细胞生物学实验- 细胞骨架
细胞生物学中的细胞骨架结构研究
细胞生物学中的细胞骨架结构研究细胞生物学是关于细胞组织的研究，而细胞骨架则是构成细胞形态、细胞运动和细胞分裂的重要组成部分。
细胞骨架是由微观的结构组成的，使得细胞具有形状和刚度，并在催化细胞分裂或细胞形态变化中发挥重要作用。
细胞骨架的结构主要包括三种类型：微丝、中间纤维和微管。
微丝是由丝状蛋白组成的，主要存在细胞质中，对细胞形态的维持和细胞运动的推动起到重要作用；中间纤维是由角蛋白家族的蛋白组成，存在于细胞核周围的细胞质中，具有机械支撑和调节细胞形态的作用；微管则是由管状蛋白组成的，存在于细胞质中，对细胞内物质运输和细胞分裂过程具有重要作用。
这三种细胞骨架之间相互联系，形成了细胞内复杂的网络结构。
在细胞骨架的研究中，光学显微镜（OM）和电子显微镜（EM）是主要的研究工具。
OM广泛应用于原位分析，可以以生命态形式观察活细胞的细胞骨架结构。
EM则是通过高分辨率的成像技术，更加精细地揭示了细胞骨架的结构。
现有研究表明，细胞骨架的组成和结构对细胞的功能起着极为重要的影响。
例如，微丝的扭曲和微管的稳定性都对肿瘤细胞转移和肿瘤微环境产生影响。
因此，将微丝或微管等成分作为研究对象，探索这些成分对细胞功能的影响，对肿瘤治疗和功能性材料研究都具有重要意义。
此外，还有一些新兴的技术被应用于细胞骨架的研究中。
例如，原子力显微镜（AFM）技术能够成像单个微丝和中间纤维等细胞骨架组件，揭示出它们的结构和机制；高通量显微镜技术（HTM）则可以大幅提高试验效率，实现对细胞骨架的高通量筛查。
虽然对细胞骨架的研究已经取得了一定的成果，但是研究者们仍需要不断地探索微观结构与宏观特性之间的关系，以及细胞骨架与细胞生长、分裂等生理过程之间的联系。
未来，细胞骨架的研究将进一步促进对细胞生物学的理解，为研究生命的奥秘提供更为深刻的见解。
观察细胞骨架实验报告
观察细胞骨架实验报告观察细胞骨架实验报告细胞是构成生物体的基本单位，而细胞骨架则是维持细胞形态和功能的重要组成部分。
通过观察细胞骨架实验，我们可以深入了解细胞骨架的结构和功能，进而探索细胞内部的奥秘。
实验过程中，我们选取了小鼠肺组织中的细胞进行观察。
首先，我们将细胞固定在载玻片上，并用甲醛进行固定处理。
接下来，我们使用荧光染料标记细胞骨架的主要成分，如微丝、中间丝和微管。
通过荧光显微镜观察，我们可以清晰地看到细胞骨架在细胞内的分布情况。
在实验中，我们发现细胞骨架呈现出丰富的结构。
微丝是由肌动蛋白蛋白质组成的细丝状结构，主要分布在细胞的边缘和质膜下。
中间丝是由多种细胞骨架蛋白组成的纤维状结构，主要分布在细胞核周围和细胞质中。
微管是由α-和β-微管蛋白组成的管状结构，主要分布在细胞质中，并参与细胞分裂和细胞器运输等重要生物学过程。
通过观察细胞骨架的实验，我们还发现细胞骨架在细胞内的功能十分重要。
微丝可以通过收缩和伸长调控细胞的形态变化和运动。
中间丝可以提供细胞的结构支持，维持细胞的形态稳定。
微管则可以作为细胞器运输的轨道，将细胞器从一个位置运输到另一个位置。
此外，我们还观察到细胞骨架与其他细胞结构之间的相互作用。
例如，细胞骨架与细胞质基质之间通过细胞外基质蛋白相互连接，形成细胞外基质-细胞骨架-细胞膜的结构。
这种结构可以提供细胞的支持和稳定，并参与细胞的信号传导和细胞外基质的合成。
通过观察细胞骨架的实验，我们不仅可以深入了解细胞骨架的结构和功能，还可以进一步研究细胞骨架与细胞生理过程的关系。
例如，我们可以通过干扰细胞骨架的形成和功能，来研究其对细胞分裂、细胞运动和细胞信号传导等过程的影响。
这些研究将有助于我们更好地理解细胞生物学的基本原理，为疾病的治疗和细胞工程的应用提供理论基础。
总之，通过观察细胞骨架的实验，我们可以深入了解细胞骨架的结构和功能，进一步探索细胞内部的奥秘。
细胞骨架在维持细胞形态和功能方面起着重要作用，与其他细胞结构之间存在着相互作用。
细胞骨架实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 理解细胞骨架的基本概念及其在细胞生物学中的重要性。
2. 掌握使用荧光显微镜观察细胞骨架的方法和技巧。
3. 认识细胞骨架的主要组成成分，包括微丝、微管和中间纤维。
4. 分析细胞骨架在不同细胞类型和生理状态下的形态和分布。
二、实验原理细胞骨架是真核细胞内由微丝、微管和中间纤维组成的网状结构，负责维持细胞形态、细胞运动、物质运输、信号传导等重要功能。
微丝主要由肌动蛋白组成，微管主要由α-和β-微管蛋白组成，而中间纤维则由多种蛋白质组成。
细胞骨架的结构和动态变化对细胞的正常生理功能至关重要。
三、实验材料与仪器材料：1. 植物细胞样本（如洋葱鳞片叶表皮细胞）2. 动物细胞样本（如小鼠成纤维细胞）3. 荧光标记的细胞骨架蛋白抗体4. 抗荧光标记的抗体5. 胶体金标记的抗体6. 封片剂仪器：1. 荧光显微镜2. 激光共聚焦显微镜3. 冷冻切片机4. 液氮5. 恒温培养箱6. 电子显微镜四、实验步骤1. 样本制备：- 植物细胞样本：取洋葱鳞片叶表皮细胞，用2%的戊二醛固定，进行冷冻切片。
- 动物细胞样本：培养小鼠成纤维细胞，用2%的戊二醛固定，进行冷冻切片。
2. 荧光标记：- 将切片置于含有荧光标记的细胞骨架蛋白抗体的溶液中，室温孵育一段时间。
- 洗涤切片，去除未结合的抗体。
3. 抗荧光标记抗体：- 将切片置于含有抗荧光标记抗体的溶液中，室温孵育一段时间。
- 洗涤切片，去除未结合的抗体。
