大肠杆菌生长曲线的测定 PPT
大肠杆菌检测医学PPT
段分离。长链DNA所携带的磷酸基团比较多，因此会You有r t更ext
多 的 T E A A 与 之 相 融 合 ， 其 在 柱 内 停 留 的 时 间 增Yo加ur t。ext
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检测原理
ATP生物发光技术是近些年来发展较快的微生物快速
检测方法。ATP是活细胞中最普遍的能量代谢产物，为
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检测原理
平板计数法首先选取较适宜的连续稀释梯度样品匀液，
将冷却至45℃±0.5℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）
倾注于平皿内，混匀并凝固后加入3~4mL的VRBA-MUG
覆盖平板表层，36±1℃下培养18~24h，之后在紫外灯下
计数。该方法是将样本做一定比例的稀释，其中的微生物
被稀释后分散成单个细胞，然后在一定的条件下进行培养
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大肠杆菌 检测方法讨论与展望
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概述
大肠杆菌是人和动物肠道中最著名的一种细菌，
主要寄生于大肠内，约占肠道菌中的1%，是一种两端
钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。大肠杆
菌能合成维生素B和K，正常栖居条件下不会致病；若
近出现的新的检测方法，为以后大肠杆菌检Y测ou提r t供ex一t
些参考。
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传统检测方法
多管发酵法 滤膜法 平板计数法
检测新技术
气相色谱与液相色谱法 ATP生物发光技术 生物传感器检测技术
PCR检测技. 术
基因芯片技术 自动化仪器 免疫磁珠技术IMS
检测原理
多管发酵法是一种检测食品及水体中大肠 杆菌的传统方法。这种方法是将样品接种于 LST肉汤中在37℃±1℃的条件下培养24±2h， 之后对产气样品进行复发酵；复发酵是将初发 酵中产气样品接种于EC肉汤中，44.5±0.2℃ 条件下培养24±2h，若产气则进行平板分离 培低，，进养但而。是影多检响管测到发时测酵间定法较结对长果试，的验容精条易确件受度要。其求他不条高YY件，oouu干成rr tt扰本eexxtt
生化工程应用Ecoli大肠杆菌之生长曲线
品在水解過程被金屬、鹽類、尿素、丙醇污染，或是界面 活性劑（detergen）沒有去除乾淨，都會使樣品在MALDI source的電離（ionization）受到極大的影響。MALDI-TOF MS對此特別敏感。
檢測流程(續)
• LCM (Laser Capture Microdissection)
Figure 26.04
Mass spectrometry matrix-assisted laser desorption-ionization (MALDI) and time-of-flight (TOF)
MALDI-TOF
matrix-assisted laser desorption inoization- time of flight
Figure 26.01
Figure 26.02 SDS polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE gel)
Western blotting
• can detect the specificity protein • detect one protein in a mixture of any
• MS本身有三個主要部份 • 第一個部份是來源（source），由樣品產生離子；第二個部份是質析
（mass analyzer），依離子質量/價數【mass/charge（m/z）】的比 例分開它們；第三個部份是偵測（detector），也就是mass analyzer 的結果。
ห้องสมุดไป่ตู้
MALDI-TOF
matrix-assisted laser desorption inoization- time of flight
微生物生长曲线测定
实验七 测定细菌生长曲线一、实验目的1. 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；2. 学习液体培养基的配制以及接种方法；3. 反复练习无菌操作技术；4. 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法二、 实验原理将一定量的细菌接种在液体培养基内，在一定条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性，如以细菌的活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，成为生长曲线（如图一）。
图一 微生物生长曲线示意图单细胞微生物的发酵具有四个阶段，即Ⅰ调整期（延滞期）、Ⅱ对数期（生长旺盛期）、Ⅲ平衡期（稳定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。
不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。
本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。
将所测得的光密度值（OD600）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G 表示。
其计算公式为：2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=式中t1和t2为所取对数期两点的时间；W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量（g/L ）或OD 。
