生物制品学实验指导

生物制品技术实验指导

生物工程系

目录

实验规则 (2)

实验一、猪瘟、口蹄疫抗体间接血凝实验 (3)

实验二、鸡新城疫灭活疫苗的制备—照蛋及接毒 (4)

实验三、鸡新城疫灭活疫苗的制备—鸡胚收毒及测效价 (5)

实验四、鸡新城疫灭活疫苗的制备—油乳苗的制备 (6)

实验五、氢氧化铝和蜂胶的制备 (7)

实验六、法氏囊炎病高免卵黄抗体的制备 (8)

实验七、法氏囊炎病高免卵黄抗体效价的测定 (9)

实验八、兔瘟灭活苗的制备 (10)

实验九、大肠杆菌自家灭活疫苗的制备 (11)

实验十、动物实验 (12)

实验十一、鸡白痢平板抗原的制备及使用 (15)

实验十二、免疫血清的制备 (16)

实验十二、细菌冷冻真空干燥实验 (18)

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实验规则

实验中所用材料，多具有传染性（如病原微生物、含病原微生物的血、尿、便、痰、脓汁及感染动物等），在实验过程中，必须严肃认真地进行无菌操作，以保证结果准确，防止实验室感染，防止病原微生物污染环境。必须遵守以下各项。

1、实验前必须预习实验指导书。若经提问发现没有预习者，须在教师指定的时间内预习完毕，方得参加实验。、进实验室不得将书包、衣物等放在实验台上，不必需的物品勿携入室内。

