微生物溶菌酶在饲料工业中的应用及其展望解读
溶菌酶应用简介
1. 溶菌酶简介溶菌酶,又称细胞壁水解酶,广泛存在于高等动植物组织及分泌物、原生动物、昆虫和各种微生物中。
1922年Fleming等发现,在人的唾液、眼泪中存在有能够溶解细胞壁杀死细菌的酶,因而被命名为溶菌酶。
它能够水解N一乙酰葡萄糖胺与N一乙酰胞壁酸之间的β一1,4糖苷键,因此可以溶解大多数革兰氏阳性菌的细胞壁而具有溶菌作用,溶菌酶本身是一种蛋白质,安全性能高,在食品、医药、生物学中得到了广泛的应用。
2. 溶菌酶的理化性质(可要可不要)溶菌酶是一种糖苷水解酶,是由129个氨基酸残基组成的小分子碱性球蛋白,相对分子质量为14 300,分子中富含碱性氨基酸和芳香族氨基酸,其多肽链经盘绕折叠形成二级和三级结构,形成一个椭圆形的外形结构,溶菌酶纯品为白色粉末结晶,无臭、甜味,易溶于水和低浓度的盐溶液,不溶于丙酮、乙醚等有机溶剂。
正常条件下溶菌酶作用的最适温度为45--50℃,最适pH为5~7,在低温干燥条件下可长期保存,热稳定性强,耐酸性强,pH为4—7时,100℃下处理45 min仍能保持其酶活性,但在碱性条件下化学性质不稳定,易变性。
3. 溶菌酶的作用1.抗菌消炎2.抗病毒:溶菌酶能与带负电荷的病毒蛋白直接作用。
与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐,使病毒失活。
3.增强免疫力:溶菌酶作为机体非特异免疫因子之一,参与机体多种免疫反应,在机体正常防御功能和非特异免疫中,具有保持机体生理平衡的重要作用。
4.其它方面的药理作用:溶菌酶还具有激活血小板的功能。
可以改善组织局部血液循环障碍,分泌脓液,增强局部防卫功能,从而体现其止血、消肿等作用。
它还可以作为一种宿主抵抗因子,对组织局部起保护作用。
5.促进双歧乳酸杆菌增殖:溶菌酶在婴儿体内可以直接或间接促进婴儿肠道细菌双歧乳酸杆菌的增殖,促进婴儿消化吸收,可以促进人工喂养婴儿肠道细菌的正常化。
4.溶菌酶的应用在乳制品中的应用:人乳中溶菌酶的含量是牛乳的3000倍,溶菌酶是婴儿生长发育必需的抗菌蛋白。
溶菌酶的修饰及其在动物生产中的应用研究进展
业中的应用潜力进行展望,以期为溶菌酶在畜牧业中的广泛应用提供参考。
关键词:溶菌酶;抗菌;改性;动物应用
中图分类号:S816
文献标识码:A
DOI 编号:10.19556/j.0258-7033.20200730-05
近年来,抗生素滥用问题引起了全社会的关注,抗 生素在畜牧业中的应用也受到了诸多限制。2016 年 7 月 26 日,我国农业部(现为农业农村部,下同)发布 2428 号文件,要求 2017 年 5 月 1 日停止使用硫酸粘杆菌素饲 料添加剂预混剂。2018 年 1 月 11 日,农业农村部发布 第 2638 号公告,要求停止在食品动物中使用喹乙醇、氨 苯胂酸、洛克沙胂等 3 种兽药,以保障动物产品质量安全, 维护公共卫生安全和生态安全。2019 年 7 月 9 日,农业 农村部发布第 194 号公告,要求 2020 年 1 月 1 日起将退 出除中药外的所有促生长类药物饲料添加剂品种。饲料 端全面禁抗、养殖端减抗限抗已成大势所趋。在此背景 下,寻找替代抗生素的新型绿色添加剂成为动物营养领 域的研究热点。溶菌酶(Lysozyme,LZ)是一种有效的 抗菌酶,于 1921 年由苏格兰生物学家亚历山大 • 弗莱明 发现 [1],此后便涌现出大量关于溶菌酶的基础科学研究。 溶菌酶是动物机体中的非特异性免疫因子,能够直接作 用于革兰氏阳性菌(G+)细胞壁,在渗透压作用下使微
生物细胞胀裂死亡。革兰氏阴性菌(G-)的细胞壁黏肽 层外有一层脂多糖和脂蛋白,对天然溶菌酶具有抗性, 故天然溶菌酶对 G- 几乎无抑菌作用。近年来国内外学者 不断尝试通过化学、物理、生物改性等方法对溶菌酶进 行修饰,拓宽其抑菌谱,提高杀菌能力。溶菌酶与抗生 素杀菌机制不同,不易产生耐药性,具有安全、无残留、 活性稳定等优良抗菌特性,已逐渐应用于畜禽饲料中。 本文就溶菌酶的修饰技术以及在动物生产中的应用进行 综述,旨在为溶菌酶的开发和利用提供理论参考和依据。
溶菌酶资料
溶菌酶----新型免疫抗菌抗病毒药物、饲料添加剂溶菌酶研发背景:抗生素是人类应用最广泛的抗菌药物,不仅用于临床,也广泛用于畜禽饲养和农业方面。
在过去的50多年中,由于饲用抗生素在养殖中的长期使用导致大量耐药菌株的产生,且病原菌抗药性逐年增强,致使疗效下降,剂量提高,造成动物疾病越防越难防,越治越难治,给养殖业造成很大的损失和危害。
同时也给全人类的健康造成严重的影响。
因此,世界卫生组织于1994年就细菌耐药性的监测结果给全世界提出了警示:细菌对抗生素产生的耐药性正在以惊人的速度增加,而现在的抗生素药物正在失去原来的疗效。
因此寻求广谱、高效的新一代饲用抗菌药物已成为迫在眉睫的摆在人类面前的课题。
澳大利亚昆士兰大学医学系博士生导师、高级研究员王雯禾博士(1993年毕业于英国剑桥大学达尔文学院获微生物营养学博士学位),一直致力于生命科学的研究和发展,历经十多年的研究发现:酶广泛存在于生物体内,参与新陈代谢等多种生理功能,其中对微生物细胞壁具有水解功能的抗菌酶,如溶菌酶lysozyme能够溶解微生物细胞壁而使微生物死亡,而且溶菌酶lysozyme在人和动物的唾液、眼泪、乳汁以及肌体组织中大量存在,是人和动物自身重要的免疫因子,与人和动物的健康息息相关。
溶菌酶lysozyme的溶菌(杀菌)作用与传统的抗生素药物相比,具有对某一病原菌所有血清型都有效的优点,克服了一种抗生素只能预防一种或其中一种血清型病原菌的不足,更不存在药物残留和耐药性的问题。
王雯禾博士认为,溶菌酶lysozyme作为畜禽、水产饲料添加剂在替代抗生素,控制耐药菌,生产绿色肉蛋奶食品方面是最佳的选择。
并多次鼓励和支持国内年轻的科学家、学者,致力于这一伟大的、划时代的、对全人类的健康有杰出贡献的产品的开发和研究。
并于2003年10月推出最早用于防治动物疾病的产品--溶菌酶系列,由于它不但能溶解(杀死)细菌,增强动物的免疫能力,而且还能和病毒结合使病毒失活,所以它作为预防动物疾病的新型饲料添加剂,正在动物疾病防治的许多领域被广泛应用。
我国溶菌酶的研究与应用进展
我国溶菌酶的研究与应用进展一、本文概述溶菌酶是一种广泛存在于生物体内的水解酶,具有溶解细菌细胞壁的能力,因此在生物防御和医药领域具有重要的应用价值。
我国作为世界上人口最多的国家,对于溶菌酶的研究与应用具有深远的实际意义。
本文旨在综述我国溶菌酶的研究现状、应用领域以及未来的发展趋势,以期为推动溶菌酶在我国生物医药、食品工业、农业等领域的应用提供理论支持和指导。
