蔗糖合成酶(Sucrose synthase,SS)试剂盒说明书
土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase,S-SC)试剂盒使用说明
土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase,S-SC）试剂盒使用说明分光光度法50管/24样货号：BC0240产品简介：S-SC能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收，其酶促作用产物与土壤中有机质、氮、磷含量，微生物数量及土壤呼吸强度密切关，是评价土壤肥力的重要指标。
S-SC催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3，5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范围内540nm光吸收增加速率与S-SC活性成正比。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。
产品内容：试剂一：甲苯5mL×1瓶，4℃保存；（自备）试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前每瓶加入40mL蒸馏水充分溶解备用；试剂四：液体45mL×1瓶，4℃保存；标准品：粉剂×1支，4℃保存，含10mg无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入1ml 蒸馏水溶解备用，4℃可保存1周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。
标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至0.5、0.4、0.3、0.2、0.1mg/ml。
操作步骤：试剂名称测定管对照管标准管风干土样（g）0.10.1-试剂一（μL）1515-振荡混匀，使土样全部湿润，37℃放置15min-试剂二（μL）250250-试剂三（μL）750--蒸馏水（μL）-750-混匀，放入37℃水浴培养24小时，10000g，4℃，离心5min，取上清液，同时准备标准品上清液或标准品（μL）200200200试剂四（μL）500500500充分混匀，放入沸水浴中煮沸5min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀。
标准曲线的建立：540nm处蒸馏水调零，读标准管吸光值A。
以浓度（y）为纵坐标，吸光度A（x）为横坐标建立标准曲线。
蔗糖合成酶(Sucrose synthase,SS)试剂盒说明书
货号：QS2504 规格：50管/24样蔗糖合成酶（Sucrose synthase，SS）试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：蔗糖是源（叶片等）光合产物向“库”器官运输的主要形态。
蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是双向反应酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代谢的关键酶之一。
研究其合成方向SS-Ⅱ的活性对于植物蔗糖合成具有重要意义。
测定原理：SS-Ⅱ催化游离果糖与葡萄糖供体UDPG反应生成蔗糖，蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水试剂的组成和配制：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体4mL×1瓶，-20℃保存；试剂二：1000μg/mL蔗糖溶液10mL×1瓶，4℃保存；试剂三：液体3mL×1瓶，4℃保存试剂四：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存；样品测定的准备：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定管需要设一个对照管。
SS-Ⅱ活性计算：第1页，共2页1、按照蛋白浓度计算单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅱ活性(μg /min/mg prot)= C标准管×V1×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷Cpr2、按照样本鲜重计算单位定义：每g组织每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
