生物制品学实验指导
初中生物实验指导手册
初中生物实验指导手册生物实验是初中生物学重要的实践环节之一，通过开展实验可以帮助学生巩固理论知识，培养科学思维和实验技能。
本文将就初中生物实验的重要性、实验前的准备工作、实验中的注意事项以及实验后的总结等方面进行详细的阐述。
一、实验的重要性生物实验有助于学生从实践中深入理解生物学的理论知识和相关概念。
通过观察和操作，学生可以亲身体验生物现象，提高对生物学的兴趣和热爱，激发科学探索的欲望。
此外，生物实验还培养了学生的观察力、分析能力和实验技巧，提高了他们的科学素养和动手能力，为将来的科学研究奠定基础。
二、实验前的准备工作在进行生物实验之前，我们需要对实验的目的、原理、步骤和所需材料等进行充分了解。
首先，查阅相关实验指导书籍和教材，了解实验的背景知识和实验原理。
其次，准备实验室所需的器材和试剂，确保实验操作的顺利进行。
最后，制定实验计划，安排好实验的时间和地点，确保实验过程的安全和顺利进行。
三、实验中的注意事项在进行生物实验的过程中，我们需要注意以下几点。
首先，注意实验的安全性，保持实验环境整洁干净，避免发生危险和意外。
其次，严格按照实验步骤进行操作，注意实验器材的正确使用和操作方法的规范性。
在实验中，我们应当耐心观察和记录实验现象，准确记录实验数据，以便后续的数据分析和实验结果的呈现。
此外，我们还需要尊重和保护生物，遵守生物伦理和实验操作的道德规范。
四、常见的生物实验方法生物实验方法种类繁多，常见的有显微镜观察法、养殖观察法、病原微生物鉴定法等。
显微镜观察法可以帮助我们观察和研究微小的生物结构和细胞，了解生物的微观世界。
养殖观察法可以帮助我们观察和研究生物的生长发育、生态习性等现象，了解生物的动态变化。
病原微生物鉴定法可以帮助我们了解疾病的发生机制和传播途径，为疾病的预防和治疗提供科学依据。
五、常见的生物实验项目在初中生物实验中，常见的实验项目有观察植物细胞结构、观察鱼类的呼吸、观察昆虫的蜕变等。
生物制品生物活性效价测定方法验证指导原则
生物制品生物活性/效价测定方法验证指导原则一、前言对药品质量控制分析方法进行验证的目的是证明采用的方法适合于相应检测要求。
生物制品质量控制中生物活性/效价为反映生物制品有效性的关键质量属性，对相应的测定方法进行规范的验证是保障其适用性的前提。
本指导原则从验证方案的制定、各验证指标的具体验证策略、验证结果的记录和方法的监控及再验证的角度阐述了生物活性/效价测定方法验证相关的要求，旨在对新建的或拟修订的生物制品生物活性/效价测定方法所开展的验证工作进行规范与指导。
本指导原则中的生物活性/效价测定主要是指相对效价测定，该法系将供试品的生物反应与已知标准品产生的反应相比较，从而定量测定供试品相对于标准品的效价。
二、方法验证的基本要素1.验证方案方法验证需根据验证方案来完成。
验证方案不仅应包括验证设计、验证指标、合理的可接受标准和数据分析计划，还应涵盖不符合可接受标准时可采取的措施等。
1.1验证设计验证设计主要涉及样品的选择、实验变异来源的考量及试验重复策略等。
应采用具有代表性的样品进行验证试验，并在验证方案中注明所需样品的类型及数量。
实验变异的来源主要包括样品的制备、试验内和试验间的影响因素。
试验内变异可能受方法开发阶段所确定的实验条件（温度、pH、孵育时间等）、实验设计（动物数量、稀释度组数、每个稀释组的重复数、稀释度间隔等）、试验过程、系统适用性和样品适用性要求、统计分析等因素的影响。
而试验间变异主要受不同分析人员、不同试验时间、不同仪器设备和试剂批次等因素的影响。
因此，一个设计良好的验证方案应综合考量试验内和试验间变异的来源。
此外，每轮验证试验中标准品和供试品均应独立制备。
验证中使用的重复策略应尽量反映影响效价测定结果的实验因素。
1.2验证指标与可接受标准由于相对效价测定方法各具特点，并随分析对象而变化，因此需视具体方法拟订具体的验证指标，关于常见验证指标的具体讨论见本节“2.各验证指标的验证策略”项下。
化学药品和治疗用生物制品上市后研究技术指导手册
化学药品和治疗用生物制品上市后研究技术指导手册1. 背景在上市前研究数据基础之上，上市后研究要求和上市后风险控制是审评审批决策的要素；上市后研究更是药品全生命周期监管的重要环节。
我国的药品注册法规体系对上市后研究有明确的要求，如在《药品注册管理办法》（2007版）中规定，以下新药应进行上市后研究（Ⅳ期临床试验）：化药属于注册分类1和2类；生物制品新药等。
虽然有上述规定，但由于各种原因，长期以来，我国未能形成完善的药品上市后研究和评价体系，未能形成上市前、上市后研究和评价的良好衔接和全链路管理。
严重影响了对上市后药品的动态评估和全生命周期监管。
为尽快弥补这一不足，药品审评中心起草制定了《化学药品和治疗用生物制品上市后研究管理规范（草案）》，为使该规范能够良好实施，作为这一文件的配套文件，特制定本手册。
本技术指导手册主要从技术角度为申办人提供指导。
2. 研究目的基于不同的药物研发和监管历史，在对于药品安全、有效、质量可控的基本认识相同的情况下，不同的国家，对药品注册上市基本条件尺度的把握上会有所不同。
现实情况下，我国上市前临床研究的水平和质量相对薄弱，而临床对突破性治疗的需求非常强烈，这在一定程度上都影响到新药上市前证据的强度。
因而，者要求我们的上市后研究在关注安全性问题之外，可能要求更加丰富的临床药理学研究，可能要求增加随机对照临床试验以强化有效性数据等。
因而，对目前我国的上市后研究的目的应有以下内容：评估药物在普通或特殊人群中使用的获益与风险评价药物广泛使用条件下的有效性评估已知与药物使用有关的严重风险评估与药物使用有关的严重风险信号当数据提示存在严重风险的可能性时，鉴定其是否为非预期的严重风险进一步完善药物上市前的有效性数据完善临床药理学信息3. 研究类型药品上市后研究，是指针对上市后药品的安全性和有效性研究。
研究方法包括临床药理学研究、临床试验、调查（例如观察性流行病学研究）、动物实验以及实验室实验等。
兽用生物制品菌(毒、虫)种种子批建立试验技术指导原则