4. 胶体金标记抗体：- 将切片置于含有胶体金标记抗体的溶液中，室温孵育一段时间。
- 洗涤切片，去除未结合的抗体。
5. 封片：- 将切片置于封片剂中，覆盖玻片，封片。
6. 显微镜观察：- 使用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察细胞骨架的形态和分布。
五、实验结果与分析1. 洋葱鳞片叶表皮细胞：- 在荧光显微镜下观察到洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架主要由微丝和微管组成。
- 微丝呈网状分布，主要位于细胞质膜内侧。
- 微管呈束状分布，主要位于细胞核周围。
细胞骨架实验报告分析
细胞骨架实验报告分析
实验目的：分析细胞骨架的结构和功能。
实验方案：
1. 从培养皿中取出细胞样本。
2. 用PBS缓冲液洗涤样本，去除杂质。
3. 采用适当的方法对细胞样本进行固定，如使用甲醛或冷冻固定法。
4. 进行细胞透明化处理，如使用醋酸正己酯或醋酸乙腈进行处理。
5. 使用荧光染料标记细胞骨架，如荧光标记的抗体。
6. 进行显微观察，使用显微镜观察细胞骨架的形态和结构，并记录观察结果。
7. 分析细胞骨架的组成和功能。
实验结果：
观察细胞骨架后，我们发现细胞骨架主要由微观结构组成，包括微丝、微管和中间丝。
微观结构在细胞内起着维持细胞形态、细胞运动和细胞分裂等重要功能。
微丝由细胞骨架蛋白聚合体组成，主要存在于细胞质中。
微丝的直径约为7纳米，长度可变。
微丝在细胞运动、肌肉收缩等方面起到重要作用。
微管由微管蛋白聚合物组成，是一种管状结构。
微管的直径约为25纳米。
微管在细胞分裂、细胞内物质运输等过程中起到
重要作用。
中间丝是由中间丝蛋白聚合物组成的，直径约为10纳米。
中间丝在细胞内提供机械支持，使细胞具有较强的抗压性。
实验结论：
细胞骨架是细胞内的重要组成部分，对维持细胞形态、细胞运动和细胞分裂等过程起着重要作用。
细胞骨架的主要组成包括微丝、微管和中间丝，它们通过不同的机制实现细胞的各种功能。
对于进一步研究细胞活动、细胞生物学和生物医学领域的研究具有重要意义。
细胞实验细胞骨架组分的荧光染色观察
细胞生物学实验细胞骨架组分的荧光染色观察一、实验目的1、掌握细胞骨架的显示方法2、掌握荧光显微镜的使用方法3、了解荧光显微镜下细胞骨架的基本形态结构4、了解荧光探针Hoechst 33342（Ho.33324）与细胞成分的结合特性和光谱特性二、实验原理1、微丝股价是一种高度动态的三维网状结构，与细胞的多种生理活动如细胞运动、胞质分离、细胞器的定位、细胞内物质的运输、吞噬作用、细胞极性生长等密切相关。
2、鬼笔环肽(phalloidin) 是从一种毒性菇类中分离的剧毒生物碱，它同细胞松弛素的作用相反, 只与聚合的微丝结合, 而不与肌动蛋白单体分子结合。
它同聚合的微丝结合后, 抑制了微丝的解体, 因而破坏了微丝的聚合和解聚的动态平衡。
3、由于鬼笔环肽非常特异地结合并稳定聚合态肌动蛋白, 因而对肌动蛋白的动态平衡造成严重影响. 此外, 较高浓度的鬼笔环肽对细胞有毒害作用. 因此, 用鬼笔环肽标记微丝并不是用于研究活体细胞的理想方法。
三、实验材料1、材料：CHO（中国仓鼠卵巢细胞）2、试剂：（1）PEM：50mM pipes (pH6.9), 5mM EGTA, 5mM MgSO4, 0.225M 山梨醇（2）0.5% Triton X-100溶于PEM缓冲液中。
（3）4%多聚甲醛溶于PEM缓冲液中。
四、实验步骤1、取出上次实验爬片于小盖玻片上的CHO细胞；2、取出培养有CHO细胞的盖片，于小平皿中37℃预温PEM洗3次(每次1mL)；3、37℃预温4%多聚甲醛固定细胞15min (1mL)4、37℃预温PEM洗3次5、加入0.5%Triton X-100处理约10min(1mL)；6、取一洁净的载玻片，按照其的大小在其上放置一条封口膜，在封口膜上滴加20μL 60nM Alex -phalloidin 10L湿盒中室温染色30min；7、在parafilm 膜上加PEM ，待盖玻片被冲起后，再轻轻揭下盖玻片；8、37℃预温PEM洗数3次；9、滴加10L Ho.33342复染色；10、荧光镜下观察。
细胞生物学实验PPT课件
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四、实验材料
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2、周皮： 取椴木茎或茶、桑、梨茎横切制片或马铃薯块茎制
片，从低倍到高倍进行观察。可见茎的外方有几层扁平砖 形，排列整齐而紧密的细胞，被染成红褐色，这是木栓层。 其内侧有一层细胞，着色较浅，细胞核明显可见，这是木 栓形成层。木栓形成层内侧有1至几层稍大，排列疏松的 同形细胞，是为栓内层。三者合称为周皮。木栓层、木栓 形成层和栓内层细胞的径向壁常在同一直线上，据皮可与 皮层细胞相区别。在周皮上还可观察到向外突起的皮孔， 有排列疏松的补充细胞存在。
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❖ （三）输导组织：
1、导管： 取南瓜茎（或向日葵茎）横切制片，先用肉眼观察，
在横切面上可见有5-7个分离的维管束，呈环状排列。然 后在低倍镜下观察其中一个维管束，中部红色的是木质部， 它的内外两边染成蓝色或绿色的是韧皮部（双韧维管束）
