实验动物微生物控制
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医学实验动物学
第二章 实验动物质量控制
目录
遗传控制标准化
微生物控制标准化
实验动物环境和设施
营养控制标准化
第二节 微生物控制标准化
东北农业大学28名师生感染布鲁氏菌病
2010年12月19日下午，“羊活体解剖学实验”；
2011年1月，王永杰连续高烧很多天了。由于是冬天，感冒发烧也
属正常，所以他没有警觉。经过吃药、打针等治疗后，他终于有些好 转，却总觉得不是那么舒服。 2011年3月开学，发现症状一样的同学有好几个。“开学时，一位 姓王的同学被其母亲背到了学校，他因为关节疼痛已无法行走。” 最终查出，共5个班级28人被感染布鲁氏菌病，其中包括27名学生、 1名老师。 “布鲁氏菌病还属于《职业病范围和职业病患者处理办法》规定的 乙类职业病。我们查过法律法规，许多行业对布鲁氏菌病患者都有 着严格的限制。 原因：1、使用未经检疫的动物； 2、未切实按照标准的实验规范执行。
血清学检查 适用于各级各类实验动物的经常性 检查和疫情普查 适用于动物群中有疾病流行，需要 检出病毒或确诊病毒存在
病原菌检查
第二节 微生物控制标准化
细菌学：病原百度文库的分离与培养
部分病原菌，已有血清学检查的报道，但建议结合分离培 养结果最后做出诊断，如鼠伤寒沙门氏菌等； 有时需要结合病理检查结果最后做出诊断，如泰泽氏菌
第二节 微生物控制标准化
无特定病原体级动物 ,SPF specific pathogen free animal
定义：除清洁级动物应排除的病原外，不携带主 要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病 原的实验动物。
标准的实验动物
必须来源无菌动物或悉生动物
常用SPF级动物：大鼠、小鼠
布鲁杆 菌
第二节 微生物控制标准化
清洁级动物 clean animal,CL
定义：除普通级动物应排除的病原外，不携带对 动物危害大和对科学研究干扰大的病原的实验动 物。 根据我国国情自行设定的等级动物。
必须来源于SPF动物或无菌动物，饲养在半屏障系统中。
一般针对小动物而言，如大鼠、小鼠、地鼠、豚鼠、兔等。
第二节 微生物控制标准化
普通级动物 conventional animal,CV
定义：不携带规定的人兽共患疾病原和动物烈性 传染病病原的实验动物。
常用普通级动物：豚鼠、地鼠、兔、犬、猪、猴
第二节 微生物控制标准化
人兽共患传染病 流 行 性 出 血 热 淋 巴 细 胞 脉 络 丛 脑 膜 炎 狂 犬 病 B 病 毒 猴 逆 转 录 病 毒 弓 形 体 钩 端 螺 旋 体 结 核 病 动物烈性传染病 鼠 痘 小 鼠 肝 炎 仙 台 病 毒 兔 出 血 热
8 83 832 8320 83200 832000 8320000
29 293 2930 29300 293000
国家标准GB50073-2001
第二节 微生物控制标准化
微生物质量监测 （一）监测方法：
病毒学：
细菌学：
真菌学：
寄生虫学：
第二节 微生物控制标准化
病毒学常用监测方法：血清学检查和病原菌检查
感染部位组织压片、切片检查
第二节 微生物控制标准化
微生物质量监测 （二）接种与治疗：
通常接种限于大动物，如犬、猴等。 治疗可能会干扰实验结果。 对于某些种属动物，存在种属特异性。比如豚鼠、兔， 抗生素会干扰正常肠道菌群而导致严重的肠道疾病。 仙台病毒、流行性出血热等烈性传染性感染，必须要处 死并彻底消毒。
第二节 微生物控制标准化
无菌级动物 germ free animal,GF
定义：无可检出的一切生命体的实验动物。
同属四级动物的还有：悉生动物，将无菌动物体内植入 已知微生物的实验动物；根据植入的菌种数，可将其分 为单菌、双菌、三菌和多菌动物。 通过子宫切术术、剖腹产术、胚胎移植等方式获得。但 偶尔会发现有微生物存在，为经过胎盘传播或通过其他
第二节 微生物控制标准化
︻ 管 理 现 状 ︼
The end,thank you!