实验二蔗糖酶培训课件
详细了解整个实验的操作流程，包括试剂的配制、样品处理、测 定等步骤。
实验步骤
试剂配制
按照一定的比例配制缓 冲液、工作液等，确保 试剂的质量和准确性。
加样处理
将待测样品加入离心管 中，加入适量的缓冲液 和工作液，充分混合均 匀。
孵育
将混合液放入适宜温度 下孵育一定时间，使蔗 糖酶充分分解葡萄糖。
通过实验方法和技术的学习，提高实验技能和实践能 力
通过实验数据的分析和处理，提高科学素养和分析能 力
02
蔗糖酶基础知识
蔗糖酶简介
蔗糖酶是一种水解蔗糖的酶，它属于转化酶家族 。
蔗糖酶的主要作用是分解蔗糖，将其转化为葡萄 糖和果糖。
蔗糖酶在自然界中广泛存在，特别是在高等植物 和微生物中。
蔗糖酶的分类和分布
实验二蔗糖酶培训课件
xx年xx月xx日
contents
目录
• 实验目的和背景 • 蔗糖酶基础知识 • 实验操作流程 • 数据分析和处理 • 实验结果展示 • 生活中的应用 • 学习体会分享
01
实验目的和背景
实验目的
掌握蔗糖酶的基本 性质和作用机理
了解蔗糖酶在食品 、发酵和生物能源 等领域的应用
分光光度计测 定
在适当的波长下，使用 分光光度计测定吸光度 值，从而计算出葡萄糖 的含量。
数据记录和处 理
记录实验数据，整理成 表格，计算葡萄糖含量 以及蔗糖酶的活力等指 标。
实验注意事项
注意安全
实验过程中需要注意安全问题，如戴手套、口罩 等防护措施，避免直接接触有毒有害物质。
实验规范
严格遵守实验室规范，保持实验环境的整洁和卫 生，避免污染和交叉污染。
学习使用和操作蔗 糖酶相关实验的方 法和技术
糖原合成酶(GCS)活性检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4178
糖原合成酶（GCS ）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：UPLC-MS-4178规格：100T/96S微量法产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体110mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体25mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体7.5mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体20μL×1支2-8℃保存试剂四粉剂×2支-20℃保存试剂五粉剂×2支-20℃保存试剂六液体45μL×1支2-8℃保存试剂七粉剂×2支-20℃保存试剂八粉剂×2瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂四：用前取1支加入1.5mL 试剂一充分溶解，-20℃分装保存4周，避免反复冻融；2、试剂五：用前取1支加入1.5mL 试剂一充分溶解，-20℃分装保存4周，避免反复冻融；3、工作液的配制：临用前将试剂三离心，取10μL 试剂三，加7mL 试剂一、1.5mL 试剂四、1.5.mL 试剂五，充分混合（约66T），现用现配，也可根据样本量按比例配制；4、试剂八的配制：（1）临用前取1瓶试剂八加入2.5mL 试剂二溶解，再加入1支试剂七溶解，可-20℃分装保存4周，避免反复冻融；（2）用前试剂六先离心，取14μL 试剂六加入1.46mL 上述（1）中溶液，充分混合（约36T ），现用现配，也可根据样本量按比例配制。
产品说明：糖原合成酶（Glycogen synthase ,GCS ）将UDPG 的糖基加到原有糖原或是糖原蛋白的非还原端，以α-1,4糖苷键连接。
GCS 是动物机体糖原合成过程的限速酶，同时也是胰岛素作用的主要靶酶，在糖代谢及维持血糖相对稳定的过程中有着重要作用。
GCS 催化UDPG 和葡萄糖残基生成糖原和UDP ，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH 生成NAD +，在340nm 下测定NADH 的下降速率，即可反映GCS 活性。
棉花蔗糖合成酶_SuSy_分子结构特征与功能预测分析_卢合全
西北植物学报,2005,25(7):1372—1376Acta Bot.Boreal.-Occident.Sin.文章编号:1000-4025(2005)07-1372-05棉花蔗糖合成酶(SuSy)分子结构特征与功能预测分析卢合全1,沈法富1*,刘凌霄1,孙维方2(1山东农业大学农学院,山东泰安271018;2宁阳县农业局,山东宁阳271400)摘 要:从生物信息学角度,利用http://w w .ex pasy.o rg、http://ww w.ch.embnet.o rg和N CBI的核酸/蛋白质结构特征在线分析工具,对棉花蔗糖合成酶(Su Sy,sucr ose synthase E.C.2.4.1.13)基因及其推导的氨基酸序列进行结构特征和功能域预测分析,探讨了棉花蔗糖合成酶的亲/疏水性、信号肽、跨膜拓扑结构、卷曲螺旋结构及功能域。