在过去的几十年里,我国溶菌酶的研究取得了显著进展。
从最初的基础研究,到如今的产业化应用,溶菌酶在我国已经成为一种重要的生物活性物质。
本文将从溶菌酶的来源、性质、制备方法、应用领域等方面进行全面概述,并对我国溶菌酶研究的未来发展进行展望。
本文还将关注溶菌酶在应对抗生素滥用和耐药性问题中的潜力,以期为我国生物医药产业的可持续发展提供新的思路和方法。
二、溶菌酶的结构与性质溶菌酶是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶,主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键,使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽,导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。
溶菌酶广泛存在于动物、植物、微生物体内,不同来源的溶菌酶其分子结构具有一定差异,但基本性质相似。
溶菌酶分子量较小,通常约为14-15KD,是一种碱性蛋白质。
其等电点通常在pH值5-0之间,因此,在酸性环境中溶菌酶分子带正电荷,可与带负电荷的微生物细胞壁发生静电吸附。
溶菌酶具有较高的热稳定性,能在50℃左右保持较长时间的活性,但其活性受pH值影响较大,通常在pH值3-4范围内活性最高。
溶菌酶对多种化学试剂表现出较强的稳定性,如氯化钠、氯化钙等盐类以及乙醇、丙酮等有机溶剂对其活性影响较小。
溶菌酶的作用机制主要是通过其催化活性水解细菌细胞壁中的多糖成分,导致细胞壁破裂,从而使细菌失去生存能力。
溶菌酶还具有抗病毒、抗肿瘤、抗炎等多种生物活性,因此在医药、食品、饲料等领域具有广泛的应用前景。
在医药领域,溶菌酶可作为抗菌药物使用,对多种革兰氏阳性菌和阴性菌具有抑制作用,尤其对耐药性金黄色葡萄球菌和链球菌具有较强的杀菌作用。
溶菌酶及其在畜牧生产上的应用
溶菌酶及其在畜牧生产上的应用
溶菌酶是一类能够溶解菌壁的酶类物质,它具有广泛的应用价值。
在畜牧生产中,溶菌酶可以用作饲料添加剂,以提高动物的饲料利用率和增强其消化功能。
溶菌酶的作用机制是通过分解细菌细胞壁中的多糖和蛋白质,从而使细菌壁受到破坏,达到杀菌的效果。
同时,溶菌酶还可以促进动物肠道中有益菌的生长,提高肠道健康状况,增强机体免疫力。
在畜牧生产中,溶菌酶被广泛应用于饲料添加剂中,以提高饲料利用效率和增强动物的消化功能。
这是因为溶菌酶可以加速饲料中的大分子多糖的降解,从而提高饲料的可消化性。
同时,溶菌酶还可以减少因为饲料不良造成的消化不良和腹泻等问题,从而提高动物的生产性能。
另外,在动物饲养过程中,肠道微生态平衡的破坏往往导致消化不良和免疫力下降等问题。
溶菌酶可以通过抑制有害细菌的生长,促进有益菌的繁殖,从而有助于维持肠道微生态平衡,提高动物的健康水平。
总之,溶菌酶在畜牧生产中发挥着重要的作用,可以提高动物的饲料利用率,增强消化功能,维护肠道健康和提高免疫力。
溶菌酶研究进展及在畜牧业中的应用
溶菌酶研究进展及在畜牧业中的应用作者:张莹雪来源:《科学与财富》2018年第28期摘要:溶菌酶是一种性质稳定、耐酸耐高温、来源于动植物及微生物的球蛋白,具有抑菌、抗病毒等功能。
通过对溶菌酶进行物理、化学及配伍改进,能够提高溶菌酶的生物学功能,作为一种对人和动物安全的抗菌剂,溶菌酶能够提高饲料利用率,用作饲料防腐剂和杀菌剂,用于饲料中可替代抗生素,治疗畜禽疾病等,应用前景相当广阔。
关键词:溶菌酶;功能;改进;饲料;畜牧业1、溶菌酶的结构及性质溶菌酶是由多种氨基酸残基构成的碱性球蛋白,属于葡萄糖苷酶,其纯品为白色或微黄色结晶体或无定型粉末,无臭、微甜、易溶于水和盐溶液,不溶于丙酮、乙醚,化学性质稳定,干燥室温条件下可长期保存。
目前研究比较透彻的是鸡蛋清溶菌酶和牛胃溶菌酶。
2、溶菌酶的分类(1)动物源溶菌酶:分为C型、G型和I型三种类型。
(2)植物源溶菌酶:目前发现含溶菌酶的植物有近170 种,在木瓜、无花果、胡萝卜、大麦等植物中均能分离出溶菌酶。
(3)微生物源溶菌酶:根据其作用对象主要分为细菌细胞壁溶菌酶和真菌细胞壁溶菌酶。
(4)噬菌体溶菌酶:噬菌体产生的溶菌酶具有特异性,由噬菌体感染、诱导宿主细胞产生,未被感染细胞中不存在。
(5)利用基因工程手段制备的溶菌酶:利用基因重组技术将人溶菌酶基因克隆到原核或者真核生物中进行表达。
3、影响溶菌酶活性的因素溶菌酶的活性受到温度、pH、化学环境等因素影响较大。
溶菌酶遇热很稳定,pH值4~7、100℃处理1min仍保持原酶活性;pH值5.5、50℃加热4h后,酶活性不受影响;在碱性条件下,溶菌酶的热稳定性较差,易变性。
糖和聚烯烃类能增加溶菌酶的热稳定牲。
但是,曾发现具有-COOH和-SH、OH基的多糖对溶菌酶活性有抑制作用。
NaCl对溶菌酶也有抗热变性作用,溶菌酶的活性在低盐浓度时和离子强度密切相关的,在高盐浓度时溶菌酶的活性受到抑制。
除此之外,溶菌酶可和许多物质形成络合物导致其活性丧失。
酶工程发展概况及应用前景
现在已知的酶的酶有几千种,但是还远远不能满足人们对酶日益增长的需要。随着科技的发展,人们正在发现更多、更好的酶。其中,令人瞩目的有核酸酶和抗体酶、端粒酶、糖生物学和糖基转移酶和极端环境微生物和不可培养微生物的新酶种,此外,新的固定化、分子修饰和非水相催化等技术越来越受到人们关注。伴随着人类基因组计划取得的巨大成果,基因组学和蛋白质组学的诞生,生物信息学的兴起,以及DNA重排技术的发展,预期在不久的将来,众多新酶的出现将使酶的应用达到前所未有的广度和深度。
1、应用酶工程生产抗生素
应用酶工程可以制备青霉素酞化酶、头抱菌素酞化酶、头抱菌素、头抱菌素酞化酶、青霉素酞化酶、脱乙酸头抱菌素、头抱菌素乙酸醋酶,近年来还进行固定化产黄青霉青霉素合成酶系细胞生产青霉素的研究,合成青霉索和头抱菌素前体物的最新工艺也采用酶工程的方法。
2、应用酶工程生产维生素
制造2一酮基一L—古龙糖酸【山梨糖脱氢酶及L一山梨糖醛氧化酶】、肌醇【肌醇合成酶】、L—肉毒碱【胆碱脂酶】、CoA【CoA合成酶系】等。由山梨醇和葡萄糖生产维生素及丙烯酸胺的生产也采用酶工程的方法四。
3、酶工程在饲料工业中的应用
动物体由于不能分泌分解纤维素、半纤维素、木质素、果胶等植物细胞壁物质的酶系,因此动物自身不能消化利用这些物质,只能通过瘤胃和大肠微生物利用上述部分物质。植物细胞壁非淀粉多糖降解酶可降解畜禽消化道内的非淀粉多糖,降低肠道内容物的粘性,促进营养物质的消化吸收,减少畜禽下痢,从而促进畜禽生长和提高饲料利用率。据赵长友【3】报道,利用纤维素复合酶作为半干贮添加剂可提高半干贮饲料的营养成分。蛋白质含量提高,粗纤维含量下降,半干贮品质得到改善,获得了色、味、嗅、质地及完好率均为上乘的优质半干贮饲料,并可抑制霉菌生长、防止腐败和延缓二次发酵,提高了半干贮饲料的完好率和利用率【4】。
