实验动物微生物国家标准资料
No4第四章实验动物微生物控制
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第四章 实验动物微生物及寄生虫控制
Zhang Bing
4、悉生动物及应用
又称已知菌动物（Animal with Bacteric Flora ）
特点 ：悉生动物和无菌动物一样，实验结果排除了动 物体内不明确的微生物对实验结果的干扰 用途
单一微生物与机体的互相关系
观察多种微生物之间及其与机体之间的互相关系和菌群 失调现象
动物饲养和实验设施要符合最基本的要求
动物仅供作教学、或预备实验时使用。
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第四章 实验动物微生物及寄生虫控制
Zhang Bing
（二）清洁级动物(clean animal CL
除普通动物应排除的病原体外，不携带对动物危害大
和对科学研究干扰大的病原。
如：清洁级小鼠 排除8种细菌、5种病毒、7种寄生虫; 清洁级大鼠
悉生动物:(gnotobiotic animal GN)
在无菌动物中人为地植入已知的一种或数种微生 物的动物被称为悉生动物。
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第四章 实验动物微生物及寄生虫控制
DB11T 828.1-2011 实验用小型猪 第1部分：微生物学等级及监测
ICS65.020.30B 44备案号：DB11 北京市地方标准DB11/T 828.1—2011实验用小型猪第1部分：微生物学等级及监测Experimental minipigPart 1：Microbiological standards and surveillance2011-11-10发布2012-03-01实施目次前言 (II)1 范围 (1)2 规范性引用文件 (1)3 术语和定义 (2)4 微生物学等级分类 (2)5 检测要求 (2)6 检测程序 (3)7 检测方法 (4)8 检测规则 (5)9 结果判定 (6)10 判定结论 (6)附录A（资料性附录）猪圆环病毒2型ELISA抗体检测 (7)前言DB11/T 828的本部分按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。
DB11/T 828《实验用小型猪》分为六个部分：——第1部分：微生物学等级及监测；——第2部分：寄生虫学等级及监测；——第3部分：遗传质量控制；——第4部分：病理学诊断规范；——第5部分：配合饲料；——第6部分：环境及设施。
本部分为DB11/T 828的第1部分。
本部分由北京市科学技术委员会提出并归口。
本部分由北京市科学技术委员会组织实施。
本部分起草单位：中国食品药品检定研究院、中国动物疫病预防控制中心、中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心、北京实验动物研究中心。
本部分主要起草人：贺争鸣、田克恭、范薇、巩薇、遇秀玲、付瑞、卢胜明。
实验用小型猪第1部分：微生物学等级及监测1 范围DB11/T 828的本部分规定了实验用小型猪微生物学等级分类、检测要求、检测程序、检测方法、检测规则、结果判定、判定结论等。
本部分适用于实验用小型猪微生物学等级监测。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
DB11!T~1459.1-2017实验动物微生物学等级及监测第1部分：实验用猪
DB11!T~1459.1-2017实验动物微⽣物学等级及监测第1部分：实验⽤猪ICS65.020.30B 44 DB11 北京市地⽅标准DB11/T 1459.1—2017实验动物微⽣物学等级及监测第1部分：实验⽤猪Laboratory animal－Microbiological standards and monitoringPart 1: Experimental pig2017-09-14发布2018-01-01实施⽬次前⾔ (II)1 范围 (1)2 规范性引⽤⽂件 (1)3 术语与定义 (2)4 微⽣物学等级分类 (2)5 检测要求 (2)6 检测程序 (3)7 检测⽅法 (4)8 检测规则 (6)9 检测判定 (6)10 判定结论 (6)11 报告 (7)前⾔DB11/T ××××《实验动物微⽣物学等级及监测》拟分为以下部分：——第1部分：实验⽤猪；——第2部分：实验⽤⽜；——第3部分：实验⽤⽺；……本部分为DB11/T ××××的第1部分。
本部分按照GB/T 1.1－2009给出的规则起草。
本部分由北京市科学技术委员会提出并归⼝。
本部分由北京市科学技术委员会组织实施。
本部分主要起草⼈：康凯、姚⽂⽣、范学政、印春⽣、吴思捷、任⼩侠、刘莹、王锡乐、刘⽂菊。
实验动物微⽣物学等级及监测第1部分：实验⽤猪1 范围本部分规定了实验⽤猪微⽣物学等级分类、检测要求、检测程序、检测⽅法、检测规则、结果判定、判定结论和报告等。
本部分适⽤于实验⽤猪微⽣物学等级监测。
