转基因小鼠与基因敲除小鼠的差异
基因编辑小鼠如何分类？
基因编辑小鼠如何分类？
基因编辑小鼠可分为三大类、7 小类：
（1）转基因（Tg）首先构建表达载体，包含启动子、增强子、编码区、polyA 等元件，然后将表达载体注入到受精卵的细胞核内，外源表达载体将插入到受精卵的基因组内，再将该受精卵移植到受体母鼠输卵管内，发育成为小鼠个体，该小鼠就会表达转入的外源基因。
（2）基因全身性敲除（KO）利用Crispr/Cas9 系统，在受精卵的目标基因的编码区两侧分别切断，然后受精卵在连接断口的过程中，会丢失掉断口之间的序列（即编码区）。
该受精卵移植到受体母鼠输卵管内，发育成为小鼠个体，该小鼠将无法表达目标基因，导致目标基因将完全失去活性，表现为全身性基因敲除。
（3）基因敲入（KI）首先构建打靶载体：包含同源臂和外源基因，然后将表达载体通过显微注射的方法注入到受精卵的细胞核内，同时利用 Crispr/Cas9 系统，在受精卵目的基因位置切断基因组 DNA，受精卵会通过同源重组将外源基因定点整合到基因组内。
该受精卵移植到受体母鼠输卵管内，发育成为小鼠个体，该小鼠就携带了转入的外源基因。
小鼠转基因干眼模型
小1.自鼠发小转鼠模基型 ：因干眼模型 1.5.IQI/Jic 小鼠 • 尽管直到8周龄左右雌性IQI/Jic小鼠颌下腺与雄性IQI/Jic小鼠泪腺中才检测到明显的 淋巴细胞浸润，但大约在小鼠四周龄左右便可在颌下腺与泪腺中检测到MHCII型分子， CD11c+与CD86+树突状细胞的存在，表明树突状细胞与表皮细胞可能是参与激活 CD4+T细胞的关键因素。 • 胸腺切除的IQI/Jic小鼠在出生后3天便可出现严重的泪腺损伤，其损伤严重度与未进 行胸腺切除术16周龄的IQI/Jic小鼠相仿，这一结果表明年轻的IQI/Jic小鼠体内的免疫 调节性T细胞可能对IQI/Jic小鼠自身免疫紊乱起到一定的调节作用。 • 最近研究表明伴随着IQI/Jic小鼠颌下腺腺体淋巴细胞的浸润与功能的紊乱，腺泡细胞 中存在着AQP5的分布异常。
基因敲除与转基因互补
基因敲除与转基因互补英文回答：Gene knockout and genetic complementation are two important techniques used in molecular biology and genetics research.Gene knockout refers to the process of intentionally disabling or "knocking out" a specific gene in an organism. This is typically done by introducing a mutation into the gene, rendering it non-functional. Gene knockout is used to study the function of a particular gene by observing the effects of its absence. For example, if a gene is suspected to be involved in a specific disease, researchers can create a knockout mouse model by disabling that gene and then observe the resulting phenotype to understand the gene's role in the disease.On the other hand, genetic complementation is a technique used to determine whether a specific phenotype iscaused by a mutation in a particular gene. It involves introducing a functional copy of the gene into an organism that carries a mutation in the same gene. If the introduced gene is able to restore the normal phenotype, it indicates that the mutation