兽用生物制品菌（毒、虫）种种子批建立试验技术指导原则1 目的为兽用新生物制品研制人员进行兽用生物制品菌（毒、虫）种子批建立及各级种子鉴定提供原则性指导。
2 背景《兽药注册办法》和农业部第442号公告规定，兽用生物制品的制造应以种子批系统为基础。
种子批分三级：原始种子、基础种子和生产种子。
只有按照规定项目和方法进行检验证明合格的种子，方可用于生产兽用生物制品。
3 定义3.1 原始种子具有一定数量、背景明确、组成均一、经系统鉴定免疫原性和繁殖特性良好、生物学特性和鉴别特征明确、纯净的病毒（细菌、虫）株。
3.2 基础种子由原始种子制备、处于规定代次水平、一定数量、组成均一、经系统鉴定符合有关规定的活病毒（菌体、虫）培养物。
3.3 生产种子由基础种子制备、处于规定代次范围内、经鉴定符合有关规定的活病毒（菌体、虫）培养物。
4 种子批的建立4.1 原始种子批的建立选用某一菌（毒、虫）株用于兽用生物制品研制和生产后，即应建立原始种子批，以确保在制品的持续生产期内，能充分供应质量均一的种子。
原始种子批建立基本原则为对选定的菌（毒、虫）株进行纯培养，并将培养物分成一定数量、装量和成分一致的小包装（如安瓿），于液氮中或其他适宜条件下保存。
对原始种子批要按照有关要求做系统鉴定。
通常情况下，应对原始种子的繁殖或培养特性、免疫原性、血清学特性、鉴别特征和纯净性进行鉴定。
4.2 基础种子批的建立4.2.1 基础种子由原始种子经适当方式传代扩增而来，增殖到一定数量后，将相同代次的所有培养物均匀混合成一批，定量分装（如安瓿），保存于液氮中或其他适宜条件下备用。
按照规定项目和方法进行系统鉴定合格后，方可作为基础种子使用。
基础种子批应达到足够的规模，以便能够保证相当长时间内的生产需要。
4.2.2 基础种子代次的确定通常情况下，将基础种子传代至规定最高代次以上第3代，取不同代次水平的培养物进行含量、免疫原性试验，考察其繁殖特性和免疫原性的稳定性。
生物制药实训报告万能
一、实训目的通过本次生物制药实训，旨在使我对生物制药的基本原理、工艺流程以及相关设备有更深入的了解，提高实际操作能力，培养严谨的科学态度和团队协作精神。
二、实训环境实训地点：生物制药实验室实训设备：发酵罐、离心机、层析柱、培养箱、显微镜等实训材料：微生物菌种、培养基、生物制品原料等三、实训原理生物制药是指利用生物技术手段，从生物体中提取或合成具有生物活性的物质，用于治疗、预防和诊断疾病的药物。
本次实训主要涉及微生物发酵、提取和纯化等工艺。
四、实训过程1. 微生物发酵（1）接种：将微生物菌种接种到培养基中，培养至对数生长期。
（2）发酵：将培养好的菌种转移到发酵罐中，控制适宜的温度、pH、溶解氧等条件，使菌种大量繁殖。
（3）产物的提取：发酵结束后，通过离心、过滤等手段将产物从菌体中分离出来。
2. 提取（1）溶剂选择：根据目标产物的性质，选择合适的溶剂进行提取。
（2）提取方法：采用萃取、渗滤、吸附等方法进行提取。
3. 纯化（1）层析：采用柱层析、薄层层析等方法对提取物进行初步纯化。
（2）结晶：通过改变溶剂、温度等条件，使目标产物结晶析出。
4. 质量检测对纯化后的生物制品进行理化性质、生物活性、安全性等方面的检测，确保产品质量。
五、实训结果通过本次实训，我掌握了以下知识和技能：1. 生物制药的基本原理和工艺流程。
2. 微生物发酵、提取和纯化等操作方法。
3. 生物制品的质量检测方法。
4. 团队协作和沟通能力。
六、实训总结1. 在实训过程中，我深刻体会到生物制药的严谨性和复杂性，对生物制药产生了浓厚的兴趣。
2. 通过实际操作，我掌握了生物制药的基本技能，为今后的学习和工作打下了基础。
3. 在实训过程中，我学会了与团队成员密切配合，共同完成实验任务，提高了团队协作能力。
4. 针对实训过程中遇到的问题，我积极向老师请教，学会了如何解决实际问题。
七、改进建议1. 增加实训设备的种类和数量，提高实训效果。
2. 加强实训指导，提高学生的实际操作能力。
生物制品生物活性效价测定方法验证指导原则
生物制品生物活性效价测定方法验证指导原则1.实验原则：(1)合理设计实验方案，确保实验步骤正确并满足测定目的。
(2)严格控制实验条件，包括温度、湿度、pH值等，以确保实验结果的可比性和可重复性。
(3)定义实验规模，即所需实验样本的数量和重复次数，以确保实验结果的统计学意义。
2.验证原则：(1)验证方法应根据不同的生物活性效价指标进行优化，比如细胞毒性、抗菌活性、细胞增殖活性等。
(2)验证方法应包括特异性、线性范围、精密度、重复性、稳定性等指标的测定。
(3)验证方法应与已验证方法进行比较，以确保新方法的可靠性和准确性。
(4)验证方法的结果应可重复，以便其他实验室或研究人员能够再现实验结果。
3.数据分析原则：(1)采用适当的统计学方法分析数据，以确定实验结果的显著性。
(2)应选择合适的数据分析软件，以确保数据的准确性和可信度。
(3)对于重复测定数据，应计算平均值和标准偏差，并绘制误差线图，以展示数据的可靠性和可重复性。
(4)对于不同样品之间的比较，应采用合适的统计学方法，如t检验、方差分析等。
4.结果解释原则：(1)结果应清晰地呈现于报告中，包括数据表、图表等。
(2)结果应与先前的验证结果进行比较，以确定方法的可靠性和稳定性。
(3)结果应与已确定的指标进行比较，以确定生物制品的生物活性效价。
(4)结果应进行合理的解释，尽量避免过度解释或夸大结果的意义。
综上所述，生物制品生物活性效价测定方法验证指导原则涉及实验设计、验证方法、数据分析和结果解释等多个方面。
通过严格按照这些原则进行实验，可以确保生物制品生物活性效价测定方法的准确性和可靠性，从而为生物制品的质量控制和安全性评估提供有力的科学依据。
9402 生物制品稳定性指导原则
9402生物制品稳定性试验指导原则稳定性试验是贯穿于整个药品研发、临床、上市及上市后质量研究的重要内容，是产品有效期制定的依据，为药品的生产工艺、制剂处方、包装材料、贮存、运输条件等方面提供依据，同时也是产品质量标准制定的基础。