用铅笔的橡皮头垂直方向，轻轻敲打盖玻片，使材料 成云雾状，然后置显微镜下观察，可见到染成红色而分离 的导管分子，仔细观察其侧壁增厚和端壁穿孔的现象。
• 材料：洋葱鳞叶、双子叶植物叶、马铃薯块茎、 芹菜、梨果、南瓜茎、柑橘果皮、松针叶
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五、实验步骤（细胞骨架观察）
1．用镊子撕取洋葱鳞叶内侧的表皮若干片(约l cm2大 小若干片)，置于50 mL烧杯中，加入pH 6.8磷酸缓冲 液，使其下沉。
细胞骨架观察实验报告
细胞骨架观察实验报告细胞骨架观察实验报告细胞骨架是细胞内的一种重要结构，由微丝、中间丝和微管组成。
它们在维持细胞形态、细胞运动以及细胞内物质的运输等方面起着重要的作用。
为了更好地了解细胞骨架的结构和功能，我们进行了一系列的观察实验。
实验一：细胞骨架的染色观察我们首先使用荧光染色技术对细胞骨架进行观察。
通过使用荧光标记的抗体，我们能够将细胞骨架上的蛋白质特异性地染色，从而使其在显微镜下呈现出荧光信号。
在实验中，我们选择了小鼠肺细胞作为观察对象。
将细胞固定在载玻片上后，使用抗体与荧光标记结合，然后进行显微镜观察。
结果显示，细胞骨架呈现出网状结构，覆盖在整个细胞内。
微丝呈现为细而长的纤维，中间丝则呈现为较粗的纤维，微管则呈现为管状结构。
通过荧光染色技术，我们能够清晰地观察到细胞骨架的分布和形态。
实验二：细胞骨架的动态观察为了观察细胞骨架的动态变化，我们进行了实时显微镜观察。
在实验中，我们使用了活体细胞显微镜，能够对细胞进行连续观察并记录下来。
通过观察，我们发现细胞骨架在细胞运动过程中发挥着重要作用。
例如，在细胞的伸展和收缩过程中，微丝会发生变化，从而影响细胞的形态。
此外，细胞骨架还参与了细胞内物质的运输。
微管作为细胞内物质运输的通道，能够将物质从细胞核运输到细胞的其他部位。
实验三：细胞骨架与细胞功能的关系细胞骨架不仅仅是维持细胞形态的重要结构，还与细胞的功能密切相关。
为了探究细胞骨架与细胞功能之间的关系，我们进行了一系列的功能实验。
在实验中，我们选择了细胞的迁移能力作为研究对象。
通过抑制细胞骨架的形成，我们发现细胞的迁移能力明显受到抑制。
这表明细胞骨架对细胞的迁移过程起到了重要的调控作用。
此外，我们还观察到细胞骨架与细胞分裂之间的关系。
在细胞分裂过程中，细胞骨架会发生动态重组，从而参与细胞的分裂。
通过抑制细胞骨架的形成，我们发现细胞的分裂过程受到了明显的干扰。
综上所述，细胞骨架是细胞内的一种重要结构，对细胞的形态、运动以及功能都起着重要的作用。
细胞生物学实验-细胞骨架的观察
细胞生物学实验-细胞骨架的观察实验目的：观察细胞骨架的存在及结构特征。
实验原理：细胞骨架主要由微小管、微丝和中间丝三种成分组成。
微小管是细胞内最重要的结构，直径约为25nm，长度具有较大的变化范围，是由α-β二聚体组成的多肽链聚集而成。
微丝是位于微小管之外的细胞骨架成分，直径约为7nm，由肌动蛋白filament组成。
中间丝直径约为中等，是由keratin和axonin组成的。
细胞骨架的主要作用包括支持和维持细胞形态、控制细胞的生命周期、支持和维持细胞内各种分子的定位及转运、以及参与细胞的运动和分裂等。
实验材料：荧光标记的微管蛋白、肌动蛋白实验方法：1. 吸附载玻片：准备好的载玻片放在乙醇中浸泡3小时，用吹气干燥后在荧光素溶液中吸附2-3小时。
2. 细胞染色：加入荧光标记的微管蛋白、肌动蛋白后，在黑暗条件下孵育1小时，然后将其冲洗干净。
3. 检测和照相：用显微镜在荧光显微镜下检测并拍照。
实验结果：1.观察荧光显微镜下的细胞：细胞显示出强光。
2.观察微管蛋白：可见微管呈无规则的网状结构，在一个点向外呈放射状散开，形成微管。
3.观察肌动蛋白：可见肌动蛋白形成菜状结构，形状呈现如波浪一样的起伏。
实验不足：此次实验只观察到细胞骨架染色后的低倍镜，需要进一步地深入探索观察细胞骨架在高倍镜下的三维结构和运动状态。
参考文献：1. 纪洪宇，卢国红. 细胞生物学[M]. 高等教育出版社, 2008.2. 段誉瑾，臧建义. 细胞生物学实验指导[M]. 科学出版社, 2009.3. Kornberg T B, Royou A. Centrosomes and microtubule organization in the Drosophila embryo[J]. Cellular and molecular life sciences, 2014, 71(23): 4301-4316.。
细胞生物学实验 细胞骨架的观察【精选】
2）室温下用1%TritonX-100处理20-30 min。 3）用M-缓冲液轻轻洗细胞3次。 4）略晾干后，用3.0%戊二醛固定细胞10 min。 5）用PBS洗数次，滤纸吸干。 6）用0.2%考马斯亮蓝R250染片子30 min。蒸馏水冲洗，在空气中自然
晾干。 7）在光学显微镜下先用10×物镜再用40×物镜观察。
细胞（特别是真核细胞）中的骨架系统，不仅仅是活细胞的支撑 结构，决定细胞的形状，而且与细胞运动、物质运输、能量转换、信 息传递、细胞分裂、基因表达、细胞分化、极性生长等生命活动密切 相关。
细胞骨架的观察
仪器、材料与试剂
仪器：光学显微镜，温箱，细胞培养来自备材料：平皿，烧杯，载玻片（为区别细胞的正反 面，剪
细胞骨架的观察
实验报告及思考题
1 画出所观察到的微丝图像。 2 说明在实验中1%TritonX-100处理细胞的作用是什么？ 3 说明M-缓冲液的作用是什么？ 4考马斯R250和G250的区别是什么？ 5 考马斯R250和鬼笔环肽对细胞骨架的染色有什么区别，各有什么