第二节 微生物控制标准化
真菌学：分离培养法
结合菌落特点和镜下染色检查可进行种属鉴定，有时还需
借助于生化反应结果和免疫学方法进行，最终做出诊断。
第二节 微生物控制标准化
寄生虫学：
体外寄生虫（节肢动物）：
肉眼观察、透明胶纸
肠道寄生虫：
采集动物粪便，肉眼观察
血液寄生虫
采血，镜检
组织内寄生虫
3. 人兽共患病 4. 影响生物制品的质量
第二节 微生物控制标准化
污染源和传播途径
1. 实验动物 2. 生物材料 3. 宠物
4. 工作人员
5. 材料和设备
第二节 微生物控制标准化
微生物学分类
第二节 微生物控制标准化
微生物学分类 ——按照国标 GB14922.2-2011
《实验动物 微生物学等级及检测》 1. 普通级动物 2. 清洁级动物 3. 无特定病原体级动物 4. 无菌级动物
隔离器
屏障系统
第二节 微生物控制标准化
洁净度 （ cleanliness ）：洁净环境内单位体积空 气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计 数 大于或等于表中粒径的最大浓度限值(pc/m3)
空气洁净度等级(N) 1 2 3 4（十级） 5（百级） 6（千级） 7（万级） 8（十万级） 9（百万级） 0.5μ m 4 35 352 3520 35200 352000 3520000 35200000 1μ m 5μ m
途径（垂直感染）在妊娠中传给子代。
原籍菌群丢失，表现出多样的形态学和生理学“异常”。 如盲肠明显增大，肠壁更薄弱。
第二节 微生物控制标准化
实验动物微生物等级与饲养设施要求
微生物等级
普通级动物 清洁级动物 SPF动物 无菌动物、悉生动物
饲养设施
开放系统 半屏障系统（净化级别十万级） 屏障系统（净化级别万级） 隔离器
第二节 微生物控制标准化
进行微生物控制的原因
1. 引起实验动物的疾病和死亡 2. 干扰实验结果
如：仙台病毒感染 小鼠肝炎病毒感染 转氨酶ALT等肝酶 。 B、T淋巴细胞对抗原反应减弱，增加干扰 网状内皮系统的吞噬细胞活性、淋巴细胞 素产量，减少血清第三补体因子（C3）水平； 的细胞毒活性被抑制，诱导血清天冬氨酸转氨酶AST、丙氨酸
第二章 实验动物质量控制
目录
遗传控制标准化
微生物控制标准化
实验动物环境和设施
营养控制标准化
第二节 微生物控制标准化
东北农业大学28名师生感染布鲁氏菌病
2010年12月19日下午，“羊活体解剖学实验”；
2011年1月，王永杰连续高烧很多天了。由于是冬天，感冒发烧也
属正常，所以他没有警觉。经过吃药、打针等治疗后，他终于有些好 转，却总觉得不是那么舒服。 2011年3月开学，发现症状一样的同学有好几个。“开学时，一位 姓王的同学被其母亲背到了学校，他因为关节疼痛已无法行走。” 最终查出，共5个班级28人被感染布鲁氏菌病，其中包括27名学生、 1名老师。 “布鲁氏菌病还属于《职业病范围和职业病患者处理办法》规定的 乙类职业病。我们查过法律法规，许多行业对布鲁氏菌病患者都有 着严格的限制。 原因：1、使用未经检疫的动物； 2、未切实按照标准的实验规范执行。
血清学检查 适用于各级各类实验动物的经常性 检查和疫情普查 适用于动物群中有疾病流行，需要 检出病毒或确诊病毒存在
病原菌检查
第二节 微生物控制标准化
细菌学：病原百度文库的分离与培养
部分病原菌，已有血清学检查的报道，但建议结合分离培 养结果最后做出诊断，如鼠伤寒沙门氏菌等； 有时需要结合病理检查结果最后做出诊断，如泰泽氏菌
第二节 微生物控制标准化
无特定病原体级动物 ,SPF specific pathogen free animal
定义：除清洁级动物应排除的病原外，不携带主 要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病 原的实验动物。
标准的实验动物
必须来源无菌动物或悉生动物
常用SPF级动物：大鼠、小鼠
布鲁杆 菌
第二节 微生物控制标准化
清洁级动物 clean animal,CL
定义：除普通级动物应排除的病原外，不携带对 动物危害大和对科学研究干扰大的病原的实验动 物。 根据我国国情自行设定的等级动物。