生物制品对温度、湿度、光照等环境因素影响更为敏感，为保证其安全有效，避免失活或降解，必须根据产品的特点开展相应的稳定性试验。
本指导原则适用于生物制品稳定性研究设计和结果分析等。
对于一些特殊品种，如基因治疗和细胞治疗类产品等，还应根据产品的特点开展相应的研究。
本指导原则的目的是规范生物制品稳定性试验研究与评价，以便更加全面、科学、有效地开展相应工作。
1. 方案制订稳定性试验应制订产品稳定性评价的详细方案。
该方案能支持产品建议的贮存条件和有效期。
方案应包含证明产品稳定性的试验类别、试验样品、试验项目、试验条件、试验时间和结果分析等内容。
2. 试验类别稳定性试验主要包括影响因素试验、加速试验和长期试验等。
影响因素试验是考察各种极端因素(如高温、光照、反复冻融、振动、氧化、酸碱等相关条件)对产品的影响，目的是探讨药物的固有稳定性、了解影响其稳定性的因素及可能的降解途径与降解产物，为制剂生产工艺、包装、贮存条件和建立降解产物分析方法提供科学依据。
加速试验是通过提高的温湿度探讨药物的稳定性，为制剂设计、包装、运输、贮存提供依据。
长期试验是在设定的贮存条件范围内进行，其目的是为制定有效期提供依据。
3. 试验样品可分为上市前和上市后试验样品，通常包括原液、成品及产品自带的稀释液或重悬液等。
对需要保存一定时间的中间产品也应进行相应的稳定性研究。
上市前稳定性试验的样品至少应为三批，上市后稳定性试验的样品批数可根据产品特性、工艺、规模等因素确定。
若发生会影响产品稳定性的变更应取三批样品进行稳定性试验。
原液或中间产物尽量釆用与规模化生产时相同材质的容器和密闭系统；成品应釆用与规模化生产时相同的包装容器与密闭系统。
《生物制品技术》实训环节课程标准
《生物制品技术》实训环节课程标准学分：2.5学时：18适用专业：生物技术及应用一、课程的性质与任务课程性质：生物制品技术是生物技术专业、生物制药、生物工程的专业基本能力课。
它是随着生物技术的进步和疾病防治的需要而逐步发展起来的一门新兴学科。
主要研究各类生物制品（即以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成，用于人类疾病的预防、治疗和诊断的药品）的来源、结构功能、生产工艺、原理、应用等多方向知识，以微生物学、免疫学、生物化学、分子生物学等学科为理论基础、以现代生物技术为技术支撑的一门新的独立学科，在生物医学领域占据着重要的地位。
本实验以生物制品生产基础技术、生物制品生产工艺、生物制品质量检验、生物制品的质量管理、典型生物制品的制备及应用的基本操作、基本技能为基础，从加强基础、培养能力、提高素质的教学目标出发，精选实验，优化实验教学内容，力求在培养学生动手能力的同时培养学生的独立思考、综合分析的能力，形成科学的思维能力和创新意识。
使高职高专院校相关专业学生具备了相应的职业岗位能力，可以胜任兽用、人用等生物制品企业的培养基生产工、生物制品检定工等工种工作。
课程任务：本课程系统以生物制品为主线，围绕生物制品的生产、质量检验、运输保存使用等内容，系统介绍了生物制品相关的基本技能，以及目前生物制品生产涉及的新技术和新方法。
通过实验课教学，使学生掌握生物制品生产基础技术、生物制品生产工艺、生物制品质量检验、生物制品的质量管理、典型生物制品的制备及应用的基本操作、基本技能，成为能够适应生物技术行业第一线需要，具有良好的职业素养、团队协作能力的高技能人才。
前导课程：普通生物学、有机化学、无机与分析化学、生物化学、微生物与免疫学基础、微生物检验技术。
平行课程：生物分离纯化技术、酶制品技术、生物检测技术、生物产品检验技术。
后续课程：企业质量管理体系、实验室组织与管理。
二、课程教学标准1、技能（1）生物制品生产基本技术：洗刷技术、培养基制备与灭菌技术、发酵技术、病毒感染细胞技术、细胞培养技术、分离纯化技术、分装与冻干技术、包装技术、生物安全防护技术。
生物制品学实验指导
生物制品技术实验指导生物工程系目录实验规则⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 2 实验一、猪瘟、口蹄疫抗体间接血凝实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 3 实验二、鸡新城疫灭活疫苗的制备—照蛋及接毒⋯⋯⋯⋯ 4实验三、鸡新城疫灭活疫苗的制备—鸡胚收毒及测效价⋯⋯ 5 实验四、鸡新城疫灭活疫苗的制备—油乳苗的制备⋯⋯⋯⋯ 6实验五、氢氧化铝和蜂胶的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7 实验六、法氏囊炎病高免卵黄抗体的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8 实验七、法氏囊炎病高免卵黄抗体效价的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯9 实验八、兔瘟灭活苗的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10 实验九、大肠杆菌自家灭活疫苗的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11 实验十、动物实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12 实验十一、鸡白痢平板抗原的制备及使用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15 实验十二、免疫血清的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16 实验十二、细菌冷冻真空干燥实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18实验规则实验中所用材料，多具有传染性（如病原微生物、含病原微生物的血、尿、便、痰、脓汁及感染动物等），在实验过程中，必须严肃认真地进行无菌操作，以保证结果准确，防止实验室感染，防止病原微生物污染环境。
