水质微生物检测基础
水质微生物检测
第二节饮用水种类及卫生微生物指标
一、饮用水分类 1、生活饮用水：供人生活的饮水和生活用水 2、包装饮用水： • 饮用天然矿泉水 • 饮用天然泉水 • 其他天然饮用水 • 饮用纯净水 • 饮用矿物质水 • 其他包装饮用水
二、饮用水介绍
（一）、生活饮用水 • 新发布的产品标准 GB5749-2006 • 标准检验方法为 GB/T5750-2006 • 水质检验项目由原35项增加至106项，旧标准微生
0 MPN/100mL
0 CFU//250mL 0 CFU//250mL 0 CFU//50mL
各类水质的微生物指标要求(续)
瓶 装 饮 用 纯 净 GB17324 － 水卫生标准 1998
菌落总数 ≤ 大肠菌群 ≤
霉菌和酵母 ≤
致病菌（沙门氏菌、
志贺氏菌、金黄色葡萄
球菌）
瓶（桶）装饮用 GB19298 － 水卫生标准 2003
• PH：水中微生物适宜范围是pH6.5～8.5，这与一般自然水 的pH值范围相适应。 海水的pH7.5～8.5，海水中多数微生 物生长的最适pH7.2～7.6；
• 化学物质：有机物，无机物：氨、硝酸盐、磷酸盐、硫酸 盐、碳酸盐，金属离子：汞、铜；
• 营养物质：异养微生物，营养贫乏时，微生物倾向吸附颗 粒。
第三节生活饮用水微生物检测
一、水样中微生物项目检测方法 GB/T 5750.12
1 菌落总数
1 平皿计数法
2 总大肠菌群大肠菌群
1 多管发酵法
2 滤膜法
4大肠埃希氏菌
二、水微生物的种类
• 水微生物的种类很多，有细菌、真菌、病毒、藻 类和原生动物；
• 水中大多数微生物属于异养微生物，它能利用水 中有机物质生长，另一类为自养微生物，它只需 无机物质就能合成新的细胞。
水中微生物的测定-国标法(水质检测)
水中微生物的测定-国标法(水质检测)
摘要
本文介绍了水中微生物的测定方法，以国家标准法为基础。
水中微生物的测定是水质检测的重要环节，可以评估水的卫生状况，以及相关的环境健康风险。
引言
水是人类生活中必不可少的资源，保证水质安全对于人类健康至关重要。
水中微生物作为一种主要的水质指标，可以反映水中存在的微生物污染程度。
因此，精确测定水中微生物的数量是进行水质检测的基本要求之一。
国标法测定方法
样品收集与处理
1. 确定采样点及采样时间，避免样品受到外界干扰。
2. 使用干燥及密闭的收集水样，并尽量防止样品受到氧气、光照和高温的影响。
3. 避免采样与外界环境接触，以防止二次污染的发生。
样品制备与预处理
1. 根据国家标准法的要求，将收集的水样进行适当的稀释，使其微生物数量在可测量的范围内。
2. 使用适当的培养基进行预处理，以促进微生物的生长。
微生物测定方法
1. 平板计数法：将经稀释处理的水样均匀地分布在培养基上，通过培养基固化后，计数形成的菌落数量，并据此推算出水样中微生物的浓度。
2. 膜过滤法：通过将水样通过细孔滤膜，然后将膜过滤板放置在含培养基的平板上，根据过滤后膜上菌落的数量计算水样中微生物的浓度。
结论
本文介绍了水中微生物的测定方法，基于国家标准法。
这些测定方法可以用于水质检测，评估水的卫生状况，以及相关的环境健康风险。
采样、制备和处理样品的正确操作，以及准确的测定方法选择，对于保证测定结果的可靠性至关重要。
水质微生物的检测
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在某些情况下，水体中的细菌总数也可指示水体受粪便等污染物污染的情况。
这里的细菌总数其实是指营养琼脂培养后形成的菌落总数。
目前世界各国对于控制饮用水的卫生质量，除采用大肠菌群等指标外，一般还采用细菌总数这个指标。
我国GB5749-85《中华人民共和国国家标准生活饮用水卫生标准》中规定生活饮用水细菌总数每毫升不得超过100个。
二、水质微生物检验方法GB5750-85《中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验法》提供了水质中细菌总数和总大肠菌群的检测方法。
（一）细菌总数的检测：国家标准中，细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。
对生活饮用水，直接吸取1ml水样于平皿中，加入营养琼脂后混匀，37℃培养24h，进行计数。
对水源水，根据情况对样品进行10倍梯度稀释，选择适宜稀释液1ml，加注平皿，营养琼脂混匀，37℃培养24h，进行计数。
37℃生长时能度，120.1ml接种10三、说明：1100个，因此可以直接吸取1毫升到平板进行培养。
2．培养时间。
与食品中菌落计数不同，测定水中细菌总数，培养时间采用24h。
3．总大肠菌群的测定方法，由于饮用水和水源水可能的污染程度不同，因此采用不同的接种量，检数表也不相同。
4．当接种量超过1毫升时，一般采用多倍浓度培养液。
如配制3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液50mL，加入100mL 水样后，总体积为150mL，培养液恢复到正常浓度。