饲料中添加溶菌酶对草鱼生长性能的影响
第42卷㊀第5期2023年10月黑龙江水产Northern Chinese FisheriesVol.42No.5October 2023文章编号:1674-2419(2023)05-0362-03作者简介:王文清(1970-),男,汉族,山东临沂人㊂沂水县诸葛镇农业综合服务中心工程师㊂主要从事大水面(水库)养殖㊁增殖技术研究及推广工作㊂邮箱:wangwenqing.1967@㊂饲料中添加溶菌酶对草鱼生长性能的影响王文清(沂水县诸葛镇农业综合服务中心,山东临沂276400)摘㊀㊀要:该试验研究草鱼(Ctenopharyngodon idella )饲料中添加不同水平的溶菌酶(Lysozyme)对其生长性能的影响,用以确定溶菌酶在草鱼生产中的最适添加水平㊂试验选择体重约20g 的健康草鱼400尾,按照单因素试验设计分成4个处理,每个处理5个重复,每个重复20尾草鱼㊂各组草鱼分别依次投喂含有0mg /kg㊁50mg /kg㊁100mg /kg 和200mg /kg 的溶菌酶的基础饵料㊂试验周期为8周㊂试验结束,检测各组草鱼的增重率㊁饵料系数㊁特定生长率㊁成活率等生长性能指标㊂结果显示,与对照组比较,当草鱼饵料中添加100mg /kg 的溶菌酶可以显著提高草鱼的试验末重㊁增重率㊁特定生长率,且显著降低了饵料系数(P <0.05)㊂研究表明,在草鱼养殖生产中使用100mg /kg 的溶菌酶可以有效改善草鱼的生长性能㊂关键词:溶菌酶(Lysozyme);草鱼(Ctenopharyngodon idella );特定生长率;饵料系数;增重率;成活率中图分类号:S965.112文献标志码:A㊀㊀随着水产养殖业的规模化发展,导致鱼类养殖密度过大,造成鱼类机体免疫力降低,易感染疾病,影响生长性能㊂2020年已禁止在饲料生产端添加抗生素,寻找促生长㊁抗病类的绿色添加剂至关重要㊂溶菌酶广泛存在动植物组织㊁体液及分泌物中,是一类具有抗菌的生物酶[1]㊂溶菌酶主要是通过破坏细菌的细胞壁,使致病菌灭活;溶菌酶是动物机体非特异性免疫系统的重要组成部分[2]㊂溶菌酶具有无耐药性㊁无残留㊁安全㊁高效的特点,是一种潜在的替抗绿色饲料添加剂[3]㊂溶菌酶对大多数的真菌㊁细菌及病毒具有很好的抑制性[4]㊂大量研究发现,在肉鸡㊁肉鸭及仔猪养殖生产中使用溶菌酶可以提高其生长性能,增强机体的抗病力[5-7]㊂邢思华[8]在草鱼生产中使用溶菌酶对其生长性能无显著性影响,但提高了草鱼机体的抗病力㊂草鱼(Ctenopharyngodon idella )是中国主要的淡水鱼养殖品种之一,提高草鱼的养殖经济效益可以促进草鱼养殖业的发展㊂但目前,溶菌酶在草鱼生产中的应用研究结果并不是很多㊂因此,该试验采用不同水平的溶菌酶(Lysozyme 或称N -乙酰胞壁质聚糖水解酶,N -acetylmuramide glycanohydrlase)研究对草鱼生长性能的影响,探讨溶菌酶在草鱼养殖中的最适添加水平,为溶菌酶科学㊁高效地应用于草鱼养殖中提供数据资料参考㊂1材料与方法1.1溶菌酶该研究使用的溶菌酶由上海沈李科工贸有限公司提供,酶活为1ˑ104U /mg㊂1.2试验设计选择体重约20g 的健康草鱼400尾,按照单因素试验设计分成4个处理,每个处理5个重复,每个重复20尾草鱼㊂各组草鱼分别依次投喂含有0mg /kg㊁50mg /kg㊁100mg /kg 和200mg /kg 的溶菌酶的基础饵料㊂试验周期为8周㊂试验结束,检测各组草鱼的增重率㊁饵料系数㊁特定生长率㊁成活率等生长性能指标㊂试验分组及处理如表1所示㊂试验草鱼的基础饵料原料组成和营养成分含量如表2所示㊂1.3草鱼的养殖管理正式试验开始前草鱼驯养1周,使其适应养殖环境,养殖期间均投喂基础饵料㊂试验草鱼饲养在20个网箱(1.5m ˑ1.2m ˑ1.0m)中,每个网箱放养㊃263㊃Copyright ©博看网. All Rights Reserved.第42卷㊀第5期2023年10月黑龙江水产Northern Chinese Fisheries研究报告The research report20尾草鱼㊂草鱼每天早中晚投喂3次(7:30㊁13:00和18:00),每日投喂量约为草鱼体重的3.5%~ 4.5%,投喂2hrs后,吸取残饵㊂试验期间,连续供氧㊂每隔7d换水一次,每次换水量约为1/3㊂水温控制在27ħ,溶解氧浓度大于5.5mg/L,氨氮浓度低于0.15mg/L㊂表1㊀试验分组及处理组别处理对照组基础饵料50mg/kg组基础饵料+50mg/kg溶菌酶100mg/kg组基础饵料+100mg/kg溶菌酶200mg/kg组基础饵料+200mg/kg溶菌酶表2㊀试验草鱼的基础饵料原料组成和营养成分原料含量(%)营养水平含量(%)鱼粉8粗脂肪 5.84豆粕20.0粗蛋白32.74菜籽粕10粗灰分7.02麸皮10玉米13米糠12棉籽粕20豆油 2.5磷酸氢钙 2.5预混料2注:①预混料为每1kg配方饵料提供:维生素D32400IU,维生素E150IU,维生素A10000IU,维生素K18mg,维生素B113mg,维生素B28mg,维生素B120.08mg,叶酸6mg,碘1.6mg,钴0.25mg,铜5mg,锌82mg,铁56mg,镁106mg,硒0.14mg㊂②饵料的营养水平均为实测值㊂1.4草鱼生长性能的测定试验第1d和第56d,所有草鱼晨饲之前,禁食12hrs后,称量体重,并统计养殖期间各组草鱼饵料的投喂量,统计养殖期间各组草鱼的死亡数量㊂从每组中挑选10尾草鱼麻醉后解剖,采集肝脏及内脏,称重,用于统计分析肝体比㊁脏体比㊂1.5数据处理分析各组草鱼的生长性能数据使用Excel2022简单统计整理,再使用SPSS28软件中单因素方差分析法分析显著性,使用LSD方法检验组间数据的多重比较,P<0.05表示数据差异显著㊂结果用均值和总标准误呈现㊂2结果饵料中不同水平的溶菌酶对草鱼生长性能的影响见表3㊂由表3数据可见,与对照组比较,当草鱼饵料中添加100mg/kg的溶菌酶可以显著提高草鱼的试验末重㊁增重率㊁特定生长率,且显著降低了饵料系数(P<0.05);但溶菌酶对草鱼存活率㊁肝体比㊁脏体比等生长性能数据无显著影响㊂研究表明,在草鱼养殖生产中使用适量的溶菌酶可以有效改善草鱼的生长性能㊂表3㊀饵料中不同水平的溶菌酶对草鱼生长性能的影响指标对照组50mg/kg组100mg/kg组200mg/kg组SEM P值初重/g20.0520.1020.0120.03 