细胞生物学实验步骤
细胞生物学实验教学备课教案细胞实验的操作与观察
细胞生物学实验教学备课教案细胞实验的操作与观察细胞生物学实验教学备课教案前言：本教案旨在为细胞生物学实验的准备工作提供指导，包括实验的操作步骤和观察要点。
实验内容涵盖细胞培养、染色和观察等方面，旨在帮助学生了解细胞结构和功能，培养他们的实验技能和科学思维。
实验目的：通过本实验，使学生了解细胞的基本结构和功能，培养他们的实验能力和观察分析能力。
实验材料和仪器：1. 细胞培养物：如细菌培养物、动物细胞培养物等。
2. 细胞培养器具：如培养皿、离心管、移液器等。
3. 染色剂：如荧光染料、溴酶、乙酰酚染料等。
4. 显微镜和载玻片。
实验步骤：步骤一：准备工作1. 检查实验材料和仪器是否齐全。
2. 清洗工作台和实验器具，保持清洁。
步骤二：细胞培养1. 取出细胞培养物，根据需要进行适当的稀释。
2. 将细胞培养物分装到培养皿中，每个培养皿的细胞密度控制在适当水平。
3. 采用无菌操作，将培养皿放入恒温培养箱中，设定适当的温度和培养时间。
步骤三：细胞染色1. 取出培养皿中的细胞，使用适当的方法将细胞附着在载玻片上。
2. 准备染色溶液，根据实验需要选择合适的染色剂。
3. 将染色溶液滴在载玻片上，与细胞接触一定时间。
4. 用适当的方法将载玻片洗净，准备观察。
步骤四：观察和记录1. 将载玻片放置在显微镜上，调整镜头和光源，观察细胞的形态和染色效果。
2. 用目镜和物镜逐步调整焦距，获得清晰的细胞图像。
3. 用规定的倍率进行观察，并记录细胞的结构特征和染色的结果。
步骤五：数据分析与讨论1. 根据观察结果，总结细胞结构和功能的特点，并进行分析讨论。
2. 分析不同染色方式对细胞观察结果的影响。
3. 理解实验中可能出现的误差，并提出改进的方法。
步骤六：实验总结1. 总结实验的目的、步骤和观察结果，梳理实验过程中的关键点和问题。
2. 分析实验结果的意义和应用价值，并展望进一步的研究方向。
3. 总结实验中的收获和不足之处，提出改进的建议。
细胞生物学实验教程
细胞生物学实验教程1. 细胞培养细胞培养是研究细胞生物学的重要工具。
其基本原理是将动植物等生物材料分离、挑选出优良细胞群体，通过合适的细胞培养基、培养条件、方法和设备，使细胞在体外生长和繁殖。
其常用培养细胞的类型有：肺、肝、胃肠、心肌、肌肉、神经、结缔组织、卵巢等。
2. 细胞分离将细胞组织挑选出来进行细胞分离，我们需要用到一般的分离试剂，如细胞酶、生物表面活性剂、离子液体、尼龙布、毛细管、细胞分选仪和细胞联合培养等，同时需要注意一些技术细节。
例如合适的分离环境和分离条件、合适的分离时间、细胞貌形的观察以及细胞去污的操作等。
3. 细胞染色细胞染色是存在于细胞的染色体、蛋白质和核酸等物质，借助不同染色剂使之显色的过程。
其优点是操作简便，速度快，结果直观且研究范围广。
根据它的使用范围和目的不同，一般分为核型分析、基因型分析、生化分析、免疫分析和化学分析等。
4. 免疫组化染色免疫组化染色是指利用抗体与细胞中的特定抗原之间的结合反应，使细胞中的抗原在细胞、组织切片或细胞培养物中可视化并得到定位的技术。
这种技术是现代生物技术与分子生物学的重要组成部分，也是研究细胞分子和生物学的密切联系。
5. 荧光标记技术荧光标记技术是指在一定条件下，荧光分子效应的物理特性。
将该技术运用于细胞生物学中，可以标记生物分子，如细胞内结构组分和生物分子中的蛋白质、核酸、糖等，以实现对其特性、运动和转化的动态和定量分析。
同时，它对于研究牛眼改良和细胞砂浆的研究、比较病理学和細胞生理学中细胞示踪标记的定位等过程中也有着积极的作用。
6. 电镜观察电子显微镜（EM）是一种利用电子束代替光束观察样品表面的高分辨率显微镜。
其操作方法较为复杂，需要像样的准备样本和设备，但提供的高分辨率和高对比度，使得研究者可以观察小于光学分辨率的细胞结构，并能发现小分子、细菌和病毒等细胞成分。
7. 分子生物学实验技术目前，分子生物学技术已经成为细胞生物学研究的重要手段之一。
细胞生物学实验
实验一细胞膜的渗透性一、实验目的1、了解细胞膜对物质渗透的一般规律。
2、了解溶血现象及其发生机制。
二、实验原理细胞膜为一种半透膜，对物质的通透具有选择性。
当红细胞放入低渗溶液时，细胞吸水膨胀而发生溶血。