三、 实验仪器、材料和用具1. 实验材料:大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；2. 培养基:牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基3.实验仪器:取液器(5000ul, 1000ul 各一支);培养箱, 摇床，722s分光光度计；4.实验用具:无菌1000ul吸头80个;无菌5000ul吸头2个;比色皿9个+共用参比杯一个.四、实验步骤1.准备菌种：将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块2.分为三个小组：第（1）小组取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基, 37 ℃200rpm取3.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃200rpm取5.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃200rpm第（2）小组取一个大肠杆菌菌落接种到100ml培养基，37 ℃200rpm取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃110rpm取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基，30 ℃200rpm第（3）小组取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基，37 ℃200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基，30 ℃200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基，37 ℃110rpm每培养一小时取样一次(2.5h,3.5h加测1次). 对照组测量起始pH,所有瓶子测量发酵9h结束测pH.3.测量：选用600nm波长，以蒸馏水作为参比，开始培养前测定每组培养液的OD值作为起始点。
实验十二、 大肠杆菌生长曲线的制作 ppt课件
比色皿经蒸馏水清洗后，必须经待测样品
润洗。比色皿的毛面用吸水纸擦干，而光面
只能用吸水纸吸干，以免光面被划破。
比色皿之间吸光度进行比较。
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五、作业
1、结果 P88
记录不同大肠杆菌培养液的OD600值，并绘制 大肠杆菌的生长曲线。
2、思考题 第1题
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实验十二、 大肠杆菌生长曲线的制作
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1
一、实验目的
• 了解大肠杆菌的生长特性与规律，绘制生 长曲线
• 掌握光电比浊法测量细菌数量的方法
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2
二、实验原理
生长曲线
将少量纯种单细胞微生物接种到定量的 液体培养基中，定时取样测定细胞数量， 以培养时间为横坐标，以菌数为纵坐标作 图，得到一条反映单细胞微生物在整个培 养期间菌数变化规律的曲线。
成因：营养的消耗使营养物比例失调、有 害代谢产物积累、PH值等理化条件不适宜。
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7
4、衰亡期
特点:细菌死亡速度大于新生成的速度、 整个群体出现负增长、细胞开始畸形、细 胞死亡出现自溶现象。
成因：主要是外界环境对继续生长越 来越不利、细胞的分解代谢大于合成代谢、 继而导致大量细菌死亡。
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盖好样品室盖，按0%键调零透射比。 取出挡光体，按100%键调100%透射比。
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2.样品测定
将参比溶液（未接种的LB液体培养基）以及 被测溶液倒入比色皿中。
打开样品室盖，将参比溶液放在样品架的第 一个槽位中，将被测溶液依次放入其它槽位 。
将参比溶液推入光路，按100%键调满度。
将测试方式调至吸光度方式。此时,显示器显 示“0.000”。
大肠杆菌生长曲线
实训材料：
1．菌种 大肠埃希菌（E.coli）1~18h液体培 养物。 2．培养基 营养肉汤培养基，生理盐水 3．其它：721型光电比色计、1ml无菌移液 管、摇床等。
原 理
• 细菌的生长一般指群体的生长，常常具有一定的规 律性。描述细菌在液体培养基中的生长规律的曲线 叫做生长曲线，即将一定量的细菌接种到一定容积 的液体培养基中，在适宜的条件下进行培养，以培 养时间为横坐标，以菌数的对数为纵坐标进行作图 得到的曲线。 • 典型的生长曲线可分为延迟期、对数生长期、稳定 期和衰亡期四个时期。
（6）吸光度的测定 将选择开关置于“A”，盖上试 样室盖子，将空白液置于光路中，调节吸光度调节 旋钮，使数字显示为“.000”。将盛有待测溶液的 比色皿放入比色皿座架中的其它格内，盖上试样室 盖，轻轻拉动试样架拉手，使待测溶液进入光路， 此时数字显示值即为该待测溶液的吸光度值。读数 后，打开试样室盖，切断光路。 • （7）关机 实验完毕，切断电源，将比色皿取出洗 净，并将比色皿座架用软纸擦净。
使用方法
（1）预热仪器 将选择开关置于“T”，按下“电源”开关。 （2）选定波长 根据实验要求，转动波长手轮，调至所需要的 单色波长。 （3）固定灵敏度挡 （4）调节T=0% 轻轻旋动零旋钮，使数字显示为“00.0”， （此时试样室是打开的）。 （5）调节T=100% 将盛蒸馏水（或空白溶液，或纯溶剂）的 比色皿放入比色皿座架中的第一格内
大肠杆菌生长曲线Байду номын сангаас定
实训目的
1．了解光电比浊计数法的原理。 2．了解细菌生长曲线的特点，绘制生长曲线。 3. 掌握光电比浊计数法测定大肠杆菌生长曲 线的方法。
752型分光光度计构造原理
• 752型分光光度计在构造原理上是由光源室、单 色器、试样室、光电管暗盒、电子系统及数字显 示器等部件组成。光源除了钨卤素灯外，还有氢 弧灯（或氘灯）。波长范围为200nm~850nm。 • 752型分光光度计能在紫外和可见光谱区域内对 样品物质作定性和定量分析 .
