR引物，做MS-PCR3.PCR 扩增产物回收、连接、转化和测序鉴定4.提取mRNA，验证甲基化异常对转录的影响5.做蛋白有关实验，进一步验证甲基化异常对蛋白表达的影响（是否导致基因沉默，造成功能缺失）问题：1.某些数据库的使用及分析软件的应用2.是对基因组进行甲基化水平检测还是部分染色体基因进行甲基化检测或者与FSH基因有关进行甲基化检测3.目前思路还不是很清晰，有点理不顺，还有点混乱。

全蛋白提取组织裂解液配方

全蛋白提取组织裂解液配方------------------------------------------作者xxxx------------------------------------------日期xxxxWestern-Blot 全蛋白提取组织裂解液配方1.储备液1.110% Triton X-100Triton X-100 10ml蒸馏水90ml混合后37℃-40℃水浴中2-3hr，使其充分混匀1.210% 去氧胆酸纳去氧胆酸纳1g蒸馏水10ml避光保存1.3200mmol/L PMSF(苯甲基磺酰氯)异丙醇5ml分装，-20℃保存1.4100mmol/L EDTA蒸馏水10ml1.51mg/mL亮抑酶肽(Leupeptin)亮抑酶肽2mg蒸馏水2ml分装，-20℃保存1.61mg/mL 抑蛋白酶肽(Aprotinin)抑蛋白酶肽2mg蒸馏水2ml分装，-20℃保存1.71mg/mL 胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)胃蛋白酶抑制剂2mg甲醇2ml分装，-20℃保存2.工作液2.1Tris-base (50mmol/L，pH 7.4)：Tris-base 605mgNaCl 900mg蒸馏水75ml2.210% Triton X-100 10mL2.32.4100mmol/L EDTA 1mL2.5用前加入：1mg/mL亮抑酶肽100μl1mg/mL 抑蛋白酶肽100μl1mg/mL 胃蛋白酶抑制剂100μl200mmol/L PMSF 500μl各成分的终浓度Triton X-100 1%去氧胆酸纳0.25%NaCl 150mmol/L EDTA 1 mmol/L 亮抑酶肽1μg/mL抑蛋白酶肽1μg/mL胃蛋白酶抑制剂1μg/mL PMSF 1mmol/L。

如何配置细胞裂解液

如何配Байду номын сангаас细胞裂解液
如何配置细胞裂解液
组织裂解液（全细胞蛋提取）：
1：Tris-HCL 50mmoL/L PH 7.4
2: Nacl 150 mmoL/L
3: 去氧胆酸钠0.25%
4：NP-40或Triton-x-100 1%
5: EDTA 1 mmoL/L
6：PMSF 1 mmoL/L
7：Aprotinin 1μg/ml
8: leupeptin 1μg/ml
9: pepstain 1μg/ml
其中:7,8,9作用不持久，要使用前加入。
细胞裂解液：1：NP-40裂解体系：150 mmoL/L Nacl 1.0%NP-40或Triton-x-100
50 mmoL/L Tris(PH8.0)
2：RIPA裂解体系：150 mmoL/L Nacl
1.0%NP-40或Triton-x-100
0.5%脱氧胆酸钠
0.1%SDS
50 mmoL/L Tris( ph8.0)
如何配置细胞裂解液如何配置细胞裂解液组织裂解液(全细胞蛋提取): 1:tris-hcl 50mmol/l ph 7.4 2: nacl 150 mmol/l 3:去氧胆酸钠0.25% 4:np-40或triton-x-100 1% 5: edta 1 mmol/l 6:pmsf 1 mmol/l 7:aprotinin 1μg/ml 8: leupeptin 1μg/ml 9: pepstain 1μg/ml 其中:7,8,9作用不持久,要使用前加入. 细胞裂解液:1:np-40裂解体系:150 mmol/l nacl 1.0%np-40或triton-x-100 50 mmol/l tris(ph8.0) 2:ripa裂解体系:150 mmol/l nacl 1.0%np-40或triton-x-100 0.5%脱氧胆酸钠 0.1%sds 50 mmol/l tris( ph8.0) 下载文档原格式( word原格式 ,共1页)