优缺点？ 6 简述微丝动态平衡过程中各种条件及作用。 7 ATP在微丝动态平衡中所起的作用是什么？
实验四 细胞骨架的观察
细胞生物学实验
细胞骨架的观察
• 实验目的 • 实验原理 • 仪器、材料与试剂 • 实验步骤 • 实验报告及思考题
实验目 的
掌握用考马斯亮蓝R250染色观 察动物和植物细胞微丝的方法。
细胞骨架的观察
实 验原理
细胞骨架（cytoskeleton）是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。 广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外 基质。狭义的细胞骨架是指细胞质骨架，包括微丝（microfilament， MF）、微管（microtubule，MT）、中间纤维（intermediated filament，IF）。
细胞生物学实验报告(5)
细胞生物学实验报告实验六实验名称细胞骨架显示——微丝的观察1、画出所观察到的微丝图像。
2、对实验成功或失败的原因进行分析讨论。
本次试验成功的观察到了微丝，但存在一些小问题。
1．染色不完全，但是着色部分可观察：实验时应用吸管轻轻吸打，防止洋葱鳞茎内表皮卷曲、折叠，若卷曲折叠可以在洗涤的过程中慢慢展开，若没展开，在制片时用镊子小心的将内表皮展开，观察着色部分。
2．细胞内除骨架蛋白外有少量着色物质：TritonX-100处理时间应足够，处理完洗涤应充分，否则胞内会存在膜泡状结构及其它杂蛋白，干扰骨架染色及观察；此外，尽量保证各组各步处理的时间和方法一致。
3．TritonX-100处理后各步操作应轻柔，避免容器剧烈震荡及吸管吹打过猛引起骨架蛋白束断裂。
3、说明在实验中用1%TritonX- 100处理细胞的作用。
用适当浓度的TritonX-100处理植物细胞，可以抽提掉细胞质内的可溶性蛋白和脂类，而骨架蛋白却保存完好。
4、根据M-缓冲液的成分分析其作用在M-缓冲液中：（1）咪唑是缓冲剂，稳定pH值。
（2）MgCl2提供Mg离子，KCl提供K离子，对骨架起聚合作用。
（3）EGTA和EDTA螯合Ca离子，在低钙条件下，骨架纤维保持聚合状态并且较为舒张，便于观察。
（4）巯基乙醇是抗氧化剂，还原二硫键，稳定骨架结构。
5、简述微丝动态平衡过程中各种条件及作用。
有些细胞内，微丝的结构相当稳定，形成永久性的结构，但在大多数非肌肉细胞中，微丝是一种暂时性的动态结构，根据生理状况不断地进行组装和去组装，从而维持细胞的形态及参与细胞运动。
（1）肌动蛋白结合蛋白：在合适的条件下，结合ATP 的肌动蛋白既可以参与微丝正极端的组装，也可以在负极端进行组装。
（2）成核蛋白：成核蛋白Arp2/3复合物、形成蛋白等催化成核过程，以实现细胞形态和运动状态的快速变化。
（3）加帽蛋白：与微丝末端结合阻止微丝解聚或过度组装。
（4）细胞内微丝的排列方式有两种：束状排列和网状排列。
观察细胞骨架实验报告
观察细胞骨架实验报告篇一：洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架观察实验报告洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架观察实验报告吴若自然科学大类单周四 119 XX/11/17一、实验目的:1. 掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法。
2. 认识细胞骨架的形态，联系细胞骨架的功能。
二、实验原理：细胞骨架是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。
广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。
根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微管和中间纤维。
细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。
本试验采用去垢剂TritonX-100 的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250 染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。
三、操作步骤：1. 取洋葱内皮表层膜1cm2(可多取两片)左右置于含2mlPBS液的小皿中湿润5min后，吸去PBS2. 向小皿中加入1.5mlTritonX-100(1%)，浸没20min后，吸走TritonX-1003. 向小皿中加入2mlMbuffer浸没置于摇床上5min，重复两次后，吸走Mbuffer4. 向小皿中加入105ml戊二醛（3%），浸没30min后，吸走戊二醛5. 向小皿中加入2mlPBS，浸没置于摇床上5min，重复两次6. 取出表皮平铺于载玻片上，滴加100微升，静置100min后吸取染料7. 向表面滴加蒸馏水洗涤后用纸巾洗去液体，重复两次8. 盖上盖玻片，擦去残余液体，用光学显微镜观察并拍照记录四、实验结果：如图所示，洋葱内表皮细胞轮廓清晰可见，细胞壁及其分界明显可见。
可观察到线性纤维交织而成的网状结构，同一细胞内各处骨架密集度不均匀，细胞核区域纤维较密集，蓝色较重。