in the original organism was responsible for the observed phenotype. This technique is often used to confirm the causative role of a gene mutation in a particular disease or trait.Both gene knockout and genetic complementation have their own advantages and limitations. Gene knockout allows researchers to study the function of a specific gene by observing the effects of its absence. It helps in understanding the role of genes in development, disease, and other biological processes. On the other hand, genetic complementation helps in confirming the causative role of a gene mutation by restoring the normal phenotype. It provides evidence for the involvement of a specific gene in a particular phenotype or disease.中文回答：基因敲除和转基因互补是分子生物学和遗传学研究中两种重要的技术。
小鼠品种品系 等级 规格
小鼠品种品系等级规格【原创版】目录1.小鼠品种分类2.小鼠品系介绍3.小鼠等级划分4.小鼠规格标准正文【小鼠品种分类】小鼠是生物医学研究中最常用的实验动物之一，其品种繁多，主要可分为以下几类：1.实验小鼠：这类小鼠主要用于实验研究，具有稳定的遗传背景和生理特征，如 C57BL/6、BALB/c 等。
2.野生小鼠：这类小鼠来自自然界，具有较强的适应能力和繁殖力，如田鼠、黄鼠狼等。
3.宠物小鼠：这类小鼠主要用于家庭饲养，具有可爱的外观和温顺的性格，如金丝熊、仓鼠等。
4.转基因小鼠：这类小鼠通过基因工程技术，具有特定的基因改造，如基因敲除小鼠、基因敲入小鼠等。
【小鼠品系介绍】品系是指具有相同遗传背景的小鼠群体，通过长期的选育和纯化，品系内的小鼠具有相似的表型和基因型。
以下是一些常见的小鼠品系：1.C57BL/6：该品系小鼠为实验小鼠，广泛应用于遗传学、免疫学等领域的研究。
2.BALB/c：该品系小鼠具有较高的繁殖力和生长速度，适用于肿瘤学、生理学等方面的研究。
3.DBA/2：该品系小鼠为野生型小鼠，常用于实验小鼠的遗传背景对照。
4.NOD/ShiLtJ：该品系小鼠为自身免疫性疾病模型小鼠，用于研究类风湿性关节炎等疾病。
【小鼠等级划分】根据小鼠的繁殖代数和遗传纯度，可以将小鼠分为以下等级：1.F0 代：初次繁殖的小鼠，遗传纯度最高。
2.F1 代：F0 代小鼠间的杂交后代，遗传纯度较高。
3.F2 代：F1 代小鼠间的杂交后代，遗传纯度逐渐降低。
4.F3 代及以上：F2 代及以上的小鼠，遗传纯度较低，适用于一般实验研究。
【小鼠规格标准】在实验小鼠的饲养和采购过程中，需要根据实验要求选择合适的规格。
小鼠的规格主要从以下几方面来衡量：1.体重：通常分为幼鼠（10-20g）、亚成年鼠（20-40g）和成年鼠（40-60g）。
2.年龄：小鼠的年龄分为幼年、亚成年和成年，通常以出生天数或周数来表示。
3.健康状况：小鼠应具有良好的健康状况，如无明显皮肤病变、眼耳口鼻无异常等。
【干货】基因敲除小鼠鉴定方法
【干货】基因敲除小鼠鉴定方法
1、基因敲除阳性鼠的鉴定
在敲除的片段两端设计引物，扩增后电泳。
理论上敲除成功的小鼠扩增出的片段大小=野生型小鼠的片段大小－敲除的片段大小，所以可通过电泳图的条带大小来进行鉴别，但实际上，若敲除的片段过大，有的酶是扩增不出来野生型片段的，比如有的酶，1.5K以下基本可以P出条带，大于1.5K的大部分是P不出的，所以当野生型的条带无法扩增时，这对引物就不能鉴定纯杂合了。
1.1、野生型片段扩增不出来时
敲除的片段较大时，野生型相应的片段往往扩增不出来。
电泳结果若是无条带，则为野生型；若是只有一条条带，则为敲除小鼠（纯合或杂合）。