磁珠法裂解液配方

磁珠法裂解液配方
磁珠法裂解液配方可能会因具体的应用和实验需求而有所不同。

一般来说，磁珠法裂解液的配方包括一些能够裂解细胞、保护核酸免受氧化、避免DNA自身二聚体形成的试剂。

一种常见的磁珠法裂解液配方包括以下成分：
(1)0.2～0.4N氢氧化钠
(2)0.3～0.6M氯化钾
(3)0.01～0.05%N-月桂酰肌氨酸钠
(4)5mM EDTA
(5)0.3～0.6M Tris-HCL
(6)1～2%曲通X-100
请注意，这只是一个常见的配方示例，实际的配方可能会根据具体的应用和实验需求进行调整。

在配置和使用磁珠法裂解液时，建议遵循相关的实验指南和安全操作规程，以确保实验的准确性和安全性。

ripa裂解液

RIPA裂解液产品简介：RIPA主要从动物组织和动物细胞中抽取可溶性蛋白。

组成：50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40,0.1% SDS.(配有一支PMSF).使用RIP A裂解达到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。

由于含有较高浓度的去污剂，不能用Bradford法测定RIPA裂解后的蛋白浓度。

保存：4℃;避光RIPA简介RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。

RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。

RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。

RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

关于不同的RIPA裂解液以及我们生产的其它裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考附录。

RIPA成分deoxycholate，0.1% SDS，以及2mM sodium pyrophosphate（焦磷酸钠），25mM β-glycerophosphate （β-甘油磷酸钠），1mM EDT A，1mM Na3VO4（钒酸钠），0.5 ug/ml leupeptin(l亮肽素)等多种抑制剂。

可以有效抑制蛋白降解。

RIPA裂解液(中)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDT A，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多种抑制剂。

RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDT A，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多种抑制剂。

DNA裂解液配制

DNA裂解液配制
配制100mL裂解液：
1M Tris-Hcl(PH8.0) 5ml
0.5M EDTA(PH 8.0) 5ml
5M NaCl 2ml
10%SDS 10ml
去离子水或双蒸水补至100ml
母液配制：
1. 1M Tris-Hcl（PH=8.0）
(1) 称取12.11g Tris。

(2) 加入80mL 双蒸水或去离子水，充分搅拌。

(3) 加入约4.2ml浓HCL调PH至8.0。

(4) 加入双蒸水或去离子水定容至100ml。

(5) 高压灭菌，常温保存。

2. 0.5 M EDTA
(1) 称取18.61g Na2EDTA﹒2H2O置于100~200ml烧杯中。

(2) 加入约80mL 蒸馏水，充分搅拌。

(3) 调PH至8.0，(约2.5g NaOH)，注意：EDTA在pH=8.0时才能完全溶解。

(4) 加入双蒸水或去离子水定容至100ml
(5) 高温高压灭菌，室温保存。

3. 5 M NaCl
(1) 称取29.22g NaCl置于100ml~200ml烧杯中。

(2) 加入80mL 去离子水或双蒸水，充分搅拌。

(3) 加去离子水或双蒸水定容至100mL。

高温高压灭菌，4℃保存
4. 10% SDS
(1) 称取10g高纯度的SDS置于100~200ml烧杯中，
(2) 加入80mL双蒸水或去离子水，68℃加热溶解。

(3) 滴加浓HCL调PH=7.2。

加去离子水或双蒸水定容100ml，室温保存。

全蛋白提取组织裂解液配方

Western-Blot 全蛋白提取组织裂解液配方1.储备液1.110% Triton X-100Triton X-100 10ml蒸馏水90ml混合后37℃-40℃水浴中2-3hr，使其充分混匀1.210% 去氧胆酸纳去氧胆酸纳1g蒸馏水10ml避光保存1.3200mmol/L PMSF(苯甲基磺酰氯)PMSF 174.2mg异丙醇5ml分装，-20℃保存1.4100mmol/L EDTAEDTA 372.24mg蒸馏水10ml1.51mg/mL亮抑酶肽(Leupeptin)亮抑酶肽2mg蒸馏水2ml分装，-20℃保存1.61mg/mL 抑蛋白酶肽(Aprotinin)抑蛋白酶肽2mg蒸馏水2ml分装，-20℃保存1.71mg/mL 胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)胃蛋白酶抑制剂2mg甲醇2ml分装，-20℃保存2.工作液2.1Tris-base (50mmol/L，pH 7.4)：Tris-base 605mgNaCl 900mg蒸馏水75ml用HCl调整pH值为7.42.210% Triton X-100 10mL2.310% 去氧胆酸纳 2.5mL2.4100mmol/L EDTA 1mL2.5用前加入：1mg/mL亮抑酶肽100μl1mg/mL 抑蛋白酶肽100μl1mg/mL 胃蛋白酶抑制剂100μl200mmol/L PMSF 500μl各成分的终浓度Tris-base 50mmol/L，pH 7.4Triton X-100 1%去氧胆酸纳0.25%NaCl 150mmol/LEDTA 1 mmol/L亮抑酶肽1μg/mL抑蛋白酶肽1μg/mL胃蛋白酶抑制剂1μg/mLPMSF 1mmol/L。

