抗核抗体基本概念及对应临床疾病概述教学讲义

染色体结构示意图
染色体
DNA
核小体
染色质 组蛋白
dsDNA
▪ 抗原： 双链DNA，天然DNA(脱氧核糖核酸骨架)
▪ 相关疾病： dsDNA: 为SLE的诊断标准之一，阳性率为60-90%，不同 的检测方法诊断特异性差别较大。抗体滴度与疾病的活动 性、狼疮肾炎的发病风险具有相关性。
▪ 抗原:
组蛋白
▪ 主要相关疾病:
PBC: 病（
（高滴度AMA M2）85% - 95%。在其他慢性肝脏疾 30%）和进行性系统性硬化症（7-25%）中也
可检出AMA
M2，但滴度较低。
抗体梯度稀释 起始稀释：1:80 梯度稀释（稀释因子2） 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 …直至抗体转阴
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
ANA荧光滴度判读举例
各稀释度的反应性
1:80 阳性+ 阳性++ 阳性++ 阳性+++ 阳性+++ 阳性++++
1:640 — — 弱+ 阳性+ 阳性++ 阳性+++
FITC标记的抗人IgG抗体
间接免疫荧光法
样本中ANA-IgG 包被HEp-2细胞的基质玻片
ANA筛查的经典和标准基质: HEp-2
抗原谱完整 (细胞核、细胞浆中近百种自身抗原) 人源细胞，无种属非特异荧光干扰 肿瘤细胞，易于培养及商品化生产 核质比大，可观察到多种不同荧光核型
基于Hep-2细胞为基质的ANA初筛实验
功能: 在DNA复制和转录过程中完成双链解螺旋
疾病: 硬化症: 50% - 75%
Anti-Scl-70 特点
▪ 局限型和弥散型硬化症病中的阳性率分别为 10% 和48%。
▪ 抗Scl-70抗体阳性的患者通常病情发展快、预 后差、多器官累及。
PM-Scl
▪ 抗原: 几种多肽复合物(分子量间于20-100kDa) ，主要的靶抗原为100 kDa
着丝点蛋白 B为主要的靶抗原 (与IIF：100%)
▪ 功能:
分裂期纺垂体的附着点
▪ 相关疾病: 硬化症:
18%
局限型:
80% - 95%
(CREST综合征)
PCNA:细胞增殖相关核抗原I型
▪ 抗原:
DNA聚合酶δ的辅助蛋白 发挥控制细胞周期的作用
▪ 相关疾病: 系统性红斑狼疮的特异性抗体，但其发生率仅为3%。
P1 P1
P0
60 S
亚基
P2 P2
▪相关疾病: SLE:
为SLE的高特异性指标，阳性率为5-15%，常见于神经狼疮。
AMA与AMA-M2
▪ 靶抗原: 线粒体亚结构上几种生化性质明确的物质，可分为九 种类型。其中最常见临床意义比较明确的为AMA M2，由AMA不 同亚型的临床相关疾病，因而对AMA阳性结果做进一步的分型 实验非常重要。
▪ 相关疾病:
硬化症: 2% - 5%
肌炎:
8%
重叠综合征: 24%
Jo-1
▪ 抗原:
组氨酰tRNA合成酶(50 kDa), 细胞浆中的磷蛋白
▪ 相关疾病: 多肌炎/皮肌炎的血清学标志，阳性率为25- 35%，当 伴有 肺间质纤维化的多肌炎，阳性率可高达70%。
着丝点
▪ 抗原：动粒中的4种蛋白：A (17 kDa), B (80 kDa), C(140 kDa), D蛋白 (50 kDa)。
抗体滴度
临床意义
1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560
阳性，需结合临床表现综合判断 阳性，提示可能存在相关疾病 明确阳性，提示可能存在相关疾病 中等阳性，提示可能存在相关疾病 强阳性，高度提示存在相关疾病 极强的阳性，高度提示存在相关疾病。
HHOEBp公-2司细间胞接产免品疫系荧列光法（产举品例系）列
产品系列 基质
检测项目
ANA筛查 HEp-2细胞
ANA各种不同核型
dsDNA
绿蝇短膜虫
AKA 16×6大孔鼠食管
抗dsDNA抗体 抗角蛋白抗体
ANCA 组织器官
中性粒细胞
抗中性粒细胞胞浆抗体
乙醇和甲醛固定
8×12孔
大鼠肝/肾/胃 ASMA\PCA\AMA\LKM-1\LC-1
10×10孔
ANA靶抗原确认实验
• 在非结缔组织病中也可出现阳性。 • 正常人中（特别是老年人）也可出现阳性，但滴度低，并且
常表现为IgM型 • 高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病
目前，ANA检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的 筛查实验。
ANA检测的临床意义
系统性红斑狼疮 活动期
非活动期 药物诱导的红斑狼疮 混合性结缔组织病（MCTD、Sharp综合征）
条带酶免分析法检测ANA—基本原理
底物 颜色反应
碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体 IgG抗体 硝酸纤维膜
LIA检测方法原理
ANA谱系列
U1-nRNP 和 Sm抗原
SLE: 15-40% MCTD: 95-100%
功能:参与mRNA前体的剪切
SLE: 5-30%
SS-A (Ro-60), Ro-52 和SS-B
均质型
核点型
着丝点型
核仁型
Scl-70
粗颗粒型 细颗粒型
核膜型.
