半夏中主要活性成分含量的测定方法研究进展

半夏中主要活性成分含量的测定方法研究进展

摘要】本文简述了中药材半夏中三类主要活性成分，琥珀酸、总生物碱和草酸

钙的常用测定方法，对半夏活性成分的检测，半夏药材质量检测控制具有一定的

参考价值。

【中图分类号】R284.1 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2017）09-0304-03

半夏是为天南星科植物半夏的干燥块茎，具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散

结之功效，生半夏具有一定的毒性，为临床常用有毒中药之一[1]。目前普遍认为，半夏中主要的有效成分为琥珀酸为主的各类有机酸，生产中常将琥珀酸含量作为

半夏质量的评定标准[2]。据曾颂[3]等人的研究证实，半夏的镇咳祛痰作用与有机

酸具有相关性。另有研究表明，半夏中的生物碱也具有明显的生物活性和药理学

活性，是半夏中的主要有效成分，其含量的高低直接影响着药材质量与疗效的好

坏[4]。除半夏的传统效用外，有研究认为，半夏含有的生物碱类次生代谢产物，

具有抗肿瘤、抗菌、抗氧化以及糖苷酶抑制等活性[5]。此外，生半夏中的草酸钙

被认为是刺激性成分，也是炮制过程中需要降低其含量的主要成分之一[6]。故琥

珀酸，总生物碱和草酸钙是半夏药材内的主要生物活性成分，其含量是评价半夏

药材质量与疗效的重要指标。本文主要就半夏中主要活性成分含量的测定方法研

究作一概述，对半夏药材的生产评价有参考价值。

1.半夏中琥珀酸含量的测定方法

琥珀酸又称丁二酸，是一种二羧酸，化学式为C4H6O4，在常温下呈无色无

味晶体。熔点及沸点分别为185℃及235℃。琥珀酸具有抗炎，抗溃疡，抗菌，

抑制神经过敏等作用，是药材半夏中的主要有效成分之一，半夏中琥珀酸含量的

测定方法主要有如下几种。

1.1 高效液相色谱法

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromato graphy\HPLC）是色谱法

的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一

溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内

各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。因其强大的分

离和高灵敏的检测能力而成为复杂体系分离分析最为常用的方法之一，在中药质

量控制、中药活性化合物的分离纯化及定性定量分析等方面得到了广泛的应用[7]。在测定半夏中琥珀酸含量时，常采用甲醇等作为流动相，检测波长210nm，流速

1ml/min[8]，用这一方法得到的峰值等数据可用于半夏质量检测的参考。

1.2 薄层扫描测定法

薄层扫描法(TLC Scanning method)亦称薄层光密度法(TLC Densitomet ry)，它是薄层色谱技术与光密度计和微型电子计算机结合起来的一种新型仪器分析方法。

应用薄层扫描仪或称薄层光密度计,可同时对各种复杂的样品进行分离和测定。鉴

于其简便快速、灵敏准确，专属性好,因此在生命科学中得到广泛的应用,现已被

国内外医药学研究所采用[9]。用这一手段测定半夏中的琥珀酸含量时，可采用薄

层扫描法,点样于硅胶G板上,展开剂为苯-乙酸乙酯-乙酸（2∶0.8∶0.3），上行展开，反射法锯齿扫描，采用外标两点法计算琥珀酸含量[10]。

1.3 直接电位滴定法

该方法为测定半夏中琥珀酸含量的传统方法，亦被目前药典采用为标准方法，具体操作为取半夏粉末(过四号筛)5g，精密称定，加乙醇50ml，加热回流1小时，

同上操作重复2次，冷却，滤过，合并滤液，蒸干，残渣精密加入氢氧化钠滴定

液(0.1mol/L)10ml，超声处理(功率500W，频率40kHz)30分钟，转移至50ml量瓶中，加新沸过的冷水至刻度，摇匀，精密量取25ml，照电位滴定法测定，用盐酸

滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白实验校正。每l ml氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于5.904mg的琥珀酸(C4H6O4)。

2.半夏总生物碱含量的测定方法

现已报道的半夏总生物碱中含有1-麻黄碱、胆碱、鸟苷、胸苷等成分，有研

究表明，生物碱是半夏药材中起镇咳作用的成分之一，除此之外，总生物碱还有

降压、降脂的作用, 对体外肿瘤细胞的增殖，也具有较强的抑制作用。也是其药

材主要应用的成分[11]。目前常用于测定半夏总生物碱含量的方法主要是分光光

度法，该方法是根据物质吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有

效手段。利用此方法测定半夏生物碱时，可取已干燥至恒重的生药粉，过筛，加

浓氨水，氯仿，冷浸后，超声提取，过滤，残渣以氯仿洗涤，合并滤液，80℃下

回收氯仿至干，用氯仿10ml溶解,加pH=5.4缓冲液,溴麝香草酚蓝溶液，振摇，

静置1h,取氯仿层于容量瓶中,用氯仿稀释作为样品供试液。以空白对照液为对照，最大吸收波长为测定波长测定其光吸收[12-13]。另外生物碱含量的测定还可以采

用酸性染料比色法，电位滴定法等较为传统的方法，但目前采用较少。

3.半夏草酸钙含量的测定

半夏生品具有强烈刺激性，表现为“戟人咽喉”，有针样刺痛感，失音等。目

前认为，草酸钙针晶可能是半夏中主要的刺激性成分之一。有研究表明，细长并

质地坚韧的草酸钙针晶可以直接刺激黏膜细胞导致细胞破损，产生大量炎症介质，从而引起刺激疼痛感[14]。从生半夏中提取分离获得的纯草酸钙针晶对家兔眼结

膜具有强烈的刺激性毒性；草酸钙针晶的浓度与刺激性强度呈典型的量效关系；

去除草酸钙针晶的半夏粉末和半夏各种溶剂提取物对家兔眼结膜几乎没有刺激性。另外，有学者认为，半夏各种炮制过程的主要作用之一即是破坏草酸钙针晶[15]。故半夏中草酸钙含量的测定也是其质量检测的重要技术之一。

3.1 高效液相色谱法

目前测定半夏中草酸钙准确含量的主要方法即是HPLC，半夏中草酸钙的高效液相色谱的条件可参考如下方案：取半夏干燥快进，打粉，过筛，精密称定，加

入15倍量的蒸馏水，70 摄氏度水浴，过滤，弃去上清液，残渣用热水洗涤两次，用0.1mol /L的HCl超声提取3次，过滤，合并3次滤液，用0.1mol/L的HCl定容，即为供试品溶液。制取一定浓度的草酸标准液，以 0.5% 磷酸水溶液为流动相，检测波长210nm，流速1.0ml/min，柱温28摄氏度[16-17]。

3.2 家兔眼结膜刺激性实验

该方法并非准确测定草酸钙含量，但可通过对家兔角膜滴加对应浓度的草酸

溶液来判断半夏加工品中草酸钙的相对浓度。可取家兔随机分组,试验时撩起上下

眼睑, 使成杯状，将药液分别滴加到兔左右眼中，每只眼给药2滴。给药后，轻

轻使上下眼睑被动闭合5～10s，使药液和眼充分接触，2min后立即用40～50mL

生理盐水冲洗眼睛至眼中无任何异物，随后观察1.5～3h内兔眼情况, 并拍照记录

家兔眼的刺激反应情况，进行量化统计，数据分析[18-20]。

4.总结与展望

目前中药有效成分的提取，测定与标准化是一项重要而艰巨的任务，在半夏

生物活性物质的测定方面，已经建立起一套较为完整的操作体系，能够利用现代

化仪器进行较为准确的含量测定。但仍存在的主要问题是生物活性成分分离不完