2 规范性引⽤⽂件下列⽂件对于本⽂件的应⽤是必不可少的。
凡是注⽇期的引⽤⽂件，仅所注⽇期的版本适⽤于本⽂件。
凡是不注⽇期的引⽤⽂件，其最新版本（包括所有的修改单）适⽤于本⽂件。
GB/T 14926.46 实验动物钩端螺旋体检测⽅法GB/T 16551 猪瘟诊断技术GB/T 18090 猪繁殖与呼吸综合征诊断⽅法GB/T 18638 流⾏性⼄型脑炎病毒诊断技术GB/T 18641 伪狂⽝病诊断技术GB/T 18646 动物布鲁⽒菌病诊断技术GB/T 18935 ⼝蹄疫诊断技术GB/T 19915.1 猪链球菌2型平板和试管凝集试验操作规程GB/T 19915.2 猪链球菌2型分离鉴定操作规程GB/T 19915.3 猪链球菌2型PCR定型检测技术GB/T 19915.7 猪链球菌2型荧光PCR检测⽅法GB/T 21674 猪圆环病毒聚合酶链反应试验⽅法GB/T 22333 ⽇本⼄型脑炎病毒反转录聚合酶链反应试验⽅法GB/T 22915 ⼝蹄疫病毒荧光RT-PCR检测⽅法GB/T 27517 鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒⾼致病性与经典毒株复合RT-PCR⽅法GB/T 27528 ⼝蹄疫病毒实时荧光RT-PCR检测⽅法GB/T 27540 猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测⽅法NY/T 537 猪放线杆菌胸膜肺炎诊断技术NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范NY/T 544 猪流⾏性腹泻诊断技术NY/T 545 猪痢疾诊断技术NY/T 546 猪萎缩性⿐炎诊断技术NY/T 548 猪传染性胃肠炎诊断技术NY/T 564 猪巴⽒杆菌病诊断技术NY/T 566 猪丹毒诊断技术NY/T 1186 猪⽀原体肺炎诊断技术SN/T 1207 猪痢疾检疫技术规范SN/T 1447 猪传染性胸膜肺炎检疫技术规范SN/T 1874 猪细⼩病毒病聚合酶链反应操作规程SN/T 1919 猪细⼩病毒病红细胞凝集抑制试验操作规程DB11/T 828.1 实验⽤⼩型猪第1部分：微⽣物学等级及监测3 术语与定义下列术语和定义适⽤于本⽂件。
现行的实验动物国家标准列表1
GB/T 14926.25-2001 实验动物 呼肠孤病毒Ⅲ型 检测方法 现行 2002-05-01实施,代替GB/T 14926.25-1994 GB/T 14926.26-2001 实验动物 小鼠脑脊髓炎病 毒检测方法 现行 2002-05-01实施,代替GB/T 14926.26-1994 GB/T 14926.27-2001 实验动物 小鼠腺病毒检测 方法 现行 2002-05-01实施,代替GB/T 14926.27-1994
现行 2002-05-01实施,代替GB/T 14926.41-1994 GB/T 14926.18-2001 实验动物 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒
检测方法
现行 2002-05-01实施,代替GB/T 14926.18-1994 GB/T 14926.19-2001 实验动物 汉坦病毒检测方法 现行 2002-05-01实施,代替GB/T 14926.19-1994 GB/T 14926.20-2001 实验动物 鼠痘病毒检测方法
GB/T 14926.28-2001 实验动物 小鼠细小病毒检 测方法 现行 2002-05-01实施,代替GB/T 14926.28-1994 GB/T 14926.29-2001 实验动物 多瘤病毒检测方 法 现行 2002-05-01实施,代替GB/T 14926.291994 GB/T 14926.30-2001 实验动物 兔轮状病毒检测 方法 现行 2002-05-01实施,代替GB/T 14926.30-1994
GB 14924.1-2001 实验动物 配合饲料通用质量 标准 现行 2002-05-01实施,代替GB 149241994 GB 14924.2-2001 实验动物 配合饲料卫生标准 现 GB 14924.3-2010 实验动物 配合饲料营养成分 现行 2011-10-01实施行 2002-05-01实施,代 替GB 14924-1994
实验动物的微生物学及寄生虫学控制
第四节 清洁动物（Clean animal，简称CL动物）
定义：除普通动物应排除的病原外，不携带对动物危害大和 对科学研究干扰大的病原。
饲养条件：屏障系统大规模生产 来源：SPF动物扩群 应用：各种科研、教学用大小鼠
清洁级动物特点：
1、微生物特点 清洁级动物比普通级动物要求排除的微生
物和寄生虫多，但比SPF动物少。清洁级动 物除肉眼观察无病外，尸体解剖时，主要 脏器、组织无论是肉眼观看还是病理组织 切片均应无病变。
(1)盲肠肥大，比普通动物要大5-6倍。 (2)肠道肌层薄，肠绒毛变细变短。 (3)肝脏重量下降。
无菌动物特点
• 循环系统
(1)心脏变小 (2)白细胞数变少，且数量波动范围小