核糖体P蛋白 线粒体型
高尔基体
溶酶体
肌动蛋白
波形蛋白
ANA间接免疫荧光法筛查试验的实际价值
初步甄别自身免疫性疾病患者（阴阳性结果） 尽可能判断荧光核型（缩小靶抗原确认实验范围） 获取抗体滴度信息（判断病情进展、预后等）
考虑到荧光法筛查试验存在主观性强的特点，因此应 以一种客观和现实的态度去面对筛查试验结果
SLE：高特异性指标，阳性率为50-95%，特异性几乎 100%，抗核小体抗体可独立于抗dsDNA抗体单独出现 ，因而抗核小体抗体与抗dsDNA抗体联合检测，可提 高SLE的血清学检出率。
抗原:
核糖体 P蛋白
核糖体60S 亚基中的3种蛋白质: P0, P1, P2. 具备相同的碳端抗原位点
40 S 亚基
功能: 调控RNA翻译
功能:RNA聚合酶III辅助蛋白
Anti-SS-A (60 kDa)
干燥综合征.: 40-95%
SLE:
20-60%
新生儿狼疮:
96%
X
Anti-Ro-52 (52 kDa) 非特异
Anti-SS-B
干燥综合征.: 40-95%
SLE:
10-20%
新生儿狼疮:
78%
Scl-70 (DNA-拓扑异构酶I)
几个相对常见且重要的荧光核型
均质型
粗颗粒型
着丝点型
核仁型
核膜型.
核点型
核糖体P蛋白
线粒体型
肌动蛋白
常见且重要核型的标准 核型表现相对典型 阳性率相对较高 靶抗原相对明确
应重视ANA滴度的检测
抗体滴度的临床意义 1、明确界定自身免疫性疾病患者； 2、作为疾病进程、临床疗效和病情预后及转归等的判断指标
类风湿性关节炎 进行性系统性硬化症 多发性肌炎及皮肌炎
干燥综合征 慢性活动性肝炎
溃疡性结肠炎 其它风湿病 正常人
95－100 80－100 100 100 20－40 20－50 85－95 30－50 70－80 30－40 26 5-10
ANA间接免疫荧光法筛查实验
间接免疫荧光法检测ANA—基本原理
H1, H2A, H2B, H3, H4，H2A-H2B，H3-H4 (主要的靶抗原为H1和H2B)
▪ 相关疾病:
药物诱导性 LE: 100%(抗组蛋白抗体是该病唯一的标志性抗 体)
各种结缔组织病：
SLE: SSc: SS:
30-80% 30%
10%
▪ 抗原:
核小体
组蛋白和DNA形成的复合物
▪ 相关疾病:
抗核抗体基本概念及临床检测
抗核抗体的定义
传统定义 针对细胞核成分的自身抗体的总称。
广义定义 针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理 解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗体的总称
靶抗原存在于包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂 结构等部位
ANA检测的临床意义
• ANA可见于多种疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组 织病的诊断、病情判断和疗效观察的指标
当前国际主流ANA间接免疫荧光法检测系统广泛采用的起始稀 释度为1:40。即该检测系统的正常参考范围为1:40。梯度稀释 时的稀释因子为1:2。HOB公司产品推荐按照1:80开展稀释。
荧光强弱及血清稀释度
荧光强弱判读 观察标本的特异性荧光强度一般用“+”号表示。 “—”为无或仅见极微弱荧光； “+”为荧光较弱但清楚可见； “++”为荧光明亮； “+++”为耀眼的强荧光。 临床上根据特异性荧光强度达“+”以上判定为阳性