必须来源于SPF动物或无菌动物，饲养在半屏障系统中。
一般针对小动物而言，如大鼠、小鼠、地鼠、豚鼠、兔等。
第二节 微生物控制标准化
普通级动物 conventional animal,CV
定义：不携带规定的人兽共患疾病原和动物烈性 传染病病原的实验动物。
常用普通级动物：豚鼠、地鼠、兔、犬、猪、猴
第二节 微生物控制标准化
人兽共患传染病 流 行 性 出 血 热 淋 巴 细 胞 脉 络 丛 脑 膜 炎 狂 犬 病 B 病 毒 猴 逆 转 录 病 毒 弓 形 体 钩 端 螺 旋 体 结 核 病 动物烈性传染病 鼠 痘 小 鼠 肝 炎 仙 台 病 毒 兔 出 血 热
8 83 832 8320 83200 832000 8320000
29 293 2930 29300 293000
国家标准GB50073-2001
第二节 微生物控制标准化
微生物质量监测 （一）监测方法：
病毒学：
细菌学：
真菌学：
寄生虫学：
第二节 微生物控制标准化
病毒学常用监测方法：血清学检查和病原菌检查
感染部位组织压片、切片检查
第二节 微生物控制标准化
微生物质量监测 （二）接种与治疗：
通常接种限于大动物，如犬、猴等。 治疗可能会干扰实验结果。 对于某些种属动物，存在种属特异性。比如豚鼠、兔， 抗生素会干扰正常肠道菌群而导致严重的肠道疾病。 仙台病毒、流行性出血热等烈性传染性感染，必须要处 死并彻底消毒。
第二节 微生物控制标准化
无菌级动物 germ free animal,GF
定义：无可检出的一切生命体的实验动物。
同属四级动物的还有：悉生动物，将无菌动物体内植入 已知微生物的实验动物；根据植入的菌种数，可将其分 为单菌、双菌、三菌和多菌动物。 通过子宫切术术、剖腹产术、胚胎移植等方式获得。但 偶尔会发现有微生物存在，为经过胎盘传播或通过其他
第二节 微生物控制标准化
︻ 管 理 现 状 ︼
The end,thank you!
第二节 微生物控制标准化
真菌学：分离培养法
结合菌落特点和镜下染色检查可进行种属鉴定，有时还需
借助于生化反应结果和免疫学方法进行，最终做出诊断。
第二节 微生物控制标准化
寄生虫学：
体外寄生虫（节肢动物）：
肉眼观察、透明胶纸
肠道寄生虫：
采集动物粪便，肉眼观察
血液寄生虫
采血，镜检
组织内寄生虫
3. 人兽共患病 4. 影响生物制品的质量
第二节 微生物控制标准化
污染源和传播途径
1. 实验动物 2. 生物材料 3. 宠物
4. 工作人员
5. 材料和设备
第二节 微生物控制标准化
微生物学分类
第二节 微生物控制标准化
微生物学分类 ——按照国标 GB14922.2-2011
《实验动物 微生物学等级及检测》 1. 普通级动物 2. 清洁级动物 3. 无特定病原体级动物 4. 无菌级动物
隔离器
屏障系统
第二节 微生物控制标准化
洁净度 （ cleanliness ）：洁净环境内单位体积空 气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计 数 大于或等于表中粒径的最大浓度限值(pc/m3)
空气洁净度等级(N) 1 2 3 4（十级） 5（百级） 6（千级） 7（万级） 8（十万级） 9（百万级） 0.5μ m 4 35 352 3520 35200 352000 3520000 35200000 1μ m 5μ m
途径（垂直感染）在妊娠中传给子代。
原籍菌群丢失，表现出多样的形态学和生理学“异常”。 如盲肠明显增大，肠壁更薄弱。
第二节 微生物控制标准化
实验动物微生物等级与饲养设施要求
微生物等级
普通级动物 清洁级动物 SPF动物 无菌动物、悉生动物
饲养设施
开放系统 半屏障系统（净化级别十万级） 屏障系统（净化级别万级） 隔离器
第二节 微生物控制标准化
进行微生物控制的原因
1. 引起实验动物的疾病和死亡 2. 干扰实验结果
如：仙台病毒感染 小鼠肝炎病毒感染 转氨酶ALT等肝酶 。 B、T淋巴细胞对抗原反应减弱，增加干扰 网状内皮系统的吞噬细胞活性、淋巴细胞 素产量，减少血清第三补体因子（C3）水平； 的细胞毒活性被抑制，诱导血清天冬氨酸转氨酶AST、丙氨酸