用比浊法测定大肠杆菌的生长曲线(共3页)
用比浊法测定大肠杆菌的生长(shēngzhǎng)曲线(一)实验(shíyàn)目的了解细菌生长曲线的持点及测定(cèdìng)原理，学会用比浊法测定细菌的生长曲线。
(二)实验(shíyàn)原理将一定数量的细菌，接种于适宜的液体培养基中，在适温下培养，定时取样测数，以菌数的对数为纵坐标，生长时间为横坐标，作出的曲线称为生长曲线。
该曲线表明细菌在一定的环境条件(tiáojiàn)下群体生长与繁殖的规律。
一般分为延缓期、对数期、稳定期及衰亡期四个时期，各时期的长短同菌种本身特征、培养基成分和培养条件不同而异。
比浊法是根据细菌悬液细胞数与混浊度成正比，与透光度成反比关系，利用光电比色计测定细胞悬液的光密度(即OD值)，用于表示该菌在本实验条件下的相对生长量。
实验设正常生长、加酸抑制和加富培养等三种处理，以了解细菌在不同生长条件下的生长情况。
（三）实验器材(1)活材料：大肠杆菌(E.coli)。
(2)培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨液体培养基14支(每支10mL)，浓缩5 倍的牛肉膏蛋白胨培养基1支。
无菌酸溶液(甲酸：乙酸：乳酸=3：1：1)。
(3)器材：1mL无菌吸管、摇床、冰箱、光电比色计、标签等。
（四）实验方法方法(1)1)接种(jiēzhòng)：取13支装有牛肉(niú ròu)膏蛋白胨培养液的试管，贴上标签(注明(zhù mínɡ)菌名、培养处理、培养时间、组号)。
按无菌操作法用吸管向每管准确(zhǔnquè)加入0.2mL的大肠杆菌培养液，接种(jiēzhòng)后，轻轻摇荡，使菌体混匀。
另一支不接种的培养管注明CK(对照)。
2)培养：将接种后的培养管置于摇床上，在37℃下振荡培养。
其中9支培养管分别于培养的0、1．5、3、4、6、8、10、12和14h后取山，放冰箱中贮存，待测定。
大肠杆菌检测ppt课件
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实验准备（2个样品/组）
培养皿：10套/组 无菌水：10支（9毫升/支） 乳糖胆盐发酵培养基： 100ml 18支试管、5ml/支 伊红美蓝琼脂培养基（EMB）:
200ml 8-10个平板
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下周实验
实验八 化学药剂对微生物生长的影响
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2
完整最新1版100课0 件
3
≥24000
10 30
30 70
40 100
40 70 150
70 140 300
150 300 350
360 710 1500
360 370
440 890
470 1500
1200 1300 3800
2100 2300 3800
3800 4400 4700
13000
24000
样品中大肠菌群系以100mL（g）检样内大 肠菌群最大可能数（MPN)表示。
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3
细菌学检验程序
细菌总数
水样稀释或不稀释
倾注平板培养 37 ℃ 24小时
样品
大肠菌群
水样稀释或不稀释
第一步------ 初步发酵试验 （乳糖发酵）
37℃ 24小时
菌落计数 （取平均数报告）
第二步------ 平板分离培养 （转种鉴别培养基） 37℃ 24小时 革兰染色镜检
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8
3.分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置 36℃±1℃温箱内，培养18h—24h，然后取出，观察菌 落形态并做革兰氏染色和证实试验。
4.证实试验
在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1—2个进行革兰 氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36℃±1℃的温箱内 培养24h±2h，观察产气情况。