必须遵守以下各项。
1、实验前必须预习实验指导书。
若经提问发现没有预习者，须在教师指定的时间内预习完毕，方得参加实验。
、进实验室不得将书包、衣物等放在实验1台上，不必需的物品勿携入室内。
2、实验室内严禁饮食、吸烟及用嘴舔湿铅笔及瓶签，、如发生感染或污染等意外时，应立即报告指导老师，进行紧急处理。
5、保持实验室安静，不得谈笑喧哗，不许搞其他动作，以免影响他人实验。
实验进行时不准随意进出。
实验室中物品未经许可不准带出室外。
6、清洗仪器、用具、材料时，须将固形物倒入指定容器内，不得直接倒入水槽，以免造成水管堵塞。
7、实验过程中，须按操作规程仔细操作，注意观察试验结果，应及时记录。
不得抄写他人的实验实习记录，否则，须重做。
生物制品强制降解试验怎么做
强制降解研究是通过改变生物制剂的各种条件（例如pH、温度、光照、化学试剂（例如，氧化剂、脱酰胺剂等）和机械力（例如震荡等））进行的，以加速化学降解，物理降解或产生不稳定分子。
当前，尚无可用于定义如何对生物药物进行强制降解研究的行业指南。
我们今天所介绍的内容仅提供有用的一般定义，一般性评论以及有关降解研究的粗略概念。
由于每个生物制品分子都不相同，因此对于强制降解研究，没有必要针对具体范围或确切条件制定严格的指导原则，并且选择生物药品的应激条件的自由度是固有的。
因此，应根据每个生物制品的具体情况应该仔细选择强制降解的条件。
法规指导文件对强制降解试验的规有以下期望： 1、生物制品制造商应提供该产品的稳定性试验指示资料，以确保该产品在稳定性条件下可以检测的到产品特性，纯度和生物效力等指标的稳定性变化数据。
2、强制降解试验研究的结果是提供给监管机构的申报信息的组成部分。
此外，将生物药物暴露于强制降解条件下的研究，对于确定是否意外暴露于其他所涉及的强制降解之外的条件下（例如在运输过程中）是否会产生生物制品分子的变化，强制降解所设计的试验条件最好尽可能的包含这些条件。
制品的包装压力研究对于评估那些特定测试参数可能是产品稳定性的最适指标也很有用，应在建议的存储条件下进行监测和研究。
强制降解试验的目的强制降解研究的定义是，强制降解试验也称破坏性试验，是分别对原料药、制剂与参比制剂进行强制降解试验，破坏样品的图谱应与空白溶液、空白辅料和未破坏样品的图谱进行对比，其目的是为了了解不同破坏条件下药物的降解产物和降解途径。
强制降解试验可以为分析方法的建立、说明书的制定和处方设计的确定等提供有益的参考。
通过各种应激剂（包括机械应力）在适当程度上故意破坏生物制品分子，以加速生物药物的化学和物理降解以及不稳定性。
强制降解研究可以提供有关特定生物药物可能降解产物的一系列信息。
该信息对于许多目的都是有用的，并且可以帮助建立分子的降解途径和固有稳定性。
生物制药实验操作作业指导书
生物制药实验操作作业指导书一、实验目的生物制药实验操作作业旨在使学生掌握生物制药相关实验操作技能，了解生物制药的基本原理和实践应用。
二、实验材料和仪器1. 材料：- 细菌培养基- 酵母- 细胞培养基- 抗生素- 溶液和缓冲液- 蛋白质纯化试剂盒- 电泳试剂- 试剂盒等2. 仪器设备：- 培养皿和培养皿架- 培养箱- 离心机- 超声波处理仪- 十分摄氏计- 离子交换层析仪- 高效液相色谱仪（HPLC）- 电泳仪等三、实验操作步骤1. 细菌培养实验a. 准备培养基：按照实验要求配制细菌培养基。
b. 接种细菌：使用无菌技术将待测的细菌接种到培养基中。
c. 培养细菌：将接种好的培养皿放入培养箱中，设置适当的温度和培养时间。
d. 观察细菌生长：根据培养后的结果进行观察和记录。
2. 酵母发酵实验a. 准备培养基：按照实验要求配制酵母培养基。
b. 接种酵母：使用无菌技术将待测的酵母接种到培养基中。
c. 培养酵母：将接种好的培养皿放入培养箱中，设置适当的温度和培养时间。
d. 观察酵母发酵：根据培养后的结果进行观察和记录。
3. 细胞培养实验a. 准备培养基：按照实验要求配制细胞培养基。
b. 接种细胞：使用无菌技术将待测的细胞接种到培养基中。
c. 培养细胞：将接种好的培养皿放入培养箱中，设置适当的温度、湿度和培养时间。
d. 观察细胞生长：根据培养后的结果进行观察和记录。
4. 抗生素敏感性实验a. 准备培养基：按照实验要求配制含有不同浓度抗生素的培养基。
b. 接种细菌：使用无菌技术将待测的细菌接种到培养基中。
c. 观察菌液浑浊度：根据培养后的结果观察菌液的浑浊程度，判断细菌对抗生素的敏感性。
5. 蛋白质纯化实验a. 细胞破碎：使用超声波处理仪等方法破碎细胞，释放目标蛋白质。
b. 离心分离：使用离心机将细胞碎片和其他杂质分离出来，获得上清液。
c. 层析纯化：使用离子交换层析仪等方法对上清液进行纯化，得到目标蛋白质。
d. 浓缩和储存：使用适当的方法将目标蛋白质浓缩并储存，以便后续的研究或应用。
生物制品生物技术产品的稳定性试验
⽣物制品⽣物技术产品的稳定性试验Q5c⼈⽤药品注册技术要求国际协调会ICH三⽅协调指导原则ICH指导委员会在1995年11⽉30⽇ICH进程第四阶段推荐采纳该指导原则由相应的ICH专家⼩组制定，按照ICH进程，已递交管理部门讨论。
在ICH进程第四阶段，最终草案被推荐给欧盟、⽇本和美国的管理机构采纳。
⽣物技术/⽣物制品质量:⽣物技术/⽣物制品稳定性试验1.引⾔由ICH三⽅协调制定的“新药原料及制剂稳定性试验”(1993年10⽉27⽇)的指导原则总体上适⽤于⽣物技术产品及⽣物制品。
然⽽，⽣物技术产品及⽣物制品确有其明显的特点，因此，在设计实验⽅案，确证在预期的贮藏期内制品的稳定性时，需要考虑这些特点。
由于这类制品的活性成分⼀般是蛋⽩质和/或多肽，因此，维持其分⼦构型，从⽽保持其活性取决于共价键和⾮共价键的作⽤⼒。
这些制剂对诸如温度变化、氧化、光照、离⼦含量及切割⼒等环境因素较为敏感，为保持其⽣物活性，避免降解，必须严格规定其贮藏条件。
稳定性的评价可能需要采⽤复杂的分析⽅法。