• 免疫系统 免疫机能基本处于原始状态。
(1)胸腺，淋巴组织，网状内皮系统发育不良
(2)脾脏小，无二级滤泡，网状内皮细胞功能下降
• 3、免疫学研究中的应用
无菌动物体内既无抗原也无特异性抗体，处于 一种“原始状态”，很适合用于各种免疫功能 的研究。 如，无菌动物暴露于微生物，先产生α球蛋白，
再产生β球蛋白，最后产生γ球蛋白。
常用无菌动物进行免疫抑制剂试验研究。
4、肿瘤学研究 （1）制备人体肿瘤模型需要免疫抑制
动物，而普通动物给予免疫抑制剂后常 继发感染死亡，所以可以应用无菌动物。
SPF动物 屏障系统 确知不带有的微生物
清洁动物 屏障系统 确知不带有的微生物
普通动物 开放系统 微生物情况不明确
二、对科染病 无
无
无 未知
寄生虫 无
无
无 未知
试验结果 明确 明确 明确 有疑问
用动物数 少 少
较少 多或大量
统计价值 很好 可能好 较好 不准确
实验动物的微生物学、寄生虫学的检验检疫
实验动物的微生物学、寄生虫学的检验检疫一、实验动物的微生物学、寄生虫学质量控制分类根据国家标准GB14922.1和GB14922.2，我国实验动物按微生物和寄生虫学控制分类，分为四个等级，即：①普通级动物（Conventional Animal, CV）；②清洁级动物（Clean Animal, CL）；③无特定病原体级动物（Specific Pathogen Free Animal, SPF）；④无菌级动物（Germ Free Animal, GF）。
现行标准中，大小鼠无普通级，犬、猴无清洁级及无菌级。
二、实验动物的微生物学、寄生虫学质量监测如何控制微生物和寄生虫，是实验动物标准化的主要内容之一。
一般而言，实验动物中，其微生物学和寄生虫学的控制等级越高、不确定因素和干扰因素越少，其实验结果就越准确、越可靠。
（一）监测意义1. 保证实验研究的顺利进行和工作人员的身体健康在人工饲养环境中实验动物被集中饲养，由于活动空间相对狭小，动物繁殖快、数量多、互相影响大，当受到外界或动物间各种病原体感染时，极易导致传染病的发生与流行。
实验动物疾病的发生与流行，除造成动物死亡外，还会干扰实验的顺利进行，引起生物制品的污染，对人类健康产生危害。
2. 确保实验数据的准确性和可重复性定期对实验动物和动物实验的环境设施、饲料、垫料和饮水等的监测，为确保实验动物符合控制等级要求提供了基础；对各级实验动物群进行微生物学、寄生虫学监测，可以确定各级实验动物是否符合原定级别，有利于排除不确定因素，保证实验动物和动物实验的质量可控，从而确保实验数据的准确性和可重复性。
也可以对实验动物不应有的病原体的入侵，及早采取措施，以免疫情扩大，导致动物的死亡，实验的终止而造成更大的损失，（二）监测方法实验动物的微生物、寄生虫检测具体操作方法详见《国家标准实验动物微生物学和寄生虫学的检测方法>>(GB/T 14926.1-14926.64；GB/T 18448.1～18448.10 ),检测方法归纳起来有病原学检测和血清学检测。
实验动物的微生物控制
in the contamination process.
Food and bedding can become contaminated
by wild rodents at times of production, harvesting and storage.
Microorganisms may be carried in the
hair, on the hands and on the clothing of personnel who have been in contact with infected animals.
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Materials and equipment
1. 体外寄生虫（节肢动物） 病原：Ectoparasites（虱子、 跳蚤、螨）
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2. 弓形虫病
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1.感染弓形虫多数为隐性感染。
2.主要危害眼和N系统 3.孕妇常有流产，早产，死胎或畸胎。 4.幼龄大鼠常导致致死性肺炎。
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第三章实验动物的微生物控制
第一节 微生物对实验动物的影响
第二节
Water, air, cages, and surgical equipment can
also become contaminated source for animals.
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Biological materials
The use of biological materials
such as cells, serum, ES cells, and
microorganisms.