实验操作

免疫沉淀（Immunoprecipitation IP ）美国芝加哥大学分子肿瘤实验室提供一、准备试剂：IP裂解液配制方法（100毫升体积）：50mM Tris-HCl pH 7.5 1M 5ml100mM NaCl 5M 2ml0.5% NP-40 (10% stock) 10ml0.3mM NaVO3 5.52mg50mM Na F 210mg20mM Na Pyrphosphate 892mg1mM PMSF 17.42mg加水至总体积达到100 ml二、实验步骤：（本方法适用于从细胞培养来源的蛋白质）1．将细胞培养液移去，加入裂解液-蛋白酶抑制剂混合液（IP-PI buffer）（T25培养瓶中加入1毫升，T75中加入3毫升），充分裂解后，将混合液转入微量离心管中。

2．冰上放置20分钟，偶尔轻微震荡。

3．4℃下，微量离心机最高速离心5分钟。

将上清液转移至另一微量离心管中。

4．加入30ul protein G- Sepharose beads（与IP-PI buffer 1：1混合）至样品中，4℃下充分混合震荡反应1小时。

5．微量离心机最高速离心1分钟，将上清转移至另一微量离心管中。

6．加入抗需要沉淀的蛋白质的抗体（2-5ug/ 样品），4℃下充分混合震荡反应1小时。

7．加入30ul protein G- Sepharose beads，4℃下充分混合震荡反应1小时。

8．微量离心机最高速离心1分钟，将上清吸弃，收集beads沉淀。

9．沉淀中加入2ul 2-巯基乙醇，煮沸10分钟，离心后取上清，行SDS-PAGE胶电泳及Wester-blotting 检测。

Western Blot(NC膜)重庆医科大学感染病分子生物学实验室一、SDS－PAGE胶电泳1. 75％酒精擦洗洁净玻片及加样梳，组装制胶槽；2. 配制分离胶：1）根据分子量选择分离胶的浓度；2）依次加入ddH2O、30％丙烯酰胺（普通滤纸过滤，避光保存）、1.5MTris－Cl（pH8.8）、10％SDS、10％过硫酸胺、TEMED，充分混匀，将混合液加至双层玻片之间；注意：1、TEMED是促凝剂，加了以后应迅速灌胶；2、分离胶的高度为插上加样梳后梳子下缘下1cm；3）以ddH2O封闭，室温放置1h以上；（可以加大促凝剂和催化剂的量，这样可以在短时间内完成分离胶配制；4）当水和分离胶有了可见的明显界限，倒掉上层水，以滤纸吸尽多余的水分（或将制胶器倾斜用加样枪吸去水即可）；注意：手法轻柔一些，不可损伤分离胶；3. 配制积层胶：1）浓度均为5％，只需选择体积，宁多勿少；2）配制方法同上，灌至平低玻片上缘，插上加样梳，小心不能产生气泡；3）室温放置1h以上；（可以加大促凝剂和催化剂的量，节省时间）注意：1、BioRad的两块板需要分离胶7ml，积层胶3ml；2、此时Tris－Cl为1.0M（pH6.8）；3、加样梳不能做平行移动，只能上下移动；4. 样品处理：1）细菌和细胞离心所得沉淀以PBS（也可以直接加入上样buffer）重悬，体积根据细菌量和细胞数调节；2）以等倍体积2×蛋白上样缓冲液混匀；3）沸水煮3－5分钟；注意：时间不宜过长，尤其是Marker；（Marker参看说明书要求，MBI的比较好，Prome ga的较差）4）离心，取上清加样；5. 电泳：1）电泳装置组装完毕后，加入甘氨酸电泳缓冲液，拔出加样梳；2）依次加样；（Marker最好选用预染型，这样在电泳时就可方便的判断目的蛋白的位置）；3）积层胶电压宜小，90－120V，分离胶可增至120－180V。

