水质微生物检测基础

固定 Fixation
水质微生物 采样
·自来水：现将自来水龙头用火焰烧灼3min，灭菌；再打 开水龙头防水5min（常用的水龙头可以 防水2~3min）；采样水置于无菌锥形瓶中，采样总量 占锥形瓶的80%左右，以便摇匀。
·水源水：选取可疑及有代表性的水域，一般距离水面 10~15cm采样；河道水采样时，将瓶口朝向、 水流方向，在指定位置打开瓶盖。
细菌的繁殖
细菌生长速度很快，一般约20min分裂一次。若按此速度 计算，细菌群体将庞大到难以想象的程度。但事实上由于 细菌繁殖中营养物质的逐渐消耗，有害代谢产物的逐渐积 累，细菌不可能始终保持高速度的无限繁殖。经过一段时 间后，细菌繁殖速度逐渐减慢，死亡菌数增多，活菌增长 率随之下降并趋于停滞。
热原与内毒素
多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代
生长旺，繁殖快：微生物有惊人的繁殖速度，大
适应性强，易变异（耐药性产生的原因）
葡萄球菌
酵母菌（芽痕）
棒状杆菌
大肠杆菌
弧状菌
链球菌
• 菌落单位----CFU
菌落单位
由单个菌细胞或几个同种菌细胞在培养基上长成肉 眼可见的菌落，每个菌落就是1CFU
光滑型菌落
粗糙型菌落
细菌虽小，仍具有一定的细胞结构和功能。细胞壁、细胞 膜、细胞质和核质等各种细菌都有，是细菌的基本结构。
球菌(coccus)
脑膜炎奈瑟菌
肺炎链球菌
杆菌(bacillus)
不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。
大 中 小
炭疽芽胞杆菌 3-10 μ m
大肠埃希菌 2-3 μ m
布鲁菌 0.6-1.5 μ m
3、其他理化特性①耐热性：120℃加热4h，可破坏98%。 180℃加热2h或250℃加热30min，才可彻底破坏。②滤过 性：其体积小，约在1~5nm之间，故能通过滤器进入滤液 中。③具有水溶性及不挥发性。④能被强酸、强碱和氧化 剂破坏
消毒与灭菌
下列术语常用于表示物理或化学方法对微生物的杀灭程度 消毒：杀死物体上病源微生物的方法,并不一定能杀死细 菌的芽胞。消毒所用的试剂称为消毒剂。 灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高， 包括杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。 抑菌：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为 各种抗生素，可抑制细菌的繁殖。 防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不 死亡。同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度时常 为防腐剂。 无菌：不存在活的细菌。防止细菌进入人体或其他物品的 操作技术，为无菌操作。
微生物基础知识 培训
宁波安联检测有限公司
微生物的定义
微生物（microorganism, microbe）:存在于自然界 中的一群体型细小、结构简单、肉眼看不见，必须 借助于特殊仪器放大后才能观察到的微小生物
按其结构、化学组成及生活习性可分为:
★原核类:仅有原始核质，无核仁或核膜，细胞器很不完善。如细菌、 放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体、螺旋体 ★真核类:细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体，细胞器完 整。如真菌（酵母菌和霉菌）、 原生动物、藻类 ★非细胞类:体积微小，能通过除菌过滤器。如病毒和朊病毒等
② smear 取 菌 苔 少 许 涂片
（ 1mm 小菌落半个） ②促使菌体蛋白质凝固，固定 与盐水混匀，涂成 在载玻片上，以免染色水洗的 大于1cm2 均匀涂膜 。 时候，细菌被水洗掉。
无 无 菌 菌 操 操 作 作
③涂毕→环移至涂膜中 央侧立，待环内菌膜破 裂，接种环烧灼灭菌。 干燥dry
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↑ ↑ 灭菌接种环 细菌合适 细菌较多
许多细菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能产生热
原。热原是微量即可引起恒温动物体温异常升高 的物质的总称。主要物质为细菌内毒素、胞壁酰 二肽及其他抗原抗体复合物、半抗体原物质和某 些药物（类固醇）等。
1、细菌内毒素一般指革兰阴性细菌细胞壁的结构成分，主 要是脂多糖。
2、细菌内毒素生物学活性可分为两类：一是致病作用，一 是保护性反应。
结晶紫
卢戈碘液液
G-菌：
类脂质多
95%乙醇
复红
肽聚糖少
意义