当红细胞放入含有不同溶质的等渗溶液中时，由于细胞膜对不同溶质的透性不同，细胞发生溶血的时间也会不同，故发生溶血现象时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。
三、实验操作1、从集市买适量活鸡血，取5ml（防止污染），放入盛有20ml Alsever’s液瓶中，混匀后置冰箱保存备用（2周内使用）。
2、使用前取用Alsever’s液保存的新鲜鸡血5ml，加入8ml的0.128mol/L NaCl溶液，小心混匀，1000r/min 离心5min，如此3次洗涤，最后配成30%的鸡红细胞（CRBC）悬液。
3、取11支试管，按附表中所示测试溶液，分别取样各3ml，作出标记后，各管均加入红细胞悬液2滴，混匀后静置于室温中，观察各支试管中发生溶血的时间及变化。
四、观察结果1、试管内液体分两层：上层浅黄色，下层红色不透明为不溶血（―）,镜检红细胞完好呈双凹盘状。
2、如果试管内液体浑浊，上层带红色者，称不完全溶血（+或++），镜检部分红细胞呈碎片。
3、如果试管内液体变红色而透明者，称完全溶血（+++），镜检发现细胞全部呈碎片。
五、实验建议1、鸡血在离心时，试管均需在扭力天平上平衡。
2、目测红细胞体积或置于带刻度的离心管中，加入生理盐水配成30%的红细胞悬液。
、3、试管中有红细胞和测试溶液时，不应强力摇晃，以免造成人为的红细胞破裂。
实验报告及作业※目测判断标准：快速溶血：+++；慢速溶血：++或+；不溶血：―实验二核酸(DNA和RNA)的细胞核定位观察一、实验目的1、了解和学习两类核酸显示的原理及操作程序。
2、了解细胞中DNA和RNA的分布。
二、实验原理细胞内的DNA主要分布在细胞核内，RNA主要存在于细胞质中。
甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同：甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。
细胞生物学自主实验
染色
• 1、把滴好的在载玻片放入染缸中，将稀释 后的Giemsa染色滴在染缸里中，室温染色 20分钟；
• 2、自来水轻轻冲洗（冲洗标本片的背面） 3～5秒钟，晾干（或烘干）； • 3、镜下观察染色体分带及染色情况。
五、注意事项
• 1 、细胞培养的环境必须无污染环境，温度保持 恒定，有适宜气体环境，pH适宜。 • 2、 操作及培养条件、培养仪器等无菌避免污染。 • 3、控制好离心速度，过快或过慢都会影响实验 结果。 • 4、低渗处理是实验成败的关键，其目的是使细 胞体积膨大，染色体松散，处理时间过长染色 体丢失会影响观察，处理时间不足，细胞内染 色体会聚集在仪器无法区分。
六、核型分析结果
女性染色体
男性染色体
结果分析讨论
一、在这次试验中我们做了4张片子，但其中一男一 女两张装片没有看到分裂相，分析原因可能有以下 几点： 1、片的高度不够，导致细胞没有摔开。 2、秋水仙素用量分配不均，导致用量不足。
• 二、核型结果分析： • 核型分析数据与正常的核型数据比较吻合。
• 女生组的细胞较好，经过三天的恒温培养 细胞的数目较多，分裂相也较多，但是男 生组的细胞数目就很少，分裂相也很少。 原因可能以下几点有: • 1、男生的细胞不容易被PHA诱导分裂； • 2、男生的细胞在制作装片的时候有损失； • 3、秋水仙处理时的用量太少（只有半滴）。
• • • •
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告（经典版）编制人：__________________审核人：__________________审批人：__________________编制单位：__________________编制时间：____年____月____日序言下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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细胞生物学实验操作指南