细胞组织裂解液

细胞/组织裂解液1. 溶液准备2×样品缓冲液：130mM Tris-HCl （ pH8.0 ） , 20% （ v/v ）甘油 , 4.6% （ w/v ） SDS , 0.02% 溴酚蓝 ,2%DTTPBS （ pH7.4 ） :10mM Na2HPO4，1.8mM KH2PO4，50mM NaCl，2.7mM KClRIPA缓冲液：50mM Tris-HCl（pH7.4），150mM NaCl，1mM EDTA，1%Trito n×100 ，1%去氧胆酸钠，0.1%SDS，1mM PMSF，1μg/ml 牛胰蛋白酶抑制剂（aprotinin ），1μg/ml亮抑蛋白酶肽（ leupeptin ）裂解液缓冲液：10mM Tris-HCl（pH7.4），0.15M NaCl，5mM EDTA（pH8.0），1%Triton×100；使用前加5mM DTT，0.1mM PMSF异丙醇和5mM ε-氨基己酸。

2. 裂解液的制备A. 制备细胞裂解液：①收集胰蛋白酶消化的细胞并离心，用PBS清洗。

②用100μl RIPA缓冲液冰浴溶解沉淀10min（每500000个细胞20μl RI PA缓冲液）。

③10000rpm，4℃离心10min，取上清转移至新管。

④用考马斯亮蓝法检测蛋白质浓度。

⑤用裂解缓冲液将溶液浓度调到5mg/ml,每小瓶中放100μl，-80℃储存。

⑥按照1:1体积比混合2×样品缓冲液，煮沸5min后，室温放置5min.⑦短时离心后点样电泳检测。

B．制备组织裂解液：①在制备过程中一直将溶胞液或组织放在冰上。

②切开组织，称取组织1.5g于PBS中清洗。

③在RIPA缓冲液中剪碎组织后，转移到匀浆器中，加足5ml RIPA缓冲液，研磨20min.④将研磨液转移到1.5ml的离心管中，14000rpm，4℃离心10min.⑤取上清液作为完整的组织裂解液。

⑥用考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度。

裂解液配制方法

1、红细胞裂解液（去除红细胞）配制试剂所需材料：1. Ammonium Chloride x10 Lysing Concentrate Solutiona) NH4Cl (1.5 M) 80 gb) KHCO3 (100 nM) 10 gc) Na4EDTA (10 nM) 3.7 gd) Distilled H2O 1000 mL2. 1N HCl or 1N NaOH（调节pH值用）配制步骤：1. 将以上a、b、c试剂溶于900ml 去离子水中；2.调节溶液pH值到7.2-7.4，加去离子水定容到1000ml；3.在制备工作液时，将此储存液稀释10倍后使用。

保存：1.10x 储存液储存于2-8°C不能超过半年（六个月）；2.在使用前，工作液每天都应该新鲜配制放置于室温，当日用不完的弃掉。

2、ripa裂解液NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 8.0) 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟）0.1mmol/L(100µg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 µmol/L(0.7µg/ml)Leupeptin（亮抑制肽）0.5mg/mlAprotinin（抑蛋白酶肽）0.3µmol/L(1µg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于0.01mol/LHEPES(pH8.0)；Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）3、细胞裂解液（Tris－HCL）1．1M Tris 溶液的配置取Tris242.2g，加ddH2O至1600ml，加热溶解。

2．1M Tris－HCL Ph=8.0溶液的配置取1M Tris 溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=8.0（需浓盐酸约8.5ml），加ddH2O 定容至200ml，高压灭菌备用。

两种裂解液的成分和配制步骤

两种裂解液的成分和配制步骤标签：细胞裂解液裂解液组织裂解液摘要 : 细胞裂解液的成分包括了 Tris-HCl、EDTA 和 NaCl。

组织裂解液的成分主要是 Urea、thiourea、CHAPS 等。

除了蛋白提取裂解液外，上述两种裂解液在一些实验中的用途也不可小觑。

本文介绍这两种裂解液的配方和配制过程。

组织裂解液配方：` 7M Urea(60. 06) 4.2042 g 2M thiourea(76.12) 1.5224 g 100mM DTT 0.1543 g 4% CHAPS 0.4 g 0.5mM EDTA 0.00146 g 40Mm Tris 0.0485 g 广州赛诚生物基因表达调控专题 Qiagen：10 个窍门助你更好掌控 qPCR 实验沐赛生物:快速建立基因敲除细胞系细胞裂解液的成分包括了 Tris-HCl、 EDTA 和 NaCl。