调节显微镜焦距可观察到细胞不同横切面的网络结构的变化，表明细胞骨架以三维立体结构的形式分布在整个细胞内。
细胞生物学实验五 、细胞骨架的纤维结构标本制备和观察 12生技二班 陈官华
实验五、细胞骨架的显微结构标本制备和观察一、目的和要求1、掌握细胞骨架光镜标本的制备方法。
2、掌握考马斯亮蓝R250对植物细胞骨架的染色方法。
3、了解植物细胞骨架的基本形态和结构。
二、实验原理细胞骨架是由蛋白质丝组成的复杂网状结构，根据组成成分和形态结构的不同，分为微丝、微管和中间纤维，它们对细胞形态的维持，细胞生长、运动、分裂、分化，物质运输，能量转换，基因表达等起到重要作用。
对光镜下细胞骨架的显微结构观察采用的方法是1%或2%TritionX-100（聚乙二醇辛基苯醚）处理细胞，可将质膜中的和细胞基质的蛋白质及全部脂质溶解，使大部分的可溶性蛋白质及全部脂质被抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存，经用戊二醛固定，再用考马斯亮蓝R250染色后，可在光学显微镜下观察到清晰的微丝束，网状结构，即为细胞骨架。
三、器材和试剂1、器材：显微镜1台、恒温箱1台、50ml小烧杯、吸管、小镊子、剪刀、载玻片、吸水卷纸、擦镜纸、水果刀、5ml 移液枪、洗耳球。
2、试剂配制a、6m mol/L磷酸缓冲液（PH6.5）：配1000ml.b、M-缓冲液：（咪唑3.40g、KCL3.7g、Mgcl2 .6H2O、EGTA 0.38g、EDTA0.02g巯基乙醇0.07mol、甘油292ml、溶解后用蒸馏水定容到1000ml，再用1mol/L的HCL调至PH7.2，温室保存）。
c、2%TritionX-100液：10mlTritionX-10加M-缓冲液500ml。
d、3%戊二醛：取25%戊二醛原液30ml，加磷酸缓冲液（PH7.2）264ml。
e、0.2%考马斯亮蓝R250染色液100ml。
f、单蒸水1000ml。
四、内容和方法1、取材：切开洋葱鳞茎，撕开中层鳞片的内表皮，剪成2-3mm大小的小片，浸入装有6m mol/L PBS（PH6.5）的小烧杯中，使其下沉，处理5-10min。
2、抽提：用吸管吸取PBS缓冲液，加5ml 2%TritionX-100入小烧杯中，置37o C恒温水浴箱中处理25min（期间轻微摇动），以提取细胞骨架以外的蛋白质。
实验三细胞骨架的显示和观察
细胞内由微丝、微管、中间纤维等交织 形成一个十分复杂的立体网络结构。它 们对于细胞形状的保持、细胞内物质运 输、细胞运动、细胞内各结构相对位置 的固定，故而称为细胞骨架；
对生长、分裂、分化，物质运输、能量 转换、信息传递、基因表达都有重要作 用。
实验目的 ： 1.了解细胞骨架的结构特征 2.掌握光镜标本的细胞骨架的制作方法。
实验仪器：显微镜、盖玻片、载冲液、1%TritonX-100、M-缓冲 液、0.2%考马斯亮蓝R250染液、3%戊二醛
标本：玉葱鳞叶
实验原理
细胞骨架在通常固定条件下不稳定，如低温、 高压、酸处理等。
当采用适当的手段，如当洋葱表皮细胞用适当 浓度的Tritonx——100(聚乙二醇辛基醚，是一 种非离子去垢剂)处理，能溶解质膜结构中及 细胞内许多蛋白质，细胞骨架系统的蛋白质却 不被破坏，
3、与抗原、抗体的结合方式简便，
不影响抗原或抗体的效价；
4、荧光明亮、不易淬灭； 5、性质比较稳定，易溶水。
荧光免疫染色类型： 直接、间接和补体介导
用抗α-tubulin抗体染色显示微管(绿色); 细胞核: 红色, DAPI染色(激光共聚焦显微镜照片)
思考题
1. 细胞分裂时细胞骨架发生哪些改变？ 可以采取哪些研究方法进行检测？
实验结果
细胞内有蓝色、粗细不均的纤维网状结 构，即为细胞骨架。
细胞生物学实验技术简介
免疫荧光染色显示细胞骨架
免疫荧光染色（Fluorescence immuno-staining）是利 用抗原－抗体特异性结合的原理，用经荧光染料标记的抗体 对细胞或组织内的蛋白质进行定性或定量研究的方法。该技 术与荧光显微镜观察相结合，可对特定的蛋白质进行细胞或 组织内的精确定位。近年来随着各种新基因和新蛋白的发现， 免疫荧光染色技术也得到越来越广泛的应用，免疫荧光技术 本身也不断得到改进。
细胞骨架的观察实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞骨架的观察方法及原理。
2. 了解细胞骨架的基本结构、组成和功能。
3. 通过观察细胞骨架，了解其在细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等过程中的重要作用。
二、实验原理细胞骨架是真核细胞内由蛋白质纤维组成的非膜结构系统，包括微管、微丝和中间纤维。
它们对维持细胞形态、细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等过程具有重要作用。
1. 微管：直径约25nm，由α、β-微管蛋白亚基组成，具有形成细胞分裂时纺锤体的功能。
2. 微丝：直径约7nm，主要由肌动蛋白组成，参与细胞收缩、细胞运动和细胞骨架的组装。
3. 中间纤维：直径约10nm，主要由角蛋白、核纤层蛋白等组成，维持细胞形态和稳定性。
实验中，利用去垢剂Triton X-100处理细胞，破坏细胞膜和细胞内的蛋白质，但细胞骨架系统的蛋白质被保护完好。