细胞生物学实验操作指南目录1.洗涤与灭菌1.1细胞培育瓶1.2小烧杯、吹管1.3盐水瓶1.4瓶盖、胶塞1.5塑料器皿1.6附注：洗液配方〔次强酸液〕2.配置常用溶液2.1平衡盐溶液2.2pH 调整液2.3抗生素液2.3.1青霉素+链霉素2.3.2两性霉素2.3.3G4182.3.4潮霉素2.4消化液2.5培育基2.5.1配置2.5.2使用3.培育操作根本要求无菌操作一．洗涤与灭菌在组织培育中，离体细胞对任何有害物质都格外敏感。
有害物质包括微生物、细胞剩余物以及非养分成分的化学物质。
因此对承受和重使用的培育器皿，都要严格清洗。
1.细胞培育瓶：(1)浸泡：初次使用和培育用后的玻璃器皿都需先用清水浸泡，以使附着物软化或被溶解掉。
的玻璃器皿，玻面常带有很多枯槁的灰尘，同时在生产过程中，玻璃外表常呈碱性并带有一些对细胞有毒的物质，如铅和砷等。
瓶使用前应先用自来水简洁冲洗，然后用稀盐酸(5%)浸泡过夜，以中和其中的碱性物质。
培育后的玻璃器皿往往附有大量蛋白质，枯槁后不易刷洗掉，故用后要马上浸入清水中；留意让水能完全进入瓶皿中，不应留有气泡。
(2)刷洗：浸泡后的玻璃器皿一般仍旧要用毛刷沾洗涤剂洗涤，以除去器皿外表的附着较牢的杂质。
刷洗次数太多，能损害器皿外表光泽度，所以应选用软毛刷和优质的洗涤剂〔如高级洗衣粉或洗洁精〕，确定不能使用含沙粒的去污粉！洗刷时特别留意洗刷瓶角部位。
可以将洗涤剂倒入浸泡培育瓶的清水中，直接在水中进展刷洗，然后再以清水冲洗干净。
(3)泡酸：刷洗不掉的极微量杂质经过硫酸和重铬酸钾洗液的强氧化作用后，可被除掉。
洗液对玻璃器皿无腐蚀作用，去污力量很强，是清洗过程中关键的一环。
浸泡时，器皿要布满洗液，勿留气泡。
浸泡时间不应少于 6 小时，一般应浸泡过夜。
留意，泡酸时要戴防酸手套，否则将损伤皮肤。
(4)冲洗：泡酸后必需用水充分冲洗，使之不留任何残迹。
冲洗时每瓶都要用水灌满，倒掉。
冲洗程序是先用自来水冲洗20 遍，再用蒸馏水冲洗10 遍，最终用双蒸水冲洗两遍。
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告实验名称：细胞培养实验实验目的：1. 了解细胞培养的基本原理和过程2. 观察细胞生长和分化的现象3. 掌握细胞培养的实验技术和方法实验原理：细胞培养是一种将生物体细胞从其原始生存环境中分离出来，在体外条件下进行培养的技术。
这种技术对于研究细胞生物学、发育生物学、药物筛选等学科具有重要意义。
本实验将通过观察细胞生长和分化的现象，加深对细胞培养技术的理解。
实验材料：1. 人体皮肤细胞2. 培养基（包含血清、抗生素、氨基酸、维生素等）3. 塑料瓶（培养皿）4. 显微镜5. 记录表实验步骤：1. 取适量人体皮肤细胞，用胰蛋白酶消化，使其从组织中分离出来。
2. 将细胞接种到塑料瓶（培养皿）中，加入适当浓度的培养基。
3. 将塑料瓶（培养皿）放入恒温培养箱中，定期观察并记录细胞生长和分化的现象。
4. 在合适的时间点，使用显微镜拍照记录细胞生长和分化的过程。
5. 实验结束后，整理数据和图片，撰写实验报告。
实验结果：经过一段时间的培养，我们观察到皮肤细胞在培养基中开始贴壁，并逐渐生长。
随着时间的推移，部分细胞开始出现分裂，形成相互连接的细胞团。
一些细胞逐渐伸展成梭形或扁平形，呈现出典型的贴壁生长形态。
在某些区域，我们观察到细胞开始分化为两种不同形态的细胞群，一种呈圆形或椭圆形，另一种呈多角形。
这些现象表明细胞已经开始分化。
实验分析：根据实验结果，我们可以得出以下结论：1. 细胞确实可以在体外条件下贴壁生长并增殖。
这证明了细胞培养技术的可行性。
2. 细胞分化是一个自然的过程，在本实验中得到了证实。
这说明细胞具有自我更新和多向分化的潜能。
3. 实验过程中需要注意无菌操作和适宜的培养条件，以确保细胞的存活和正常生长。
此外，不同种类的细胞可能需要不同的培养条件，因此在实际操作中需要针对具体细胞类型进行实验。
实验结论：通过本次实验，我们了解了细胞培养的基本原理和过程，观察了细胞生长和分化的现象，并掌握了细胞培养的实验技术和方法。
细胞生物学试验
实验目的
实验原理 实验步骤
作
思
业
考
细胞生物学实验
作 业：
总结细胞膜对不同性质物质 通透性的规律
实验目的
实验原理 实ห้องสมุดไป่ตู้步骤
作
思
业
考
细胞膜通透性的观察
细胞生物学实验
思 考：
比较鸡血和人血溶血时间， 说明什么问题？
实验目的
实验原理 实验步骤
作
思
业
考