1.020.841末重/g80.32b85.28b90.03a86.43ab 4.280.043增重率/%300.60b324.28ab349.93a331.50ab13.040.036特定生长率/(%/d) 2.42b 2.63ab 2.77a 2.69ab0.120.031存活率/%100100100100 饵料系数 1.49a 1.43ab 1.35b 1.38ab0.090.019肝体比 2.12 2.15 2.26 2.200.210.632脏体比10.4310.5610.6310.60 1.320.742注:同行数据被标注不同字母表示具有差异性(P<0.05),被标注含有相同字母或未标注字母表示数据无显著性差异(P>0.05)㊂3讨论草鱼肠道含有大量的微生物菌群,对机体消化饵料中营养物质具有重要作用㊂草鱼肠道中的微生物可以分泌大量的蛋白酶㊁纤维素酶等消化酶,促进机体消化吸收饵料中养分㊂而溶菌酶也具有类似消化酶的活性㊂该研究中,与对照组比较,当草鱼饵料中添加100mg/kg的溶菌酶可以显著提高草鱼的试验末重㊁增重率㊁特定生长率,且显著降低了饵料系数,表明在草鱼养殖生产中使用适量的溶㊃363㊃Copyright©博看网. All Rights Reserved.第42卷㊀第5期2023年10月黑龙江水产Northern Chinese Fisheries研究报告The research report菌酶可以有效改善草鱼的生长性能㊂邢思华等[8]在草鱼养殖生产中使用适量的溶菌酶对草鱼的生长性能无显著性影响,但添加200mg/kg~300mg/kg 的溶菌酶可以增强草鱼机体的抗病力㊂王坛等[9]在吉富罗非鱼生产中添加54mg/kg的溶菌酶可以提高吉富罗非鱼的增重率㊁蛋白质效率,显著降低饵料系数;当溶菌酶添加量为54mg/kg和72mg/kg 时,可以显著增强机体的免疫力及抗氧化能力㊂以上研究结果与本试验不完全相同,可能是因为溶菌酶的活性㊁添加量㊁养殖环境㊁鱼的种类不同导致结果不完全一致㊂溶菌酶提高鱼类生长性能可能是因为抑制了肠道中有害菌的数量,促进了有益菌,如芽孢杆菌的生长繁殖,改善肠道健康,促进消化酶的分泌,提高机体对饵料中养分的消化吸收,进而提高鱼类的生长性能㊂4结论该试验条件下,在草鱼养殖生产中使用适量的溶菌酶可以提高草鱼的试验末重㊁增重率㊁特定生长率,显著降低了饵料系数,但对草鱼成活率㊁肝体比㊁脏体比等数据无显著性影响㊂溶菌酶在草鱼养殖生产中的最适添加水平为100mg/kg㊂参考文献:[1]赵荣文,谭丽萍,刘同军.溶菌酶及其应用研究进展[J].齐鲁工业大学学报,2021,35(01):12-18.[2]程赛赛,季金虎,徐二华,等.溶菌酶对动物肠道屏障的影响及其在动物生产中的应用研究进展[J].饲料研究, 2021,44(19):157-160.[3]王飒爽,陈海宝,武嘉平,等.绿色添加剂溶菌酶在畜禽生产中的应用研究进展[J].饲料研究,2020,43(05): 142-145.[4]张琳,尚校兰,李秋玲,等.溶菌酶的修饰及其在动物生产中的应用研究进展[J].中国畜牧杂志,2021,57(07): 18-22.[5]林厦菁,茅沈丽,范秋丽,等.重组人溶菌酶对黄羽肉鸡生长性能㊁免疫功能和肠道健康的影响[J].动物营养学报,2022,34(10):6527-6538.[6]顾维智,张国基.溶菌酶对肉鸭生长性能和免疫器官指数的影响[J].饲料工业,2008,29(24):46-48. 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溶菌酶的研究现状及应用进展综述
溶菌酶的研究现状及应用进展摘要:溶菌酶是一种具有天然活性,安全无毒的生物酶,可专一作用于微生物的细胞壁,从而广泛应用于食品防腐,医疗制品,机体免疫等方面。
本文介绍了溶菌酶的结构、性质。
对其近年来其在食品工业上的应用进行了综述,并对其应用前景进行了展望。
关键词:溶菌酶;分离纯化;研究现状;应用前言:溶菌酶又称脆壁质酶或N一乙酰壁质聚糖水解酶,是英国细菌学家弗莱明于1922年在鼻粘液中发现的强力杀菌物质,此后人们在人和动物的多种组织、分泌液及某些植物、微生物中也发现了溶菌酶的存在,自然界中,鸟类和家禽的蛋清溶菌酶含量最多,鸡蛋清约含0.3%。
由于溶菌酶本身是一种天然蛋白质,抗菌、抗病毒、抗肿瘤、无毒性的优点,使得溶菌酶在乳制品、饮料、水产品、肉类制品和医药上都有广泛的应用。
1溶菌酶作用机理:溶菌酶能有效地水解细菌细胞壁的肽聚糖,水解位点是N-乙酰胞壁酸(NAM)的1位碳原子和N-乙酰葡萄糖胺(NAG)的4位碳原子间的β-1.4糖苷键。
肽聚糖是细菌细胞壁的主要成份,它是由NAM、NAG和肽“尾”(一般是4个氨基酸)组成,NAM与NAG通过β-1.4糖苷键相连,肽“尾”则是通过D-乳酰羧基连在NAM的第3位碳原子上,肽尾之间通过肽“桥”(肽键或少数几个氨基酸)连接,NAM、NAG、肽“尾”与肽“桥”共同组成了肽聚糖的多层网状结构,作为细胞壁的骨架,上述结构中的任何化学键断裂,皆能导致细菌细胞壁的损伤。
2溶菌酶的分类:溶菌酶的底物特异性很强,不同来源溶菌酶作用的底物不同。
按溶菌酶的来源可分为动物溶菌酶、植物溶菌酶、微生物溶菌酶和细菌噬菌体溶菌酶。
按作用细胞壁不同分为细菌细胞壁溶菌酶和真菌细胞壁溶菌酶。
细菌细胞壁溶菌酶又细分为两种,一种是作用于β-1,4糖苷键的细胞壁溶解酶,另一种是作用于肽链“尾”端和酰胺部分的细胞壁溶解酶。
3溶菌酶的结构溶菌酶由129个氨基酸组成的单肽链蛋白质,含有4对二硫键。
溶菌酶分子近椭圆形。
溶菌酶
27.40%
2.70%
溶菌酶
对照组
增重效果:
“溶菌酶” 增重结果
19.00 18.00 17.00 16.00
18.45 平均每头增重(kg)
17.00
溶菌酶
对照组
每头利润:
8.00 4.00 0.00
7.52
每头增收毛利(元)
溶菌酶
0.00
空白组
(3)预防效果(小猪喂饲) “溶菌酶” 临床预防试验结果(50头小猪)
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(4)预防效果(肉鸡喂饲)324羽肉鸡成活率结果 “溶菌酶” 临床预防试验结果
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93.83%
85.19%
50.00%
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一、溶菌酶是什么? 二、溶菌酶的药理作用。 三、临床效果。 四、经济效益和生态效益。
一、溶菌酶是什么?