经戊二醛固定，蛋白质的特异性染料考马斯亮蓝R250染色后，用光学显微镜观察，可以见到细胞内一种以微丝为主的网状结构，即细胞骨架。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：洋葱鳞茎内表皮细胞、PBS缓冲液、M-缓冲液、1% Triton X-100、3%戊二醛、0.2%考马斯亮蓝R250染液、蒸馏水。
2. 实验仪器：普通光学显微镜、水浴锅、解剖刀、镊子、小培养皿、吸水纸、纱布、胶头滴管。
四、实验步骤1. 取洋葱鳞茎内表皮细胞，用解剖刀将其内表皮划成0.5cm×0.5cm的小格，用镊子撕取多片内表皮，浸入到盛有PBS缓冲液的培养皿中，静置5min。
2. 吸去PBS，加入1% Triton X-100处理20-25min，吸去Triton X-100。
3. 向培养皿中加入2ml M-缓冲液，浸没置于摇床上5min，重复两次。
4. 吸去M-缓冲液，加入0.2%考马斯亮蓝R250染液，染色10min。
5. 吸去染液，用蒸馏水冲洗3次。
6. 用中性树胶封片，置于显微镜下观察。
五、实验结果与分析1. 观察到洋葱鳞茎内表皮细胞细胞质中出现网状结构，即细胞骨架。
实验6细胞骨架的观察【精选】
质的固定效果好，且不破坏细胞骨架的结构。
0.2% 考马斯亮蓝R250染液： 考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白质染料，可以使细胞
内各种蛋白质染色。本实验中，有些骨架纤维(微管，2025nm)不稳定；有些纤维(中间纤维，8-11nm)太细，在光学 显微镜下无法分辨。 所以，我们观察到的主要是微丝束， 由许多微丝（5-7nm）结合在一起，直径约在40nm左右，考 马斯亮蓝R250染色对微丝束的显示起了夸大的作用。
8. 观察：光镜下观察可见表皮细胞的轮廓，细胞内存在 着被染成蓝色、粗细不等的纤维网络结构，便是细胞 骨架。转高倍镜下观察，转动微调可见细胞骨架的立 体结构。
五、注意事项：
1. 撕取洋葱鳞茎内表皮不可带茎肉，样本要展开铺平。 2. 去垢处理要掌握好时间和温度。 3. 染色时间需掌握好，必要时可分不同时间进行染色。 4. 观察时选择平展、染色适中的部位观察。
溶液配制：
M-缓冲液 咪唑 3.40 g，氯化钾 3.70g，氯化镁(MgCl2.6H2O) 101.65 mg，EGTA （乙二醇双醚四乙酸）330.35mg，EDTA（乙二胺四乙酸）29.22mg， 巯基乙醇 0.07ml，甘油 292 ml，蒸留水加至 1000 ml。
1%Triton X-100溶液 Triton X-100 1ml + M-缓冲液 99 ml 。
四、实验方法与步骤：
1. 取材：撕取洋葱鳞茎近中轴内表皮，浸入装有5ml PBS 溶液的小烧杯中 ，使其下沉，处理3次，每次3min。
2. 抽提：吸去 PBS溶液，加 3ml 1 % Triton X-100 入小烧 杯，置 37 ℃恒温箱处理20min。
3. 冲洗：吸去 TritonX-100 ，用 3ml M缓冲液轻轻洗 3 次， 每次 3min。
细胞生物学实验-免疫荧光观察细胞骨架
细胞骨架的免疫荧光标记及定位观察免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记并获得成功。
根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体作为探针检测组织或细胞内的相应抗原。
荧光素在一定条件下可与抗体分子结合同时不影响抗体免疫活性的特性。
用荧光抗体浸染可能含抗原的细胞或组织切片，如有相应抗原存在，则抗原与标记抗体特异性结合，形成的免疫复合物固定于细胞上，不易洗脱，在荧光显微镜下可以观察到发出荧光的可见物体，从而可以对抗原或抗体的性质进行定性、定量和定位分析。
常用的荧光素有异硫氰酸荧光素（FITC）和罗丹明（Rhodamine）等。
免疫荧光的应用范围极其广泛，可以用于内分泌激素、蛋白质、多肽、核酸、神经递质、受体、细胞因子、细胞表面抗原、肿瘤标志物、血药浓度等各种生物活性物质的研究。
免疫荧光技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。
主要缺点是：存在非特异性染色，结果判定的客观性不足，步骤比较复杂。
免疫荧光分为直接法、间接法和补体结合法。
直接法：将荧光素直接偶联在一抗上，不需要二抗。
1.检查抗原法：这是最早的方法，用已知特异性抗体与荧光素结合，制成荧光特异性抗体，直接与细胞或组织中相应抗原结合，在荧光显微镜下即可见抗原存在部位呈现特异性荧光。
此法很特异和简便，但一种荧光抗体只能检查一种抗原，敏感性较差。
2.检查抗体法：将抗原标记上荧光素，即为荧光抗原，用此荧光抗原与细胞或组织内相应抗体反应，而将抗体定位检测出来。
间接法:先用未标记的特异抗体（一抗）与抗原结合，再用有荧光素标记的抗抗体（二抗，如抗IgG的抗体）与标本反应，样品中若有与一抗结合的抗原存在，则会形成抗原-抗体-抗抗体复合物从而达到染色的目的。
细胞骨架的观察实验指导
细胞骨架的观察实验指导实验材料：1.细胞培养物2.细胞培养培养基3.PBS（磷酸盐缓冲盐溶液）4.4%多聚甲醛5. 0.1% Triton X-100 溶液6.1%BSA溶液7.细胞骨架特异抗体（如抗微管抗体和抗中间丝抗体）8.辅助抗体（如荧光标记的二抗）9.荧光染料（如荧光素-鳦绿或苏木精红）10.封片用溶剂（如磁性切片载玻片和硝酸盐封片剂）实验步骤：1.倒置细胞培养物：a.制备细胞培养物并放置在合适的培养箱中。
b.取出培养箱中的细胞培养物，小心地倒置在培养皿或玻璃片上。