09大肠杆菌生长曲线的测定
第九次课大肠杆菌生长曲线的测定（2学时）一、基本原理大多数细菌的繁殖速率很快，在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20min分裂一次．将一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个阶段。
以培养时间为横坐标，以细菌数日的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细菌的生长曲线。
不同的细菌在相同的培养条件下其生长曲线不同，同样的细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不相同。
测定细菌的生长曲线，了解其生长繁殖规律，这对人们根据不同的需要，有效地利用和控制细菌的生长具有重要意义。
本实验用分光光度计进行光电比浊测定不同培养时间细菌悬浮液的OD值，绘制生长曲线．也可以直接用试管或带有测定管的三角瓶测定“klett units”值的光度计。
只要接种1支试管或1个带测定管的三角瓶，在不同的培养时间(横坐标)取样测定，以测得的klett units为纵坐标，便可很方便地绘制出细菌的生长曲线。
如果需要，可根据公式1klett units=OD／0.002换算出所测菌悬液的OD值。
二、实验器材1．菌种大肠杆菌。
2．培养基LB液体培养基70m1，分装2支大试管(5ml／支)，剩余60ml装入250ml的三角瓶．3．仪器或其他用具722型分光光度计，水浴振荡摇床，无菌试管，无菌吸管等。
三、实验步骤1.标记取11支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h。
2．接种分别用5m1无菌吸管吸取2．5m1大肠杆菌过夜培养液(培养10—12h)转人盛有50m1 LB液的三角瓶内，混合均匀后分别取5m1混合液放人上述标记的11支无菌大试管中。
3．培养将已接种的试管置摇床37℃振荡培养(振荡频率250r／min)，分别培养0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，将标有相应时间的试管取出，立即放冰箱中贮存，最后一同比浊测定其光密度值。
9 吴旭杰 大肠杆菌生长曲线测定
大肠杆菌生长曲线测定一、实验简介大多数细菌的繁殖速度很快，在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20min分裂一次，将一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个阶段。
以培养时间为横坐标，以细菌数目的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制曲线称为该细菌的生长曲线。
不同的细菌在相同的培养条件下其生长曲线不同，同样的细菌在不同的培养条件下培养所绘制的生长曲线也不相同。
测定细菌的生长曲线，了解其生长繁殖规律，这对人们根据不同的需要，有效地利用和控制细菌的生长具有重要意义。
本实验用分光光度计进行光电比浊测定。
当光线通过微生物菌悬液时，由于菌体的散射及吸收作用使光线的透过率降低，在一定的范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比，与光密度成（OD值）正比。
因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘制出该菌在一定条件的生长曲线。
二、实验试剂与材料1、菌种：大肠杆菌2、培养基：LB培养基（蛋白胨10g、酵母膏5g、氯化钠10g、PH 7.0～7.2）70ml，分装2支大试管（5ml/支），剩余60ml装入250ml三角烧瓶中进行灭菌。
3、仪器及器具：分光光度计、比色杯、水浴恒温摇床、接种环、无菌吸管、三角瓶、无菌水、无菌操作台、酒精灯。
三、实验过程和步骤1、种子液制备：在无菌操作台上用灭菌的接种环以无菌操作挑取大肠杆菌菌种放入灭过菌的无菌三角烧瓶中，并用无菌水稀释50倍。
放在无菌条件下静置一段时间作种子悬液。