溶菌酶是一种应用基因工程技术获取的酶,其效 果比蛋清溶菌酶增效50~100倍,抗菌谱扩大到了部分 革兰氏阴性菌。同时,我们还在活力保护上获得了一 种生物活性保护剂,大大延长了生物酶的有效期,二 年内活力水平比对照增加20%。在人的唾液、眼泪、 乳中都存在这种酶。专门作用于微生物细胞壁的水解 酶,又称细胞壁溶解酶。该酶能催化水解细胞壁中的 N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的ß –1,4糖苷键, 使细胞壁不溶性多糖分解成可溶性糖肽,细菌内容物 逸出而使细菌溶解。它可参与各种诱发炎症的酸性物 质结合,使其失活,并能增强其它药物的疗效。
指标 防治率
本产品与现有相关产品主要性能对比
溶菌酶的研究进展及应用
溶菌酶的研究进展及应用朱元镇;刘婧仪;于常红【期刊名称】《山东医学高等专科学校学报》【年(卷),期】2018(040)003【总页数】4页(P207-210)【关键词】溶菌酶;作用机制;改良方法【作者】朱元镇;刘婧仪;于常红【作者单位】青岛大学,山东青岛266071;青岛大学,山东青岛266071;青岛大学,山东青岛266071【正文语种】中文溶菌酶(Lysozyme)又称胞壁质酶(Muramidase), 广泛存在于自然界,具有抗细菌、真菌及肿瘤等多种药理作用,具有生物相容性好对组织无刺激性、无毒性的特点,已被制作为一种性质优良杀伤病原微生物而不破坏机体的酶制剂。
根据其分子结构和来源的不同分为6类:植物溶菌酶、微生物溶菌酶、噬菌体溶菌酶(主要为T4噬菌体)、C型(蛋清溶菌酶、胃溶菌酶等)、G型(鹅型溶菌酶)和I型(无脊椎动物溶菌酶),其中C、G型和噬菌体溶菌酶最常见。
溶菌酶化学性质稳定,商品化主要为蛋清溶菌酶,仅对革兰氏阳性菌有抑制作用,为此国内外一直致力于开发改良新型溶菌酶。
本文就溶菌酶的作用机制、目前的改良开发及应用情况进行综述。
1 溶菌酶的作用机制1.1 抗细菌作用溶菌酶是存在于动物体液及组织中的固有免疫因子,通过破坏细菌细胞壁激活细菌自溶蛋白,使膜通透性增大导致细菌裂解死亡,其机制如下:N-乙酰己糖胺酶水解细菌细胞壁肽聚糖的β-1,4糖苷键;酰胺酶水解细菌细胞壁内N-乙酰葡糖胺与肽桥之间的连接—N-乙酰葡糖胺-L-丙氨酸键及内肽酶水解细菌细胞壁肽桥内的肽键。
蛋清溶菌酶是目前研究最为透彻的一种溶菌酶。
通过X-射线衍射得到的晶体学数据,Phillips等最先提出蛋清溶菌酶催化糖苷键断裂的能力来自静电稳定的碳正离子中间体及空间位阻效应,酶的活性位点与糖结合使其变构成半椅型构象,使糖苷键容易断裂;之后Vocadlo等又发现酶结构中Glu35对于维持酶的活性至关重要,Glu35作为糖苷键的质子供体,切割底物碳氧单键,通过Asp52形成糖基酶中间体,随后Glu35与水反应形成的氢氧根攻击糖基酶中间体,水解生成产物,而酶保持不变。
溶菌酶在猪、禽上的应用
摘要:在畜牧养殖中,抗生素不仅作为动物发病时治疗的药物进行使用,还会作为促生长剂添加到动物的饲料中使用,目前全球75%的抗生素都用到了动物的生产养殖中。
持续广泛的滥用抗生素,不仅导致了细菌耐药性的产生,也使得肉食品中抗生素残留加大,威胁到了人类的健康。
因此,为了减少抗生素的过度使用、维护环境的安全性,寻找合适的抗生素替代品变得尤为紧迫和重要。
关键词:溶菌酶;猪;禽;应用溶菌酶在猪、禽上的应用顾振宏1,赵子惠2,蒋东平1(1.甘肃省白银市平川区畜牧兽医技术服务中心甘肃白银730900;2.甘肃省畜牧兽医研究所甘肃平凉744000)收稿日期:2023-03-08基金项目:猪IFN-λ1基因克隆、原核表达及抗PoRV 活性研究(项目编号:21JR7RA718)作者简介:顾振宏(1987.9—),男,本科,兽医师,主要从事动物防疫、检疫工作。
1溶菌酶的概述1.1溶菌酶的渊源溶菌酶是1922年由Fleming 从人的唾液和泪水中发现的一种具有溶解有些细菌作用的物质,因此将其命名为溶菌酶。
溶菌酶是一种单体碱性球蛋白,它的相对分子量为14.4ku ,溶菌酶的肽链包括129个氨基酸残基,其中包含18种氨基酸。
溶菌酶肽链N 末端由第40~88位氨基酸残基构成β-反平行折叠结构,含有4对由含硫氨基酸Cys 构成的二硫键,而C 末端由第1~39位和第89~129位氨基酸残基折叠形成α-螺旋结构。
肽链之间的活性位点是溶菌酶的功能核心,能够识别和水解细菌细胞壁的聚糖,从而发挥溶菌作用[1]。
溶菌酶是一种具有杀菌作用的天然抗感染物质,具有序列保守性和无毒副作用的碱性蛋白。
它广泛存在于人体各种组织、禽类和鸟类蛋清中,以及哺乳动物的泪液、血浆、唾液和乳液等液体中。
此外,微生物中同样含有溶菌酶[2]。
据来源不同可分为以下四类:微生物溶菌酶、植物溶菌酶、动物溶菌酶和蛋清溶菌酶[3]。
目前绝大多数的溶菌酶是从蛋清中提取而来的,经常采用的提取方法是:亲和层析法、离子交换树脂法、聚丙烯酸沉淀法和直接结晶法等。
酶制剂在工业上的应用现状与展望
《酶工程》课程论文学院:材料与化工学院专业班级:2011级生物工程(2)班姓名:李丹丹学号:20110412310047评阅意见评阅成绩评阅教师:2014年6月12日酶制剂在工业上的应用现状与展望姓名:李丹丹学院和专业:材料与化工生物工程2班摘要:酶制剂是一类特殊的食品添加剂,具有催化高效性,专一性等显著特点。
文章综述了食品工业中酶制剂利用及新动向,包括淀粉糖、油脂、蛋白质加工、面包、啤酒、饮料工业以及改善苦味的酶类的应用。
并介绍了酶与食品的关系、酶制剂在食品生产中用于保藏、改善质量和增加营养价值、增加品种种类、提高便捷性和提高食品生产效率等作用,还介绍了酶制剂在饲料中的应用。
并对酶制剂在食品工业中和在动物饲料方面的发展方向进行展望。
关键词:酶制剂食品工业饲料工业应用1.酶制剂的简介酶是一类具有专一性生物催化能力的蛋白质。
而从生物体中提取的具有酶活力的制品,称为酶制剂。
酶制剂主要用于食品加工和制造业方面,它在对提高食品生产效率和产量、改进产品风味和质量等方面有着其它催化剂所无法替代的作用。
另外,酶制剂在日化、纺织、环境保护和饲料等行业也有着较广泛的应用。
随着发酵工业的发展,酶制剂的主要来源已被微生物所取代,它具有不受季节、地区和数量等因素影响的特性,还具有种类多、繁殖快、质量稳定和成本低等特点。
随着微生物育种技术的发展,酶制剂的种类越来越多,分类也越来越细。
目前我国已工业化生产的、且用于食品工业的酶制剂主要有:淀粉酶、异淀粉酶、果胶酶和蛋白酶等,它们在食品加工中都起着十分重要的作用。
当然,尽管目前我国酶制剂行业的发展已有了长足进步,但与发达国家相比,还有很大差距。
为进一步加快酶制剂产业技术的进步,今后应注重在调整产品结构、增加新品种、提高产品质量和竞争力、实现规模化经营和拓宽应用领域等方面作深入的研究。
2.酶制剂在食品工业中的应用利用淀粉酶可以将淀粉水解为葡萄糖或不同DE值的淀粉糖浆,再经过葡萄糖异构酶的作用产生果葡糖浆;果胶酶用于果汁的加工和澄清,可提高果酒的得率,改善澄清效果,加快过滤速度;乳糖酶可分解牛奶中的乳糖,提高人体对牛奶的消化性;脂肪酸可改进食品风味;蛋白酶可用于蛋白胨和氨基酸混合液的制造,生产糖果使用的蛋白发泡剂,用在面包、糕点和通心粉的生产上可缩短揉面时间、增强面团延伸性和改进产品质量,用在肉类加工上可嫩化肉类、软化肠衣和提高质量,用在乳酪制造上可缩短生产时间等。
