电泳拖尾

电泳出现拖尾现象

电泳出现拖尾现象，英文成为smear，就是弥散。

琼脂糖凝胶电泳拖尾是怎么回事？

1：样品浓度过高。这种情况稀释一下就行了。提质粒的时候常出现这种情况。

2：蛋白杂质阻碍DNA的泳动。提基因组DNA时常出现这种情况。

以上两种情况，拖尾都是在电泳条带的后面。

3：样品破碎或是被降解

4：存在RNA

这两种情况，拖尾都是在电泳条带的前面。

PCR产物电泳拖尾，主要从以下两个方面考虑：

1、PCR产物自身原因：

往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多，而造成PCR的非特异性产物过多。

对策：①减少Taq酶的量，或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。

③适当降低Mg2+浓度。④增加模板量，减少引物的用量，减少循环次数，提高退火温度。

2、电泳体系的问题：

（1）电泳缓冲液TAE或者TBE的污染，建议更换缓冲液。（2）上样时样品漂了，建议增加上样缓冲液的用量，以及小心加样。（3）电压太高。（4）适当把你的胶的浓度加大。（根据你的片断大小而定）（5）观察你的marker

是否也存在拖尾现象，作为对照。

PCR拖尾及假阳性的原因及对策

拖尾

现象：产物在凝胶上呈Smear状态。

原因：

1.模板不纯

2.Buffer不合适

3.退火温度偏低

4.酶量过多

5.dNTP、Mg2+浓度偏高

6.循环次数过多

对策：

1.纯化模板

2.更换Buffer

3.适当提高退火温度

4.适量用酶

5.适当降低dNTP和镁离子的浓度

6.减少循环次数

假阳性

现象：空白对照出现目的扩增产物

原因：

靶序列或扩增产物

的交*污染

对策：

1.操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外；

2.除酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管

及加样枪头等均应一次性使用。

3.各种试剂最好先进行分装，然后低温贮存