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细胞膜通透性的观察
人工合成脂双层对不同物质的选择 性通透
细胞膜通透性的观察
实验原理：
本实验将红细胞分别放于各种等渗溶 液中，由于红细胞膜对不同溶质的通
细胞生物学实验
东北师大 生科院
透性不同，使得不同溶质透入细胞的
速度相差很大，有些溶质甚至不能透 入细胞。当溶质分子进入细胞后可引 使细胞膨胀，细胞膜破裂，血红素溢
实验目的
实验原理
起渗透压升高，水分子随即进入细胞， 实验步骤
低渗对细胞的影响
细胞膜通透性的观察
实验目的
实验原理 实验步骤
作
思
业
考
细胞生物学实验
实验步骤：
• 3．分别在以下几种等渗溶液中重 复同样实验，观察有无溶血，以 及溶血时间。 0.17mol/L氯化铵、0.17mol/L醋 酸铵、0.17mol/L硝酸钠、 0.12mol/L草酸铵、0.12mol/L硫 酸钠、0.32mol/L葡萄糖、 0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇、 0.32mol/L丙酮、0.32mol/L乙二 醇。
细胞生物学实验
实验目的
细胞膜通透性的观察
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冻存细胞的复苏
1、于液氮罐中取出冻存管。
2、37℃水浴锅中摇动，使之快速融化。
3、超净台内酒精棉球擦拭，打开冻存管，吸出细胞悬液，注入离心管中，再滴加2倍培养液，混匀。
4、离心：1500转/分，3分钟，弃上清。
5、吸取2-3ml培养液加入到离心管中，吹打制悬，接种到培养瓶中，37℃培养。
组织块法培养骨骼肌细胞
1、将新生大鼠处死，再用酒精棉球擦拭其全身消毒，带入超净台内于肩关节和髋关节处剪取四肢（去爪），置培养皿中。
2、PBS液中，清理血污，剥去皮肤。
3、用PBS液洗涤两次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。
4、用将肌组织从骨骼上剪切下来，PBS液清洗后转移至干净培养皿中。
5、加少量培养液，将组织剪成1mm3小块，用吸管将其转移到培养瓶，贴附与瓶底面。
翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。
入37℃培养箱静置0.5-1小时，轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养。
贴壁细胞的传代和冻存
1、超净台中打开细胞培养瓶，用吸管将培养液吸出。
2、加入PBS液，使其覆盖培养瓶底部，轻轻摇动后倒掉。
3、加入消化液，以覆盖整个培养瓶底部，盖好瓶盖，于倒置显微镜下观察，待
见到细胞质回缩、细胞间隙增大后于超净台内倒掉消化液。
4、加培养液终止消化。
5、用吸管吸取培养瓶中的培养液，反复吹打瓶壁，制备细胞悬液。
6、将细胞悬液吸入离心管中，离心1500转/分，3分钟，倒掉上清。
7、加入3ml培养液于离心管中，吹打制悬。
8、取2ml细胞悬液进行接种后，剩余细胞悬液继续离心1500转/分，3分钟。
9、去上清，加入1ml冻存液，制悬，转移到冻存管，再按照-4℃1小时→-20℃
2小时→-80℃2小时→液氮的顺序进行冻存。
细胞计数
血球计数板每一大方格长为1mm，宽为1mm，高为0.1mm，体积为0.1mm3，可容纳的溶液是0.1μl，那么每ml溶液中所含细胞数即是视野中每一大方格中数出的细胞数的10000倍。
实验步骤
（一）准备计数板：用酒精清洁计数板和盖玻片，然后用吸水纸轻轻擦干（二）制备细胞悬液：用胰蛋白酶消化单层培养细胞或收集悬浮培养细胞，制成单个细胞悬液。
要求细胞密度不低于104/ml，若细胞数很少，应将悬液离心（1000rpm，3min），重悬浮于少量培养液中。
（三）加样：将盖玻片盖在计数板两槽中间。
用吸管轻轻吹打细胞悬液，吸取少量细胞悬液，在计数板上盖玻片一侧加细胞悬液，加样量不要溢出盖玻片，也不要过少或带气泡。
否则要将计数板和盖玻片擦干净重新加样。
（四）计数：在显微镜下，用10×物镜观察计数板四角大方格中的细胞数，细胞压中线时，只计左侧和上方者，不计右侧和下方者。
（五）计算：将计算结果代入下式，得出细胞密度。