酶制剂在饲料工业中的应用
促进饲料资源开发 利用:酶制剂能够 提高饲料的营养价 值,使一些原本无 法利用的资源得到 有效利用,降低饲 料成本。
提高饲料转化率: 酶制剂可以促进 饲料中营养物质 的消化吸收,提 高饲料的利用率, 减少浪费。
改善动物生产性 能:酶制剂能够 促进动物生长, 提高生产效率, 缩短养殖周期。
减少环境污染: 酶制剂可以降通过基因工程技术改良酶制剂的活性、稳定性和产量。 发酵工艺优化:优化发酵工艺条件,提高酶制剂的生产效率和产品质量。 酶的固定化技术:研究酶的固定化技术,提高酶制剂的重复使用性和稳定性。 新型酶制剂的开发:开发新型酶制剂,满足饲料工业中对酶制剂的多样化需求。
酶制剂市场需求增长:随着养殖业的发展,酶制剂作为饲料添加剂的需求不断增长。
了不确定性。
酶制剂的作用效果 还受到饲料原料质 量、动物种类和生 长阶段等多种因素 的影响,使得其在 实际应用中存在一 定的风险和不确定
性。
酶制剂的活性:如何保持酶的活性,使其在饲料加工和储存过程中保持稳定是一个挑战。
酶制剂的定向进化:通过定向进化技术提高酶制剂的催化效率和特异性是研发的关键。
酶制剂的生产成本:降低生产成本,提高产量是实现酶制剂广泛应用的重要因素。 酶制剂的安全性:确保酶制剂的安全性和无毒副作用是饲料工业应用的重要前提。
酶制剂的发现: 酶制剂的起源
和早期研究
酶制剂的研发 阶段:各个阶 段的研发成果
和突破
酶制剂的应用 领域:酶制剂 在饲料工业、 食品工业等领 域的应用情况
酶制剂的未来 发展:未来酶 制剂的研究方 向和潜在应用
领域
酶制剂的提取和分离技术
酶制剂的固定化技术
酶制剂的复配技术
酶制剂的生产工艺流程
液体酶制剂:易于运输和储存,但稳定性较差 粉状酶制剂:便于添加到饲料中,稳定性较好 颗粒酶制剂:适合规模化养殖,方便使用 微胶囊酶制剂:能够提高酶的稳定性,延长保存期
溶菌酶在养殖中的应用
溶菌酶在养殖中的应用作者:李鑫谭志坚凌欣华李巧贤来源:《兽医导刊》 2014年第4期李鑫谭志坚/ 佛山市正典生物技术有限公司凌欣华/ 梅州市畜牧兽医技术推广站李巧贤/ 广东现代农业集团研究院溶菌酶(Lysozyme,EC3.2.1.17)存在于哺乳动物的泪液、唾液、血浆、乳汁、胎盘、体液及组织细胞内,其中以蛋清中含量最丰富。
溶菌酶对革兰氏阳性菌有抑制作用,而对没有细胞壁的动物体细胞不会产生影响,因此安全性很高。
溶菌酶作为抗生素的替代品,被WHO 和许多国家认定为无毒、无害、无残留及安全性很高的天然蛋白质,目前已经被广泛应用于医药、食品和畜牧业等领域,2010 年溶菌酶被我国卫生部批准为食品添加剂。
(一)溶菌酶的特性溶菌酶(Lysozyme),又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶,能水解肽聚糖中的N-乙酰葡萄糖和N-乙酰胞壁酸之间的β-1,4糖苷键,以此破坏细菌的细胞壁,具有较强的抑菌活性。
溶菌酶是一种白色、微白色结晶型或无定型粉末,无臭、味甜且易溶于水,不溶于丙酮和乙醚等有机溶剂,在干燥室温可长期保存。
化学性质非常稳定,对热也极为稳定。
当pH在1.2~11.3范围内剧烈变化时,其结构几乎不变。
在酸性环境中,溶菌酶对热的稳定性很强,但在碱性环境中溶菌酶对热稳定性较差。
最适pH为6.6,最适温度为45℃~50℃,等电点pH10.5~11。
(二)溶菌酶的分类溶菌酶根据其来源可分为,植物源溶菌酶、动物源溶菌酶和微生物源溶菌酶;按其所作用的微生物的不同又可分为细菌细胞壁溶菌酶和真菌细胞壁溶菌酶。
植物源溶菌酶,目前发现含溶菌酶的植物有近170种,在木瓜、无花果、胡萝卜、大麦等植物中均能分离出溶菌酶,植物源溶菌酶分子量较大,对革兰氏阳性菌的抑菌活性较强。
动物源溶菌酶包括鸡蛋清溶菌酶、人和哺乳动物溶菌酶,鸡蛋清溶菌酶是目前研究和应用最多的,也是了解最清楚的溶菌酶之一,约占鸡蛋清的 3.5%左右。
在人和许多哺乳动物的眼泪、鼻粘液、唾液、乳汁等分泌液及肝、肾、淋巴组织等组织均存在溶菌酶。
溶菌酶在畜禽生产中的应用进展
溶菌酶在畜禽生产中的应用进展陈忠琼【摘要】溶菌酶是一种无毒、无害、安全性高的盐基水解蛋白酶,具有抗菌、抗炎、抗病毒、增强免疫力等作用,还可作为一种天然绿色防腐剂,广泛应用于医药、食品、畜牧等行业.文章介绍了溶菌酶的理化性质、功效作用,并对其在畜禽生产中的应用进行综述.【期刊名称】《饲料博览》【年(卷),期】2014(000)008【总页数】4页(P32-35)【关键词】溶菌酶;畜禽;生产;应用【作者】陈忠琼【作者单位】重庆市动物疫病预防控制中心,重庆401120【正文语种】中文【中图分类】S816.8;S814溶菌酶又称胞壁质酶、N-乙酰胞壁质聚糖水解酶,是一种特异性作用于细胞壁的有效抗菌剂,广泛存在于动植物和微生物中。
最早对溶菌酶的研究始于20世纪初,1922年在人的唾液和眼泪中发现一种具有溶解细菌作用的酶——溶菌酶,直到1965年才弄清溶菌酶的立体结构。
随着近年来畜牧产业高度集约化生产,畜禽疾病发生频率日趋上升,而由疾病造成的死亡率和淘汰率亦呈逐年递增趋势,给畜牧业造成极大的经济损失。
目前我国对畜禽疾病防治仍以抗生素为主,容易造成高浓度的药物残留,同时也容易引起耐药性、菌群失调、胃肠功能紊乱、免疫力下降等诸多不良反应,严重危害动物及人类健康。
因此,开发安全、高效的饲用抗生素替代品已是迫在眉睫,而溶菌酶是一种具有蛋白质本质及类似抗生素作用特点的天然酶,是养殖行业理想的饲料添加剂,受到了普遍的关注与青睐。
1 溶菌酶的理化性质溶菌酶是一种糖苷水解酶,是由129个氨基酸残基组成的小分子碱性球蛋白,相对分子质量为14 300,分子中富含碱性氨基酸和芳香族氨基酸,其多肽链经盘绕折叠形成二级和三级结构,形成一个椭圆形的外形结构,不同来源的溶菌酶具有相同的氨基酸残基组成数量,但因其多肽链上的某些氨基酸种类存在差异而导致不同来源的溶菌酶相对分子质量各异。
溶菌酶纯品为白色粉末结晶,无臭、甜味,易溶于水和低浓度的盐溶液,不溶于丙酮、乙醚等有机溶剂。
溶菌酶论文生物活性论文:溶菌酶的研究进展及优势分析
溶菌酶论文生物活性论文:溶菌酶的研究进展及优势分析[摘要] 近年来,随着对溶菌酶研究的深入,其应用日趋广泛,现分别从其结构、来源及应用方面对使用溶菌酶的优点作一综述。
[关键词] 溶菌酶; 生物活性; 应用the advantages of using lysozymehui qiusha(pharmaceutical college, shandong university of traditional chinese medicine, jinan, shandong, 250014,china,)[abstract] recent years, with the deepening of the research of lysozyme, its application increased widely. in this paper i reviewed the advantages of using lysozyme from its structure, the source and application respectively.[keywords] lysozyme; bioactivity; application对溶菌酶的研究,从20世纪初便开始了,那时候对它的认识只限于其对细菌的溶解作用,随着索尔顿等人弄清楚溶菌酶抑菌作用的机理,溶菌酶的研究步入了新的领域。