5．滤膜法检测总大肠菌群，一般在检测较大量低浊度水样时采用，大量水样滤过滤膜后，水中所含有的所有细菌均截留在滤膜上。
水质检测基础知识及上岗考试题
水质检测基础知识及上岗考试题一、仪器设备知识1。
电导电极有哪几种？答:有光亮和铂黑两种2。
DJS-1型光亮电导极运用范围?答:被测溶液的电导率低于10μs/cm时使用3。
电导仪”低周”的适用范围答：测量电导率低于300μs/cm的液体时使用4.测PH值用的玻璃电极为什么要用蒸馏水浸泡后才能使用?答：因为干玻璃电极不显示PH效应,只有经过水化的玻璃电极才显示PH效应，所以玻璃电极要浸泡在蒸馏水中备用.5.玻璃电极使用前为什么要处理?答:玻璃电极经浸泡24小时以上,玻璃电极形成了稳定的水化层，使玻璃电极的膜电位在一定温度下与试液的PH值成线性关系,因此玻璃电极在使用前应在蒸馏水或0.1N盐酸中浸泡24小时以上。
6.电子天平的称量原理？答：电子天平的称量依据是电磁力平衡原理.7。
PHS-3C型酸度计工作原理?答:是利用PH电极和参比电极对被测溶液中不同酸度产生的直流电位,通过放大器输送到转换器，以达到显示PH的目的.8.721型分光光度计的使用范围是什么?答:721型分光光度计可用于实验室中可见光谱360~800nm范崐围内进行定量比色分析.9。
使用分光光度计的注意事项?答:连续使用时间不宜过长，要正确拿比色皿,拿毛玻璃面，洗涤并保管好比色皿,不要用去污粉或毛刷刷洗.10.721分光光度计对工作环境有什么要求?答: 应安放在干燥房间内,放置在坚固平稳的工作台上使用,崐应远离高强磁场。
电场及高频波的电气设备.避免在有硫化氢。
亚崐硫酸氟等腐蚀性气体的场所使用.11.721分光光度计工作原理是什么？答：721分光光度计是根据朗伯—比耳定律设计的A=KCL。
当入崐射光. 吸收系数K.溶液的光径长度L不变时,透射光是根据浓度而崐变化的.12.721分光光度计由哪几部分组成?答:由光源。
单色器.比色皿和检测器四部分构成.13。
电子天平应安放在什么环境下？答1)稳定，尽可能避免震动（2)保证无大的温度变化，无腐蚀(3）避免阳光直射和通风（4)电源要稳定二.专业技术知识14.碱性碘化钾溶液应(避光)保存,防止(碘逸出)15。
水质微生物检验用培养基
EC-MUG培养基用途：用于多管发酵法测定生活饮用水及水源水中大肠埃希氏菌。
配方：（g/L）胰蛋白胨 20g磷酸氢二钾 4g氯化钠 5g磷酸二氢钾 1.5g乳糖 5g三号胆盐 1.5gMUG 0.05g∙本品参照GB/T5750.12-2006标准配方配制；∙pH值6.9±0.2；∙用标准菌株检验符合质控标准。
MFC琼脂培养基用途：用于饮用水，水源水中耐热大肠菌群滤膜法的测定。
配方：（g/L）胰胨 10g酵母浸粉 3g乳糖 12.5g三号胆盐 1.5g多胨 5g苯胺蓝 0.2g氯化钠 5g玫红酸 0.1g琼脂 15g∙本品参照GB/T5750.12-2006标准配方配制；∙pH值7.4±0.1；∙用标准菌株检验符合质控标准。
MUG营养琼脂（MUG Nutrient Agar）用途：用于生活饮用水及其水源水中大肠埃希菌的测定。
配方：（g/L）蛋白胨 5g牛肉浸膏粉 3g琼脂粉 15g4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（MUG） 0.1g∙本品参照GB/T5750.12-2006标准配方配制；∙pH值6.8±0.2；∙用标准菌株检验符合质控标准。
MMO-MUG培养基（Minimal Medium ONPG-MUG）用途：用于生活饮用水及水源水的大肠菌群酶底物法检测。
配方：（g/L）硫酸铵 5g亚硫酸钠 40mg氯化钠 10g两性霉素B 1mg氯化钙 50mg硫酸锰 0.5mg硫酸锌 0.5mg茄属植物萃取物 0.5g硫酸镁 100mgHEPES钠盐 5.3gONPG 0.5gMUG 0.075gHEPES 6.9g∙本品参照GB/T5750.12-2006标准配方配制；∙pH值7.2±0.1；∙用标准菌株检验符合质控标准。
假单胞菌琼脂基础培养基/CN琼脂基础（CN Agar Base）用途：用于铜绿假单胞菌检测与计数-滤膜法。
配方：（g/L）明胶蛋白胨 16g氯化镁 1.4g酪蛋白水解胨 10g硫酸钾 10g琼脂 12g加热煮沸溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟，临用时在无菌环境下加入配套试剂抗生素液（04-059）和甘油液（04-060）（用法与用量见配套试剂说明）。
微生物检验流程及操作标准
微生物检验流程及操作标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：微生物检验是一种重要的实验室技术，用于检测食品、水质、环境等样品中的微生物存在情况。