结果表明该酶具有2个卷曲螺旋区段:20～30和190～215氨基酸区域,没有信号肽,是一个非跨膜的亲水性稳定蛋白,包含两个功能结构域7～555(Suc ro se-sy nth)和568～747(Gly co se-t ransf-1),分别行使蔗糖合成功能、糖基化合物(U D P、AD P、G DP或CM P)转移功能。
关键词:棉花;蔗糖合成酶(SuSy);结构特征;功能;生物信息学中图分类号:Q71;S562 文献标识码:AAnalysis and Prediction of Structural Characteristics and Functionsof Sucrose Synthase Molecule in CottonLU He-quan1,SHEN Fa-fu1*,LIU Ling-xiao1,SUN W ei-fang2(1Departmen t of Agronom y,Sh and ong Agricultural Univ ersity,Taian,Shandong271018,China;2Ag ricultu ral Bureau ofNingyang Cou nty,Ningyang,Shandong271400,China)Abstract:In term s of bioinfomatics a nd by m ea ns o f http://w .expasy.o rg、http://ww .and N CBI nucleic acid/pro tein o nline a naly tical utility,sucrose synthase gene as w ell as the struc-tural cha racteristic and functio nal do mains of sucrose synthase a mino acid sequence w as analy zed and pre-dicted in cotto n.Meantim e,the hydrophilicity,hydro phobicity,sig nal peptide,transmembrane to polo gical structure,w inded helical structure and functional do mains of sucrose sy nthase w ere also discussed.The re-sults sho wed tha t sucro se sy nthase had two helical seg ment that w ere20～30ammio acid sequence and190～215amino acid sequence,and did no t contained sig nal peptide;it was a stable no n-transmembrane a nd hydrophilic protein including tw o functional domains,7～555(sucrose-synth)and568～747(fglycose transf-1),which play ed the roles of the sy nthesis sucro se and the transfer o f glycosyl co mpo unds,respec-tiv ely.Key words:co tto n;sucrose synthase;structural characteristic;functio n;bioinfo rmatics 植物蔗糖合成酶(sucrose sy nthase,SuSy E.C.2.4.1.13)是由分子量约为83～100kD的亚基构成的四聚体[1],是植物蔗糖代谢关键酶中极其重要的一种酶。
蔗糖合成酶(分解方向;SS-I)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
蔗糖合成酶（分解方向；SS-I）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC4310规格:50T/24S产品内容：提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体8mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加入2.5mL试剂一充分溶解待用，用不完的试剂建议分装后，-20℃保存，避免反复冻融。