组织裂解液的成分主要是 Urea、 thiourea、 CHAPS 等。

除了蛋白提取裂解液外，上述两种裂解液在一些实验中的用途也不可小觑。

本文介绍这两种裂解液的配方和配制过程。

组织裂解液配方：` 7M Urea(60. 06) 4.2042 g 2M thiourea(76.12) 1.5224 g 100mM DTT 0.1543 g 4% CHAPS 0.4 g 0.5mM EDTA 0.00146 g 40Mm Tris 0.0485 g 2%(v/v) NP-40 0.2 ml 1%(v/v) Triton X-100 0.1 ml 5mM PMSF 用前加 0.00871 g 2%pharmalyte 0.2ml 共 10ml 分装成 400µl/每管(可应用于 30-80 毫克组织裂解) 注：已配好分装成 400µl/每管可供应用不需另配!!! 细胞裂解液配方： 6M Urea(60. 06) 1.8018 g 2M thiourea(76.12) 0. 7613 g 65mM DTT 0.050 g 4% CHAPS 0.2 g 40Mm Trisbase 0.02425 g 共 5ml 分装成 200µl/每管(可应用于 50-100ml 培养瓶内的细胞裂解) 1、溶液准备 2×样品缓冲液：130mM Tris-HCl ( pH8.0 ) , 20% ( v/v ) 甘油 , 4.6% ( w/v ) SDS , 0.02% 溴酚蓝 , 2% DTT PBS ( pH7.4 ) ：10mM Na2HPO4 , 1.8mM KH2PO4 , 50mM NaCl , 2.7mM KCl RIPA 缓冲液：50mM Tris-HCl(pH7.4) , 150mM NaCl , 1mM EDTA , 1%Triton×100 , 1%去氧胆酸钠 , 0.1%SDS , 1mM PMSF , 1μ g/ml 牛胰蛋白酶抑制剂 ( aprotinin ) , 1μ g/ml 亮抑蛋白酶肽 ( leupeptin )裂解液缓冲液：10mM Tris-HCl(pH7.4) , 0.15M NaCl , 5mM EDTA(pH8.0) , 1%Triton×100;使用前加 5mM DTT,0.1mM PMSF 异丙醇和 5mM ε -氨基己酸 2、裂解液的制备制备细胞裂解液：收集胰蛋白酶消化的细胞并离心，用 PBS 清洗。

红细胞裂解液配方

红细胞裂解液配方
1.裂解液：的确是ACK裂解液作用更柔和些
配方：
NH4CL 8.29g
KHCO3 1.00g
Na2EDTA 37.2mg
溶于1000mL蒸馏水，pH 7.2-7.4，效果一直很好。

注意：
（1）裂解液如果放在冰箱里，一定要预热，37度即可。

裂解期间试管也可水浴，但如果是夏天室温比较高则不必；
（2）裂解5min后立刻离心（从所有管都混匀后计时间）；
（3）PBS离心洗涤2次；
（4）裂解液pH值很重要，最好一次不要配多，时间长效果不好，我一般一次配100mL，避光保存。