微生物检验需要严格遵守一系列操作标准和流程，以确保检验结果的准确性和可靠性。
下面我们将介绍一下微生物检验的流程及操作标准。
一、样品采集1. 样品的采集需要采用无菌工具，并保持样品在采集过程中不受到外界环境的污染。
2. 样品的采集过程应尽量避免接触到任何可能引入外源微生物的物质，比如皮肤、空气等。
3. 采集的样品应标明正确的标识信息，包括样品名称、采集地点、采集日期等。
二、样品处理1. 样品收到实验室后，需要尽快进行处理，避免样品内的微生物增殖或死亡。
2. 样品处理过程需要保持在无菌条件下进行，使用无菌工具进行操作。
3. 样品处理过程中需要按照检验要求进行适当的稀释，以确保实验得出准确的结果。
三、培养基准备1. 培养基的制备需要按照标准的配方和步骤进行，以确保培养基的质量符合要求。
2. 制备培养基时需要严格遵守无菌操作规范，避免细菌、真菌等外源微生物的污染。
3. 制备好的培养基需要在适当的条件下保存，确保培养基的稳定性和有效性。
四、接种操作1. 在进行微生物检验之前，需要准备好无菌的接种环、移液器等工具。
2. 采取适当的方法将处理好的样品接种到培养基上，避免接种时引入外源微生物。
3. 接种操作需要在无菌条件下进行，避免培养物受到任何污染。
五、培养与观察1. 接种后的培养基需要置于适当的温度和湿度条件下进行培养，促使样品中的微生物生长。
2. 定期观察培养基上的生长情况，记录生长的数量和形态，用于后续的分析和鉴定。
3. 在观察过程中需要注意反复进行无菌操作，避免细菌、真菌等外源微生物的污染。
六、鉴定与结果解读1. 当样品中的微生物生长到一定程度时，需要进行鉴定和分析，确定其种属和数量。
2. 鉴定过程需要参考相关的鉴定手册和标准，进行适当的试验和测试。
3. 根据鉴定结果进行结果解读，判断样品中微生物的种类和数量是否符合标准要求。
水质微生物检测
不同稀释度的平均菌落数
10-2 164 295 271 30 1650 11 305 0 10-3 20 46 60 8 513 5 12 0
两个稀释度 菌落数之比
—— 1.6 2.2 2 —— —— —— ——
菌落总数/ （CFU/mL）
16400 37750 27100 1500 513000 270 30500 < l×l0
第十二章 水质微生物检测
第一节 水中微生物
一、水生境的特征 影响水中微生物分布类群的主要因素： 温度 静水压 光照 溶解氧 氢离子强度 化学物质 营养物质
• 光照：日光中紫外线射入水中强度明显减弱，具有光合作 用的微生物和藻类主要分布在水的表层； • 溶解氧：水中的需氧微生物利用溶解氧，水体表层主要是 需氧和兼性需氧微生物，深层和水底以厌氧微生物为主； • PH：水中微生物适宜范围是pH6.5～8.5，这与一般自然 水的pH值范围相适应。 海水的pH7.5～8.5，海水中多数 微生物生长的最适pH7.2～7.6； • 化学物质：有机物，无机物：氨、硝酸盐、磷酸盐、硫酸 盐、碳酸盐，金属离子：汞、铜； • 营养物质：异养微生物，营养贫乏时，微生物倾向吸附颗 粒。
50 cfu/mL 3 MPN/100mL 10 cfu/mL 10 cfu/mL 不得检出
10000 个/L 2000 个/L
第三节生活饮用水微生物检测
一、水样中微生物项目检测方法 GB/T 5750.12
1 菌落总数 2 总大肠菌群
1 平皿计数法 1 多管发酵法 2 滤膜法
3 酶底物法
3 耐热大肠菌群 4大肠埃希氏菌
四、各类水质的微生物指标要求
标准名称 生活饮用水 卫生标准 标准号 GB5749-2006 细菌学项目 菌落总数 总大肠菌群 耐热大肠菌群 大肠埃希氏菌 贾第鞭毛虫 隐孢子虫 细菌总数 总大肠菌群 粪大肠菌群 大肠菌群 粪链球菌 铜绿假单胞菌 产气荚膜梭菌 限量 100cfu/ml 不得检出， MPN/100mL； cfu/100mL 不得检出， MPN/100mL； cfu/100mL 不得检出， MPN/100mL； cfu/100mL <1 （个/10L） <1 （个/10L） 100（cfu/ml） 每 100ml 水样中不得检出 每 100ml 水样中不得检出 0 MPN/100mL 0 CFU//250mL 0 CFU//250mL 0 CFU//50mL
水质微生物检测
免疫学方法
利用特异性抗体进行检测，具 有较高的特异性和灵敏度，是 未来发展的重要方向。
生物传感器技术
生物传感器技术可实现快速、 连续的检测，具有广阔的应用 前景。
自动化与智能化
通过自动化和智能化技术，可 提高检测效率，减少人为误差
。
未来研究方向与趋势
新型检测方法的研发
针对不同水质和微生物种类，研发新型的检 测方法。
水质微生物检测
目录
• 水质微生物检测概述 • 水质微生物检测技术 • 水质微生物检测标准与法规 • 水质微生物检测实践与应用 • 水质微生物检测的挑战与展望
01
水质微生物检测概述
定义与目的
定义
水质微生物检测是对水体中微生 物的数量、种类和活性进行检测 的过程。