试剂三：液体8mL×1瓶，4℃避光保存。
标准品：粉剂×1支，20mg果糖；4℃保存。
临用前加入1mL蒸馏水溶解，配成20mg/mL果糖溶液备用。
4℃保存一周。
产品简介：蔗糖合成酶（Sucrose Synthase，SS）是植物糖代谢过程的关键酶，负责催化蔗糖分解与合成的可逆反应，其分解活性可以催化蔗糖水解成UDPG与果糖，参与淀粉、纤维素和半纤维素的合成等代谢途径。
分解方向SS-I催化蔗糖和UDP生成果糖与UDPG，果糖与3,5-二硝基水杨酸反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质，通过测定540nm处吸光值变化可计算得SS-I活性。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、台式低温离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。
操作步骤：一、粗酶液提取：组织：按照质量（g）:提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，8000g，离心10min，取上清置于冰上待测。
二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、将20mg/mL标准液用蒸馏水稀释为5、4、3、2、1mg/mL的标准溶液备用。
3、操作表：(在1.5mL离心管中操作)试剂名称（µL）对照管测定管标准管空白管样本2020--标准溶液--20-蒸馏水---20试剂一808080试剂二-80--混匀，30℃水浴30min后，95℃水浴10min（盖紧，防止水分散失）。
实验操作指导书：蔗糖酶的提取与部分纯化
（一）蔗糖酶的提取与部分纯化一、实验目的：学习酶的纯化方法，并为动力学实验提供一定量的蔗糖酶。
二、试剂：1. 啤酒酵母2. 二氧化硅3. 甲苯（使用前预冷到0℃以下）4. 去离子水（使用前冷至4℃左右）5. 冰块、食盐6. 1N乙酸7. 95%乙醇三、仪器：1. 研钵1个2. 离心管3个3. 滴管3个4. 量筒50ml 1个5. 水浴锅1个6. 恒温水浴7. 烧杯100ml 2个8. 广泛pH试纸9. 高速冷冻离心机四、操作步骤：1. 提取（1）准备一个冰浴，将研钵稳妥放入冰浴中。
（2）称取5g干啤酒酵母和20g湿啤酒酵母，称20mg蜗牛酶及适量（约10g）二氧化硅，放入研钵中。
二氧化硅要予先研细。
（3）量取预冷的甲苯30ml缓慢加入酵母中，边加边研磨成糊状，约需60分钟。
研磨时用显微镜检查研磨的效果，至酵母细胞大部分研碎。
（4）缓慢加入预冷的40ml去离子水，每次加2ml左右，边加边研磨，至少用30分钟。
以便将蔗糖酶充分转入水相。
（5）将混合物转入两个离心管中，平衡后，用高速冷离心机离心，4℃，10000rpm，10min。
如果中间白色的脂肪层厚，说明研磨效果良好。
用滴管吸出上层有机相。
（6）用滴管小心地取出脂肪层下面的水相，转入另一个清洁的离心管中，4℃，10000rpm，离心10min。
（7）将清液转入量筒，量出体积，留出1.5ml测定酶活力及蛋白含量。
剩余部分转入清洁离心管中。
（8）用广泛pH试纸检查清液pH，用1N乙酸将pH调至5.0，称为“粗级分I”。
2. 热处理（1）予先将恒温水浴调到50℃，将盛有粗级分I的离心管稳妥地放入水浴中，50℃下保温30分钟，在保温过程中不断轻摇离心管。
（2）取出离心管，于冰浴中迅速冷却，用4℃，10000rpm，离心10min。
（3）将上清液转入量筒，量出体积，留出1.5ml测定酶活力及蛋白质含量（称为“热级分II”）。
3. 乙醇沉淀将热级分II转入小烧杯中，放入冰盐浴（没有水的碎冰撒入少量食盐），逐滴加入等体积预冷至－20℃的95%乙醇，同时轻轻搅拌，共需30分钟，再在冰盐浴中放置10分钟，以沉淀完全。
甘蔗的蔗糖合成与糖代谢途径
甘蔗的蔗糖合成与糖代谢途径甘蔗作为一种经济作物，被广泛种植和利用。
其主要产品之一就是蔗糖。
甘蔗中的蔗糖合成与糖代谢途径是许多研究者关注的重点。
本文将就甘蔗蔗糖的合成与糖代谢途径进行探讨。
首先，我们来了解一下甘蔗中蔗糖的合成过程。
甘蔗中蔗糖的合成主要是通过光合作用和炭水化合物的代谢来完成的。
在光合作用中，甘蔗通过叶绿素吸收太阳光能，将二氧化碳和水转化为葡萄糖。
葡萄糖是合成蔗糖的原料之一。
在甘蔗中，蔗糖合成的关键酶是蔗糖磷酸合成酶（Sucrose phosphate synthase，SPS）。
SPS是一种亲合Krebs磷酸途径和蔗糖磷酸代谢的酶，它促进了蔗糖的合成。
蔗糖磷酸合成酶可以催化果糖-6-磷酸和UDP葡萄糖之间的反应，产生葡萄糖-6-磷酸和蔗糖-6-磷酸。
而蔗糖-6-磷酸经过一系列的反应，最终生成了蔗糖。