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实验动物微生物国家标准 (1)可编辑全文
五、取样方法的规定
新国标与原国标在取样方面的不同：
取样要求
取样数量
取样方法
本标准采用与实验动物寄生虫学检测的统一
检测频率、取样数量和取样方法，适当参考实验
动物群体大小来决定抽样数量，并规定抽样点。
五、取样方法的规定
取样要求： 每个小鼠、大鼠、地鼠和豚鼠生产繁殖单元（群
体100只以上），按照动物等级的不同取样。 兔 根据群体大小取样。（没有具体规定）
四、各等级动物检测项目的确定
普通级：排除动物烈性传染病和人兽共患性疾病 的病原体；
清洁级：排除对动物危害大和对科学研究干扰大 的病原；
SPF动物：排除主要潜在感染或条件致病和对科 学实验干扰大的病原体；
无菌动物：无可检出的一切生命体
四、各等级动物检测项目的确定
犬、猴微生物学质量标准是此次国家标 准的补充内容。在确定检测项目方面，主 要抓住烈性传染病和人兽共患病的病原以 及对科学研究干扰大的病原。同时采取把 检测项目分为必要时检测和必须检测两类 的方法，即可做到与国际接轨，又使重点 突出，使检测工作的可操作性更强。
实验小鼠、大鼠的等级划分 补充犬、猴的质量标准 “必检项目”和“必要时检测项目” 各等级动物检测项目确定 取样方法的规定 对动物免疫问题的规定 检测方法的调整
一、实验动物等级的设定
实验动物微生物质量等级的划分是实验动物质量 标准的一个核心问题，也是这次国标修订补充工 作中争论较大的问题，存在不同的看法。之所以 难度较大，就是在这个问题上，即要考虑与国际 接轨，不能停滞保守，保护落后。还要考虑到我 国实验动物现有水平和发展的需要，不能盲目拔 高，脱离开我国现阶段的具体国情，要找到一个 结合点，给国标作出一个恰如其分的定位。
动物试验规范
动物试验规范根据实验动物微生物控制标准，可将实验动物分为四级：一级普通动物（CV），系指微生物不受特殊控制的一般动物。
要求排除人兽共患病的病原体和积少数的实验动物烈性传染病的病原体。
为防止传染病，在实验动物饲养和繁殖时，要采取一定的措施，应保证其用于测试的结果具有反应的重现性（即无论不同的操作人员，在不同的时间，用同一品系的动物按规定的实验规程所做的实验，都能获得几乎相同的结果）。
二级清洁动物（CL），要求排除人兽共患病及动物主要传染病的病原体。
三级无特殊病原体动物（SPF），要求到二级外，还要排除一些规定的病原体。
其除菌与灭菌的方法，可使用高效空气过滤器除菌法、紫外线灭菌法、三甘醇蒸气喷雾法及氯化锂水溶液喷雾法。
四级无菌动物（GF）或悉生动物（GN）。
无菌动物要求不带有任何用现有方法可检出的微生物。
悉生动物要求在无菌动物体上植入一种或数种已知的微生物。
在病理学检查上，四类实验动物也有不同的病理检查标准。
一级外观健康，主要器官不应有病灶。
二级除一级指标外，显微镜检查无二级微生物病原的病变。
三级无特殊病原体动物。
无二、三级微生物病原的病变。
四级不含二、三级微生物病原的病变，脾、淋巴结是无菌动物组织学结构。
综合上述，对不同级别的实验动物在动物房设计上和管理上则有不同的要求。
无菌、已知菌以及无特殊病原体动物都需要在无菌或尽可能无菌的环境里饲养，这种环境，目前国际上通用称为屏障环境，即用一道屏障把动物与周围污染的环境隔开，就如胎鼠在母鼠子宫内一样。
这种环境从控制微生物的角度分为隔离系统、屏障系统、半屏障系统、开放系统和层流架系统等五大类。
A隔离系统是在带有操作手套的容器中饲养动物的系统，用于饲养无菌动物和栖生动物。
内部保持按微生物要求的100级的洁净度，但其设置的房间及操作人员不必按无菌室考虑。
B屏障系统把10000~100000级左右的无菌洁净室作为饲养室，主要用于无特殊病原体动物的长期饲养和繁殖。
入室施行严格管理，如淋浴、换贴身衣服等。
第二章第二节 实验动物微生物学质量的标准化
普通级、 SPF级
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无菌动物、SPF动物和普通级动物优缺点比较
项目 传染病 寄生虫 试验结果 无菌动物 无 无 明确 SPF动物 无 无 明确 普通动物 有或可能有 有或可能有 有疑问
应用动物数
统计价值 长期实验 死亡率 长期实验存活率 实验的准确设计 实验结果的讨论价值
少量
很好 可能好 很少 约100％ 可能 高
无特定病原体动物概念
简称SPF动物。指除清洁动物应排除的病原 和寄生虫外，不携带主要潜在感染或条件致 病和对科学实验干扰大的病原和寄生虫。 SPF动物来源于无菌动物，必须饲养于屏障 系统中。
SPF动物的特性
目前国际上对SPF动物的要求不同、质量标 准也不一样。结合我国的实际情况，以既排 除对动物群有危害的病原体，又排除对动物 实验研究有干扰的微生物和寄生虫为原则。