确保培养物均匀地覆盖在底部。
2.固定细胞：a.慢慢地向细胞培养物中加入4%多聚甲醛，使浓度达到最终浓度。
b.使用PBS洗涤细胞3次，每次洗涤5分钟。
3.渗透化细胞膜：a. 用0.1% Triton X-100 溶液渗透化细胞膜，在室温下孵育5分钟。
b.使用PBS洗涤细胞3次，每次洗涤5分钟。
4.阻止非特异结合：a.使用1%BSA溶液阻止非特异结合，将其加入细胞上，孵育30分钟。
b.使用PBS洗涤细胞3次，每次洗涤5分钟。
5.免疫反应：a.加入特异性抗体（如抗微管抗体或抗中间丝抗体），孵育1小时。
b.使用PBS洗涤细胞3次，每次洗涤5分钟。
6.加入荧光标记的二抗：a.添加荧光标记的二抗，与特异抗体结合，孵育1小时。
b.使用PBS洗涤细胞3次，每次洗涤5分钟。
7.染色：a.使用适当的荧光染料（如荧光素-鳦绿或苏木精红）进行细胞染色。
按需求用荧光染料染色。
b.使用PBS洗涤细胞3次，每次洗涤5分钟。
8.封片：a.倒置细胞培养物到切片载玻璃片上。
b.轻轻地用硝酸盐封片剂将细胞培养物封盖，并放置在室温下干燥。
9.观察并记录：a.将封片放置在显微镜台上。
b.使用荧光显微镜观察细胞骨架。
c.使用相机或图像捕获软件记录观察到的细胞骨架结构。
实验注意事项：1.细胞处理和操作过程中要保持洁净，避免细菌和污染物的干扰。
2.细胞固定和渗透化过程中要严格控制时间和温度，使得细胞组织得到最佳的处理效果。
骨架的观察实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握利用光学显微镜观察细胞骨架的基本原理和方法。
2. 了解细胞骨架的组成、结构及其在细胞功能中的作用。
3. 培养实验操作技能和科学思维能力。
二、实验原理细胞骨架是真核细胞内的一种蛋白纤维网架体系，由微丝、微管和中间纤维组成。
它对于维持细胞的形态结构、细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等生理过程具有重要作用。
本实验采用去垢剂TritonX-100处理细胞，使细胞膜和大部分蛋白质溶解，而细胞骨架蛋白得以保留，随后使用考马斯亮蓝R250染色，以便在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：洋葱鳞片叶表皮细胞、TritonX-100、考马斯亮蓝R250、PBS缓冲液、Mbuffer、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、显微镜等。
2. 实验仪器：光学显微镜、离心机、冰箱、恒温培养箱等。
四、实验步骤1. 取洋葱鳞片叶表皮细胞，用镊子轻轻撕取约1cm²大小的组织，置于含有2ml PBS液的小皿中，湿润5分钟。
2. 吸去PBS液，向小皿中加入1.5ml 1%的TritonX-100，浸没细胞20分钟。
3. 吸去TritonX-100，向小皿中加入2ml Mbuffer，浸没细胞，置于摇床上5分钟，重复两次。
4. 将处理后的细胞滴于载玻片上，用盖玻片封片。
5. 将载玻片置于显微镜下观察，使用考马斯亮蓝R250染液染色，观察细胞骨架的网状结构。
6. 记录观察结果，并分析细胞骨架的形态、分布和功能。
五、实验结果与分析1. 观察到洋葱鳞片叶表皮细胞中存在明显的细胞骨架结构，呈网状分布。
2. 细胞骨架主要由微丝、微管和中间纤维组成，微丝呈细长的纤维状，微管呈管状结构，中间纤维呈较粗的纤维状。
3. 细胞骨架在细胞中分布均匀，覆盖整个细胞表面，与细胞膜紧密相连。
4. 细胞骨架在细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等生理过程中发挥重要作用。
六、实验结论通过本次实验，我们成功观察到了洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架结构，了解了细胞骨架的组成、结构及其在细胞功能中的作用。
细胞骨架的组织和细胞生物学研究
细胞骨架的组织和细胞生物学研究细胞是生物的基本结构单位，它们由不同的器官、分子和蛋白质构成，构成了许多复杂的生物过程和表现。
这些重要的分子和结构连接在一起组成了一个三维的网络，称为细胞骨架。
细胞骨架是细胞结构和形态的主要决定因素，同时也有助于细胞内膜运输、信号传导和细胞运动等生理过程。
关于细胞骨架的组织和细胞生物学研究一直是细胞生物学研究中的重要方向。
细胞骨架的组成细胞骨架是由三种主要的蛋白质细丝组成：微小管、中间丝和微丝。
微小管由α和β循环蛋白质聚合而成，该蛋白质含有GTP结合位。
中间丝由角蛋白组成，它们是一种结构多样、分子量相对较大的蛋白质。
微丝由G蛋白调节的肌动蛋白组成，一般情况下，微丝存在于最基础的生理过程，如质膜的构成和细胞的收缩等。
细胞骨架的功能细胞骨架在生物变异中起着重要作用。
它们在细胞内各个区域建立支撑、维持并改变细胞形态，从而参与细胞的基本生理功能。
微小管对于细胞形态的维持和变化至关重要。
它们通过支撑和维持细胞的形状，帮助细胞保持形状和大小的稳定，从而参与细胞的基本生理功能。
中间丝具有一定的机械强度，能保持细胞的稳定和维持细胞形态的复杂性。
它们对细胞的制造和改变提供了基础性的支持，参与细胞的基本生理过程。
微丝作为负责细胞收缩和细胞分裂的主要骨架组成部分，对细胞的形态和稳定性起到重要作用。
它们参与细胞的的流动、吞噬、胞互作用和导管分泌等许多过程，是细胞生命活动中至关重要的组成部分。
