临床免疫学检验

一、名解带现象（前带、后带）：在等价带的前后，由于抗体和抗原过量，形成的沉淀物少，上清液中可测出游离的抗体或抗原，这种现象称为带现象。

当抗体过量时称为前带，抗原过量时称为后带。

凝集反应：是指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被可溶性抗原（或抗体）的颗粒性载体与相应抗体（或抗原）特异性结合后，在适当电解质存在下，出现肉眼可见的凝集现象。

直接凝集反应：在适当电解质参与下，细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原直接与相应抗体结合出现肉眼可见的凝集现象，称为直接凝集反应。

间接凝集反应：将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒性载体（如正常人O型红细胞、细菌、胶乳颗粒等）的表面，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适当电解质存在条件下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应或被动凝集反应。

Coombs试验：又称抗球蛋白试验，是抗球蛋白参与的间接血凝试验，用于检测抗红细胞不完全抗体。

不完全抗体多半是7S的IgG类抗体，能与相应的抗原牢固结合，但因其分子量较小，体积小，不能起到桥联作用，在一般条件下不出现可见反应。

利用抗球蛋白抗体作为第二抗体起桥联作用，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体，使红细胞凝集。

沉淀反应：是指可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发生特异性结合而出现可见的沉淀现象。

高剂量钩状效应：抗原过量可引起高剂量钩状效应，即抗原过量致形成的IC分子小，发生再解离，浊度下降，光散射减少。

海德堡曲线理论：当抗体过量时，IC的形成随着抗原递增至抗原、抗体比例最适处达最高峰，沉淀反应最明显，称等价带，高峰区域左侧，抗体浓度过高，沉淀反应不明显，称前带；高峰区域右侧，抗原浓度过高，沉淀反应也不明显，称后带，这就是海德堡曲线理论。

包被：将抗体或抗原结合在固相载体上的过程称为包被。

封闭：由于包被过程中固相载体表面不能被抗体或抗原蛋白质完全覆盖，实验操作过程中加入的血清标本以及酶结合物中的蛋白质也会部分地非特异性吸附于固相载体表面，最终产生非特异性显色导致测定本底偏高，在这种情况下，需用1%-5%的牛血清白蛋白或5%-20%小牛血清再包被一次，消除此干扰，此过程称为封闭。

亲和素的活性单位：亲和素的活性单位是以亲和素结合生物素的量来表示的，即以能结合1ug 生物素所需要的亲和素量为1个亲和素活性单位。

胶体金免疫技术：是以胶体金作为示踪标记物或显色剂，应用于抗原抗体反应的一种标记免疫测定技术。

M蛋白：主要是指患者血清中某一类免疫球蛋白含量显著增多，大多在30g/L以上，这种异常增多的免疫球蛋白理化性质十分一致，称为单克隆蛋白即M蛋白。

窗口期：从HIV感染到能够检测出HIV抗体的时间段称为窗口期。

TORCH ：临床上将4种引起胎儿先天性感染的病原微生物统称为“TORCH”，其中TO是弓形虫，R是风疹病毒，C是巨细胞，H是单纯疱疹I/II型。

自身免疫性疾病（AID）：机体免疫系统受环境或遗传等因素作用产生针对自身正常或变性的组织、器官、细胞、蛋白质或酶类等自身抗原的免疫应答，导致自身组织器官损伤或功能障碍所致的疾病称为自身免疫性疾病。

免疫增殖病：免疫器官、免疫组织或免疫细胞异常增生所致的一组疾病称为免疫增值性疾病，主要表现为免疫球蛋白异常和免疫功能异常。

个体化医疗：是指在适当的治疗时间，使用适当的给药途径，对适当的患者施以适当的药物和适当剂量，以避免不当治疗和有害治疗，降低药物的毒副作用。

肿瘤抗原：是指细胞癌变过程中新出现的或异常表达的抗原物质，在肿瘤的发生发展及诱导机体产生抗肿瘤免疫应答中具有重要作用，是肿瘤免疫诊断和免疫防治的分子基础。

是指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞生物合成、释放或是机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。