2.离心速度：800-1000rpm，5min
3.研磨轻柔很重要
4.培养淋巴细胞的最佳培养液是RPMI 1640，因为是原代细胞，要用10%胎牛血清。

还有非常重要的一点，要想让细胞增殖得好，必须加二巯基乙醇（beta-2ME）
5.细胞密度1－2X10^6/mL。

全蛋白提取组织裂解液配方

全蛋白提取组织裂解液配方Western-Blot 全蛋白提取组织裂解液配方1.储备液10% Triton X-100Triton X-100 10ml蒸馏水90ml混合后37℃-40℃水浴中2-3hr，使其充分混匀10% 去氧胆酸纳去氧胆酸纳1g蒸馏水10ml避光保存200mmol/L PMSF(苯甲基磺酰氯)PMSF 174.2mg异丙醇5ml分装，-20℃保存100mmol/L EDTAEDTA 372.24mg蒸馏水10ml1mg/mL亮抑酶肽(Leupeptin)亮抑酶肽2mg蒸馏水2ml分装，-20℃保存1mg/mL 抑蛋白酶肽(Aprotinin)抑蛋白酶肽2mg蒸馏水2ml分装，-20℃保存1mg/mL 胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)胃蛋白酶抑制剂2mg甲醇2ml分装，-20℃保存2.工作液Tris-base (50mmol/L，pH 7.4)：Tris-base 605mgNaCl 900mg蒸馏水75ml用HCl调整pH值为7.410% Triton X-100 10mL10% 去氧胆酸纳 2.5mL100mmol/L EDTA 1mL用前加入：1mg/mL亮抑酶肽100μl1mg/mL 抑蛋白酶肽100μl1mg/mL 胃蛋白酶抑制剂100μl 200mmol/L PMSF 500μl各成分的终浓度Tris-base 50mmol/L，pH 7.4 Triton X-100 1%去氧胆酸纳0.25%NaCl 150mmol/LEDTA 1 mmol/L亮抑酶肽1μg/mL抑蛋白酶肽1μg/mL胃蛋白酶抑制剂1μg/mLPMSF 1mmol/L。

组织裂解液和细胞裂解液如何配制

组织裂解液和细胞裂解液如何配制一、细胞裂解液配制方法一一、试剂准备1、新鲜配制冷的 RIPA 裂解缓冲液:150 mM NaCL1% NP-40 (去垢剂)0.1% SDS (去垢剂)2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)2ug/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)1 mM PMSF (蛋白酶抑制剂)1.5 mM EDTA (蛋白酶抑制剂)1mM NaVanadate (磷酸脂酶抑制剂)(任选)以上所有试剂均按比例溶于150 mM NaCL溶液中。

2、冷的PBS 中加入 1 mM PMSF1.5 mM EDTA1mM NaVanadate （钒酸钠）(任选)3、对数期生长状态佳的细胞，75cm至少3-4瓶（90%以上生长面积）。

二、实验步骤1、将长满细胞的培养瓶放置在冰上，用吸液管吸出培养液。

加入足够的冷的 PBS在培养瓶中充分洗涤细胞表面，以洗去瓶中残留的培养基，倒掉PBS ，重复以上操作2-3遍。

在最后一次洗涤中尽可能吸干残留的PBS，尽量在冰上操作。

2、向培养瓶中加入冷的RIPA 裂解缓冲液 (每75cm2 培养瓶加1ml). 然后用细胞刮子沿着瓶壁开始刮细胞，如果所需要刮的同种细胞有多瓶，则将第一瓶刮下的细胞液吸出转入下一瓶中继续刮 (由于处理后的细胞裂解液较粘稠，所以宜用直径大点的吸液管吸取)。

3、吸出刮好的细胞裂解液置于14ml 离心管中（置于冰上），然后重复步骤2以刮取剩下的细胞。

4、尽可能将多的细胞裂解液收集到14ml的离心管中，样品插入冰盒进行超声，超声强度以不产生泡沫为准，超声每次2-3秒，重复3-4次。

如仍有细胞碎片或沉淀，应离心10000rpm,10分钟，留取上清。

5、取出小量细胞裂解液测其蛋白浓度（用Biorad Bradford 试剂盒或紫外分光光度计，在A280测定），分装保存在 -70℃。

4方法二NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 8.0) 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟）0.1mmol/L(100µg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 µmol/L(0.7µg/ml)Leupeptin（亮抑制肽） 0.5mg/mlAprotinin（抑蛋白酶肽）0.3µmol/L(1µg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于0.01mol/LHEPES(pH8.0);Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）裂解操作程序：* 离心收集1×107个细胞* 加入4℃预冷1%NP-40裂解液100µl* 剧烈震荡使细胞充分悬浮混匀（如为组织进行匀浆）* 4℃放置15~30min* 4℃离心，15 000rpm,10min，取上清备用。

裂解液及其应用的制作方法

裂解液及其应用的制作方法裂解液是一种特殊用途的液体，它可用于分解有机化合物、腐蚀金属和清洗化学设备等。

下文将介绍一种制作裂解液及其应用的方法。

材料准备：- 冰醋酸（99%纯度）- 硝酸（70%纯度）- 硫酸（95%纯度）- 盐酸（37%纯度）- 取代烷基苯磺酸（90%纯度）注意：以上化学品都是有毒的，必须在严密控制下操作，并遵循相关安全规定。