目的
评估水质的安全性和卫生状况， 预防和控制水传播疾病，保障公 众健康。
检测方法
培养法、荧光原位杂交技 术、PCR-DGGE等。
工业废水微生物检测
检测目的
监控工业废水处理效果，确保达标排放。
检测项目
总需氧量、总有机碳、氨氮等。
检测方法
化学分析法、生物分析法、在线监测技术等。
05
水质微生物检测的挑战 与展望
当前面临的主要挑战
微生物多样性
水质中的微生物种类繁 多，包括细菌、病毒、 原生动物等，检测难度
质量控制与保证
加强水质微生物检测的质量控制与保证，确 保检测结果的准确性和可靠性。
标准化与规范化
建立水质微生物检测的标准化和规范化体系， 提高检测结果的可靠性。
多指标综合评价
结合多种指标进行综合评价，以更全面地反 映水质状况和微生物污染情况。
谢谢观看
生活饮用水标准检验方法-微生物指标[1]
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修订后
微生物指标 限值 微生物指标
限值
-
肠球菌/（CFU/100mL）
0
-
产气荚膜梭状芽胞杆/（CFU/100mL）
0
一、菌落总数
修订前
修订后
细菌总数
菌落总数
原理：细菌总数是指水样在一定 定义：水样在营养琼脂上有氧条 条件下培养后（培养基成分、培 件下37℃培养48h后，所得1ml水 养温度和时间、pH、需氧性质等） 样所含菌落的总数。 所得1ml水样所含菌落的总数。按 本规范规定所得结果只包括一群
酶底物法定义：总大肠菌群酶底物法是指在选择性培养基上能产生β半乳糖苷酶的细菌群组，该细菌群组能分解色原底物释放出色原体 使培养基呈现颜色变化，以此技术来检测水中总大肠菌群的方法。 培养基：MMO-MUG培养基（Minimal Medium ONPG-MUG）。 本方法可分为定性和定量。 定量法：10管法、51孔定量法 培养条件： 36±1℃ 24h
在滤膜上,将滤膜贴在选择培养上, 膜过滤水样, 将滤膜贴在添加乳
经培养后,计数生长在滤膜上的典 糖的选择培养上, 37℃ 培养24h，Fra bibliotek型大肠菌群菌落数。
能形成特征菌落的需氧和兼性厌
培养条件：37℃ 18-24h
氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌以检 测水中总大肠菌群的方法。
培养条件：37℃ 24±2h
酶底物法
能产生β-半乳糖苷酶的细菌群组分解ONPG使培养基呈黄色 酶底物法的主要特点： 优点： 可同时判断水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌 检测时间较短，只需18-24h，最长需要28h 无需确证试验 操作简单，对试验条件和人员要求低 缺点： 检测成本高
总大肠菌群三种方法的比较
时间 验证试验 步骤 特殊设备 价格
微生物检测操作相关要求
问题
二、 滤膜法
• 总大肠菌群滤膜法 是指用孔径为0.45μm的
微孔滤膜过滤水样，将滤膜贴在品红亚硫酸钠 培养基上37℃培养24h，能形成特征性菌落的 需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性菌以检测水中总 大肠菌群的方法。 • 滤膜法适用于饮用水、水源水，特别是低浊度 水样中总大肠菌群的测定。本法适用于较大量 水样测定，如原水量少可加无菌水稀释。本方 法简单快速，较为精密。
• 产酸判断：紫色培养液变成黄色 • 产气判断：发酵导管内有小气泡，如轻 轻打动试管有气泡沿管壁上浮，应考虑 可能有气体产生，需进一步试验。 • 挑选菌落特征：黑紫色、有光泽或无光 泽菌落；红色、粉红色菌落。 • 抑制剂：胆盐、煌绿、十二烷基硫酸钠。
思考
1、单倍乳糖蛋白胨培养液和双倍、三倍乳糖蛋 白胨培养液有什么不同？如何配制？在什么情 况下加单倍乳糖蛋白胨培养液，什么情况下加 三倍乳糖蛋白胨培养液？ 2、生活饮用水、地表水如何稀释？ 3、如何确定接种量？ 4、初步发酵后如何判断阳性管？阴性管？ 5、今天做什么 ？怎么做？
3. 证实试验
• 经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽胞杆 菌，同时接种乳糖蛋白胨培养液，与 36℃±1℃培养24h±2h,有产酸产气者， 即证实有总大肠菌群存在。 结果报告 • 经镜检、生化反应证实为大肠杆菌阳性 的管数，查MPN检索表，报告每100ml 水样中的大肠菌群最可能数（MPN）值。
总大肠菌群测定的关键步骤
水源水
• 以无菌操作方法吸取1ml充分混匀的 水样，注入盛有9ml灭菌生理盐水的 试管中，混匀成1：10稀释液。 • 吸取1：10的稀释液1ml注入盛有9ml 灭菌生理盐水的试管中，混匀成1： 100稀释液。按同法制成不同浓度稀 释液。 • 用灭菌吸管吸取未稀释的水样和2个 ～3个适宜稀释度的水样1ml，分别 注入灭菌平皿内。以下操作同生活 饮用水的检验步骤。
水质检测微生物指标
.