移植（transplantation）：指将健康细胞、组织或器官从其原部位移植到自体或异体的一定部位、用以代替或补偿机体所丧失的结构和（或）功能的现代医疗手段。

移植排斥反应（transplantation rejection）：是针对移植抗原产生免疫应答，从而导致移植物功能丧失会受者机体损害的过程。

获得性免疫缺陷综合征：AIDS，又称艾滋病，是由人类免疫缺陷病毒（HIV）感染引起的一组综合征，患者以CD4+T细胞减少为主要特征，同时伴反复机会感染，恶性肿瘤及中枢神经系统退行性病变。

免疫缺陷病：是由于先天遗传因素或后天因素造成的免疫系统在发育、分化、代谢或相互调节的不同环节上发生障碍，导致免疫功能低下或缺失，临床上表现为以感染为主的一组综合症。

二、简答1.什么是免疫佐剂？免疫佐剂有哪些种类？其作用机制如何？P22答:免疫佐剂：某些物质预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答的类型，称为免疫佐剂。

佐剂种类：一类是本身具有免疫原性的佐剂，如细胞因子，卡介苗等；另一类是本身无免疫原性的佐剂，如液体石蜡，明矾等。

作用机制：①改变抗原的物理性状，延缓抗原降解和排除，从而更有效地刺激免疫系统；②刺激单核-吞噬细胞系统，增强其处理和提呈抗原的能力；③刺激淋巴细胞增殖和分化，可提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴度；④改变抗体的产生类型以及诱导迟发型超敏反应。

2.简述单克隆抗体的制备技术要点和应用？P28答：制备技术要点：①尽早用获得的抗体阳性杂交瘤细胞株制备单克隆抗体，可避免多次传代引起染色体逐渐丢失而使细胞产生抗体能力减弱甚至消失；②单克隆抗体的产生：大量制备单克隆抗体的方法以动物体内诱生法为主；③单克隆抗体的纯化：目前最有效的单克隆抗体纯化法是亲和层析法，其具有选择性高、所得抗体纯度高、回收率高等优点；④单克隆抗体的性质鉴定：为确定获得的多个杂交瘤细胞株哪一株最适用，则要对其进行鉴定。

应用①检验医学诊断试剂；②抗体药物的研制及应用；③蛋白质的提纯；④“探针”作用。

3.单克隆抗体和多克隆抗体比较有何优缺点和局限性？P30答：优点：具有高特异性，高均一性和可重复性。

缺点：对环境的高度敏感性、弱凝集反应和不呈现沉淀反应、反应强度低，所需设备昂贵，制备技术复杂等。

局限性：固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围；。

4.简述对流免疫电泳的原理和结果判断。

P46答：原理：在pH8.6的缓冲液中,大部分蛋白质抗原等电点低,带较强的负电荷,分子量小,受到电渗作用小,在电场中向正极移动;而抗体绝大多数为IgG ,等电点偏高,在pH8.6时带负电荷较少,且分子量较大,移动速度慢,它向正极移动缓慢甚至不移动,而在电渗作用下,随水流向负极移动,电渗引向负极移动的速度超过了IgG向正极的移动速度,因此抗体移向负极,在抗原抗体浓度最适比处形成沉淀线,根据沉淀线相对于两孔的位置可大致判断抗原抗体的比例关系。

结果判断：若抗原浓度高于抗体，沉淀线靠近抗体孔，抗原浓度越高，沉淀线越接近抗体孔，甚至超过抗体孔。

5.免疫放射分析与放射免疫分析的主要区别有哪些？P59表格6.酶联免疫吸附试验（ELISA）的基本原理及方法类型？P83答：基本原理是把抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性，也就是形成固相抗原或抗体；将抗原或抗体与酶连接成酶标记抗原或抗体，它既保留了免疫活性，又保留了酶的活性；测定时将受检样品（含待测抗原或抗体）和酶标记抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体反应形成固相化抗原抗体-酶复合物；用洗涤的方法将游离成分去掉，结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例；加入底物后，底物被固相载体上的酶催化生成有色产物，通过定性或定量检测有色产物的量即可确定样品中待测物质的含量。