PS:条带大小=野生型片段大小-敲除片段大小
1.2、野生型片段可以扩增出来时
假设
条带1大小=野生型条带大小
条带2大小=野生型片段大小-敲除片段大小
当野生型的片段可以扩增出来时，电泳结果若是只有条带1，则为野生型；若是既有条带1又有条带2，则为杂合敲除小鼠；若是只有条带2，则为纯合敲除小鼠。
所以这种情况就不需要再设计引物鉴定纯杂合了。
选择性敲除小鼠神经细胞adam10基因导致胼胝体和海马联合发育不全
选择性敲除小鼠神经细胞adam10基因导致胼胝体和海马联合发育不全王义辉;李秀娟;黄珊珊;汪明欢【摘要】目的探讨adam 10基因在小鼠神经系统发育的作用.方法将gfapcrce 转基因鼠和adam 10loxlox转基因鼠杂交,得到神经细胞特异性adam10基因敲除鼠(gfapcre-adam10loxlox);在出生后第14d对小鼠大脑切片行HE染色和免疫组织化学染色,观察adam10基因敲除后神经系统发育情况.结果选择性敲除小鼠神经细胞adam10基因(gfapcreadam10loxlox)后,小鼠可存活至出生后3 w左右;HE染色发现胼胝体缺失,海马发育不全,髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)免疫荧光染色发现髓鞘发育异常.结论 Adam10基因在小鼠神经系统发育中具有重要作用,选择性敲除小鼠神经细胞adam10基因导致胼胝体和海马联合发育不全,髓鞘发育异常.【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》【年(卷),期】2015(024)003【总页数】5页(P219-223)【关键词】adam10;条件性基因敲除;中枢神经系统;胼胝体和海马联合发育不全【作者】王义辉;李秀娟;黄珊珊;汪明欢【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科,武汉430030;武汉市中西医结合医院老年病科,武汉430022;华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科,武汉430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科,武汉430030【正文语种】中文【中图分类】R322.81Adams（a disintigrin and metalloprotease）因其结构上具有解聚素（disintigrin）和金属蛋白酶（metalloprotease）二个重要的结构域而命名［1，2］。
Adam10是adams家族的一个亚型，在神经系统中特别是神经元有表达［3，4］，其作用底物广泛，其中包括Notch、Cadherin、Ephrin等［5－7］，这些底物分子在中枢神经系统发育中具有重要作用。
几种基因敲除鼠简介
目录
• 基因敲除鼠概述 • 条件性基因敲除鼠 • 全敲除鼠 • 诱导性基因敲除鼠
01 基因敲除鼠概述
基因敲除鼠的定义
• 基因敲除鼠：通过基因工程技术，将特定基因从 老鼠体内敲除，从而产生具有特定表型特征的转 基因动物。
基因敲除鼠的用途
疾病模型
药物筛选
基因敲除鼠可以模拟人类遗传性疾病 的发生和发展过程，用于研究疾病的 发病机制和治疗方法。
全敲除鼠通常是通过将经过基因 编辑的胚胎干细胞注入早期胚胎 中，然后移植到代孕母鼠体内发
育而成。
全敲除鼠的应用
01
02
03
疾病研究
全敲除鼠可以模拟人类遗 传性疾病，用于研究疾病 的发病机制、病理生理变 化和药物筛选等。
药物研发
全敲除鼠可以用于评估新 药对特定基因缺陷的治疗 效果，加速药物的研发进 程。
部分基因敲除鼠
03
将特定基因部分敲除或敲低，产生具有部分缺失或降低该基因
表达的转基因动物。
02 条件性基因敲除鼠
条件性基因敲除鼠的原理
条件性基因敲除鼠是通过基因打靶技术，将特 定基因的启动子替换为可诱导的启动子，使得 基因的表达只在特定条件下被激活或沉默。
可诱导的启动子通常来源于激素响应元件或化 学诱导系统，如四环素响应系统、干扰素响应 系统等。
药物研发
利用条件性基因敲除鼠可以筛选出 对特定疾病有疗效的药物，缩短药 物研发周期并提高成功率。
条件性基因敲除鼠的优缺点
优点
条件性基因敲除鼠具有高度特异性，可以避免全身敲除基因带来的副作用；同 时，可以在特定时间和空间范围内研究基因的功能，提高实验的可控性和精确 度。
缺点