注：挑取菌落时必须对大肠杆菌菌落的形态特点进行深入了解以便挑取同一菌落菌种，从而避免对后面的比浊产生影响。
2、大肠杆菌形态学观察：取菌悬液将其涂布在1cm^2的载玻片的面积上自然烘干，然后进行革兰氏染色（涂片—晾干—固定—结晶紫染色—水洗—媒染—水洗—脱色—复染—水洗—晒干—镜检），对其进行形态学观察。
实验十二、 大肠杆菌生长曲线的制作
二、实验原理
生长曲线
将少量纯种单细胞微生物接种到定量的 液体培养基中，定时取样测定细胞数量， 以培养时间为横坐标，以菌数为纵坐标作 图，得到一条反映单细胞微生物在整个培 养期间菌数变化规律的曲线。 一个典型的生长曲线分为延迟期、对数期、 稳定期和衰亡期四个时期
微生物生长曲线示意图
1、延迟期 特点：生长速率常为零、菌体粗大、 RNA含量增加、代谢活力强、对不良环境 的抵抗能力下降。 成因：微生物刚刚接种到培养基之上 ，其代谢系统需要适应新的环境，同时要 合成酶、辅酶、其他代谢中间代谢产物等 ，所以此时期的细胞数目没有增加。
五、作业
1、结果 P88 记录不同大肠杆菌培养液的OD600值，并绘制 大肠杆菌的生长曲线。
2、思考题 第1题
微生物数量的测定方法 平板菌落计数法 显微镜直接计数法 光电比浊法
平板菌落计数法 对样品稀释培养，据形成的菌落数计数。
优点：活菌计数方法，对设备要求不高。 缺点：操作复杂。 显微镜直接计数法 使用血球计数板在显微镜下直接计数。 优点：操作简便，计数直观。 缺点：计数结果为活细菌和死菌体的总和。
光合细菌菌株NS的生 长曲线
三、实验器材 菌种 培养不同时段的大肠杆菌。 仪器或其他开电源，仪器预热20 min，将波长调至600 nm处。 打开样品室，将挡光体插入比色皿架，将 其推或拉入光路。 盖好样品室盖，按0%键调零透射比。 取出挡光体，按100%键调100%透射比。
光电比浊法 光电比浊法是利用在一定的范围内，微生物细 胞浓度与透光度成反比的原理。当细菌细胞在 溶液中数量越多，浊度越大，在光电比色计中 测定时所吸收的光线越多。
优点：简便快速，适合于自动控制。 缺点：测定结果受培养液成分影响；某些样品 样品不适合用此法。
实验十二、 大肠杆菌生长曲线的制作
微生物生长曲线示意图
1、延迟期 特点：生长速率常为零、菌体粗大、 RNA含量增加、代谢活力强、对不良环境 的抵抗能力下降。 成因：微生物刚刚接种到培养基之上 ，其代谢系统需要适应新的环境，同时要 合成酶、辅酶、其他代谢中间代谢产物等 ，所以此时期的细胞数目没有增加。
2、对数期 特点：生长速率最快、代谢旺盛、酶系 活跃、活细菌数和总细菌数大致接近、细胞 的化学组成形态理化性质基本一致。 成因:经过调整期的准备，为此时期的微 生物生长提供了足够的物质基础，同时外界 环境也是最佳状态。
3、稳定期
特点：活细菌数保持相对稳定、总细菌数 达到最高水平、细胞代谢产物积累达到最高峰 、是生产的收获期。 成因：营养的消耗使营养物比例失调、有 害代谢产物积累、PH值等理化条件不适宜。
4、衰亡期 特点:细菌死亡速度大于新生成的速度、 整个群体出现负增长、细胞开始畸形、细 胞死亡出现自溶现象。 成因：主要是外界环境对继续生长越 来越不利、细胞的分解代谢大于合成代谢、 继而导致大量细菌死亡。
五、作业
1、结果 P88 记录不同大肠杆菌培养液的OD600值，并绘制 大肠杆菌的生长曲线。
2、思考题 第1题
在600 nm波长下，用未接种的LB液体培养 基作空白对照，分别对培养了0、4、8、12、 16和20 h的大肠杆菌培养液，进行光电比浊测 定。对于高浓度的大肠杆菌培养液,要用未接 种的LB培养基进行稀释，使其吸光值在0.10.65范围内。 比色皿经蒸馏水清洗后，必须经待测样品 润洗。比色皿的毛面用吸水纸擦干，而光面 只能用吸水纸吸干，以免光面被划破。 比色皿之间吸光度进行比较。
微生物数量的测定方法 平板菌落计数法 显微镜直接计数法 光电比浊法
平板菌落计数法 对样品稀释培养，据形成的菌落数计数。
《大肠杆菌》课件
THANKS
感谢观看
。
食物中毒通常发生在食用被污染 的肉类、奶制品、蔬菜等食品后 ，因此食品生产和加工过程中的
卫生控制至关重要。
抗生素抗性与超级细菌
抗生素是治疗细菌感染的重要药物，但长期使用抗生素会导致细菌产生抗药性。