近年来对溶菌酶的研究越来越多,其应用也越来越广泛,现从其结构、来源及应用等方面对使用溶菌酶的优点做一总结。
1 溶菌酶来源与分类溶菌酶的来源很广泛,在生物体中,它存在于人体多种组织,鸟类和家禽的蛋清、哺乳动物的泪、唾液、血浆、尿、乳汁等等,其中鸡蛋清中分布最广。
除了这些常见的来源,目前溶菌酶还可通过基因工程的方法发酵得到,在常食用的水果中也可分离出溶菌酶,足见其分布广泛。
根据溶菌酶生物来源,可将溶菌酶分为4类,即:细菌噬菌体溶菌酶、植物溶菌酶、微生物溶菌酶和动物型溶菌酶,其中动物型溶菌酶还可分为c型、g型和i型。
溶菌酶的种类及其应用
溶菌酶的种类及其应用摘要:溶菌酶(Lysozyme Ec 3.2.17)又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶,它能专一性的作用于目的微生物的细胞壁,而不能作用于其它物质,是一种无毒、无害、安全性很高的盐基水解蛋白酶。
文章介绍了溶菌酶的来源、种类、抑菌机理,论述了溶菌酶在食品业、畜牧业、医药业中的应用,并展望了其发展及应用前景。
关键词:溶菌酶;种类;食品;畜牧;医药;应用溶菌酶( lysozyme,EC3.2.1.17)又称细胞壁质酶(muramid-ase)或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶(N-acetylmuramide glycano-hydralase)。
最早对溶菌酶的研究起于Nicolle 1907年发表的枯草芽孢杆菌中的溶解子,1922年Fleming等发现,在人的唾液、眼泪中存在有能够溶解细胞壁杀死细菌的酶,因而被命名为溶菌酶[1]。
此后人们发现溶菌酶广泛地存在于高等动物组织及分泌物、植物及各种微生物中,其中在新鲜的鸡蛋清中含量最高。
1937年Abraham和Robinson从卵蛋白中分离出溶菌酶晶体,揭开了研究溶菌酶的历史篇章。
1965年,英国的菲利普等用X衍射法对溶菌酶进行研究分析,第一个完全弄清了溶菌酶的立体结构[2]。
它广泛存在于鸟类、家禽的蛋清中和哺乳动物的泪液、唾液、血浆、乳汁、胎盘以及体液、组织细胞内,其中在蛋清中含量最丰富(约0.3%)。
在一些植物体如卷心菜、萝卜、无花果和微生物体内也存在溶菌酶,只是含量差异较大。
溶菌酶具有抗菌、抗病毒和消炎作用,与抗生素复合应用能增强抗生素疗效。
它还是人体内的非特异性免疫因子,可提高机体的免疫力,并且与其他阳离子抗菌肽类天然防御因子有很好的协同作用[3]。
另外,它本身是1种天然蛋白质,能在胃肠道作为营养物质消化、吸收,无毒性,也不在体内残留,是1种安全性很高的食品保鲜剂、营养保健品和药品[4]。
溶菌酶常用于各种加工食品和饮料中,集药理、保健和防腐3种功能于一体[5]。
溶菌酶及其在食品工业中的应用
溶菌酶及其在食品工业中的应用
肖怀秋;林亲录;李玉珍;赵谋明
【期刊名称】《中国食物与营养》
【年(卷),期】2005(000)002
【摘要】本文综述了溶菌酶的结构、来源、活力测定方法及在食品研究中的应用,并根据当前研究状况对溶菌酶今后在食品工业中的应用和发展进行了展望.
【总页数】3页(P32-34)
【作者】肖怀秋;林亲录;李玉珍;赵谋明
【作者单位】湖南农业大学食品科技学院,长沙,410128;湖南农业大学食品科技学院,长沙,410128;湖南农业大学食品科技学院,长沙,410128;华南理工大学食品与生物工程学院,广州,510641
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
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微生物溶菌酶在饲料工业中的应用及其展望畜禽胃肠道疾病是影响生产的主要疾病之一,传统预防措施是在饲料中添加抗生素。
近10年来,随着科学水平的提高,人们对抗生素的副作用有了深刻认识,如耐药菌的产生,抗生素在畜产品的残留以及抗生素的长期使用而导致畜禽细胞免疫及体液免疫功能的下降等。
溶菌酶是1922年Alexander Fleming发现的一种能选择性的溶解微生物细胞壁的酶类,经试验证明可用于防治畜禽胃肠炎、消化不良及化脓性过程。
另外还可起到非专用性生长激素的作用。
作为畜禽饲料添加剂的酶类,应在饲料加工及通过胃内酸性环境时仍能保持较高的酶活力,溶菌酶所具有的耐热、耐酸特性为其作饲料添加剂提供了保证。
1.溶菌酶溶菌酶(Lysozyme Ec 3.2.17)又称胞壁质酶,它广泛存在于鸟类、家禽的蛋清中和哺乳动物的泪液、唾液、血浆、乳汁、胎盘以及体液、组织细胞内,其中在蛋清中含量最丰富(约0.3%)。
在一些植物体如卷心菜、萝卜、无花果和微生物体内也存在溶菌酶。
溶菌酶是一种糖苷水解酶,在干燥条件下可在室温下长期保存,其纯品为白色或微白色结晶型或无定型粉末,无臭、味甜、易溶于水,不溶于丙酮、乙醚等。
其化学性质稳定,在pH4—7范围内,100℃处理1min仍能保持原酶活性,但在碱性环境中该酶对热稳定性较差。
最适pH为6.6,等电点pH=10.5-11。
在实际应用中,溶菌酶具有抗菌、抗病毒、止血、消肿、镇痛及加快组织修复等功能,因此,可用于医疗和食品添加剂,用于提取微生物细胞内各类物质和进行原生质体制备及融合育种。
近年来,在饲料行业中也开展了一些有关溶菌酶的应用方面的研究工作,但还有待于进一步的研究开发,为了更好地促进这一开发研究工作,本文概述了国内外有关溶菌酶在畜禽饲料添加剂方面的应用情况。
2.溶菌酶的抑菌机理溶菌酶是一种碱性蛋白,相对分子量为14.6×103,它的一级结构由129个氨基酸残基组成2200个原子,其稳定性主要与多级结构中的4对二硫键、氢键及疏水键有关,而且它通过其肽键上的第35位的谷氨酸和第52位的天冬氨酸构成的活性部位水解破坏组成微生物细胞壁的N—乙酰氨基葡糖(NAG)—N乙酰氨基葡糖乳酸(NAM)间的β—1,4糖苷键,使革兰氏阳性菌体细胞壁不溶性多糖水解生成可溶性粘肽,是一种具有杀菌作用的天然抗感染物质.3.溶菌酶在畜禽饲料中的应用3.1作饲料防腐剂和杀菌剂由于溶菌酶本身是一种天然蛋白质,无毒性,是一种安全性高的饲料添加剂。
它能专一性的作用于目的微生物的细胞壁,而不能作用于其它物质。
该酶对革兰氏阳性菌、枯草杆菌,耐辐射微球菌有强力分解作用。
对大肠杆菌、普通变形菌和副溶血弧菌等革兰氏阴性菌等也有一定的溶解作用。
与聚合磷酸盐和甘氨酸等配合使用,具有良好的防腐作用,在饲料中添加溶菌酶可防止霉变,延长饲料的贮存期,减少不必要损耗。