条件性基因敲除鼠的构建过程复杂，需要较高的技术要求和时间成本；同时， 诱导系统的效果可能受到多种因素的影响，如激素水平、给药方式等。
基因工程小鼠名称解读
基因工程小鼠名称解读基因工程小鼠是指通过人为干预小鼠基因组的技术手段，使其表达特定基因或缺失特定基因，从而实现对基因功能的研究和相关疾病模型的建立。
这些小鼠通常被用于研究基因功能、疾病机制、药物筛选等方面。
在基因工程小鼠的命名中，常用的方式是根据其基因改造方式或目的来命名。
以下是一些常见的基因工程小鼠名称及其解读：1. 转基因小鼠（Transgenic mice），这类小鼠是通过将外源基因导入小鼠的基因组中而得到的。
这些外源基因可以来自其他物种，如人类或其他动物。
转基因小鼠常用于研究特定基因的功能、表达模式等。
2. 敲除小鼠（Knockout mice），这类小鼠是通过人为干预使特定基因在小鼠体内失去功能的方式得到的。
一般采用基因敲除或基因靶向突变技术，使小鼠体内特定基因的表达受到抑制或完全消除。
敲除小鼠常用于研究基因的功能缺失对生理和病理过程的影响。
3. 过表达小鼠（Overexpression mice），这类小鼠是通过人为干预使特定基因在小鼠体内过度表达的方式得到的。
通过引入外源基因或增强内源基因的表达水平，使小鼠体内特定基因的表达量显著增加。
过表达小鼠常用于研究基因的过度表达对生理和病理过程的影响。
4. 突变小鼠（Mutant mice），这类小鼠是指在小鼠基因组中引入或产生突变的小鼠，突变可以是点突变、插入突变、删除突变等。
突变小鼠常用于研究特定基因突变对生理和病理过程的影响。
除了上述常见的命名方式，基因工程小鼠还可以根据具体的研究目的、基因改造技术等来命名，例如组织特异性表达小鼠、条件性基因敲除小鼠等。
需要注意的是，基因工程小鼠的命名通常是根据研究者或研究机构的需求和约定来进行的，不同研究领域和实验室可能会有不同的命名方式和规范。
总体而言，基因工程小鼠的命名旨在描述其基因改造方式、基因功能或研究目的，以便研究者能够清楚地了解其特点和应用范围。
肿瘤小鼠造模方法
肿瘤小鼠造模方法肿瘤小鼠模型是研究肿瘤发展、治疗和预防的重要工具。
通过模拟人类肿瘤的形成和发展过程，可以更好地了解肿瘤的病理生理特征，并为肿瘤的早期诊断和治疗提供有益的信息。
下面我们将介绍几种常用的肿瘤小鼠造模方法。
1. 异种移植模型异种移植模型是最常用的肿瘤小鼠模型。
它通过将人类肿瘤细胞或肿瘤组织移植到小鼠体内形成肿瘤。
该方法可以用于研究肿瘤的生长、转移、侵袭和药物敏感性等方面。
在异种移植模型中，首先需要获取人类肿瘤细胞或肿瘤组织样本。
常用的来源包括人类肿瘤细胞株、肿瘤切片、肿瘤移植瘤等。
然后，将这些样本注射到小鼠体内，通常是通过皮下注射、腹腔注射或静脉注射的方式。
注射后，观察肿瘤的生长情况，定期测量肿瘤体积，并进行影像学检测以评估肿瘤的进展和治疗效果。
2. 转基因小鼠模型转基因小鼠模型是通过改变小鼠基因组中的特定基因，使其表达或缺失某种特定基因，从而模拟人类特定基因异常引起的肿瘤。
这种模型常用于研究特定基因对肿瘤发生和发展的影响。
转基因小鼠模型的制备通常分为两个步骤：基因敲除和基因敲入。
基因敲除是指将目标基因从小鼠基因组中彻底删除，而基因敲入是指将目标基因导入小鼠基因组中，使其表达或缺失。
基因敲除通常采用胚胎干细胞技术。
首先，通过体外培养的方法获得小鼠胚胎干细胞，然后，通过基因编辑技术，将目标基因从胚胎干细胞基因组中删除。
最后，将这些基因敲除的胚胎干细胞注入到小鼠的早期胚胎中，使其发育成为具有目标基因敲除的小鼠。
基因敲入通常采用质粒转染、病毒载体转染或基因修复等方法。
通过以上方法，将目标基因导入小鼠的基因组中，使其表达或缺失。
这种模型的制备过程比较复杂，需要专业的实验条件和技术支持。
3. 化学诱导模型化学诱导模型是通过给予小鼠特定的诱癌物，如化学物质或药物，来诱发肿瘤的形成。
这种模型可以模拟某些环境因素或生理机制与肿瘤发生的关系。
在化学诱导模型中，首先选择合适的诱癌物，如DMBA（二甲基苯并[a]芘）、DEN（二乙胺）等。
转基因小鼠与基因敲除小鼠的差异
转基因小鼠与基因敲出小鼠的差异
请问：转基因小鼠与基因敲出小鼠之间有什么差异呀？？
最佳答案
转基因小鼠就是基因组中含有外源基因的小鼠。
它是按照预先的设计，通过细胞融合、细胞重组、遗传物质转移、染色体工程和基因工程技术将外源基因导入精子、卵细胞或受精卵，再以生殖工程技术而发育。
用以改变普通小鼠的性状.