12
❖ 证实试验
经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆 菌，同时接种乳糖蛋白胨培养液，置36 ℃+1 ℃培养箱内培养24 h+2h,有产酸产气者，即 证实有总大肠菌群存在。
.
13
6.结果报告
❖ 查表
根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查 MPN（most probable number,最可能数）检 索表，报告每100mL水样中的总大肠菌群最 可能数（MPN）值。5管法结果见表2,15管结 果见表3.稀释样品查表后所得结果应乘稀释 倍数。如所有乳糖发酵管均为阴性时，可报 告总大肠菌群未检出。（表3略）
❖ 生活饮用水
1mL水样+15mL45℃左右琼脂 摇匀 ，做平行样和空白对照。冷却后，翻转平板 ，36 ℃+1 ℃培养48h后计数。
❖ 水源水
先制成1：10，1：100等稀释液，再按生 活饮用水的检验步骤进行检验。
.
4
注意事项
❖ （1）操作要快而准，包括材料、加样、倒培 养基。
❖ （2）吸液体时液体不能进入吸头。
❖ （3）样品稀释时一定要混匀。
❖ （4）倒培养基前，瓶口要过火焰。
❖ （5）一定要有空白对照。
❖ （6）培养基温度控制，培养基薄厚。
.
5
6.菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要
时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落
数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计
算时应用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个
16000或1.6×104 38000或3.8×104 27000或2.7×104 1500或1.5×103 510000或5.1×105 270或2.7×102 31000或3.1×104
水环境中微生物检测原理简析
水环境中微生物检测原理简析随着城市化和工业化的发展，水资源污染的问题日益突出，水环境中微生物的检测对于评估水质污染程度和保护水资源具有重要意义。
微生物检测主要是针对水中的细菌、真菌、藻类等微生物进行检测，通过对微生物群落结构和数量的分析，可以快速、准确地了解水环境的污染情况。
本文将对水环境中微生物检测的原理进行简析，包括微生物检测的常用方法、检测指标及其意义等内容，以期为水环境微生物检测提供一定的参考。
一、微生物检测的常用方法1.培养法培养法是最常见的微生物检测方法之一，通过在富含营养物质的培养基上培养水样中的微生物，利用微生物在培养基上生长的特点，可以快速、准确地检测出水样中的微生物数量。
培养法的优点是可以得到微生物的生长数量和种类信息，是一种比较客观的检测方法，但也存在一些局限性，比如部分微生物无法在常规培养条件下生长，因此可能漏报一部分微生物。
2.分子生物学方法分子生物学方法是近年来发展迅速的微生物检测技术，主要包括PCR（聚合酶链式反应）、实时荧光定量PCR、荧光原位杂交等技术。
这些方法利用微生物的DNA或RNA信息作为检测目标，可以快速、准确地检测出水样中微生物的种类和数量，尤其适用于检测那些不易培养的微生物。
分子生物学方法的优点是灵敏度高、特异性强，但也存在一定的局限性，比如需要昂贵的实验设备和专业技术人员，且不能区分活菌和死菌。
3.浊度法浊度法是一种简单、快速的微生物检测方法，通过测定水样中微生物颗粒对光的散射情况来间接反映微生物的数量。
浊度法的优点是简便易行，适用于快速检测大样本数量，但也存在一定的局限性，比如不能区分不同种类的微生物，只能大致反映微生物的数量。
二、微生物检测的指标及其意义1.总菌落总数（TVC）总菌落总数是指在一定培养条件下，水样中的细菌总数。
TVC是评价水质卫生状况和预警水环境中细菌污染的重要指标，其数量直接反映了水样中的微生物污染程度。
TVC的检测方法主要包括培养法和分子生物学方法，通过TVC的检测，可以及时了解水环境的卫生状况，并采取相应的治理措施。
水中微生物的测定-国标法(水质检测)
水中微生物的测定-国标法(水质检测)---摘要水中微生物的测定是水质检测中的重要环节，用于评估水体中微生物的生物学活性和污染程度。