鉴别细菌：把细菌分成G+和G-两大类。 选择抗菌药物：例如G+球菌对青霉素敏感,G-杆菌耐 药。

了解细菌的致病机理：G+菌大多产生外毒素,G-菌产 生内毒素。 革兰染色的步骤 涂片 → 干燥 → 固定→ 染色 紫碘酒红，分分半半
①接种环取盐 ①手持载玻片一端，涂膜朝 水3ul×2滴, 上，两个涂膜快速通过火焰 水滴间距小于 外层3次，时间2～3秒钟。 2cm。
微生物的分布
土壤：是微生物生活的最适环境 水：仅次于土壤的微生物分布、定居的第二场所 空气：空气中的微生物主要来源于带有微生物菌体及孢子
的灰尘，这类微生物大多数是腐生性的，还来源于人和动 物，它们大多数是通过呼吸道排出的，其中也包含有病原 微生物，悬浮在大气中。
微生物的类群和形态结构
一、细菌
按其致病性可分为:
★病原性微生物 ★非病原性微生物
微生物的特点
个体小,面积大：小于0.1mm。肉眼不可见。 分布广,种类多（10万多种） ：自然界中到处都
有，如水、空气、土壤等, 土壤中的数量最多。
代谢强，转化快：发酵乳糖的细菌在1小时内可
分解其自重1000～10000倍的乳糖；产朊假丝酵母 合成蛋白质的能力比食用公牛强10万倍
消毒与灭菌
热力灭菌法：使蛋白质、酶及核酸永久性破环，细胞膜溶 辐射灭菌法
解，导致细胞发生不可逆转的死亡。 1、紫外线：波长200-300nm的紫外线具有杀 1、干热灭菌法—采用灼烧或干热空气灭菌 ，使用方便，
菌作用。穿透物质的能力很差，一般要求紫外灯 适用于玻璃器皿和瓷器等耐高温的固体物的灭菌 。 距离照射物不超过1.0米为宜 2、湿热灭菌法—利用热蒸汽杀死微生物。 2、电离辐射 高压蒸汽灭菌：利用高温高压蒸汽进行灭菌的方 高速电子、 X射线、γ射线 法 ，蒸汽的穿透力较热空气强可以杀死一切微生 3物，包括细菌的芽孢，真菌的孢子或休眠体等耐 、微波 高温的个体 。最可靠最适用最广泛的灭菌方法。 波长1mm~1m
·采样结束后，样品冷藏运输，尽快检测。
样品处理、实验准备、实验步骤及报告详见作业指导书
染色
革兰氏染色法
革兰染色法是丹麦内科医生 Christain Gram 于1884年创立的一种细菌复染色方法，已有130多 年的历史，仍在广泛使用。
通透性学说、等电学说、化学学说
G+菌： 肽聚糖多 交联度大 类脂质少
细菌是一类细胞细而短、结构简单、细胞壁坚韧，以二分裂方式无性 繁殖的原核微生物，分布广泛。
1.
细菌的形态与结构 （1） 球菌 多数球菌直径在1微米左右，外观呈球形 或近似球形。由于繁殖时分裂平面不同可形成不同的排 列方式，分为双球菌、链球菌、葡萄球菌等。 （2） 杆菌 形态多数呈直杆状，也有的菌体稍弯，多 数呈分散存在，也有的呈链状排列，分为棒状杆菌、链 状杆菌、球杆菌等。 （3） 螺形菌 菌体弯曲，呈弧形或螺旋形。如幽门螺 杆菌。