此外，甘蔗中还有一种重要的酶——蔗糖合成酶（Sucrose synthase，SuSy）。
蔗糖合成酶与SPS协同作用，参与蔗糖的合成过程。
它能够催化UDP葡萄糖和蔗糖-6-磷酸之间的反应，形成蔗糖和UDP，其中UDP是可再生的。
蔗糖合成酶在甘蔗中起到了重要的调控作用，它能够影响蔗糖的合成速率和分布。
在甘蔗的糖代谢途径中，除了蔗糖合成过程外，还存在着蔗糖分解的途径。
当甘蔗需要能量时，蔗糖会被分解成葡萄糖和果糖。
这个过程主要依赖于蔗糖酶（invertase）、果糖苷酶（fructosidase）和酵素蔗糖磷酸水解酶（sucrose phosphorylase）等。
这些酶能够将蔗糖分解成其组成的单糖，以供能量代谢。
此外，在甘蔗中还存在着糖原的合成和分解过程。
当甘蔗中储存的蔗糖过多时，它会被转化成糖原，以减少过多的蔗糖对植物的影响。
糖原是由葡萄糖组成的多糖，在植物细胞内起储存能量的作用。
总结来说，甘蔗的蔗糖合成与糖代谢途径是一个复杂的过程，涉及到多种酶的协同作用。
蔗糖合成的关键酶包括蔗糖磷酸合成酶（SPS）和蔗糖合成酶（SuSy），它们通过调节蔗糖的合成速率和分布来影响甘蔗的生长和发育。
分光光度法测定蔗糖合成酶(SS)、蔗糖磷酸合成酶(SPS)酶活性
蔗糖是重要的光合产物，是植物体内运输的主要物质，优势碳水化合物的暂贮形式之一。
蔗糖合成酶（SS）、蔗糖磷酸合成酶（SPS）是植物体内催化蔗糖合成的两种酶。
对这两种酶活性的测定，可以了解植物组织合成蔗糖能力的高低。
【实验原理】蔗糖合成酶催化游离果糖与葡萄糖工体UDPG反应生成蔗糖。
UDPG+果糖---蔗糖+UDP这是一个可逆反应，平衡常数为1.3-2.0。
该酶在分解方向的Km值相对较高（30-150mmol/L），细胞中高的蔗糖浓度有利于反应向分解方向进行。
蔗糖合成酶活性测定既可在合成方向进行测定（外加底物UDPG和果糖，测产物蔗糖的量表示酶活性），也可以在分解方向进行测定（外加蔗糖和UPD，测定果糖含量表示酶活性）。
蔗糖磷酸合成酶（SPS）催化UDPG与果糖-6-磷酸（F6P）结合形成磷酸蔗糖：UPDG+F6P---蔗糖-6-P+UDP+H+6-磷酸蔗糖可以经磷酸蔗糖酶（SPP）水解后形成蔗糖。
实际上最近有证据证明SPS 和SPP可以在体内形成一个复合体，因此使得SPS催化的反应基本上是不可逆的。
酶活性测定是外加UDPG和F6P，测定产物蔗糖的量表示酶活性。
一般把SPS-SPP系统看作是蔗糖合成的主要途径，而把蔗糖合成酶看作是催化蔗糖分解的。
果糖是酮糖，可与间苯二酚混合加热反应生成红色产物，在一定范围内糖的含量与反应液颜色成正比。
蔗糖在含有盐酸的间苯二酚中水解成葡萄糖和果糖，也能生成红色产物，在480nm处可比色测定。
【实验材料】植物茎【仪器设备及设备】冷冻离心机，恒温水浴，分光光度计，研钵一套，磁力搅拌器，天平（感量0.01mg），0.1、0.5、1、5ml移液管各1个，10ml具塞试管10支，5ml量瓶一个，冰箱【试剂药品】1.提取缓冲液：100mmol/L Tris-HCl(PH7.0)缓冲液，内含5mmol/LMgCl 2,2mmol/LEDTA-Na 2,2%乙二醇，0.2%牛血清蛋白（BSP），2%PVP，5mmol/LDTT。
植物蔗糖合成酶(SS)试剂盒说明书
植物蔗糖合成酶(SS)试剂盒说明书试验原理：植物蔗糖合成酶(SS)试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。
内容及其配制自备材料1）蒸馏水。
2）加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3）振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1）避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2）实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3）不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
作注意事项1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3）不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7）底物A应挥发，避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
8）加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9）按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法1）血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2）血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。