本文介绍了水中微生物测定的国标法，包括样品收集、菌落计数、培养方法和结果评价等内容。
---1. 引言水是人类生活中必不可少的资源，但水中微生物的存在可能对人类健康造成威胁。
因此，对水中微生物的测定和监控非常重要。
国标法是国家规定的水质检测方法，为测定水中微生物数量提供了一种科学准确的方法。
2. 范围本文所介绍的国标法适用于表面水、地下水、饮用水和废水等各类水样中微生物数量的测定。
3. 原理国标法采用了经典的菌落计数法。
采样后，将水样在含有适当营养物质的琼脂培养基上培养，利用微生物在培养基上形成的菌落数量来反映水样中微生物的数量。
4. 设备和试剂- 干净的采样和采样器具- 可密封的培养皿和琼脂培养基- 高温高压灭菌器- 灭菌匀平器和移涂棒- 防护设备（手套、口罩、护目镜等）- 干净的试剂和培养基5. 检测步骤1. 样品采集：选择合适的水质监测点，使用采样器具在适当深度和位置处采集水样。
2. 样品处理：将采集的水样转移至干净的中，在采样前进行预处理，如过滤去除大颗粒杂质。
3. 菌落计数：将适量的水样分别移涂于含有琼脂培养基的培养皿上，用灭菌匀平器均匀涂布。
4. 培养：将培养皿密封后，放置于适当的培养箱中，恒温培养。
5. 结果评价：培养适当时间后，根据培养基上形成的菌落数量进行计数，并根据国家标准确定水样的微生物数量。
6. 数据分析根据测定结果，可对水质进行评估。
水质检测中微生物数量的国家标准可以作为参考，判断水样是否符合相关的卫生要求。
7. 结论水中微生物的测定是水质检测中重要的环节。
本文介绍了水中微生物的测定国标法，包括样品收集、菌落计数、培养方法和结果评价等内容。
该方法可用于各类水质样品的微生物测定，并提供了科学准确的结果评价。
水质监测部门可根据该方法进行水质检测，保障人民群众的健康和生活安全。
水质检测基本常识
水质检测基本常识1.常用水质分析方法水质分析的方法与水中待测定成分的性质和含量有关系。
常用的水质分析方法化学法、气相色谱法、离子色谱法、原子吸收法、原子荧光法、电极法等。
其中化学法包括重量法、容量滴定法和光度法三种。
容量滴定法又口分为沉淀滴定、氧化还原滴定、络合滴定和酸碱滴定等，光度法又可分为比浊法、比色法、紫外分光光度法、红外分光光度法和可见光光度法等。
为了方便迅速地得到检测结果，现在各种水质分析项目的检测有向仪器方法发展的趋势。
但水质的常规分析还是以化学法为主，只有待测成分含量较少、使用普通化学分析法无法准确测量时，才考虑使用仪器法。
而目仪器法往往也需要用化学法予以校正。
2.常用仪器（1）精密仪器：分析天平、分光光度计、生物显微镜、pH计、DO 分析仪、气相色谱仪、浊度计、余氯测定仪、BOD5测定仪、CODcr，测定仪、原子吸收分光光度计等。
（2）电气设备： BOD5培养箱、电冰箱、恒温箱、可调高温炉、六联电炉、恒温水浴箱、电烘箱、电动离心小机、蒸馏水器、高压蒸汽灭菌锅、磁力搅拌器等。
（3）玻璃仪器∶烧杯、量筒、量杯、酸式滴定管、碱式滴定管、移液管、刻度吸管、DO 瓶、试管、比色管、冷凝管、橡皮奶头吸管、蒸馏水瓶、碘量瓶、洗气瓶、具塞锥形瓶、广口瓶、试剂瓶、称量瓶、容量瓶、分液漏斗、圆底烧瓶、平底烧瓶、锥形瓶、凯式烧瓶、玻璃蒸发皿、平皿、漏斗、玻璃棒、玻璃管、玻璃珠、干燥器、酒精灯等。
（4）其他设备∶扭力天平、滴定管架、冷凝管架、漏斗架、分液漏斗架、比色管架、烧瓶夹、酒精喷灯T、定量速纸、定性滤纸、定时钟表、操作台、医用手套、温度计、采样瓶、糖瓷盘、防护眼镜、洗瓶刷、滴定管刷、牛角匙、白瓷板、标签纸、灭火器、急救药箱等3.空白试验空白试验是以水质分析时使用的蒸馏水或纯水代替被测水样，其他所加试剂与样品测定完全相同的操作过程。
空白试验应与样品测定同时进行。
一般情况下，样品测定结果不仅与样品中待测物质的浓度有关。
水质检验基础知识
给水处理基本方法
1.氯消毒 在常温常压下，氯是一种有强烈刺激性的黄绿 色气体。当温度低于－33.6℃时，或在常温下将氯 加压到6～8个大气压时，就成为深黄色的液体，俗 称液氯。 氯消毒原理。氯消毒主要通过次氯酸H0Cl起作用。 由于次氯酸是很小的中性分子，只有它才能扩散到 带负电的细菌表面，并通过细菌的细胞壁穿透到细 菌内部。当次氯酸分子到达细菌内部时，能起氧化 作用破坏细菌的起新陈代谢催化作用的酶系统，从 而达到杀菌消毒的目的。