⽣物活性测定是稳定性研究的关键内容之⼀。
在制品纯度和分⼦特性允许的情况下，⽤适当的理化、⽣化和免疫化学的⽅法分析分⼦实体及定量检测降解产物也是稳定性研究的⼀部分。
申报者应根据以上所述的这些概念，提供能⽀持⽣物技术产品及⽣物制品稳定性的数据，同时还应考虑到许多外部条件亦会影响产品的效价、纯度和质量。
应根据长期、真实时间、真实条件的稳定性研究的初步数据制定原材料和制剂的贮藏期。
由此可见，合适的长期稳定性研究是成功开发上市产品的关键。
本⽂旨在指导申报者在产品上市申请时应提供的各类稳定性研究资料。
申报者还应认识到，稳定性数据在审评过程中需不断更新。
2. 附件的范围本附件适⽤于明确的蛋⽩质、多肽及其衍⽣物和含有这些衍⽣物的制剂以及从组织、体液、细胞培养物中分离或是⽤DNA 重组技术⽣产的产品。
因此，该⽂件涵盖了以下品种的稳定性资料的研究和申报:细胞因⼦类(⼲扰素、⽩介素、集落刺激因⼦、肿瘤坏死因⼦)、促红细胞⽣成素、纤溶酶原激活素、⾎浆因⼦、⽣长激素和⽣长因⼦、胰岛素、单克隆抗体和由明确的蛋⽩质和多肽构成的疫苗。
细胞生物学实验指导
实验一动物细胞的传代培养一、实验目的1．熟悉细胞培养过程中的无菌操作技术。
2．了解细胞传代培养的基本方法和主要操作步骤二、实验原理细胞培养(cell culture)是指从机体内取出某种组织或细胞，模拟机体内的生理条件使其在体外生存、生长和繁殖的过程。
细胞的体外培养在细胞生物学和医学研究领域有着极为广泛的用途，这一技术已成为研究细胞生理、细胞增殖、细胞遗传、细胞癌变和细胞工程等课题的一项不可缺少的手段。
细胞培养技术的突出优点在于能为研究者提供大量的生物性状相同的细胞作为研究对象，便于人们在体外利用各种不同的方法从不同的角度研究细胞生命活动的规律。
另外，利用细胞培养技术还可使人们较为方便地研究各种物理、化学和生物因素对细胞结构和功能的影响。
细胞培养可分为原代培养和传代培养2种情况。
所谓原代培养(primary culture)是指直接从机体取出组织或细胞后所进行的首次培养。
而传代培养(subculture)是指当原代培养的细胞增殖到一定密度后，将其从原培养容器中取出，以1：2或其他比例转移到另一个或几个容器中所进行的再培养。
传代培养可简称传代。
在体外培养过程中，要使细胞能正常地生长、繁殖，需经常对其进行传代。
传代的累积次数就是细胞的代数。
在从事细胞培养工作时常常会接触到细胞系(cell line)和细胞株(cell strain)这两个容易混淆的概念。
一般认为，细胞系指通过原代培养并经传代后所形成的细胞群体，由于细胞系来源于原代培养，而原代培养物中所含的细胞种类较多，故一个细胞系往往由多个生物学性状不同的细胞群体所组成，而细胞株是利用单细胞分离培养法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中选择出的细胞群体，一个细胞株往往具有特殊的生物学性状或标记并可持续存在。
细胞培养是一种程序复杂、条件较多且要求严格的实验性工作。
由于细胞在体外的生长、繁殖会受到温度、营养物质、酸碱度、渗透压及微生物等多种因素的显着影响，故细胞培养工作的各个环节如培养器皿清洗消毒、营养液配制和除菌、pH值调整、温度调节等操作都有严格的要求和规定，特别要注意无菌操作，这是细胞体外培养成败的关键。
Q5c生物技术／生物制品质量：生物技术／生物制品稳定性试验
生物技术／生物制品质量：生物技术／生物制品稳定性试验1．引言由ICH 三方协调制定的“新药原料及制剂稳定性试验”(1993 年10 月27 日)的指导原则总体上适用于生物技术产品及生物制品。
然而，生物技术产品及生物制品确有其明显的特点，因此，在设计实验方案，确证在预期的贮藏期内制品的稳定性时，需要考虑这些特点。
由于这类制品的活性成分一般是蛋白质和/ 或多肽，因此，维持其分子构型，从而保持其生物活性取决于共价键和非共价键的作用力。
这些制剂对诸如温度变化、氧化、光照、离子含量及切割力等环境因素较为敏感，为保持其生物活性，避免降解，必须严格规定其贮藏条件。
稳定性的评价可能需要采用复杂的分析方法。
生物活性测定是稳定性研究的关键内容之一。
在制品纯度和分子特性允许的情况下，用适当的理化、生化和免疫化学的方法分析分子实体及定量检测降解产物也是稳定性研究的一部分。
申报者应根据以上所述的这些概念，提供能支持生物技术产品及生物制品稳定性的数据，同时还应考虑到许多外部条例亦会影响产品的效价、纯度和质量。
应根据长期、真实时间、真实条件的稳定性研究的初步数据制定原材料和制剂的贮藏期。
由此可见，合适的长期稳定性研究是成功开发上市产品的关键。
本文旨在指导申报者在产品上市申请时应提供的各类稳定性研究资料。
申报者还应认识到，稳定性数据在审评过程中需不断更新。
2 ．附件的范围本附件适用于明确的蛋白质、多肤及其衍生物和含有这些衍生物的制剂以及从组织、体液、细胞培养物中分离或是用DNA重组技术生产的产品。
因此，该文件涵盖了以下品种的稳定性资料的研究和申报：细胞因子类(干扰素、白介素、集落刺激因子、肿瘤坏死因子)、促红细胞生成素、纤溶酶原激活素、血浆因子、生长激素和生长因子、胰岛素、单克隆抗体和由明确的蛋白质和多肤构成的疫苗。
本指导原则的下列章节，在与药品管理机构协商后，还可用于其他类制品，如传统疫苗；但不包括抗生素、变态原提取物、肝素、维生素、全血或血细胞成分。
动物试验相关指导原则
01
基因工程产品的安全评价
02
其它安全试验
○ 用于制备兽用生物制品的一些非生物源性物质，如矿物油佐剂、 铝胶佐剂等，用于食品动物后，可能对人类的生命健康造成危 害，这类制品的安全试验中应包括靶动物的残留试验，为制定 该制品的休药期提供必要的支持性数据
○ 定量免疫定量强 ○ 定量免疫变量强 ○ 变量免疫定量强毒攻 ○ 抗血清或卵黄抗体
毒攻击法
毒攻击法
击法（PD50试验） 被动免疫攻毒法
靶动物免疫攻毒试验
兽用生物制靶动物免疫攻毒保护力相关性的研究（最小免疫剂量 试验）
免疫产生期及免疫持续期试验