1000×g离心30分钟去除颗粒。
蔗糖合成酶(SS)、蔗糖磷酸合成酶(SPS)
1．2．1蔗糖合成酶(SS)、蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性参照於新建[]的方法并稍加改进。
酶液提取：取0.5g左右预冷的水稻叶片(剪碎的去主叶脉的叶片)，加4 mL缓冲液A(50mmol ／L Tris—HC1，pH 7．0、10 mmol／L MgC12、2 mmol／L EDTA-Na2、20 mmol／L巯基乙醇、2％乙二醇)于预冷的研钵中冰浴快速研磨成糊状，倒入离心管中，在低温冷冻离心机上4℃ 10000 r／rmin离心30 min，所得上清液用于酶活性测定。
SS活性的测定：在总体积0.15 mL的反应介质(含50 mmol／L Tris—HCL，pH7.0、10 mmol ／L MgC12, 10 mmol／L果糖、3 mmol／L UDPG)中，加入100uL酶液，30℃水浴中反应10 min，加入2 mol／L NaOH 0.05mL，沸水煮10 min，流水冷却。
再加入1．5 mL浓盐酸和0．5 mL 0．1％的间苯二酚，摇匀后置于80℃水浴保温10 min，冷却后于480nm处比色测定蔗糖的生成。
活性单位以[蔗糖nmol／(g·min)，Fw]表示。
SPS活性的测定：在蔗糖合成酶反应体系中用10 mmol／L果糖-6-磷酸取代10 mmol／L果糖，其余均按蔗糖合成酶的方法。
活性单位以[蔗糖umol／(g·h)，Fw]表示。
药品配制（按100份）酶液提取1 配制缓冲液A---1000ml200mmol／L Tris—HC1----500ml200m mol／L Tris 12.1g----500ml蒸馏水，200m mol／L HC1／L 8.36ml盐酸（37%）加水491.63ml水将250 ml Tris+233.5 ml HC1，在此液中加入MgC12（分子量95.21，0.9521g），EDTA-Na2（含两个结晶水分子量372，g），巯基乙醇（分子量78，ml），乙二醇（分子量，ml），最后加蒸馏水定容到1000ml2 配制缓冲液B---1000ml 5 ml12.5ml Tris+11.65ml HCl，加入MgC12 0.0238g，果糖（259.19分子量，0.1296g），加入UDPG （Uridine 5′-diphosphoglucose disodium salt from Saccharomyces cerevisiae分子量610.27，19.1ug）,定容到25ml 容量瓶12.5ml Tris+11.65ml HCl，加入MgC12 0.0238g，加入果糖-6-磷酸（304.1分子量，0.03041g），UDPG（Uridine 5′-diphosphoglucose disodium salt from Saccharomyces cerevisiae分子量610.27，19.1ug）,定容到25ml 容量瓶3 . 2 mol／L NaOH 50ml 0.4g 定容至50 ml4.0．1％的间苯二酚1g 999ml 蒸馏水5．做蔗糖标准曲线植物组织ATP酶活性测定一、原理ATP酶（adenosinetriphosphatase）可催化ATP水解生成ADP及无机磷的反应，这一反应放出大量能量，以供生物体进行各需能生命过程。
新版蔗糖转化酶活性测定作业指导书
作业指导书O P E R A T I N G I N S T R U C T I O N S蔗糖转化酶活性的测定编号：XZJY032-00-2019版本：第一版第0次修改编制：审核：批准：实施日期：2019.03.01一、编制目的为规范单位对蔗糖转化酶活性检测的操作，编制本作业指导书。
二、适用范围本标准适用于蔗糖转化酶活性的测定。
三、编制依据GB/T 4928-2008《啤酒分析方法》四、实验原理不经巴氏灭菌或高温灭菌的啤酒，酒体中各种酶系仍保持着活性，其中的蔗糖转化酶可以将蔗糖分解为葡萄糖，利用葡萄糖鉴别试纸可以检查酒体中的蔗糖转化酶活性。
五、试剂和材料5.1 蔗糖溶液（250g/L）：称取蔗糖25g，用水溶解，并定容至100mL。
5.2 葡萄糖鉴别试纸。
六、仪器6.1 移液管。
6.2 试管。
6.3 恒温水浴：控温精度±0.5℃。
七、操作步骤分别吸取酒样10mL于三支试管中。
于第一支试管中加水2.0mL，摇匀。
将第二支试管置于沸水中加热2min，取出冷却。
于第二支试管和第三支试管中各加入2.0mL蔗糖溶液，摇匀。
然后三支试管同时置于30℃±0.5℃水浴中保温30min。