基因敲除是基因打靶技术的一种，类似于基因的同源重组。
指外源DNA与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，从而代替受体细胞基因组中的相同/相似的基因序列，整合入受体细胞的基因组中。
此法可产生精确的基因突变，也可正确纠正机体的基因突变。
基因嵌入又称基因置换，它是利用内源基因序列两侧或外面的断裂点，用同源
序列的目的基因整个置换内源基因。
用以研究某一基因的作用.。
基因敲除小鼠技术
转基因、基因敲入/敲除动物技术已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的重要技术，该技术从上世纪七八十年代诞生以来，已有近四十年的历史，经典技术如DNA原核显微注射、胚胎干细胞显微注射技术一直以来经久不衰，并逐渐从基础研究实验室转向商业模式，成为一项高度标准化的新兴产业一、技术介绍与研究进展转基因、基因敲入/敲除动物技术已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的重要技术，该技术从上世纪七八十年代诞生以来，至今已有近四十年的历史，经典技术如DNA原核显微注射、胚胎干细胞显微注射技术一直以来经久不衰，在小鼠模型构建方面日趋完善，并且如同剪切酶和抗体等常规分子生物学试剂的制备技术一样，逐渐从基础研究实验室转向商业模式，成为一项高度标准化的新兴产业，催生了数以百计的创新药物和数以千计的优秀文章。
尽管如此，传统技术仍然存在一些难以克服的缺陷，如步骤繁琐、周期漫长、成功率低、费用高昂等，而ZFN和TALEN等新技术的出现，或有可能将这一局面彻底改变。
二、同源重组技术原理基因敲除鼠技术是上世纪80年代中后期基于DNA同源重组的原理发展起来的，Capecchi和Smithies在1987年根据同源重组（homologous recombination）的原理，首次实现了ES的外源基因的定点整合（targeted integration），这一技术称为"基因打靶"（gene targeting）或"基因敲除"（gene knockout），利用这种ES的显微注射就可以制作出基因敲出小鼠（KO Mice: knockout mice）;由于这一工作，Capecchi和Smithies于2007年与Evans分享了诺贝尔医学奖。
同源重组（homologous recombination）定义：是指发生在姐妹染色单体（sister chromatin) 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。
基因敲除三大技术对比
1）全基因/条件性基因敲除大/小鼠
2）全基因/条件性报告基因敲除/敲入大/小鼠
3）CRISPR/Cas9粒构建
4）细胞系敲除/敲入
免疫类
B-NSG小鼠：Biocytogen-NOD-SCID-IL2rg
B-NSG小鼠是NOD遗传背景，Prkdc和IL2rg双基因敲除的小鼠，是目前国际公认的免疫缺陷程度最高、最适合人源细胞或组织移植的工具小鼠。
3Байду номын сангаас先全敲除再条件性敲除模式小鼠
4）基因敲入模式小鼠
5）ROSA位点定点转基因
TALEN技术
基因敲除效率高，速度快，可实现多物种基因敲除
基因敲入效率较低，多基因敲除困难，系统构建相对复杂，存在脱靶风险
1）全基因敲除大/小鼠
2）全基因敲除细胞系
EGE系统
基因敲除/敲入效率高，速度快，可实现多基因、多物种基因敲除/敲入，系统构建简单
•Il2rgnull：Interleukin-2受体的gamma链（IL-2Rγc，又称CD132）位于小鼠X染色体上，是具有重要免疫功能的细胞因子Il2、Il-4、Il-7、Il-9、Il-15和I-21的共同受体亚基，该基因敲除后的小鼠机体免疫功能严重降低，尤其是NK细胞的活性几乎丧失。
B-NSG小鼠：综合了NOD-SCID-IL2rg背景特征，具有重度免疫缺陷表型，无成熟T细胞、B细胞和功能性NK细胞，细胞因子信号传递能力缺失等。非常适合人造血干细胞及外周血单核细胞的移植和生长。
•造血和免疫学研究
•人类疾病感染模型研究
IL17-EGFP knockin mice
Catalog number:BCG‐IM-0001
MMTV-PyMT转基因小鼠模型介绍
MMTV-PyMT转基因小鼠模型介绍