2、实验室内严禁饮食、吸烟及用嘴舔湿铅笔及瓶签，、如发生感染或污染等意外时，应立即报告指导老师，进行紧急处理。

5、保持实验室安静，不得谈笑喧哗，不许搞其他动作，以免影响他人实验。实验进行时不准随意进出。实验室中物品未经许可不准带出室外。

6、清洗仪器、用具、材料时，须将固形物倒入指定容器内，不得直接倒入水槽，以免造成水管堵塞。

7、实验过程中，须按操作规程仔细操作，注意观察试验结果，应及时记录。不得抄写他人的实验实习记录，否则，须重做。如有疑问，应向指导教师询问清楚后方可进行。

8、实验完毕后，须将玻璃仪器、用具等清洗干净，按原来的位置摆设放置，如有破损须报告指导教师，并填写仪器损坏登记簿。关好门窗水电，用消毒液洗手后离去。

10、实验结束后，由值日生负责打扫实验室，保持室内整洁，注意关上水、电、窗、门。

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实验一猪瘟（HC）、口蹄疫（FMD）抗体间接凝集试验

一、目的要求：掌握正向间接凝集反应原理及操作方法。

二、原理：将病毒抗原吸附于醛化红细胞上，带抗原的红细胞可以和抗体发生凝集，从而可

以检测被检猪的相应抗体水平。

三、材料：微量反应板、移液器、滴头、HC诊断抗原、FMD诊断抗原、被检血清、阳性

血清、阴性血清各一瓶、生理盐水、微量振荡器、胶布适量。

四、方法步骤：

1、用移液器加滴头吸生理盐水。加入微量反应板孔内一排8孔，每孔加50微升。

2、换一滴头吸一被检血清从第一孔加入50微升，吹吸3次（1：2）吸此孔液体到第2

孔，吹吸3次，（1：4），依次类推倍比稀释至第8孔，第8孔再弃去50微升。这

样每孔均为50微升，稀释度分别为1：2、1：4……1：256。

3、换一滴头吸HC诊断抗原各25微升，分别加入第4孔、第6孔。

4、换一滴头吸FMD诊断抗原各25微升，分别加入第5孔、第7孔。

5、每组做1份对照：

在反应板最后一排分别滴阳性血清、阴性血清各2孔，并分别加HC、FMD诊

断抗原各25微升。

6、在微量振荡器上振荡2min，室温下（25-30℃）1.5—2h观察。

7、其他同学重复做1—4步。

8、贴胶布、标明被检血清、组别、对照等。

9、结果判断：HC抗体凝集（++）1：16以上为合格；FMD抗体1：128以上为合格。

五、思考题：

1、正向间接反应的原理是什么？

2、该试验应注意哪些事项？如何判定自己做的结果准确？

3、当结果出现错误时，有哪些原因造成的？

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实验二鸡新城疫灭活疫苗的制备——照蛋及接毒

一、目的要求：通过试验掌握鸡新城疫灭活油乳疫苗的制备方法。

二、原理：新城疫病毒可以在鸡胚中生长、并引起病变和鸡胚死亡。收胚胎尿囊液毒后，可

以利用血凝实验测定效价（NDV病毒具有血凝素，可自动凝集红细胞）。符合标准后灭活、加佐剂可制成灭活疫苗。

三、材料：孵化10天的受精鸡胚、照蛋器、新城疫II系和IV系疫苗、生理盐水、1ml注射

器、石蜡、滴头、注射针头、酒精棉球、镊子。

四、方法步骤：

1、将鸡胚先照蛋、画出气室，用酒精棉球消毒接种部位、离气室边缘1cm（避开血管），

先用消毒针头钻破蛋壳，然后针头与蛋成30度角进针0.5cm注入0.1mlNDV，1-4

组接II系毒种，5-6组接IV系毒种，标记，每2人1个鸡蛋、接种后封蜡。

2、毒种的准备：

将疫苗按1羽份0.1ml稀释，然后加入青链霉素溶液，使之达到含500单位青链霉

素/ml，接毒时按0.1ml病毒液/枚蛋接种。

3、接毒后的鸡胚放入孵化箱中，37.5℃孵化，24h挑出死胚蛋弃去，其它继续孵化，

以后每半天观察1次，挑出死胚，放入4℃冰箱冷藏，到96—120h不论是否死亡都

放4℃冰箱冷藏1天。

五、思考题：

1、如何确定鸡胚的死活？

2、鸡胚接种有几种方法？日龄是多少？

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实验三鸡新城疫灭活疫苗的制备——鸡胚收毒及测效价

一、目的要求：掌握新城疫病毒血凝实验操作方法。

二、原理：新城疫病毒有血凝素，可以凝集鸡的红细跑，通过测血凝效价，知道尿囊液中

病毒的含量。

三、材料：无菌吸头、脱脂棉、无菌剪子、镊子、无菌烧杯、微量反应板、0.5%鸡红细胞、

移液器、滴头、离心机、生理盐水、酒精棉球。

四、方法步骤：

1、提前准备0.5%鸡红细胞（鸡的抗凝血加生理盐水离心洗涤5次，3000转/分、最

后配成0.5%红细胞）。

2、将气室用酒精棉球消毒、剪开气室、剪开尿囊膜、用吸头吸尿囊液于烧杯中（可

垫少量脱脂棉花，防堵吸头。）

3、测效价：

(1)取一微量反应板用移液器吸生理盐水，按第1-12孔各加加50微升。

(2)换1个滴头吸被检尿囊液50微升放于第1孔，吹吸3次，再吸此孔50微升

到第2孔，依次类推，最后到11孔弃去50微升。稀释度分别为1：2、1：4、

1：8、1：16、1：32、1：64、1：128、1：256、1：512、1：1024、1：2048。

(3)空白12孔生理盐水50微升，做阴性对照。

(4)1—12孔各加入0.5%红细胞50微升，阴性对照也加入50微升0.5%红细胞。

(5)在微量振荡器上振荡2min，放入湿盒中，25℃、15min后开始观察到60min。

(6)判定病毒血凝效价，记录。

4、将尿囊液按每ml加500单位青链霉素，杀菌、4℃保存，同时加入0.1%甲醛灭活，

4℃1天。（一般合格弱毒疫苗病毒效价在1：512以上）。

5、尿囊液冰冻保存。留做灭活油乳苗用。

五、思考题：

1、记录你测的血凝效价是多少？是否合格？

2、为什么血凝试验可测鸡新城疫病毒的效价？

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