无菌动物的特性
一般特征： 主要表现为早起体重增长速度较慢、性 成熟期稍晚、产仔数较少、但仔畜成活率较 高、寿命延长。
无菌动物的特性
解剖生理特征： （1）肠道肌层变薄 （2）盲肠肥大 （3）心脏相对缩小，白细胞数值恒定 （4）肾脏较小，如无菌豚鼠
无菌动物的特性
免疫特征： 由于缺乏微生物的刺激，其淋巴结与脾脏的 发育不良 吞噬功能与普通动物差别不大 在被病毒攻击后也可产生干扰素 免疫能力降低，对微生物感染异常敏感
无特定病原体动物 无菌动物
普通级动物概念
指未经严格的微生物和寄生虫控制，饲养在 普通环境中，其体内外不带有标准规定的人 畜共患病病原、寄生虫和动物烈性传染病病 原的动物。
普通级动物的特性
该类实验动物饲养于开放系统中，是在微生 物控制上要求最低的动物，如普通级兔只排 除沙门菌、皮肤真菌、兔出血症病毒、弓形 体及体外寄生虫等对人体和动物危害较大的 病原体。
实验动物分级及其标准
====Word行业资料分享--可编辑版本--双击可删====实验动物分级及其标准根据实验动物微生物控制标准，可将实验动物分为四级：一级普通动物（CV），系指微生物不受特殊控制的一般动物。
要求排除人兽共患病的病原体和积少数的实验动物烈性传染病的病原体。
为防止传染病，在实验动物饲养和繁殖时，要采取一定的措施，应保证其用于测试的结果具有反应的重现性（即无论不同的操作人员，在不同的时间，用同一品系的动物按规定的实验规程所做的实验，都能获得几乎相同的结果）。
二级清洁动物（CL），要求排除人兽共患病及动物主要传染病的病原体。
三级无特殊病原体动物（SPF），要求到二级外，还要排除一些规定的病原体。
其除菌与灭菌的方法，可使用高效空气过滤器除菌法、紫外线灭菌法、三甘醇蒸气喷雾法及氯化锂水溶液喷雾法。
四级无菌动物（GF）或悉生动物（GN）。
无菌动物要求不带有任何用现有方法可检出的微生物。
悉生动物要求在无菌动物体上植入一种或数种已知的微生物。
在病理学检查上，四类实验动物也有不同的病理检查标准。
一级外观健康，主要器官不应有病灶。
二级除一级指标外，显微镜检查无二级微生物病原的病变。
三级无特殊病原体动物。
无二、三级微生物病原的病变。
四级不含二、三级微生物病原的病变，脾、淋巴结是无菌动物组织学结构。
综合上述，对不同级别的实验动物在动物房设计上和管理上则有不同的要求。
无菌、已知菌以及无特殊病原体动物都需要在无菌或尽可能无菌的环境里饲养，这种环境，目前国际上通用称为屏障环境，即用一道屏障把动物与周围污染的环境隔开，就如胎鼠在母鼠子宫内一样。
这种环境从控制微生物的角度分为隔离系统、屏障系统、半屏障系统、开放系统和层流架系统等五大类。
A隔离系统是在带有操作手套的容器中饲养动物的系统，用于饲养无菌动物和栖生动物。
内部保持按微生物要求的100级的洁净度，但其设置的房间及操作人员不必按无菌室考虑。
B屏障系统把10000~100000级左右的无菌洁净室作为饲养室，主要用于无特殊病原体动物的长期饲养和繁殖。
实验动物微生物和遗传-等级
实验动物微生物、寄生虫学和遗传学概念及其质量监测(讲义大纲)前言我国实验动物科学经过多年发展, 已经开始进入并达到国际标准, 其中最重要的标志之一是实验动物的标准化的实现。
标准化实验动物是指有清楚的微生物、寄生虫学背景(即体内病原微生物，寄生虫的携带状况)和遗传学背景(即品系和品种)的实验动物。
因而了解实验动物微生物、寄生虫学和遗传学概念及其监测，对一切生命科学相关领域研究是非常必要的。
第一节实验动物微生物、寄生虫学及其质量监测一、实验动物微生物、寄生虫学概念实验动物微生物、寄生虫学是针对实验动物本身特有的微生物，寄生虫研究而发展形成的一门学科, 并且拓宽丰富了兽医及医学微生物，寄生虫学的研究范围，在了解实验动物微生物、寄生虫性疾病, 对实验动物的危害, 对人可能造成的损害以及在实验动物等级划分方面都有重要意义。
主要内容包括：1.实验动物细菌学和真菌学可引起实验动物细菌性疾病的细菌已有30个属的68种细菌，其中危害较大的有20余种。
2.实验动物病毒学迄今为止，各种实验动物病毒涉及到脊椎动物病毒的所有科、属、种。
有些直接威胁到人的健康和生命。
3.实验动物寄生虫学实验动物寄生虫种类繁多，已报道的有六、七十种。
以上三个方面由于涉及内容非常丰富，已发展成相对自成体系的学科，有些细菌、病毒和寄生虫的研究非常重要，不仅对实验动物至关重要，而且对人医学相关的领域研究提供了重要参考资料和模型价值。
二、实验动物微生物、寄生虫学质量的影响1．威胁人的健康和生命：实验动物如果携带人兽共患病病原，如淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒，流行性出血热病毒，猴B病毒，利什曼原虫等，可直接传染给人，威胁人的健康和生命。