○ 主动免疫的免疫期 ○ 被动免疫的免疫期 血清学效力检验与靶动物免疫攻毒保护相关性的研究 不同血清型或亚型间的交叉保护力试验 实验动物效力检验与靶动物效力检验结果相关性的研究 子代通过母源抗体获得被动免疫力的效力和免疫期试验 不同接种途径对靶动物的效力试验 接种后动物体内抗体消长规律的研究
兽用中药和天然药物临床试验技术指导原则
(一)靶动物安全性试验 (二)实验性临床试验 (三)扩大临床试验
靶动物安全性试验每组最低动物数
受试动物种类
马、牛等大动物 羊、猪等中动物 兔、貂、狐等小动物
犬、猫等宠物 家禽
动物数
5 8 10 8 15
实验性临床试验每组最低动物数
受试动物种类
马、牛等大动物 羊、猪等中动物 兔、貂、狐等小动物
他实验在同一环境中进行； 如确实需要与其他动物一起实验，需要考虑是否会相互影响，如大肠杆菌
攻毒不宜与其他实验一起开展。 试验开展前，需要检查保温设备、通风设备、防蛇鼠、笼具等是否完好，
水槽、料槽、饲料是否齐全。
二 开始实验
兽用生物制品实验室安全试验技术指导原则
兽用生物制品实验室安全试验技术指导原则1 目的为兽用生物制品实验室安全试验研究提供原则性指导。
2 背景兽用生物制品的安全性是考察其质量的最重要指标之一。
《兽药注册办法》中对兽用生物制品的实验室安全试验项目进行了详细规定。
3 基本要求3.1 实验室及动物实验室的生物安全条件应符合国家有关实验室生物安全标准。
3.2 实验动物的要求实验室安全试验中所用实验动物应是普通级或清洁级易感动物，必要时应使用SPF级动物。
禽类制品的实验室安全试验多使用本动物，其它制品的实验室安全试验中除使用靶动物外，还须用敏感的小型实验动物（如啮齿类）进行试验。
试验中应使用敏感性最高的品系。
应使用最小使用日龄的动物进行试验。
每批制品的实验室安全试验中所用动物应不少于10只（头），来源困难或经济价值高的动物应不少于5只（头），鱼、虾应不少于50尾。
3.3 对制品的要求实验室安全试验中所用实验室制品的生产用菌（毒、虫）种、制品组成和配方等，应与规模化生产的产品相同。
试验性产品应经过必要的检验，且结果须符合要求。
试验性产品中主要成分的含量应不低于规模化生产时的出厂标准。
3.4 试验设计在试验开始前，必须制定详细的实验室安全试验方案，其内容应包括受试制品的种类，试验开始和结束的日期，试验动物的年龄、品种、性别等特征，制品的配方，对照组的设置，每组动物的数量，实验动物来源、圈舍、试验管理和观察方式，结果的判定方法及标准等。
4 实验室安全试验的内容和方法4.1 一次单剂量接种的安全试验按照推荐的接种途径，用适宜日龄的靶动物,接种1个剂量，至少观察2周。
评估指标应包括临床症状、体温、局部炎症、组织病变等。
对于可用于多种动物的生物制品，应该用各种靶动物进行安全试验。
4.2 单剂量重复接种安全试验对可能进行多次接种的生物制品，均须进行该试验。
按照4.1项进行，但在第1次接种后2周，以相同方法再接种一次，再次接种后应继续观察至少2周。
4.3 一次超剂量接种的安全试验按照4.1项进行，但接种剂量为免疫剂量的数倍至一百倍不等。
《已上市生物制品药学变更研究技术指导原则》
《已上市生物制品药学变更研究技术指导原则》《已上市生物制品药学变更研究技术指导原则》是为进一步规范我国生物制品药品变更研究工作而制定的指导原则。
本指南的主要目的是指导药品生产企业在生产过程中发生变更时如何进行科学、规范的评估和研究，保障生物制品药品的质量、安全与有效性。
本指南的适用范围包括已上市生物制品的各类变更事项，如生产工艺、原材料、生产设备、设施等的变更等。
变更研究应当由生产企业的质量管理部门牵头负责，他们应具备相应的研究水平和科研能力。
同时，相关变更研究也需要得到相关政府机构的监管与认可。
本指南确定了药品变更研究的工作内容。
其中包括对变更项目的详细描述，以及对变更带来的影响进行科学评估和风险评估。
同时，还需要制定相应的研究方案，明确实验设计、样品采集、实验分析等具体步骤和方法。
变更研究过程中还需确保数据的科学可靠性和准确性，充分记录数据和观察结果，并进行合理的数据分析和统计处理。
本指南还明确了变更研究的技术要求。
首先，需要建立完备的质量管理体系，在研究过程中进行全面的样品检测，确保数据的真实准确。
其次，需要充分了解和评估变更的风险和潜在影响，并制定相应的风险控制策略。
同时，还需要建立相应的实验室和设备，以满足变更研究的需要。
此外，还需要严格甄别变更研究的关键因素和指标，确保研究结果的可靠性和准确性。
在原则的制定中，企业需要与相关药品监管机构密切配合，及时汇报变更研究的进展情况，并向其提供变更研究的结果和相关文件。
同时，在变更研究的过程中，生产企业还需要建立健全的变更管理制度，确保变更的科学性、合规性和透明度。
此外，还需要定期进行变更研究的检查和审核，以保证研究工作的质量和有效性。
总之，《已上市生物制品药学变更研究技术指导原则》的制定旨在规范药品生产企业在生产过程中的变更管理和研究工作，以确保生物制品药品的质量、安全和有效性能够得到充分保障。
这将促进我国生物制品药品产业的发展，提高药品质量和安全水平，同时也将为相关企业提供更明确和可操作的指导。
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验技术实验医学研究中心编订2013-08实验一实验准备【目的】了解组织培养中实验器材的处理过程。
【概述】目前多数的实验室还达不到用后即弃的条件，常要反复使用一些器皿，在组织细胞培养中器材的清洗、消毒灭菌仍是重要环节，是一项繁重而艰苦的工作,而且工作量很大, 其主要目的是去除器皿上杂质及其对细胞生长有影响的物质及各种微生物。
【材料】1.玻璃器皿：培养瓶，血清瓶，试管，吸管2.塑料器皿：枪头，EP管【操作步骤】（一）玻璃器皿的处理玻璃器皿用于培养细胞、细胞冻存、培养用液的存放等。
提供细胞生长的玻璃表面不但要清洁干净，而且要带适当电荷。
苛性碱清洗剂会使玻璃表面带的电荷不适于细胞附着，需以HCL或H2SO4中和。
清洗玻璃器皿不仅要求干净透明、无油迹，且不能残留任何毒性物质。