大肠杆菌等细菌在长期接触抗生素的过程中，会逐渐适应并抵抗抗生素的作用，形 成超级细菌。
超级细菌对多种抗生素具有抗药性，给治疗带来了极大的困难，也对全球公共卫生 安全构成了严重威胁。
致病性或提高其生物合成能力，为工业生产和医疗应入探究大肠杆菌的致病机制，为开发更有效的抗 菌药物和治疗方法提供理论支持。
加强跨学科合作
加强生物学、化学、物理学等领域的跨学科合作，利用新 技术和新方法，推动大肠杆菌研究的创新发展。
提高应用价值
将大肠杆菌的研究成果应用于实际生产和医疗实践中，提 高其应用价值和社会效益。同时，需要关注伦理和安全问 题，确保研究工作的合规性和可持续性。
致病性大肠杆菌的传播途径多样，包 括动物-人传播、人-人传播和食物-人 传播。
这些致病性大肠杆菌通过食物、水或 接触污染表面进入人体，导致腹泻、 呕吐、腹痛等症状，严重时甚至会导 致休克和死亡。
食物中毒与感染
食物中毒是指食用了被致病性大 肠杆菌污染的食物而引起的急性
中毒性疾病。
感染后可能出现恶心、呕吐、腹 痛、腹泻、发热等症状，严重时 可导致脱水、电解质紊乱和休克
05
大肠杆菌的研究进展
新技术与新方法
基因组学技术
利用新一代测序技术，对大肠杆 菌基因组进行全面解析，发现新 的基因和基因变异，为研究其生 物学特性和致病机制提供基础。
蛋白质组学技术
通过蛋白质组学方法，研究大肠杆 菌的蛋白质表达和功能，揭示其在 不同环境下的适应机制和调控机制 。
大肠杆菌生长曲线的测定
授课教师: 孙运军 研 究 生: 何浩 张晨
黄同龙 左明星
实用文档
目的要求
1、通过光密度值的测量了解大肠杆菌的生 长规律，绘制生长曲线。
2、了解光电比浊法测量细菌数量的原理。
实用文档
基本原理
将一定量的细菌接种到恒容积的液体培养基 中，在适宜的培养条件下，该群体就会有规律的 增长。以培养时间为横坐标，以细胞数目的对数 或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细 菌的生长曲线。该曲线包括四个阶段：延滞期、 指数期、稳定期、衰亡期。
实F用e文S档O光4溶吸液收在曲6线50nm的
大肠杆菌悬浮液的光吸收规律：
实验表明，OD600在0.1~ 0.65之内的大肠杆菌悬浮液基本符合朗 伯－比耳定律，即吸光度与菌液浓度成正比。
大肠杆菌梯度稀释液的 实用文档 光吸收曲线
器材
1、菌 种：大肠杆菌。 2、培养基：LB液体培养基。 3、仪器与耗材：722型分光光度计、恒温摇
实用文档
实用文档
实用文档
本实验采用分光光度计进行光电比浊测 定不同培养时间细菌悬浮液的光密度值， 绘制生长曲线。
实用文档
光吸收的基本定律：朗伯－比耳定律 A=kbc (k为摩尔吸光系数，b为液层厚度，c为溶液浓度)
朗伯－比耳定律的意义是：当一束平行单色光通过均匀、非散 射的溶液时，其吸光度与溶液浓度和液层厚度的乘积成正比。
4、将已接种的试管置摇床37℃振荡培养(200 rpm)，在相应时间 取出试管放于冰箱中，最后一同测定OD600值。
5、进行光密度测定时，以未接种的LB液体培养基为空白对照， 从早取出的培养液开始依次测定，细胞密度大的培养液用LB 液体培养基稀释后测定，使OD600值在0.1~ 0.65之内。
大肠杆菌生长曲线的测定
细菌的生长曲线。不同的细菌在相同的培养条件下其
生长曲线不同，同样的细菌在不同的培养条件下所绘 制的生长曲线也不相同。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数法、
平板菌落计数法、称重法、比浊法等。本实验采用比
浊法测定，由于细菌悬浮液的浓度与混浊度成正比， 因此，可利用光电比色计测定菌悬液的光密度来推知 菌液的浓度，并将所得的光密度值（OD值）与其对应 的培养时间作图，即可绘出该菌再一定条件下的生录所测定的OD420值数据。 2、以OD420值为纵坐标，培养时间为横坐标，
绘出大肠杆菌生长曲线。
大肠杆菌生长曲线的测定
一、实验目的要求
（1）了解细菌生长曲线特点和繁殖规律，并学会绘 制生长曲线。
（2）学习用比浊法测定大肠杆菌的生长曲线
二、实验原理
将一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜 的条件下培养细胞要经历延迟期、对数期、稳定期和