2．威胁实验动物的健康，造成直接经济损失：一些烈性传染病，如鼠痘，兔病毒性出血热感染可使整个动物群覆灭。
3．干扰实验结果，导致实验终止：很多感染病原可影响实验结果。
三、实验动物微生物、寄生虫学等级标准根据病原微生物、寄生虫对实验动物致病性和危害性的不同，以及是否存在于动物体内, 将实验动物分成四级：1.普通级实验动物(Conventional animal，CV) 体内必须排除人兽共患病和烈性动物性传染病病原微生物及寄生虫。
实验室生物安全的相关规范与标准
实验室生物安全的相关规范与标准近几年来，我国陆续出台了多部有关实验室生物安全的规范与标准，实验室的生物安全越来越受到人们的重视。
本文就实验室生物安全的相关规范与标准作一简要叙述，供大家参考。
1、病原微生物实验室生物安全管理条例及其配套文件2004年11月12日，国务院发布第424号国务院令，公布《病原微生物实验室生物安全管理条例》。
条例分为七章：总则、病原微生物的分类和管理、实验室的设立与管理、实验室感染控制、监督管理、法律责任、附则，共72条。
该条例颁布后，农业部和卫生部相继出台了配套文件。
农业部文件包括《动物病原微生物分类名录》、《高致病性动物病原微生物菌（毒）种或者样本运输包装规范》和《高致病性动物病原微生物实验室生物安全管理审批办法》。
卫生部文件包括《人间传染的病原微生物名录》和《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》。
2、医疗废物管理条例及配套文件《医疗废物管理条例》（第380号国务院令）已于2003年6月4日国务院第十次常务会议通过，并予公布，自公布之日起施行。
条例分总则、医疗废物管理的一般规定、医疗卫生机构对医疗废物的管理、医疗废物的集中处置、监督管理、法律责任、附则，共7章57条。
条例适用于医疗废物的收集、运送、贮存、处置以及监督管理等活动。
根据条例规定，任何单位和个人有权对医疗卫生机构、医疗废物集中处置单位和监督管理部门及其工作人员的违法行为进行举报、投诉、检举和控告。
根据《医疗废物管理条例》，卫生部和国家环境保护总局制定了《医疗废物分类目录》、《医疗废物管理行政处罚办法》。
卫生部颁布实施了《医疗卫生机构医疗废物管理办法》（2003年8月14日经卫生部部务会议讨论通过）。
国家环保总局颁布实施了《医疗废物专用包装物、容器标准和警示标识规定》(环发[2003]188号)和《医疗废物集中处置技术规范》（试行）（环发[2003]206号）。
3、实验室生物安全通用要求国家标准《实验室生物安全通用要求》（GB 19489—2004）已于2004年5月28日颁布，于该年10月施行。
动物性食品微生物学检验实验
二、实验说明
• 大肠菌群：指一群在37℃，24h能发酵乳糖、产 酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢 杆菌。该菌群主要来源于人畜粪便，故以此作为 粪便污染指标，来评价食品的卫生质量，具有广 泛的卫生学意义。
• 食品中大肠菌群数系以每100ml（g）检样内大肠 菌群最近似数（MPN）来表示，其含义是指 100ml（g）食品内含有大肠菌群数的实际数值。
五、实验结果
• 查大肠菌群数表得出本次实验值。
大肠菌群最可能数（MPN）检索表
检 样量
1ml（g） 0.1ml（g） 0.01ml（g）
×3
×3
×3
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10311 Nhomakorabea0
1
1
1
1
1
2
1
1
3
1
2
150 300 350
360 710 1500
1200 1300 3800
2100 2300 3800
3800 4400 4700
13000 24000 48000
注：1、本表采用3个稀释度1ml（g），0.1ml（g），0.01ml（g），每稀释度3管。 2、表内所列检样量如改用10ml（g），1ml（g），和0.1ml（g）时，表内数字相应降低10倍；如 改用0.1ml（g），0.01ml（g）和0.001ml（g）时，则表内数字应增加10倍，其余可类推。
实验动物微生物质量控制(共49张PPT)
Lyphocytic choriomenin gitis
virus
狂犬病 (Rabies)
Rhabdo virus
小鼠、仓鼠
类 似 流 行 性 感 冒 的 症 状 ，接 触 感 染 ( 接 触 小 鼠 头痛、肌痛、发热、恶 粪便和尿液)；吸入； 心 、 呕 吐 、 喉 痛 、 畏 光 。咬伤，或由节肢动物
如蚊子、蟑螂传播
所有哺乳类
头痛、肌痛、发热、恐 咬伤、皮肤伤口或黏