为了保证清洗的质量，一般玻璃器皿的处理分为六个个步骤。
1.浸泡：新的玻璃器皿首先用自来水初步刷洗，5％稀盐酸溶液中浸泡过夜。
使用过的玻璃器皿用1‰的新洁尔灭或清水浸泡。
泡时应将器皿完全浸入水中，使水进入器皿内而无气泡空隙遗留。
2.刷洗：一般多用毛刷和洗涤剂或洗衣粉进行洗涤，以去除器皿内外表面的杂质。
3.浸酸：酸就是清洁液，由浓硫酸、重铬酸钾及蒸馏水桉一定比例配制而成,具有很强的氧化作用，去污能力很强，对玻璃器皿无腐蚀作用。
经清洁液浸泡后，玻璃器皿残留的未刷洗掉的微量杂质可被4.流水灌满、倒掉，须重复十次以上，然后，再用蒸馏水漂洗2～3次，最后用三蒸水漂洗一次。
烤箱内烘干备用。
5.包装：包装的目的是防止消毒灭菌后再次受到污染，所以经清洗烤干的器材应严格包装后再进行消毒灭菌处理。
6.消毒灭菌：包括干热消毒和湿热消毒。
干热消毒一般在烤箱中进行，主要用于消毒玻璃器皿，需加温到160℃，保持90～120min方能杀死芽孢。
湿热消毒是一种有效的消毒方法,一般使用高压蒸汽灭菌器进行消毒。
因物品不同，其有效灭菌压力和时间不同，一般物品（如布类、金属器械、玻璃器皿等）消毒的要求是101.33kpa（相当于15磅,121℃）20min，某些培养用液、橡胶制品、塑料器皿等要求为67.55kpa (相当于10磅,115℃)10min。
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生物制品技术实验指导生物工程系目录实验规则 (2)实验一、猪瘟、口蹄疫抗体间接血凝实验 (3)实验二、鸡新城疫灭活疫苗的制备—照蛋及接毒 (4)实验三、鸡新城疫灭活疫苗的制备—鸡胚收毒及测效价 (5)实验四、鸡新城疫灭活疫苗的制备—油乳苗的制备 (6)实验五、氢氧化铝和蜂胶的制备 (7)实验六、法氏囊炎病高免卵黄抗体的制备 (8)实验七、法氏囊炎病高免卵黄抗体效价的测定 (9)实验八、兔瘟灭活苗的制备 (10)实验九、大肠杆菌自家灭活疫苗的制备 (11)实验十、动物实验 (12)实验十一、鸡白痢平板抗原的制备及使用 (15)实验十二、免疫血清的制备 (16)实验十二、细菌冷冻真空干燥实验 (18)1实验规则实验中所用材料，多具有传染性（如病原微生物、含病原微生物的血、尿、便、痰、脓汁及感染动物等），在实验过程中，必须严肃认真地进行无菌操作，以保证结果准确，防止实验室感染，防止病原微生物污染环境。
必须遵守以下各项。
1、实验前必须预习实验指导书。
若经提问发现没有预习者，须在教师指定的时间内预习完毕，方得参加实验。
、进实验室不得将书包、衣物等放在实验台上，不必需的物品勿携入室内。
2、实验室内严禁饮食、吸烟及用嘴舔湿铅笔及瓶签，、如发生感染或污染等意外时，应立即报告指导老师，进行紧急处理。
5、保持实验室安静，不得谈笑喧哗，不许搞其他动作，以免影响他人实验。
实验进行时不准随意进出。
实验室中物品未经许可不准带出室外。
6、清洗仪器、用具、材料时，须将固形物倒入指定容器内，不得直接倒入水槽，以免造成水管堵塞。
7、实验过程中，须按操作规程仔细操作，注意观察试验结果，应及时记录。
不得抄写他人的实验实习记录，否则，须重做。
如有疑问，应向指导教师询问清楚后方可进行。
8、实验完毕后，须将玻璃仪器、用具等清洗干净，按原来的位置摆设放置，如有破损须报告指导教师，并填写仪器损坏登记簿。
关好门窗水电，用消毒液洗手后离去。
10、实验结束后，由值日生负责打扫实验室，保持室内整洁，注意关上水、电、窗、门。
2实验一猪瘟（HC）、口蹄疫（FMD）抗体间接凝集试验一、目的要求：掌握正向间接凝集反应原理及操作方法。
二、原理：将病毒抗原吸附于醛化红细胞上，带抗原的红细胞可以和抗体发生凝集，从而可以检测被检猪的相应抗体水平。
三、材料：微量反应板、移液器、滴头、HC诊断抗原、FMD诊断抗原、被检血清、阳性血清、阴性血清各一瓶、生理盐水、微量振荡器、胶布适量。
四、方法步骤：1、用移液器加滴头吸生理盐水。
加入微量反应板孔内一排8孔，每孔加50微升。
2、换一滴头吸一被检血清从第一孔加入50微升，吹吸3次（1：2）吸此孔液体到第2孔，吹吸3次，（1：4），依次类推倍比稀释至第8孔，第8孔再弃去50微升。
这样每孔均为50微升，稀释度分别为1：2、1：4……1：256。
3、换一滴头吸HC诊断抗原各25微升，分别加入第4孔、第6孔。
4、换一滴头吸FMD诊断抗原各25微升，分别加入第5孔、第7孔。
5、每组做1份对照：在反应板最后一排分别滴阳性血清、阴性血清各2孔，并分别加HC、FMD诊断抗原各25微升。
6、在微量振荡器上振荡2min，室温下（25-30℃）1.5—2h观察。
7、其他同学重复做1—4步。
8、贴胶布、标明被检血清、组别、对照等。
9、结果判断：HC抗体凝集（++）1：16以上为合格；FMD抗体1：128以上为合格。
五、思考题：1、正向间接反应的原理是什么？2、该试验应注意哪些事项？如何判定自己做的结果准确？3、当结果出现错误时，有哪些原因造成的？3实验二鸡新城疫灭活疫苗的制备——照蛋及接毒一、目的要求：通过试验掌握鸡新城疫灭活油乳疫苗的制备方法。
二、原理：新城疫病毒可以在鸡胚中生长、并引起病变和鸡胚死亡。
收胚胎尿囊液毒后，可以利用血凝实验测定效价（NDV病毒具有血凝素，可自动凝集红细胞）。
符合标准后灭活、加佐剂可制成灭活疫苗。
三、材料：孵化10天的受精鸡胚、照蛋器、新城疫II系和IV系疫苗、生理盐水、1ml注射器、石蜡、滴头、注射针头、酒精棉球、镊子。
四、方法步骤：1、将鸡胚先照蛋、画出气室，用酒精棉球消毒接种部位、离气室边缘1cm（避开血管），先用消毒针头钻破蛋壳，然后针头与蛋成30度角进针0.5cm注入0.1mlNDV，1-4组接II系毒种，5-6组接IV系毒种，标记，每2人1个鸡蛋、接种后封蜡。
2、毒种的准备：将疫苗按1羽份0.1ml稀释，然后加入青链霉素溶液，使之达到含500单位青链霉素/ml，接毒时按0.1ml病毒液/枚蛋接种。