基因敲除小鼠是什么？是否就是我们平日所说的实验室用的小白鼠?其实小鼠有很多种，小白鼠只是其中一种，通常普通的小白鼠多被药厂用作临床试验，而基因敲除的小鼠，则用于更尖端的生物医学研究。
基因敲除小鼠技术原理：是先在小鼠的胚胎干细胞上通过基因重组的办法进行基因修饰——就是将胚胎干细胞中的靶向基因改掉,然后将“修饰”后的胚胎干细胞植入小鼠的早期胚胎,生成嵌合体小鼠。
这种嵌合体小鼠长大后,体内同时存在被“修饰”过的基因和未被“修饰”的基因。
下面是，MMTV-PyMT转基因小鼠介绍
MMTV-PyMT转基因小鼠是一种人类乳腺癌动物模型。
该小鼠使用MMTV-LTR驱动多瘤病毒中间T抗原（PyMT）在小鼠乳腺组织的表达，使小鼠出现乳腺肿瘤的表型。
可用于研究乳腺肿瘤的发生、发展及转移，及乳腺肿瘤相关药物的筛选。
基因敲除技术与转基因技术的比较研究
基因敲除技术与转基因技术的比较研究生物技术的发展和应用为人类带来了巨大的利益。
然而，与此同时，也不可避免地带来了一些争议。
在生物技术领域，基因敲除技术和转基因技术是两个热门话题，它们的利用在不同领域具有巨大的应用前景。
本文旨在比较基因敲除技术与转基因技术，帮助读者更好地了解它们的区别和优劣之处。
一、基因敲除技术基因敲除技术是一种通过DNA重组实现基因灭活或剔除的方法。
它通常通过利用重组酶切，将合成的DNA序列植入到细胞中，可以导致目标基因在细胞内被敲除或被靶向沉默。
基因敲除技术的优势在于可以准确地控制目标基因，从而促进基因治疗的发展。
此外，它还可以为疾病基因的研究提供新的平台。
基因敲除技术在基础研究、药物研发、细胞修饰和癌症研究等领域有着广泛的应用。
例如，通过敲除恶性肿瘤细胞中的抑癌基因，可以阻止恶性肿瘤的发展；在研发新的药物时，可以通过基因敲除来验证药物的靶点，从而确定药物的作用机理；以及通过基因敲除来研究不同基因在特定生物过程中的作用，例如神经发育和心肌细胞的分化。
二、转基因技术与基因敲除技术不同，转基因技术针对的是在植物和动物等有机体中插入外来基因的技术。
转基因技术常用的几种方法包括随机插入、受控插入、基因扩增和胚胎基因修饰。
转基因技术可以实现“设计”生物体，也就是人为地改变其生物特性。
转基因技术在食品生产、医疗和工业生产等领域有着广泛的应用。
例如，经过转基因技术改造后的植物可以抵抗病虫害，提高产量和质量，从而为食品生产提供了可能；在医疗领域，转基因技术可以用于生产抗体和蛋白质药物，或者用于治疗癌症、糖尿病和多发性硬化等疾病。
此外，转基因技术还可以用于工业制造，例如用转基因植物生产生物燃料、革命纤维和生物塑料等。
三、基因敲除技术与转基因技术的比较基因敲除技术和转基因技术虽然都是生物技术领域的重要发展方向，但二者还是有所不同的。
基因敲除技术致力于通过切断DNA序列来消除不必要的基因，而转基因技术则是通过插入新的基因来增强或改变生物体的功能。
转基因小鼠和基因敲除小鼠区别？
转基因小鼠和基因敲除小鼠区别？基因技术是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达，引起生物体的性状的可遗传的修饰，这一技术称之为转基因技术（Transgenic technology）。
人们常说的"遗传工程"、"基因工程"、"遗传转化"均为转基因的同义词。
经转基因技术修饰的生物体在媒体上常被称为"遗传修饰过的生物体"（Genetically modified organism，简称GMO）。
Genetically Modified--转基因，简称GM。
是指运用科学手段从某种生物中提取所需要的基因，将其转入另一种生物中，使与另一种生物的基因进行重组，从而产生特定的具有变异遗传性状的物质。
利用转基因技术可以改变动植物性状，培育新品种。
也可以利用其它生物体培育出期望的生物制品，用于医药、食品等方面。
基因敲除技术是20世纪80年代发展起来的，是建立在基因同源重组技术基础以及胚胎干细胞技术基础上的一种新分子生物学技术。
所谓胚胎干细胞(EmbryonicStem cell，ES)是从着床前胚胎(孕3-5天)分离出的内细胞团(Inner cellmass，ICM)细胞，它具有向各种组织细胞分化的多分化潜能，能在体外培养并保留发育的全能性。
在体外进行遗传操作后，将它重新植回小鼠胚胎，它能发育成胚胎的各种组织。
而基因同源重组是指当外源DNA片段大且与宿主基因片段同源性强者并互补结合时，结合区的任何部分都有与宿主的相应片段发生交换(即重组)的可能，这种重组称为同源重组。
基因敲除就是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的的一种技术。