水、狂妄、抽搐、昏厥、 膜感染含狂犬病毒的
死亡
唾液
细菌性疾病
疾病
病原
媒介动物
人类临床症状
传染途径
全身性感染 (Systemic infections)
布氏杆菌病 (Brucellosis)
犬 Brucdla Canis 、 猪 Brucella suis
正常菌群
a. 正常菌群受内外环境变化发生菌群失调，将产生数量和位置的改变， 由非致病菌变为致病菌。
3. 真菌感染对动物和实验的干扰
病原真菌大多为人兽共患病原，病原性弱，为慢性过程，以慢性增生性炎
症为主。
真菌孢子飞扬，污染环境，威胁动物和实验、饲养人员。
4. 寄生虫感染对动物和实验的干扰
掠夺宿主的营养
(Rabies) 酶联免疫吸附试验（ELISA）。
Germfree animal GF
三、微生物、寄生虫潜在感染对实验研究的干扰
1. 实验动物病毒对动物和实验的干扰
鼠痘病毒
a. 实验性结核、X射线、化学毒素、组织移植、肿瘤、运输可使隐性感染病毒激
活。
b. 大量内毒素或切除脾脏可改变吞噬细胞功能，而增加小鼠对病毒的易 感性。
试验动物微生物学等级及监测
实验动物微生物学等级及监测GB 14922.2-2001前言本标准的全部技术内容为强制性。
本标准是在GB 14922-1994《实验动物微生物学和寄生虫学监测等级（啮齿类和兔类）》的基础上，与寄生虫学监测等级的有关内容分开，形成的独立标准。
本标准对实验动物等级进行了重新设定，与寄生虫学等级对应，将实验小鼠和大鼠的微生物学等级分为清洁级、无特定病原体级（SPF）和无菌级，取消了普通级。
豚鼠、地鼠和兔仍保留四级。
犬和猴分为普通级和SPF级。
相应增加了犬和猴的微生物学监测项目。
本标准对取样数量作了重新规定。
根据生产繁殖单元大小决定取样数量，改变了过去按动物等级取样的做法。
兔、犬、猴等较大动物可以活体取样，不必处死动物，因此取样数量也没有减少。
本标准对必须检测和必要时检测作了限定性说明：“必须检测项目：是指在进行实验动物质量评价时必须检测的项目。
必要时检测项目：是指从国外引进实验动物、怀疑有本病流行、申请实验动物生产许可证和实验动物质量合格证时必须检测的项目”。
本标准从3个方面对监测项目进行了调整：删除原标准列出、但实际检出率极低或很少检出的项目（如：实验小鼠、大鼠不检测多杀巴斯德杆菌）；增加近年来在动物生产中出现的一些病原微生物（如：嗜肺巴斯德杆菌由清洁级调为SPF级必须检测项目），使不同动物各等级检测项目更加合理。
本标准及其相关配套标准自实施之日起，代替GB 14922-1994。
本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。
本标准起草单位：中国实验动物学会。
本标准主要起草人：贺争鸣、田克恭、李红、黄韧、屈霞琴、范薇。
本标准于1994年1月首次发布。
中华人民共和国国家标准实验动物微生物学等级及监测GB 14922.2-2001代替GB 14922-19941 范围本标准规定了实验动物微生物学等级及监测，包括：实验动物微生物学的等级分类、检测要求、检测程序、检测规则、结果判定和报告等。
本标准适用于豚鼠、地鼠、兔、犬和猴；清洁级及以上小鼠、大鼠。
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提高动物质量，控制疾病的发生，取消 普通级动物是我们的一个可选择的做法
实验动物是生命科学研究的基础和重要支 撑条件。 实验动物质量是决定实验动物能否作为生 命科学研究基础和支撑条件的基本条件和 前提。
二、补充犬、猴微生物质量等级标准
随着生命科学、基础医学和药物研制与开发的迅 猛发展，实验犬和实验猴的开发利用日益增加。 在有关部门和单位的努力下，已初步建成了一些 具有一定规模的实验犬和实验猴养殖、研究和开 发的基地，为进一步标准化和规模化奠定了良好 的基础。自上世纪90年代以来，在行业和地方有 关机构组织制定了实验犬和实验猴微生物学和寄 生虫学检测等级标准，经过多年来的检测和研究 工作，积累了一定的经验，在此基础上，进一步 制定我国实验犬和实验猴的国家标准是十分必要 的。
一、实验动物等级的设定
取消普通级小鼠、大鼠等级的理由：
经过十几年的发展，我国的实验动物的生物净化 技术、高等级实验动物饲养繁育、动物设施以及 检测技术等方面已积累了一些成功的经验，这些 为我们普及应用清洁级动物提供了重要的技术保 证。 随着国家和学术界对实验动物工作的重视，实验 动物质量也有了很大的提高，清洁级以上动物在 使用动物中所占的比例逐年上升。
ICLAS 中国 芬兰 日本 美国 澳大利亚 荷兰
小鼠/大鼠 小鼠/大鼠 小鼠/大鼠 小鼠/大鼠 小鼠/大鼠 小鼠/大鼠 小鼠/大鼠