细胞数/毫升原液=（4大格细胞数之和/4）×104×稀释倍数
转染
Lipofectamine 2000转染试剂转染步骤（24孔板）：
1、转染前一天，胰酶消化细胞并计数，在24孔板内放入玻片，细胞铺板，使其在转染日细胞密度为70-85％。
细胞铺板在1ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
2、配制溶液A和溶液B
（1）溶液A：对于每孔细胞，使用50ul无血清培养基稀释0.8ugDNA，轻轻混匀。
（2）溶液B:使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用50ul无血清培养基稀释2ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。
3、室温下孵育5min。
4、将溶液A逐滴加入溶液B中，轻轻混匀。
室温放置20分钟。
5、将24孔板中的旧培养液吸出，用无血清培养基清洗两次。
6、直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。
在4-6小时后观察细胞，更换培养基。
（step1--step6: 转染1）
7、在37℃，5％CO
2
中继续培养。
8、48h后，用荧光显微镜观察。
细胞凋亡检测
1、取洁净盖玻片于多聚赖氨酸中浸泡5min，紫外消毒，无菌超净台内吹干。
将盖玻片置于培养皿中，接种细胞培养，使为50%-80%满。
2、加入H
2O
2
（200μmol/l）刺激细胞发生凋亡，2h后换液，继续培养过夜。
（step1—step2:凋亡1）(H
2O
2
储存浓度为：0.01μmol/μl)
3、取出细胞爬片（注意细胞面朝上），放入玻璃培养皿中，吸尽培养液，用丙酮溶液室温下固定细胞10 min。
4、去固定液，用PBS洗涤2遍，每次3min ，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床或手动晃动数次。
5、加入0.5ml Hoechst 33342 染色液，染色5min，也用摇床轻轻晃动，注意避光。
6、用PBS洗两遍，每次3分钟。
7、滴10ul封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免空气，使细胞接触封片液（细胞面朝下），切勿弄反。
8、设空白对照：与试验平行不加H
2O
2
，只加培养液的空白对照。
细胞增殖的检测（MTT法）
1、收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板（96孔平底板）使待测细胞调密度至5000-8000孔，5%CO
2
，37℃培养过夜。
2、第二天加入浓度梯度的H
2O
2
（0、50、100、200、400、800μmol/l）。
药
物浓度6个梯度,设3个复孔。
3、5%CO
2
，37℃孵育2小时，倒置显微镜下观察，换液，每孔100ul培养液,继续培养过夜。
（step1—step2: MTT 1）
4、每孔加入20ul MTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。
5、终止培养，小心去除孔内培养液。
6、每孔再加入150ul二甲亚砜，在酶联免疫检测仪中振荡混匀，使结晶物充分溶解，OD490nm处测量各孔的吸光值。
免疫荧光
1、细胞培养在盖玻片上，长到60-80%时取出（注意细胞面朝上）放到玻璃培养皿中。
2、PBS洗细胞3次，每次3min。
•3、丙酮溶液室温下固定细胞10 min，PBS洗两次，用滤纸吸干多余液体。
•4、10%羊血清温育10min。
•5、弃封闭液，直接滴加约15µL（1：50稀释）抗微管蛋白抗体(一抗)在生长有细胞的盖玻片上，放入湿盒内，4℃孵育过夜。
（step1—step6: MTT1）•6、PBS洗涤3次，每次洗3min。
用滤纸吸去水分，略干燥。
•7、在盖玻片上滴加20 µL左右FITC-羊抗鼠抗体（二抗），放在湿盒内，37℃温育45min，注意避光。
•8、用PBS洗细胞3次，每次5min。
•9、DAPI染色3min。
11、用PBS洗细胞3次，每次5min。
•12、略干燥后，用甘油-PBS(9:1)封片，置荧光显微镜下观察。