3、接毒后的鸡胚放入孵化箱中，37.5℃孵化，24h挑出死胚蛋弃去，其它继续孵化，以后每半天观察1次，挑出死胚，放入4℃冰箱冷藏，到96—120h不论是否死亡都放4℃冰箱冷藏1天。
五、思考题：1、如何确定鸡胚的死活？2、鸡胚接种有几种方法？日龄是多少？4实验三鸡新城疫灭活疫苗的制备——鸡胚收毒及测效价一、目的要求：掌握新城疫病毒血凝实验操作方法。
二、原理：新城疫病毒有血凝素，可以凝集鸡的红细跑，通过测血凝效价，知道尿囊液中病毒的含量。
三、材料：无菌吸头、脱脂棉、无菌剪子、镊子、无菌烧杯、微量反应板、0.5%鸡红细胞、移液器、滴头、离心机、生理盐水、酒精棉球。
四、方法步骤：1、提前准备0.5%鸡红细胞（鸡的抗凝血加生理盐水离心洗涤5次，3000转/分、最后配成0.5%红细胞）。
2、将气室用酒精棉球消毒、剪开气室、剪开尿囊膜、用吸头吸尿囊液于烧杯中（可垫少量脱脂棉花，防堵吸头。
）3、测效价：(1)取一微量反应板用移液器吸生理盐水，按第1-12孔各加加50微升。
(2)换1个滴头吸被检尿囊液50微升放于第1孔，吹吸3次，再吸此孔50微升到第2孔，依次类推，最后到11孔弃去50微升。
稀释度分别为1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64、1：128、1：256、1：512、1：1024、1：2048。
(3)空白12孔生理盐水50微升，做阴性对照。
(4)1—12孔各加入0.5%红细胞50微升，阴性对照也加入50微升0.5%红细胞。
(5)在微量振荡器上振荡2min，放入湿盒中，25℃、15min后开始观察到60min。
(6)判定病毒血凝效价，记录。
4、将尿囊液按每ml加500单位青链霉素，杀菌、4℃保存，同时加入0.1%甲醛灭活，4℃1天。
（一般合格弱毒疫苗病毒效价在1：512以上）。
5、尿囊液冰冻保存。
留做灭活油乳苗用。
五、思考题：1、记录你测的血凝效价是多少？是否合格？2、为什么血凝试验可测鸡新城疫病毒的效价？5实验四鸡新城疫灭活疫苗的制备—油乳苗的制备一、原理：油类是非特异性免疫佐剂，通过一定方法将水剂灭活疫苗和油类乳化在一起，可提高该疫苗的免疫效果。
二、目的要求：要求学生掌握灭活油乳苗的制备方法。
三、材料：白油、吐温-80、司本-80、硬脂酸铝、新城疫灭活水剂苗、高速捣碎机、量筒、烧杯、离心机、1ml吸管、离心管。
四、方法步骤：1、预准备：油相：将白油中加入2%硬脂铝酸、6%司本-80、加热溶化（160-170℃半小时），分装500ml瓶中，116℃灭菌30min，备用，同时灭菌吐温-80。
2、制水相：将水剂疫苗中加入4%吐温-80，高速搅拌2-5min。
3、乳化：将油相加入捣碎机中，缓慢搅拌，慢慢加入水相（1：1或1：2，水：油相），然后高速搅拌5min，即成。
4、检查：（1）黏度检查：吸1ml油乳苗放出（垂直）0.4ml为15s，此为适用黏度。
（2）稳定性：3000r/min离心15min不分层。
六、作业：1、记录操作方法和过程。
2、油水能乳化在一起的原理是什么？3、你做的油乳苗性能是否符合标准？影响因素有那些？6实验五氢氧化铝胶和蜂胶的制备一、原理：明矾水和氨水起反应生成铝胶。
铝胶是一个比较好的免疫佐剂，具有吸附沉淀、包埋作用、可增强免疫效果。
蜂胶的溶解和测定等级二、目的要求：要求学生掌握氢氧化铝胶的制备方法。
2KAI（SO4）2•12H2O+HN4OH——2AL（OH）3+K2SO4+3（NH4）+24H2O三、材料：明矾、水桶、电炉、氨水、搅拌器、PH纸、纱布、棉花。
四、方法步骤：1、明矾水的准备：先将明矾砸碎，将水烧至80℃左右，将明矾按20%加入、搅拌、溶化、澄清10-30分钟、虹吸上清液纱布棉花过滤。
2、合成：将60℃的明矾水搅拌，边搅边加入氨水（缓慢加入），当出现浓稠时，PH约8左右，停止加氨水。
3、打碎混匀。
将已合成胶放入打碎机中，打磨2遍。
4、洗去SO4²ˉ离子：将胶放入水桶1/4—1/5，补充干净水（纱布棉花过滤）到满桶，每天澄清1次，同时倒去上清水，再补充水，连续4次，以洗去SO4²ˉ。
5、将制成胶装500ml瓶，高压灭菌备用。
五、示教：磷酸三钙制备先配20%磷酸氢二钠和20%氯化钙灭菌。
在灭活菌液100ml中加入2.5ml20%氯化钙，摇匀，然后缓慢加入20%磷酸氢二钠7.5ml，搅拌匀，即成絮状磷酸三钙佐剂疫苗。
六、蜂胶制备：1)酒精融化：一班称50克蜂胶，4度下砸碎，倒入200毫升95%酒精中融化24h。
2)第2天滤纸过滤，渣滓45度烘干，第3天称重，算出蜂胶等级，以及每毫升7酒精蜂胶含量。
3)使用，按疫苗每毫升加10mg，摇匀。
六、作业：1、铝胶佐剂有何优缺点？2、记录铝胶制作过程。
3、你测的蜂胶等级是多少？8实验六法氏囊炎病高免卵黄的制备一、目的要求：掌握法氏囊病高免卵黄抗体的制备过程和技术。
二、原理：鸡蛋蛋黄中有卵黄抗体，通过人工免疫母鸡法氏囊疫苗多次，卵黄中就有较高的法氏囊炎病毒的抗体，提取该抗体，就可以用于治疗和预防鸡法氏囊炎病。
三、材料：法氏囊炎油乳灭活苗、捣碎机、高免鸡蛋、青霉素、链霉素、纱布、0.1%新洁尔灭、水桶、生理盐水。
四、方法步骤：1、免疫母鸡：提前1个月用法氏囊油乳灭活苗免疫鸡3次，每次1.5ml，10天免疫1次，最后免疫后到10天收蛋，测效价、符合1：128以上即可制法氏囊卵黄抗体。
2、洗高免鸡蛋：将高免鸡蛋置0.3%新洁尔灭溶液中，擦洗消毒、凉干。
3、分离蛋黄：将高免鸡蛋打开两瓣，将蛋清倒入桶中，留下蛋黄备用。
4、制高免蛋黄液：按蛋黄和生理盐水1：3比例制备，先将8个蛋黄约120ml倒入捣碎机中，开机10秒打匀，停机加入约360ml生理盐水并加各20万青、链霉素，再捣碎开机1-2秒，一层纱布过滤分装于无菌瓶中，即成。
零下5-10℃保存。
若有鸡发生法氏囊炎病，按1-2ml/kg肌肉注射该抗体，即可起到治疗和预防作用。
五、思考题：1、制高免卵黄为什么要选用健康母鸡接种？2、制的高免卵黄为什么要加青、链霉素？9实验七法氏囊炎高免卵黄抗体效价的测定一、目的要求：掌握法氏囊炎高免卵黄抗体效价的测定方法。