随后将三支试管再同时置于沸水中加热2min，取出，冷却至室温。
分别用葡萄糖鉴别试纸的一端浸入各试管中30s~60s，取出，立即观察其颜色变化，记录结果。
八、判定若C管试纸变色且颜色深于A管和B管，则判为生啤酒或鲜啤酒。
若不变色或者与A管和B管颜色无差别，则判为熟啤酒。
[指南]蔗糖合成酶的测定方法
![[指南]蔗糖合成酶的测定方法](https://img.taocdn.com/s3/m/bf412762a517866fb84ae45c3b3567ec102ddcd2.png)
0000蔗糖合成酶的测定方法一、仪器设备0000000冷冻离心机、恒温水浴、分光光度计00000000二、试剂0000000HEPES-NaOH（50mmol/L，pH7.5）缓冲液，包括50mmol/L MgCI2；2mmol/LEDTA；0.2%(W/V)BSA；2%PVP；00000000.1%间苯二酚：称取0.1g溶解并定溶于100ml 95%乙醇中。
000000030%盐酸、2mol/L NaOH、100mmol/L UDPG、100mmol/L6-磷酸果糖、100mmol/L果糖0000000三、操作方法00000001、粗酶液制备0000000称取0.5g样品（植物叶片去掉主叶脉），洗净剪碎，置于预冷的研钵中，加3ml Hepes-NaOH 缓冲液，冰浴研磨，10000×g离心10min。
000000002、酶活性测定0000000依次加入50μL粗酶液，00000050μLHepes-NaOH缓冲液pH7.5，0000000020μL 50 mmol/LMgCI2，000000020μL 100mmol/L UDPG，000000020μL 100mmol/L6-磷酸果糖（20μL 100mmol/L果糖），000000030℃中反应30min后，加入200μL 2mol/L NaOH终止反应，沸水煮10min，流水冷却，加入1.5ml 30%盐酸和0.5ml 0.1% 间苯二酚，摇匀后置于80℃水浴保温10min，冷却后置于480nm处，以提前杀死酶活性为空白比色测定蔗糖含量。
000000同时取50μL粗酶液，加入200μL 2mol/L NaO H，以下同上操作，测定蔗糖含量。
00000003、蔗糖标线制作：00000000取0、40、80、120、160、200μg/ml的蔗糖溶液50μL，操作同上，然后以蔗糖浓度为纵坐标，以吸光值为横坐标，得方程。
000000004、计算0000000样品中酶活性（μg·g﹣1·h﹣1）=0000000式中C—反应液催化产生的蔗糖总量（μg）；0000000V1—提取酶液时加入的缓冲液体积（ml）；0000000V2—酶反应时加入的粗酶液体积（ml）0000000淀粉酶活性的测定0000001方法00000001.1试剂配制淀粉酶提取缓冲液：0.1mol/L-1柠檬酸溶液(pH 5.6);1%的淀粉溶液：用0.1mol/L-1的柠檬酸缓冲液(pH 5.6)配制；标准麦芽糖溶液(1mg/mL-1);3,5-二硝基水杨酸试剂(DNS试剂):称取6.5 g 3,5-二硝基水杨酸溶于少量水中，移入1000 mL容量瓶中，加入325 mL 2mol·L-1 NaOH溶液，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容到1000 mL。
蔗糖酶-酶工程实验
3，5-二硝基水杨酸 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
试剂 （ml）
保温时间
在 100℃恒温水浴中加热 5 分钟
蒸馏水 （ml） 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7
混匀
A520nm 还原糖（mg） 6、测定样品 I、II、III 的蛋白质含量 0.8ml的样品I、II、III加入 3.2ml的考马斯亮蓝溶液，反应时间为 10min，测定的A595 值，依据上述公式 即可计算出样品的蛋白质含量。
3、蔗糖酶活性测定原理 蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶 EC 3.2.1.26），是一种水解酶。它能催化非还原性双糖（蔗 糖）的 1,2-糖苷键裂解，将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖（还原糖）。因此，每水解 1mol 蔗糖，就能生 成 2mol 还原糖。还原糖的测定有多种方法，例如：纳尔逊－索模吉（Nelson-Smogyi）试剂比色法，斐林 试剂法等。 本实验采用 3.5-二硝基水杨酸法测定还原糖的含量，由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是 3.5-二硝 基水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正 比。