它克服了随机整合的盲目性和偶然性，是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法。
这项技术的诞生可以说是分子生物学技术上继转基因技术后的又一革命。
遗传修饰小鼠模型基因型鉴定技术要点介绍
第38卷第1期2021年2月实验动物科学L A B O R A T O R Y A N I M A L S C I E N C EVol.38 N o.1February 20214研究进展i遗传修饰小鼠模型基因型鉴定技术要点介绍#刘甦苏王辰飞岳秉飞李冠名范昌发(中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所.北京102696)摘要：近年来，随着生物医学研究及基因编辑技术的发展，出现了越来越多的动物模型。
由于制作方法的不同，其 基因型鉴定技术方法也不一样，导致基因型鉴定的工作存在混乱无序的现象。
本文根据遗传修饰小鼠模型制作方法进行分类，介绍了随机转基因小鼠、条件性基因敲人小鼠、基因敲除小鼠三类常见模型的基因型鉴定技术要点，规范遗传修饰小鼠模型基因型鉴定方法，保证动物实验材料的准确性，从而推动动物模型在基础和应用科技领域的应用与发展。
关键词：遗传修饰；小鼠模型；基因型鉴定；技术要点中图分类号：R-332文献标识码：A文章编号：1006-6179(2021)01-0074-05D O I：10. 3969/j. issn. 1006-6179. 2021.01. 015遗传修饰小鼠模型是基础和应用科学研究中不可或缺的工具，在研究人类疾病相关基因功能、疾病 表型、诊断及治疗等方面都起着重要作用111。
近年 来，动物模型制作成为研究热点，针对小鼠的基因修饰技术也在不断更新，出现了各种类型的遗传修饰小鼠模型，比较常见的分为随机转基因小鼠、条件性 基因敲人小鼠、基因敲除小鼠三类+5]。
由于制作方法不同，其基因型鉴定方法也不一样，目前很多实 验人员并不能很好的掌握该类实验的技术要点，从 而导致基因型鉴定工作存在混乱无序的现象。
本文 从基因型鉴定实验总体原则、三类模型的设计原理、鉴定引物设计原则及结果判定这几个方面介绍了基因型鉴定技术要点，规范基因型鉴定技术方法，保证 动物实验材料的准确性，从而推动动物模型在基础和应用科技领域的应用与发展。
转基因与基因敲除knockoutmice
转基因 • 基因敲除• 表型分析 •影像分析• 慢病毒• 基因资源
1 of 10
MicroRNA载体
关键因素
• DNA concentration • Injection buffer • Visualizing pronuclei • Timing of injection • Size of DNA • Copy number ： 随机的 • Position Effect insulator
• 1982年，Palmiter和Brinster，Nature，超级鼠
转基因动物研究历史
1. 20世纪60年代末和70年代初，John Gurdon向蛙卵和 小鼠胚胎注射mRNA，研究mRNA能否在动物卵细胞 和早期胚胎中翻译。
2. 1974年，Jaenisch和Mintz首次报道应用显微注射法 获得SV40DNA转基因小鼠。
Spontaneous P<0.0005%
Induced
Random （随机突变）
Targeted
（定向突变）
X-ray mutagenesis 0.05% Chemical mutagenesis 0.1%
Transgene（转基因）10% Homologous Recombination（同源重组）
转基因与基因敲除
-基因工程动物模型的构建
1. Overview.
（概述）
2. Transgenic technology
（转基因技术）
3. Gene targeting
（基因打靶技术）
4. Present
(动物模型的现状)
回顾
转基因动物(transgenic animal) • 概念：用人工方法将外源基因导入或整合到基因组内，并能
敲除小鼠常见问题与回答
敲除小鼠常见问题与回答一、什么是ES细胞显微注射？答：胚胎干细胞显微注射是制作基因敲除小鼠的一个最常用的方法。
主要过程是将携带目的基因的胚胎干细胞注射到小鼠的囊胚腔中获得嵌合体小鼠。
所得嵌合体小鼠的组织，将同时含有来源于囊胚的细胞和胚胎干细胞。