衰亡期四个阶段。以培养时间为横坐标，以细菌数目
的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该
三、实验仪器及材料
恒温培养箱、超净工作台、721分光光度计、牛肉膏 蛋白胨培养液、大肠杆菌菌种
四、实验方法步骤 1、预先将大肠杆菌接种到牛肉膏蛋白胨培养液中，37℃振荡
培养18h备用。
2、取7支装有灭菌牛肉膏蛋白胨液体培养基的试管，编号0、
2、4、6、8、10、CK，分别接入培养18h的大肠杆菌液体培养 液300ul，37℃振荡培养。 3、分别于接种后的0、2、4、6、8、10h，取对应编号的试管， 取培养液在分光光度计上测定并记录420nm处的OD值。 若菌液太浓，可做适当稀释，使OD值在0.0-0.4之间较好。 经稀释后测得OD420值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的 OD420值。
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黄同龙 左明星
目的要求
1、通过光密度值的测量了解大肠杆菌的生 长规律，绘制生长曲线。
2、了解光电比浊法测量细菌数量的原理。
基本原理
将一定量的细菌接种到恒容积的液体培养基 中，在适宜的培养条件下，该群体就会有规律的 增长。以培养时间为横坐标，以细胞数目的对数 或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细 菌的生长曲线。该曲线包括四个阶段：延滞期、 指数期、稳定期、衰亡期。
3、用5 ml无菌吸管取2.5 ml大肠杆菌培养液(培养12h)转入装有 LB液体培养基的三角瓶内，混匀后分别取5ml混合液放 入上述标记的11支无菌大试管中。
4、将已接种的试管置摇床37℃振荡培养(200 rpm)，在相应时间 取出试管放于冰箱中，最后一同测定OD600值。
5、进行光密度测定时，以未接种的LB液体培养基为空白对照， 从早取出的培养液开始依次测定，细胞密度大的培养液用LB 液体培养基稀释后测定，使OD600值在0.1~ 0.65之内。
床、无菌试管、无菌吸管。
大家应该也有点累了，稍作休息 大家有疑问的，可以询
10
操作步骤
1、配制LB液体培养基100 ml，分装1支试管(5 ml/支)，剩余培养 基装入250 ml的三角瓶，121℃灭菌20min。
2、取11支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即0、1.5、 3、4、6、8、10、12、14、16和20 h。
本实验采用分光光度计进行光电比浊 测定不同培养时间细菌悬浮液的光密度值， 绘制生长曲线。
光吸收的基本定律：朗伯－比耳定律 A=kbc (k为摩尔吸光系数，b为液层厚度，c为溶液浓度)
朗伯－比耳定律的意义是：当一束平行单色光通过均匀、非散 射的溶液时，其吸光度与溶液浓度和液层厚度的乘积成正比。
实验结果
1、将测定的OD600值填入下表：
2、绘制大肠杆菌的生长曲线：
OD600值
培养时间/h
LB液体培养基配方：100ml
酵母提取物(Yeast extract): 0.5g 蛋白胨(Tryptone)：1g 氯化钠(Nacl)： 1g
Thanks for your attention！
不同培养时间的菌液
OD600 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20
2.5 2
1.5 1
0.5 0
培养时间
OD600 OD600校正
注意事项：
• 选用规格一致的试管； • 每支试管的装液量应相同(5 ml/支)； • 混匀的菌悬液加入到比色皿后应迅速读取OD值； • 保护比色皿透光面不受磨损，不要用手指直接接触； • 分光光度计在未测样品时应及时打开盖。
FeSO4溶液在650nm的 光吸收曲线
大肠杆菌悬浮液的光吸收规律：
实验表明，OD600在0.1~ 0.65之内的大肠杆菌悬浮液基本符合朗 伯－比耳定律，即吸光度与菌液浓度成正比。
大肠杆菌梯度稀释液的 光吸收曲线
器材
1、菌 种：大肠杆菌。 2、培养基：LB液体培养基。 3、仪器与耗材：722型分光光度计、恒温摇