因此可利用分光光度计在 520nm 进行比色测定，求得样品中的含糖量。此法操作简便、迅速、杂质干 扰较小。 蔗糖酶活力单位(u)：蔗糖酶在室温(25℃）, pH4.5 的条件下，每分钟水解产生 1μmol 葡萄糖所需的 酶量(ml)。 蔗糖酶比活力的计算：每毫克蛋白质所具有的酶活力单位数，一般用酶活力单位/mg 蛋白质表示。酶 的比活力在酶学研究中用来衡量酶的纯度，对于同一种酶来说，比活力越大，酶的纯度越高。利用比活力 的大小可以用来比较酶制剂中单位质量蛋白质的催化能力，是表示酶的纯度高低的一个重要指标。 比活力——酶的总活力单位数除以总蛋白 mg 数，即每 mg 蛋白所含有的酶活力单位数。 比活力＝活力单位/mg 蛋白 4、蛋白质浓度测定原理： Bradford 法是基于考马斯亮蓝 G-250 有红、蓝两种不同颜色的形式，在一定浓度的乙醇和酸性条件下， 可配成淡红色的溶液，当与蛋白质结合后，产生蓝色化合物，反应迅速稳定，反应化合物在 465～595nm 有最大的吸光值，化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。因此可检测 595nm 的光吸收值的大 小计算蛋白质的含量。 二、试剂和仪器 1、实验材料 （1）市售蔗糖酶， 95% 乙醇(-20℃）、透析袋；（2）5%蔗糖溶液 500ml；（3）20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液。 （4）0.2mol/L 乙酸缓冲液（pH 4.5）： A：0.2mol/L NaAC：称取 27.616g NaAC 溶解并定容至 1000ml。 B：0.2mol/L HAC：100ml 乙酸(分析纯)定容至 500ml。 将两者分别取 315ml、185ml 混合，用强碱调 pH 到 4.5。
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货号：QS2504 规格：50管/24样蔗糖合成酶（Sucrose synthase，SS）试剂盒说明书
可见分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
蔗糖是源（叶片等）光合产物向“库”器官运输的主要形态。
蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是双向反应酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代谢的关键酶之一。
研究其合成方向SS-Ⅱ的活性对于植物蔗糖合成具有重要意义。
测定原理：
SS-Ⅱ催化游离果糖与葡萄糖供体UDPG反应生成蔗糖，蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体4mL×1瓶，-20℃保存；
试剂二：1000μg/mL蔗糖溶液10mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体3mL×1瓶，4℃保存
试剂四：液体40mL×1瓶，4℃保存；
试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存；
样品测定的准备：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定管需要设一个对照管。
SS-Ⅱ活性计算：
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1、按照蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅱ活性(μg /min/mg prot)= C标准管×V1×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷Cpr
2、按照样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅱ活性(μg /min /g鲜重) = C标准管×V1×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷W
C标准管：标准管浓度，1000μg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.03mL； V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g
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