【CN110129376A】银杏内生真菌代谢产物及在制备抗氧化剂中的应用【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910175172.5

(22)申请日 2019.03.08

(83)生物保藏信息

CCTCC NO：M2019125 2019.03.06

(71)申请人 浙江工业大学

地址 310014 浙江省杭州市下城区潮王路

18号

(72)发明人 潘芸　杨胜利　张慧　邵泽辉　

杨锡　陈萍　

(74)专利代理机构 杭州天正专利事务所有限公

司 33201

代理人 黄美娟　李世玉

(51)Int.Cl.

C12P 1/02(2006.01)

A61K 36/06(2006.01)

A61P 39/06(2006.01)C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称

银杏内生真菌代谢产物及在制备抗氧化剂

中的应用

(57)摘要

本发明公开了一种银杏内生真菌代谢产物

及在制备抗氧化剂中的应用，所述代谢产物是由

黄盖小脆柄菇(Psathyrella candolleana )

Gb.PY -F1发酵液经超声破碎、

微滤、硅胶柱层析、凝胶Sephadex LH -20柱分离、重结晶获得的。银

杏内生真菌代谢产物Gf.6-7-23的CL50＝14.538

μg/mg ，阳性对照Vc的CL50＝15.261μg/mL，

Gf.6-7-23对DPPH的清除能力与抗坏血酸效果几

乎同等，而本发明通过微生物发酵的方法可制备

得到，在一定程度上避免了植被的破坏，

环保。权利要求书1页 说明书6页序列表1页 附图5页CN 110129376 A 2019.08.16

C N 110129376

A

权　利　要　求　书1/1页CN 110129376 A

1.一种银杏内生真菌代谢产物，其特征在于所述代谢产物按如下方法制备：(1)将黄盖小脆柄菇(Psathyrella candolleana)Gb.PY-F1发酵液经超声破碎后抽滤，滤液用微滤膜过滤后用乙酸乙酯萃取，取有机相浓缩至恒重，获得代谢粗产物；所述黄盖小脆柄菇(Psathyrella candolleana)Gb.PY-F1保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M2019125，保藏日期为2019年3月6日，保藏地址：中国武汉武汉大学，邮编：430072；(2)将步骤(1)代谢粗产物用乙酸乙酯溶解后进行硅胶柱层析，以体积比100-0:0-100的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集体积比50:50石油醚-乙酸乙酯的流出液，浓缩至干，记为组分Gf.6；(3)将步骤(2)组分Gf.6用乙酸乙酯溶解后再次进行硅胶柱层析，以体积比75:15石油醚-丙酮为流动相洗脱，收集第7个柱体积的流出液，浓缩至干，记为组分Gf.6-7；

(4)组分Gf.6-7以体积比1:1的甲醇-三氯甲烷为洗脱剂进行凝胶Sephadex LH-20柱分离，收集Rf值为0.6的流出液，浓缩至干，记为组分Gf.6-7-23；(5)步骤(4)组分Gf.6-7-23经甲醇溶解重结晶，获得晶体；将晶体用甲醇溶解后，以体积比10:5:5的丙酮：甲苯：氯仿为展开剂进行薄层层析，收集Rf为0.6的组分，获得银杏内生真菌代谢产物。

2.如权利要求1所述银杏内生真菌代谢产物，其特征在于步骤(1)所述发酵液按如下方法制备：将黄盖小脆柄菇Gb.PY-F1接种于发酵培养基中，28℃，180r/min培养7d，获得发酵液；所述发酵培养基组成：硝酸钠3g/L，磷酸氢二钾1g/L，硫酸镁0.5g/L，氯化钾0.5g/L，硫酸亚铁0.01g/L，蔗糖30g/L，溶剂为蒸馏水，pH 7.0～7.2。

3.如权利要求1所述银杏内生真菌代谢产物，其特征在于步骤(1)所述代谢粗产物按如下方法制备：在405W条件下，每工作3s，间歇4s，进行300次循环对发酵液超声破壁处理后抽滤，取滤液经0.45μm微孔滤膜过滤后浓缩至原体积的1/3，用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩至恒重，获得代谢粗产物。

4.如权利要求1所述银杏内生真菌代谢产物，其特征在于步骤(2)操作条件为：将步骤(1)代谢粗产物用乙酸乙酯溶解，加入硅胶，研磨均匀后，真空干燥，即为吸附样品的硅胶；将吸附样品的硅胶上样于硅胶色谱柱中，采用体积比100-0:0-100的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集体积比50:50石油醚-乙酸乙酯的流出液，浓缩至干，记为组分Gf.6；所述硅胶与发酵粗产物质量比为1.5：1。

5.如权利要求1所述银杏内生真菌代谢产物，其特征在于步骤(2)石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱体积比依次为100:0、90:10、80:20、70:30、60:40、50:50、40:60、30:70、20:80、10: 90、0:100。

6.如权利要求1所述银杏内生真菌代谢产物，其特征在于步骤(3)操作条件为：将步骤(2)组分Gf.6用乙酸乙酯溶解，加入硅胶，研磨均匀后，真空干燥，即为吸附组分Gf.6的硅胶；将吸附组分Gf.6的硅胶上样于硅胶色谱柱中，以体积比75:15石油醚-丙酮为流动相洗脱，收集第7个柱体积的流出液，浓缩至干，记为组分Gf.6-7；所述硅胶与组分Gf.6质量比为1.5：1。

7.如权利要求1所述银杏内生真菌代谢产物，其特征在于步骤(4)操作条件为：组分Gf.6-7以体积比1:1的甲醇-三氯甲烷为洗脱剂进行凝胶Sephadex LH-20柱分离，流速为1drop/s，收集Rf值为0.6的流出液，浓缩至干，记为组分Gf.6-7-23。

8.一种权利要求1所述银杏内生真菌代谢产物在制备抗氧化剂中的应用。

9.一种所述银杏内生真菌代谢产物在制备抗氧化药物或化妆品中的应用。

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