（一）化学试剂：
化学试剂的分级： 除此之外还有许多特殊规格试剂，如基准试剂、 色谱纯试剂、光谱纯试剂、电子纯试剂、生化试 剂和生物染色剂等。使用者要根据试剂中所含杂 一般试剂
根据GB 15346－1994《化学试剂的包装及标 志》规定，一般试剂分为三个等级，即优级纯、 分析纯和化学纯。通常也将实验试剂列入一般试 剂。
响到分析结果的准确性，因此作为检验人员应
该全面了解试剂的性质、规格和适用范围，才 能根据实际需要选用试剂，以达到既能保证分 析结果的准确性又能节约经费的目的。
2. 化学试剂的储存
大部分化学试剂都具有一定的毒性，有的 是易燃、易爆危险品，因此必须了解一般化学药 品的性质及保管方法。
2. 化学试剂的储存
给水处理基本方法
城市给水处理的目的是去除原水中悬浮物质、胶体、病菌 以及水中其他有害人体身体健康和影响工业生产的有害杂 质，使处理后水质满足现行生活饮用水质标准和工业生产 用水水质的要求 一、给水处理方法 水处理方法应根据水源水质和用水对象对水质的要求 确定。 1）当生活饮用水采用地面水时，需要进行混凝、沉 淀(或澄清)、过滤、消毒等处理工艺过程。 2）如果采用没有受到污染的地下水源，当水质清澈 透明时，只要经过消毒，便可符合生活饮用水水质要求。 3）当要求的水质较高时，则需作进一步的专门净化 处理，如除铁、除锰、软化、淡化以及其它方面的特殊处 理。
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② smear 取 菌 苔 少 许 涂片
（ 1mm 小菌落半个） ②促使菌体蛋白质凝固，固定 与盐水混匀，涂成 在载玻片上，以免染色水洗的 大于1cm2 均匀涂膜 。 时候，细菌被水洗掉。
无 无 菌 菌 操 操 作 作
③涂毕→环移至涂膜中 央侧立，待环内菌膜破 裂，接种环烧灼灭菌。 干燥dry
↑ ↑ 灭菌接种环 细菌合适 细菌较多
按其致病性可分为:
★病原性微生物 ★非病原性微生物
微生物的特点
个体小,面积大：小于0.1mm。肉眼不可见。 分布广,种类多（10万多种） ：自然界中到处都
有，如水、空气、土壤等, 土壤中的数量最多。
代谢强，转化快：发酵乳糖的细菌在1小时内可
分解其自重1000～10000倍的乳糖；产朊假丝酵母 合成蛋白质的能力比食用公牛强10万倍
细菌的繁殖
细菌生长速度很快，一般约20min分裂一次。若按此速度 计算，细菌群体将庞大到难以想象的程度。但事实上由于 细菌繁殖中营养物质的逐渐消耗，有害代谢产物的逐渐积 累，细菌不可能始终保持高速度的无限繁殖。经过一段时 间后，细菌繁殖速度逐渐减慢，死亡菌数增多，活菌增长 率随之下降并趋于停滞。
热原与内毒素
消毒与灭菌
热力灭菌法：使蛋白质、酶及核酸永久性破环，细胞膜溶 辐射灭菌法
解，导致细胞发生不可逆转的死亡。 1、紫外线：波长200-300nm的紫外线具有杀 1、干热灭菌法—采用灼烧或干热空气灭菌 ，使用方便，
菌作用。穿透物质的能力很差，一般要求紫外灯 适用于玻璃器皿和瓷器等耐高温的固体物的灭菌 。 距离照射物不超过1.0米为宜 2、湿热灭菌法—利用热蒸汽杀死微生物。 2、电离辐射 高压蒸汽灭菌：利用高温高压蒸汽进行灭菌的方 高速电子、 X射线、γ射线 法 ，蒸汽的穿透力较热空气强可以杀死一切微生 3物，包括细菌的芽孢，真菌的孢子或休眠体等耐 、微波 高温的个体 。最可靠最适用最广泛的灭菌方法。 波长1mm~1m
微生物基础知识 培训
宁波安联检测有限公司
微生物的定义
微生物（microorganism, microbe）:存在于自然界 中的一群体型细小、结构简单、肉眼看不见，必须 借助于特殊仪器放大后才能观察到的微小生物
按其结构、化学组成及生活习性可分为:
★原核类:仅有原始核质，无核仁或核膜，细胞器很不完善。如细菌、 放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体、螺旋体 ★真核类:细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体，细胞器完 整。如真菌（酵母菌和霉菌）、 原生动物、藻类 ★非细胞类:体积微小，能通过除菌过滤器。如病毒和朊病毒等
固定 Fixation
细菌是一类细胞细而短、结构简单、细胞壁坚韧，以二分裂方式无性 繁殖的原核微生物，分布广泛。
1.