方法类型①检测抗原的方法：蛋白大分子抗原大多采用双抗体夹心法，只有单个抗原决定簇的小分子则采用竞争法。

②检测抗体的方法：间接法，双抗原夹心法，竞争法和捕获法等。

7.吖啶酯化学发光的原理和特点是什么？P97答：发光原理：吖啶酯在碱性条件下被H2O2氧化时，发出波长为470nm的光，具有很高的发光效率，其激发态产物N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体特点：①吖啶酯发光的氧化反应简单快速，不需要催化剂，只要在碱性环境中进行即可。

②反应体系中加入H2O2和NaOH溶液后，发光迅速，背景噪音低，保证了测定的敏感性。

③吖啶酯可直接标记抗原或抗体，结合稳定，不影响标记物的生物活性和理化特性。

④吖啶酯发光为瞬间发光，持续瞬间短，因此对信号检测仪的敏感度要求比较高。

8.免疫组织化学技术的抗原修复方法有哪些？p119①酶消化法：根据消化能力强弱可分为轻度消化酶（如无花果蛋白酶）、中度消化酶（如胰蛋白酶）和强消化酶（如胃蛋白酶）。

②盐酸水解法：操作中应注意掌握盐酸浓度、水解温度及水解时间，以最大程度暴露抗原而又不破坏抗原性为目的。

③微波法：将石蜡切片置于缓冲液中，凭借微波辐射产生的高热效应及高速分子运动能量解开交联蛋白，暴露被掩盖的抗原决定簇。

④高压锅法：其利用加热暴露抗原，经济简单，适用于大批切片的加热处理。

⑤煮沸法：也是利用热效应恢复抗原性。

9.溶血空斑试验、酶联免疫斑点试验原理、方法学是什么p145溶血空斑试验：原理：将SRBC免疫的小鼠脾脏（或家兔淋巴结）制成单个细胞悬液，与SRBC在琼脂糖凝胶内混合后倾注于小平皿或玻片上。

脾细胞中的抗体生成细胞释放抗SRBC抗体，使其周围的SRBC致敏，在补体参与下可将SRBC溶解，形成肉眼可见的溶血空斑。

每一个空斑中央含一个抗体形成细胞，空斑数目即为抗体形成细胞数。

空斑大小表示抗体形成细胞产生抗体的多少。

方法学：①经典溶血空斑形成试验：用于检测实验动物抗体形成细胞的功能。

可分为直接法和间接法。

②被动溶血空斑试验：是指抗体形成细胞产生的Ig与SRBC上的抗原结合，在补体参与下出现溶血反应。

酶联免疫斑点试验：原理：酶联免疫斑点试验是一种既可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量的方法。

其原理是用抗原包被固相载体，加入待检的抗体产生细胞，即可诱导抗体的分泌。

分泌的抗体与包被抗原结合，在抗体分泌细胞周围形成抗原抗体复合物，使细胞吸附于载体上，加入酶标记的第二抗体与细胞上的抗体结合，通过底物显色反应的深浅，可测定出生成的抗体量，并可在镜下计数着色的斑点形成细胞。

10.ELISA的优缺点是什么？P87优点：高度的敏感性和特异性，操作简便，试剂稳定，对环境没有污染，易于推广和标准化，可同时检测大量标本且试验废弃物便与处理等。

缺点：由于是基于抗原抗体特异性反应的原理，因此该技术有其局限性。

如检测抗原，则要求抗体（单抗或多抗）是特异性的，待测抗原必须存在能与抗体结合的抗原决定簇，如果基因突变导致某些位点的不表达或异常表达，或者结合位点因为某些原因被封闭或阻断，将会影响抗体与抗原的结合；如检测抗体，则要求所包被的抗原应尽可能包含所有的特异性抗原决定簇，同时又尽可能不含有非特异性成分，这些影响测定结果的因素往往由于技术水平的限制而难以完全做到，因此试验中假阳性或假阴性结果是不能完全避免的。