细胞骨架研究的发展细胞骨架是现代细胞生物学非常热门的研究对象之一。
许多研究者正在探索细胞骨架的三维结构、动态、生物学功能和调控机制。
细胞骨架在生物物理学中有重要的地位，许多实验室正在应用基于三维成像的高科技技术进行数值模拟和计算，以了解细胞结构、形态和功能相关的机理，并为治疗许多疾病提供新的方法。
最近，随着纳米材料和纳米技术的进步，研究者成功地将纳米材料与细胞骨架纤维粘附在一起，从而进一步研究了细胞骨架的机械特性和生物物理特性。
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常用荧光探针
细胞参量 荧光探针 吸收/发射 nm
特性
蛋白和抗体 FITC 494/518 绿色荧光 的耦联探针
染死细胞,对PH值变化不 敏感
Texas red 595/615 红色 多参量细胞标记 荧光
溶酶体
Neutral red 541/640 红 探针微偏碱性,可标记溶酶
DAPI 358/461 蓝色荧光
Hoechst33342 350/461 蓝色荧光
嵌入核酸双链间,只能标记死细 胞.用于 染色体,细胞观察,分辨 死活细胞和细胞周期研究
嵌入核酸双链间,只能标记死细 胞.用于电泳分析,染色体观察
半通透细胞,结合于DNA的AT碱 基对.用于细胞周期的研究,染色 体和细胞核的观察
7. 取一个洁净的载玻片，按照载玻片的大小在其上放置一 条封口膜，在封口膜上上滴加10 μL 55 nM Alexa-568phalloidin (red)，将经上述处理的盖玻片细胞面向下孵 育于染色液中，于湿盒中室温避光染色30 min。 8. 小心取下盖玻片，将其置于小平皿中（细胞生长的面朝 上），用37℃预温 PEM避光漂洗3次。 9.在载玻片上分别滴加Ho.33342工作液10 μL，将盖玻片 上的细胞倒扣在载玻片上室温暗处孵育10 min。 10. 封片。 11. 荧光显微镜观察微丝（绿色荧光激发，产生红色荧 光）;核（紫外光激发，产生蓝色荧光）。
Hoechst 33342是一种亲脂性物质，能与DNA特异性结合的荧光探针，所以被大 量用于活细胞的观察和定量的研究。荧光激发和发射波长分别为350 nm和461 nm。
• 仪器 荧光显微镜，倒置显微镜
• 材料 原代培养的鸡胚成纤维细胞
载玻片，盖片，滴管，滤纸 • 试剂
PEM缓冲液
0.5% Triton X-100
4% 多聚甲醛
Hoechst.33342储存液:1mg/mL(溶于PBS) 55nM Alex – phalloidin （鬼笔环肽）
细胞微丝骨架和细胞核的染色
细胞培养于盖玻片上（爬片） 37℃预温 PEM洗3次（每次 1mL）) 37℃预温4%多聚甲醛固定15min（1ml） 37℃预温 PEM洗3次（每次 1mL） 0.5% Triton X-100 通透处理约10min（1ml） 37℃预温 PEM洗3次（每次 1mL） 55nM Alex -phalloidin 10L湿盒中避光室温染色
细胞骨架的荧光观察
2018.10.26
实验目的
• 了解荧光探针的基本知识 • 学习荧光显微镜的工作原理及使用方法 • 掌握细胞核和微丝骨架的标记技术
常用荧光探针
细胞参量 荧光探针 吸收/发射 nm
特性
DNA和 RNA
Propidum iodide (PI) 535/617 红色荧光
Ethidium romide (EB) 518/605 红色荧光
30min 37℃预温 PEM避光洗3次（1ml） 避光滴加10 L Ho.33342复染色10min 37℃预温 PEM避光洗3次（1ml）
在封口膜上滴加染液，将细胞爬片细胞面向 下孵育于染色液中。 注意盖玻片的正反面，切勿产生气泡！
在parafilm 膜上加PEM ，待盖玻片被冲起 后，再轻轻揭下盖玻片。
色荧光
体等酸性细胞器
线粒体
Rhodamine 123 507/529 黄绿色荧光
可进入活细胞,阳离子性, 摄入快,淬灭快,无毒性
荧光显微镜
光源
细胞骨架
• 狭义的细胞骨架是指细胞质骨架，包括：
– 微丝（microfilament，MF，7nm） – 微管（microtubule，MT，25nm） – 中间纤维（intermediated filament，IF，10nm）
1. 将原代培养的成纤维细胞 (或者HeLa细胞) 培养于小盖玻 片上，在含10% 胎牛血清的DMEM培养基中于37℃, 5% CO2培养 箱中培养至细胞融合度达70%～80%。 2. 取出培养有细胞的小盖玻片，置于小平皿中用37℃预温 PEM轻轻漂洗3次。 3. 加入37℃预温 4%多聚甲醛固定15min 。 4. 用37℃预温PEM漂洗3次。 5. 加入0.5 % Triton X-100通透处理约10 min 6. 用37℃预温 PEM漂洗3次。
• 背景
Triton X -100: 当细胞用适当浓度的triton X -100溶液（聚乙二醇辛基苯基醚，一种非离子去 垢剂）处理，能够溶解质膜结构中及细胞内许多蛋白质，而微丝束结合得比较紧 密，不容易被去除 ，经固定和染色后，可在光镜下观察到由微丝组成的纤维束。
鬼笔环肽(phalloidin) 是从一种毒性菇类中分离的剧毒生物碱，它同细胞松弛 素的作用相反, 只与聚合的微丝结合, 而不与肌动蛋白单体分子结合。它同聚合 的微丝结合后, 抑制了微丝的解体,会破坏了微丝的聚合和解聚的动态平衡。
思考题
Triton X-100处理细胞的作用是什么？ 下次课：期中考核-动物细胞培养技术