溶菌酶用于饲料中,黄健等指出溶菌酶与葡萄糖氧化酶有增效作用,且抗酸作用还可以通过花生四烯酸的加入可到进一步增强。
3.2具有防治仔猪腹泻的作用 Linderman等报道,仔猪断奶时,胰腺的分泌突然下降,使动物消化功能出现短期障碍,养分吸收降低而导致腹泻。
添加溶菌酶制剂后能有效地控制因消化不良而引起的腹泻。
因为溶菌酶可以提高内源性蛋白酶的活性,促使抗炎多肽的产生,因而具有抵抗和消除炎症的作用。
李小辉等[15]报道它与免疫球蛋白在功能上有着紧密的联系,并能与其它生命活性物质入补体增强抗体的活性,从而杀灭细菌,因为溶菌酶对引起仔猪腹泻的埃希氏大肠杆菌和轮状病毒具有较强的抑制作用。
在现代饲料工业中,经常使用微生物添加剂[16],其作用是维持动物体消化道内微生态平衡。
在微生态系统中,微生物添加剂抵抗病原菌的主要方式是依靠竞争性排斥作用,即产生不利有害菌的产物,例如产生溶菌酶和抗菌物质,乳酸、过氧化氢等[17]。
Morgan等报道溶菌酶制剂还能有效防止球虫病。
饲喂小麦基础日粮的鸡,添加和不添加酶对球虫病的应激呈现不同的反应,对照组鸡生长被抑制52.5%,而加酶组为30.5%,而且损伤系数要好得多。
3.3用于防治胃肠炎、消化不良等疾病胃肠道微生物区系过度发酵会干扰消化的正常生理过程。
Choct等认为,完整的可溶性NSP的提高将以有害的方式增加小肠中发酵微生物的活性。
Carre等报道,添加酶制剂后,使NSP 的分子量减小,降低食糜粘度,从而减少回肠微生物发酵,增加盲肠的发酵作用,为机体提供部分能量,相应改善动物的生产性能。
胃肠道微生物的发酵状态还与动物的某些疾病有关,NSP的增加使发酵水平提高。
添加酶制剂后,可使结肠和直肠中短链脂肪酸的产生显著下降,从而预防某些疾病的发生。
酶还能改变肠道微生物群,增加肠道有益菌,使肠道内的胺,甲酚等有害物减少,增加机体抗病力,提高动物的生产性能。
南京农业大学畜牧系王林云教授于1993年11月2日至1994年1月31日,在吴江市第一畜场进行了肉猪饲养重复试验结果,增重提高12.7%,每千克增重少耗料0.27,每头肥猪增收24.14元。
苏州市畜禽公司、苏州新城饲料研究所于1993年9月1日至10月19日进行“爱维菌”肉鸡饲养试验结果,育成率提高3.85%,增重率提高12.9%,每千克增重少耗料0.23千克,每羽提高经济效益1.32元。
邵春荣等经饲喂肉仔鸡、犊牛、仔猪等畜禽证明,溶菌酶可用于防治畜禽肠胃炎、消化不良及化脓性过程,另外还可起到非专用性生长激素的作用。
“利多命”酶制剂,是日本田边制药公司生产的,含有瘤胃内容物、复合酶制剂、酵母、磷酸氢钙、纤维素酶、丙酸和硫酸钴等。
其添加量(9/头·日),羊和犊牛为30~50,成年牛为100~200,与饲料混匀后喂用。
该产品可促食欲,具有加强瘤胃机能,提高饲料效率,预防前胃驰缓、食滞、急性膨胀、下痢等。
赵京杨报道,使用含乳酸杆菌、酵母菌、芽孢杆菌和白地霉菌等活菌的液态益生素饲喂仔猪,添加组日增重比对照组提高11.42%,腹泻率降低37.52%;聂实践使用腊样芽孢杆菌取得了良好效果,降低了仔猪的腹泻率、提高增重效果明显。
另有报道,通过给母猪饲喂益生素调整母猪体内微生物区系、净化母猪体内微环境,减少大肠杆菌等有害菌和氨等有害物质的排放改善外部环境,使仔猪减少了接触病源微生物的机会,从而降低仔猪腹泻等疾病的发生。
梁明振研究结果,添加益生素组平均日增重和饲料利用率分别比对照组提高4.6%和5.7%,血清总蛋白较对照组高,而血清尿素氨较对照组低,这也说明益生素对仔猪的生产性能和仔猪对饲料蛋白质的利用具有良好的促进作用;张国龙等报道,35日龄断奶仔猪日粮中添加0.2%~0.4%活菌制剂可使粪中大肠杆菌总数明显降低,同时血清中SOD酶的活性高于对照组约为3.4个亚硝酸单位,增加35%。
根据Jon A Vander hoof临床及其引起的紊乱(包括轮状病毒引起的腹泻、与抗生素有关的腹泻、梭菌引起的腹泻等)。
3.4可促进鸡体的健康在不用任何抗生素情况下,于肉鸡饲料中添加饲用溶菌酶制剂,可促进鸡体的健康,提高增重和饲料报酬,减少死亡。
邵春荣等用自制的饲用溶菌酶制剂作为饲料添加剂,对175羽肉用仔鸡进行了饲养对比试验,结果显示:在不用任何抗生素的情况下,添加4~100mg/kg的饲用溶菌酶制剂,试验组平均增重比对照组提高2~2.8%,饲料消耗量降低2.1~5.2%,存活率提高14~17%,饲料报酬提高5.0~8.8%,自制的溶菌酶制剂活力高(1200~2000U/mg)添加量小,容易保存,饲喂效果明显。
曹江山等采用添加了溶菌酶的万康迪饲用酶制剂饲喂同一鸡舍的鸡,试验表明,产蛋数增加7.04%,蛋重增加7.06%,产蛋率提高5.76%,饲料转化率提高6.69%,比对照组增加收入0.46元。
纯的溶菌酶生产需时长、劳动量大,成本高,而在畜禽养殖业上应用则可用粗制品。
Okonenona.T等用鸡蛋白在0~4℃下添加5%苛性钠和氯化钠,加热,得到白色凝胶状物,用于饲喂肉鸡,结果活重比对照组提高2%,饲料报酬提高5.0~8.8%,存活率提高2~9%。
3.5促进饲料中营养物质的消化、吸收饲用溶菌酶可以促进饲料中营养物质的消化、吸收,提高饲料的消化率,最大限度地提高饲料原料的利用率[32]。
3.6在水产养殖工业中的应用活菌制剂[33]中有益微生物进入水产动物机体后,形成优势菌群,产生溶菌酶、过氧化氢等物质,可杀灭潜在病原菌,并且产生各种消化酶,有利于养分分解,具有高度安全性,不会对水产动物产生任何危害,也不会在水中和鱼体内有残留。
4溶菌酶使用时的注意事项在使用溶菌酶时首先应充分研究掌握溶菌酶的特性,其次,要控制好物理因素如水分、pH值、离子强度等对其活性的影响。
因为溶菌酶通常对革兰氏阳性菌的作用非常有效,但对革兰氏阴性菌则无效或效果很差,因此首先要弄清要抑制菌的微生物种类,才能更大程度地发挥溶菌酶的作用[1]。
5小结及展望由于饲料工业中长期使用抗生素而导致畜禽细胞免疫及体液免疫功能下降,同时抗生素可在畜禽体内残留而危及人类的健康,饲料工业中急需无毒、无害的添加剂[34,35]。
饲用酶制剂应运而生[36],它们一般是直接用作饲料添加剂的水解酶。
可以改变肠道微生物群落,促进饲料的消化、吸收,提高饲料的利用率。
但是这类酶热稳定性差,易失活,在胃内酸性环境下易被破坏,因而起不到实际效果[37]。
但是饲用溶菌酶具有以下优点可补其不足:(1)热稳定性强、耐酸性,便于储藏和运输,是一种安全性很高的添加剂[38]。
(2)饲用溶菌酶可使用溶菌酶的粗制品,节省了生产成本,同时还具有添加量小、容易保存等优点。
(3)作为畜禽饲料添加剂酶类,应在饲料加工及通过胃内酸性环境时仍能保持较高的酶活力,溶菌酶所具有的耐热、耐酸特性为其用作饲料添加剂提供了保证[39]。
(4)最大限度地提高饲料原料的利用率,促进营养物质的消化和吸收[40]。
我国现有的溶菌酶的生产几乎都采用从鸡蛋清中提取溶菌酶,因此研究开发经济高效的溶菌酶生产方法是急需解决的问题。
预测今后饲用溶菌酶的生产及应用应在以下几个方面开展:(1)高效无毒菌株的筛选;(2)高效生产菌的基因重组;(3)新工业新技术的研究开发应用;(4)拓宽溶菌酶的品种及应用领域;(5)饲料高效防腐剂。