大肠杆菌生长曲线的测定 PPT

本实验采用分光光度计进行光电比浊 测定不同培养时间细菌悬浮液的光密度值， 绘制生长曲线。
光吸收的基本定律：朗伯－比耳定律 A=kbc (k为摩尔吸光系数，b为液层厚度，c为溶液浓度)
朗伯－比耳定律的意义是：当一束平行单色光通过均匀、非散 射的溶液时，其吸光度与溶液浓度和液层厚度的乘积成正比。
实验结果
1、将测定的OD600值填入下表：
2、绘制大肠杆菌的生长曲线：
OD600值
培养时间/h
LBwenku.baidu.com体培养基配方：100ml
酵母提取物(Yeast extract): 0.5g 蛋白胨(Tryptone)：1g 氯化钠(Nacl)： 1g
Thanks for your attention！
床、无菌试管、无菌吸管。
大家应该也有点累了，稍作休息 大家有疑问的，可以询
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操作步骤
1、配制LB液体培养基100 ml，分装1支试管(5 ml/支)，剩余培养 基装入250 ml的三角瓶，121℃灭菌20min。
2、取11支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即0、1.5、 3、4、6、8、10、12、14、16和20 h。
3、用5 ml无菌吸管取2.5 ml大肠杆菌培养液(培养12h)转入装有 LB液体培养基的三角瓶内，混匀后分别取5ml混合液放 入上述标记的11支无菌大试管中。
4、将已接种的试管置摇床37℃振荡培养(200 rpm)，在相应时间 取出试管放于冰箱中，最后一同测定OD600值。
5、进行光密度测定时，以未接种的LB液体培养基为空白对照， 从早取出的培养液开始依次测定，细胞密度大的培养液用LB 液体培养基稀释后测定，使OD600值在0.1~ 0.65之内。
FeSO4溶液在650nm的 光吸收曲线
大肠杆菌悬浮液的光吸收规律：
实验表明，OD600在0.1~ 0.65之内的大肠杆菌悬浮液基本符合朗 伯－比耳定律，即吸光度与菌液浓度成正比。
大肠杆菌梯度稀释液的 光吸收曲线
器材
1、菌 种：大肠杆菌。 2、培养基：LB液体培养基。 3、仪器与耗材：722型分光光度计、恒温摇
不同培养时间的菌液
OD600 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20
2.5 2
1.5 1
0.5 0
培养时间
OD600 OD600校正
注意事项：
• 选用规格一致的试管； • 每支试管的装液量应相同(5 ml/支)； • 混匀的菌悬液加入到比色皿后应迅速读取OD值； • 保护比色皿透光面不受磨损，不要用手指直接接触； • 分光光度计在未测样品时应及时打开盖。
大肠杆菌生长曲线的测定
授课教师: 孙运军 研 究 生: 何浩 张晨
黄同龙 左明星
目的要求
1、通过光密度值的测量了解大肠杆菌的生 长规律，绘制生长曲线。
2、了解光电比浊法测量细菌数量的原理。
基本原理
将一定量的细菌接种到恒容积的液体培养基 中，在适宜的培养条件下，该群体就会有规律的 增长。以培养时间为横坐标，以细胞数目的对数 或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细 菌的生长曲线。该曲线包括四个阶段：延滞期、 指数期、稳定期、衰亡期。