嵌合体小鼠必须和野生型小鼠配种以决定遗传改变的生殖系能否传递，这样可能获得转基因或打靶基因（来源于胚胎干细胞）稳定的生殖系传递的小鼠。
一般情况下，大约能获得50%继承了目的基因的后代。
二、嵌合体遗传学上用以指不同遗传性状嵌合或混杂表现的个体。
免疫学上的涵义则指一个机体身上有两种或两种以上染色体组成不同的细胞系同时存在,彼此能够耐受,不产生排斥反应,相互间处在嵌合状态。
在基因敲除鼠中指通过向囊胚注射被外源基因转化了的胚胎干细胞，使得发育成为的个体中含有不同基因型的细胞，产生的个体也叫嵌合体，即该生物体中嵌合了两种不同遗传结构的细胞（一种是基因型被改变了的细胞，另一种是原来的基因型的细胞）。
三、条件性敲除的原理？答：Cre-LoxP系统是源于P1噬菌体的一个DN A重组体系,由Cre酶和相应的LoxP位点组成,它能导致重组发生在特定的D NA序列处(LoxP位点),该系统可以将外源基因定点整合到染色体上或将特定DN A片段删除。
基于Cre-LoxP的基因打靶要分两步来进行。
首先要在胚胎干细胞的基因组中引入Lox P序列，这一步可以通过打靶载体的设计和对同源重组子的筛选来实现。
下一步通过Cr e介导的重组来实现靶基因的遗传修饰或改变。
Cre-LoxP系统既可以在细胞水平上用Cre重组酶表达质粒转染中靶细胞，通过识别Lox P位点将抗性标记基因切除，又可以在个体水平上将重组杂合子小鼠与C re转基因小鼠杂交，筛选子代小鼠就可得到删除外源标记基因的条件性敲除小鼠。
基因敲除小鼠中嵌合体鼠与杂合子小鼠的区别
基因敲除小鼠中嵌合体小鼠与杂合子小鼠的区别嵌合鼠与杂合子（鼠）是否为同一个概念？带有外来的与亲本双重的遗传信息？嵌合鼠是否为转基因鼠？还有就是“回交”的概念是什么？是子一代同母一代交配？带着这些问题，我们来了解一下每个名词的概念和区别。
在制备基因敲除小鼠的过程中，需要将正确基因打靶的胚胎干细胞注射到囊胚中。
我们可以把ES细胞称作供体，囊胚称作受体。
当受体囊胚（比如Balb/C品系，为白色小鼠）注射了供体ES细胞（比如C57BL/6品系，为黑色小鼠）后，再移植到代孕小鼠子宫，继续发育成个体。
这个时候，如果ES细胞对个体的发育做出了贡献，所得到的小鼠就是嵌合体小鼠。
这只小鼠的每一个器官的细胞组织都可能来自于受体囊胚（白色）或ES细胞（黑色）。
当一个器官有些细胞来自于囊胚，有些来自于ES细胞时，就会产生嵌合现象。
比如皮肤的某些细胞来自于囊胚（白色），有些来自于ES细胞（黑色），嵌合体小鼠的皮肤就会是一块白一块黑的。
但白细胞和黑细胞之间的基因组在任何单个细胞内并没有交集。
嵌合体小鼠带着两套完全不同的基因组。
但从皮肤来看，小鼠越黑，说明ES细胞的贡献率越大，也就说明嵌合效率越高。
但有的时候，我们不能只从皮肤毛色来看。
也可以从小鼠的眼睛颜色来看。
比如，Balb/C的眼睛应该是红色的。
如果出现黑色眼睛，说明黑色ES细胞的贡献率越大。
也说明嵌合率越高。
所谓杂合子是说小鼠任何一个细胞的两套染色体，一个来源于父亲，一个来源于母亲。
比如小白鼠和小黑鼠交配，每个细胞的两个染色体都是一个来自小白鼠，一个来自小黑鼠。
反应在皮肤上就是小灰鼠。
而不是嵌合体小鼠的一片白，一片黑。
这与嵌合子小鼠完全不是一回事。
如果我们在ES细胞的一条染色体上A基因上引入基因突变（打靶），另一条染色体上的等位A基因是野生型的，得到的小鼠对这个A基因来讲，就是杂合子。
如果两个染色体上的A基因都突变了，就是纯合子。
而如果两个染色体上的A基因都没有突变，这个时候不叫纯合子，而是叫做野生型小鼠。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
转基因小鼠与基因敲出小鼠的差异
请问：转基因小鼠与基因敲出小鼠之间有什么差异呀？？
最佳答案
转基因小鼠就是基因组中含有外源基因的小鼠。
它是按照预先的设计，通过细胞融合、细胞重组、遗传物质转移、染色体工程和基因工程技术将外源基因导入精子、卵细胞或受精卵，再以生殖工程技术而发育。
用以改变普通小鼠的性状.
基因敲除是基因打靶技术的一种，类似于基因的同源重组。
指外源DNA与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，从而代替受体细胞基因组中的相同/相似的基因序列，整合入受体细胞的基因组中。
此法可产生精确的基因突变，也可正确纠正机体的基因突变。
基因嵌入又称基因置换，它是利用内源基因序列两侧或外面的断裂点，用同源
序列的目的基因整个置换内源基因。
用以研究某一基因的作用.。