制作方法：1. 取一个干燥、清洁的玻璃瓶，将200毫升的冰醋酸倒入其中。

2. 在玻璃瓶中加入10毫升的硝酸，轻轻晃动，混合均匀。

3. 加入10毫升的硫酸，继续轻轻晃动，混合均匀。

4. 加入10毫升的盐酸，继续轻轻晃动，混合均匀。

5. 最后加入10毫升的取代烷基苯磺酸，轻轻晃动，混合均匀。

制作好的裂解液应该是透明的、无色的，PH值应该在2.0-3.0之间。

制好后的裂解液需要保存在密闭的容器中，并储存在遮光的地方，以免受光照。

应用方法：1. 分解有机化合物：将需要分解的有机化合物加入裂解液中，放入烧杯中加热至沸腾。

裂解液会分解有机化合物，产生气体，并留下固体残渣。

2. 腐蚀金属：将需要腐蚀的金属放入裂解液中，裂解液会迅速腐蚀金属表面，产生气体。

需要注意的是，裂解液对钛、锆、铌等耐蚀金属无腐蚀作用。

3. 清洗化学设备：将需要清洗的化学设备部件浸泡在裂解液中，轻轻刷洗至无污垢残留。

裂解液在化学研究、分析和实验室设备维护中都有广泛应用。

但是在使用时需要特别小心，严格遵守安全规定。

1. 遵守安全操作规程。

裂解液对人体有刺激性和腐蚀性，应当禁止直接接触皮肤、眼睛等部位。

在使用时应穿戴合适的个人防护装备，如手套、护目镜、防护服等。

2. 使用时需在通风良好、设备齐备、专业人员指导下进行。

在使用过程中，应避免液体的飞溅或溅出，以免伤害到相关人员或设备。

3. 处理裂解液时，应注意安全。

裂解液的处理必需在防护齐备、实验室通风良好的环境下进行，防止液体的外散或气体的释放。

在处理过程中，应避免液体混合或与其他废物混合，以防止发生不可预见的反应。

细菌裂解液配制

细菌裂解液配制介绍在细菌学研究中，细菌裂解液是非常重要的实验试剂，用于破坏细菌细胞壁，释放细胞内的物质。

本文将详细介绍如何正确配制细菌裂解液，以确保实验结果的准确性和可重复性。

材料与试剂•细菌培养物•溶液A：细菌洗涤缓冲液•溶液B：细菌裂解缓冲液•酶A：裂解酶•酶B：核酸酶•磷酸盐缓冲液实验步骤第一步：细菌培养与收集1.从冰冻保存的细菌培养物中挑取一支，转移到含有适宜培养基的培养皿中。

2.在37°C恒温培养箱中培养细菌，直至菌液达到对数生长期。

3.将培养好的细菌菌液离心，弃上清液。

4.使用溶液A进行细菌洗涤缓冲洗涤，离心2分钟，弃上清液，重复该步骤至上清液基本清澈。

第二步：细菌裂解1.将洗涤后的菌液转移到离心管中。

2.向离心管中加入适量的溶液B，使细菌细胞完全覆盖。

3.使用振荡器以合适的速度和时间裂解细胞。

注意不要过度振荡，以免降低细胞内溶解物的活性。

4.将裂解后的溶液离心5分钟，收集上清液。

5.将上清液保存在冰箱-20°C保存。

第三步：添加酶和磷酸盐缓冲液将裂解后的细菌液中加入适量的裂解酶和核酸酶，使酶的浓度达到最佳活性。

磷酸盐缓冲液用于维持溶液的酸碱平衡。

第四步：离心与收集上清液将添加酶和磷酸盐缓冲液的溶液再次进行离心，以去除未裂解的细胞碎片和其他杂质。

收集上清液并保存在冰箱中。

注意事项1.在实验过程中，要注意无菌操作，以避免细菌污染。

2.使用洗涤缓冲液和裂解缓冲液时，要准确称量并彻底溶解，以免对实验结果产生影响。

3.根据实验需要，可以调整裂解酶和核酸酶的用量，以达到所需的细胞裂解效果。

4.细菌裂解液的保存时间不宜过长，建议在使用前48小时内使用。

结论细菌裂解液的配制是细菌学研究中的重要步骤。

通过正确的步骤和合适的试剂配比，可以有效地裂解细菌细胞，释放出目标物质。

在实验过程中，我们需要注意无菌操作，严格控制实验条件，以确保实验结果的准确性和可重复性。

希望本文的指导能帮助您成功配制细菌裂解液，并顺利开展后续实验工作。