细菌的形态与结构 （1） 球菌 多数球菌直径在1微米左右，外观呈球形 或近似球形。由于繁殖时分裂平面不同可形成不同的排 列方式，分为双球菌、链球菌、葡萄球菌等。 （2） 杆菌 形态多数呈直杆状，也有的菌体稍弯，多 数呈分散存在，也有的呈链状排列，分为棒状杆菌、链 状杆菌、球杆菌等。 （3） 螺形菌 菌体弯曲，呈弧形或螺旋形。如幽门螺 杆菌。
多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代
生长旺，繁殖快：微生物有惊人的繁殖速度，大
适应性强，易变异（耐药性产生的原因）
葡萄球菌
酵母菌（芽痕）
棒状杆菌
大肠杆菌
弧状菌
链球菌
• 菌落单位----CFU
菌落单位
由单个菌细胞或几个同种菌细胞在培养基上长成肉 眼可见的菌落，每个菌落就是1CFU
光滑型菌落
粗糙型菌落
3、其他理化特性①耐热性：120℃加热4h，可破坏98%。 180℃加热2h或250℃加热30min，才可彻底破坏。②滤过 性：其体积小，约在1~5nm之间，故能通过滤器进入滤液 中。③具有水溶性及不挥发性。④能被强酸、强碱和氧化 剂破坏
消毒与灭菌
下列术语常用于表示物理或化学方法对微生物的杀灭程度 消毒：杀死物体上病源微生物的方法,并不一定能杀死细 菌的芽胞。消毒所用的试剂称为消毒剂。 灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高， 包括杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。 抑菌：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为 各种抗生素，可抑制细菌的繁殖。 防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不 死亡。同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度时常 为防腐剂。 无菌：不存在活的细菌。防止细菌进入人体或其他物品的 操作技术，为无菌操作。
结晶紫
卢戈碘液液
G-菌：
类脂质多
95%乙醇
复红
肽聚糖少
意义
鉴别细菌：把细菌分成G+和G-两大类。 选择抗菌药物：例如G+球菌对青霉素敏感,G-杆菌耐 药。
ห้องสมุดไป่ตู้
了解细菌的致病机理：G+菌大多产生外毒素,G-菌产 生内毒素。 革兰染色的步骤 涂片 → 干燥 → 固定→ 染色 紫碘酒红，分分半半
①接种环取盐 ①手持载玻片一端，涂膜朝 水3ul×2滴, 上，两个涂膜快速通过火焰 水滴间距小于 外层3次，时间2～3秒钟。 2cm。
许多细菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能产生热
原。热原是微量即可引起恒温动物体温异常升高 的物质的总称。主要物质为细菌内毒素、胞壁酰 二肽及其他抗原抗体复合物、半抗体原物质和某 些药物（类固醇）等。
1、细菌内毒素一般指革兰阴性细菌细胞壁的结构成分，主 要是脂多糖。
2、细菌内毒素生物学活性可分为两类：一是致病作用，一 是保护性反应。
微生物的分布
土壤：是微生物生活的最适环境 水：仅次于土壤的微生物分布、定居的第二场所 空气：空气中的微生物主要来源于带有微生物菌体及孢子
的灰尘，这类微生物大多数是腐生性的，还来源于人和动 物，它们大多数是通过呼吸道排出的，其中也包含有病原 微生物，悬浮在大气中。
微生物的类群和形态结构
一、细菌
细菌虽小，仍具有一定的细胞结构和功能。细胞壁、细胞 膜、细胞质和核质等各种细菌都有，是细菌的基本结构。
球菌(coccus)
脑膜炎奈瑟菌
肺炎链球菌
杆菌(bacillus)
不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。
大 中 小
炭疽芽胞杆菌 3-10 μ m
大肠埃希菌 2-3 μ m
布鲁菌 0.6-1.5 μ m
水质微生物 采样
·自来水：现将自来水龙头用火焰烧灼3min，灭菌；再打 开水龙头防水5min（常用的水龙头可以 防水2~3min）；采样水置于无菌锥形瓶中，采样总量 占锥形瓶的80%左右，以便摇匀。
·水源水：选取可疑及有代表性的水域，一般距离水面 10~15cm采样；河道水采样时，将瓶口朝向、 水流方向，在指定位置打开瓶盖。
·采样结束后，样品冷藏运输，尽快检测。
样品处理、实验准备、实验步骤及报告详见作业指导书
染色
革兰氏染色法
革兰染色法是丹麦内科医生 Christain Gram 于1884年创立的一种细菌复染色方法，已有130多 年的历史，仍在广泛使用。
通透性学说、等电学说、化学学说
G+菌： 肽聚糖多 交联度大 类脂质少