13/12 8+8/9+7 11+9/10+9 10/10 （16）13/12 12/12ห้องสมุดไป่ตู้7/18
实验动物微生物国家标准
一、国家标准修订补充的指导思想和依据 二、国家标准修订补充的主要内容以及说明
实验小鼠、大鼠的等级划分 补充犬、猴的质量标准 “必检项目”和“必要时检测项目” 各等级动物检测项目确定 取样方法的规定 对动物免疫问题的规定 检测方法的调整
一、实验动物等级的设定
实验动物微生物质量等级的划分是实验动物质量 标准的一个核心问题，也是这次国标修订补充工 作中争论较大的问题，存在不同的看法。之所以 难度较大，就是在这个问题上，即要考虑与国际 接轨，不能停滞保守，保护落后。还要考虑到我 国实验动物现有水平和发展的需要，不能盲目拔 高，脱离开我国现阶段的具体国情，要找到一个 结合点，给国标作出一个恰如其分的定位。
一、实验动物等级的设定
（88年立项，94年发布） 小鼠：普通级、清洁级、SPF级、无菌级 大鼠：普通级、清洁级、SPF级、无菌级 地鼠：普通级、清洁级、SPF级、无菌级 豚鼠：普通级、清洁级、SPF级、无菌级 兔： 普通级、清洁级、SPF级、无菌级
犬：普通级、SPF级 猴：普通级、SPF级
实验动物微生物国家标准
李洪涛 河南省实验动物中心
实验动物质量国家标准
时间
1994
动物种类
小鼠、大鼠、地 鼠、豚鼠、兔 小鼠、大鼠、地 鼠、豚鼠、兔、 犬、猴
项目
细菌、病毒、寄生 虫、遗传、环境、 饲料 细菌、病毒、寄生 虫、遗传、环境、 饲料
2001
实验动物微生物国家标准
一、国家标准修订补充的指导思想和依据 指导思想 依据 二、国家标准修订补充的主要内容以及说明
一、实验动物等级的设定
取消普通级小鼠、大鼠等级的理由：
实验小鼠、大鼠不设普通级，将推动清洁级以上动物的生 产和使用，解决目前存在的清洁级动物有人生产，但很少 有人使用，或有二级以上动物设施，但仅作为一种摆设而 不投入使用的问题。 实验小鼠、大鼠不设普通级，符合国家科技部在《科研条 件发展“九五”计划和2010年远景目标纲要》中提出的： “到2000年，全国基本普及清洁级动物；到2010年，基 本普及SPF级实验动物。”这一发展目标的要求。
二、补充犬、猴微生物质量等级标准
原行业、地方标准：
犬：普通级、清洁级、SPF级、无菌级 猴：普通级、清洁级、SPF级、无菌级
现行国标：
犬：普通级、SPF级 猴：普通级、SPF级
实验犬、猴设两个等级的理由
与国际接轨：在美国、日本、欧洲等国，虽然没有统一的 标准，但实验犬、猴均包括普通级、SPF级两个等级。 原行业和地方标准中规定的清洁级犬、猴的微生物学检测 项目，已基本达到了国外普通级、SPF级的要求，有些项 目甚至高出国外SPF级犬、猴的要求，因此在制定国标时 没有必要再设清洁级。 无菌级犬、猴饲养管理和环境控制要求极其严格，国内现 有条件很难达到，国外也极少有无菌犬、猴供应和使用， 因此，国标中也没有列出。
实验动物微生物国家标准
国际/国际组织 ICLAS 中国 芬兰 日本 美国 澳大利亚 荷兰 动物 小鼠/大鼠 小鼠/大鼠 小鼠/大鼠 小鼠/大鼠 小鼠/大鼠 小鼠/大鼠 小鼠/大鼠 病毒项目 14/9 5+6/7 16/8 8/9 10/8 13/8 11/10
实验动物微生物国家标准
国际/国际组织 动物 细菌、真菌、支原体
一、实验动物等级的设定
在动物等级设定上，存在的不同意见主要集 中在实验小鼠、大鼠。关于等级的设定，存在的 两种不同意见主要是设三个等级还是保留原有的 四个等级，通过广泛征求意见和充分的讨论，认 为实验小鼠、大鼠设三个等级（取消普通级）对 促进实验动物质量的提高、与国际质量标准接轨、 推动我国实验动物科学发展以及整个生命科学发 展是积极的、有利的。
实验动物微生物国家标准
依据：
国家科委第2号令《实验动物管理条例》 国家科委与国家技术监督局联合颁发《实验动物质量管理 办法》 同时参考国家标准《实验动物微生物学和寄生虫学检测等 级（啮齿类和兔类）》（GB14922-94） 国家标准《实验动物微生物学和寄生虫学检测方法（啮齿 类和兔类）》（GB14926-94） 行业、地方颁布的实验动物质量标准 国际上具有权威性的资料。
实验动物微生物国家标准
指导思想：
国家标准，不仅仅是在今后的实际工作中对实验动物质量 进行评价的科学依据，而且可以说，国标的制定，将在一 定程度上决定着我国实验动物科学整体水平的发展进程， 从这些年实验动物工作发展来看，国标的颁布和执行，对 提高实验动物质量，保证动物实验科学水平起到了很大的 促进作用。因此，在制订标准时，要考虑到我国实验动物 现有水平，不能盲目攀高；同时，要尽可能做到与国际上 多数国家的标准接轨，不能停滞保守，保护落后。要制定 出适应我国实验动物科学发展需要的、而且将对这些发展 起到积极促进作用的国家标准。