紫外可见分光光度法设计性
中国药科大学生化设计性实验报告参考——酵母RNA的提取、组分鉴定和含量测定
（2）核糖
取1支试管加人水解液1mL、三氯化铁
浓盐酸溶液2mL和苔黑酚乙醇溶液0.2mL。放沸水
浴中10分钟。注意溶液是否变成绿色，说明核糖
的存在。 （3）磷酸 取1支试管，加入1ml水解液，加入5滴 浓HNO3和1ml钼酸铵试剂后，在沸水浴中加热， 观察有无黄色磷钼酸铵沉淀产生，说明磷酸是否
存在。
酵母RNA的提取、组分鉴定和含量测定
【实验目的】
1.学习稀碱法提取RNA的原理和操作方法。
2.了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的 方法。 3.掌握地衣酚显色法及紫外分光光度法测定 酵母RNA含量的原理和方法
【实验原理】
酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液， 在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核 糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。
4.RNA地衣酚法显色测定
（1)标准曲线的制作
（1)标准曲线的制作
按上表编号及加入试剂。加毕，摇匀70nm波长处测定各管光吸收值。取测定
的平均值,以RNA浓度为横坐标,光吸收为纵坐标
作图,绘制标准曲线。
(2)样品的测定
取两支试管,各加入2.0mL样品注液,再加
2.实验仪器：
研钵、150mL锥形瓶、恒温水浴锅、布氏漏斗 及抽滤瓶、离心机、漏斗、分光光度计。
【实验材料和主要仪器、试剂】
3.实验试剂： 0.04mol/LNaOH溶液、95%乙醇、酸性乙醇 溶液、1.5mol/L硫酸溶液 、浓氨水、 0.1mol/L硝酸银溶液 、氯化铁浓盐酸溶 液、苔黑酚乙醇溶液、钼酸铵试剂（将2g 钼酸铵溶解在100ml10%硫酸中）、标准 RNA母液、标准RNA溶液、样品溶液、地衣 酚-铜离子试剂
2.0mL地衣酚-Cu2+试剂，如前述进行测定.
《紫外分光光度法测定硼》检测方法验证
硼与亚甲胺 -H 形成黄色配合物，其颜色与硼的浓度在一 定范围内呈线性关系，适用于生活饮用水及其水源水中可溶 性硼的测定。最低检测质量为 1.0μg，若取 5.0mL 水样测定， 则最低检测质量浓度为 0.20mg/L。 1 测定方法与参数
通过以上检测数据可知，有证标准物质的测定值在证书 范围内。 4.3 加标回收率测定
对实际样品和实际样品加标进行检测，选取某浓度水样 平行测定，测定结果及加标回收率见表 3。
水样测定 加标回收
表3 实际水样及加标回收率数据
平行号
1
2
测定结果
3
（mg/L）
4
5
6
平均值（mg/L）
1
2
测定结果
3
（mg/L）
对 GB/T 5750.5—2006《生活饮用水标准检验方法》开展 方法验证。根据该标准方法，配制标准系列，建立工作曲线 ； 根据与质控样品数据比对检验准确度 ；采用某浓度样品进行 加标回收验证（注 ：方法为紫外分光光度法光法，参数有准 确度、精密度）。 2 实验仪器与试剂
10mL 比色管、TU-1901 型紫外可见分光光度计及 100mL 容量瓶。
第47卷第6期
2021年6月
资源与环境
Resources and Environment
化工设计通讯
Chemical Engineering Design Communications
《紫外分光光度法测定硼》检测方法验证
马 博 （石家庄高新技术产业开发区供水排水公司，河北石家庄 050035）
摘 要 ：对 GB/T5750.5—2006《生活饮用水标准检验方法 无机非金属指标》（甲亚胺 -H 分光光度法）进行了方法验证， 以评价该检测方法是否适用于水中硼的检测工作，以确保该方法能够满足水中硼的测定。
Box-Behnken设计-响应面法优化山茱萸叶总三萜提取工艺
Box-Behnken设计-响应面法优化山茱萸叶总三萜提取工艺作者：朱登辉张靖柯李孟石静亚刘娟娟魏俊俊郑晓珂冯卫生来源：《中国药房》2021年第01期摘要目的：优化山茱萸叶总三萜提取工藝。
方法：在山茱萸叶充分溶胀的基础上，采用加热回流法提取其总三萜。
在单因素试验中考察乙醇体积分数、液料比、提取时间和提取次数对山茱萸叶总三萜含量的影响;以齐墩果酸为对照品，采用紫外-可见分光光度法测定总三萜含量。
在单因素试验的基础上，固定提取次数为3次，以总三萜含量为响应值，以乙醇体积分数、液料比、提取时间为响应因素，采用Box-Behnken设计-响应面法优化山茱萸叶总三萜的提取工艺并进行验证。
结果：山茱萸叶总三萜的最佳提取工艺为乙醇体积分数73%、液料比38 ∶ 1（mL/g）、提取时间60 min。
3次验证试验结果显示，山茱萸叶总三萜的含量分别为6.92%、6.91%、6.84%，平均含量为6.89%（RSD=0.63%），与预测值（7.28%）的相对误差为5.36%。
结论：优化的提取工艺稳定、可靠，可用于山茱萸叶总三萜的提取。
关键词山茱萸叶;总三萜;Box-Behnken设计;响应面法;提取工艺ABSTRACT OBJECTIVE： To optimize the extraction technology for total triterpenes from the leaves of Cornus officinalis. METHODS： Based on the full swelling of the leaves of C. officinalis，total triterpenes was extracted with heating reflux method. The effects of ethanol concentration，liquid-solid ratio， extraction time and extraction times on the contents of total triterpenes from the leaves of C. officinalis were investigated by single factor test. Using oleanolic acid as control， the contents of total triterpenes were detected by UV spectrometry. On the basis of single factor test，fixing the times of extraction as 3 times， taking the contents of total triterpenes as response value，using ethanol volume fraction， solid-liquid ratio and extraction time as factors， Box-Behnken design-response methodology was used to optimize the extraction technology of total triterpenes from the leaves of C. officinalis， and the optimized extraction technology was validated. RESULTS：The optimal extraction technology of total triterpenes from the leaves of C. officinalis were as follows as ethanol concentration of 73%， liquid-to-material ratio of 38 ∶ 1 （mL/g）， extraction time of 60 min. Results of 3 validation tests showed that the contents of total triterpenes from the leaves of C. officinalis were 6.92%， 6.91%， 6.84%; the average content was 6.89% （RSD=0.63%），relative error of which with the predicted value （7.28%） was 5.36%. CONCLUSIONS： The optimized technology is stable and reliable， and can be used for the extraction of total triterpenes from leaves of C. officinalis.KEYWORDS Leaves of Cornus officinalis;Total triterpenes;Box-Behnken design; Response surface methodology; Extraction process山茱萸为山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb. et Zucc.的干燥成熟果肉，具有补益肝肾、收涩固脱的功效，可用于治疗眩晕耳鸣、腰膝酸痛等症[1]。
体内药物分析方法和方法的设计和评价
为：毛细管区带电泳、胶束电动毛细管色谱、
毛细管凝胶电泳、毛细管等电聚焦、毛细管等
速电泳和毛细管电色谱法。上述这些方法近几
年来在体内药品分析中均得到不一样程度应
用。 体内药物分析方法和方法的设计和评价
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体内药物分析方法和方法的设计和评价
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• 选取何种方法进行体内药品分析为好呢？普通 要依据药品理化性质、结构持征、药品浓度大 小、干扰成份多少、预处理方法、试验目标以 及试验室条件等原因综合起来进行考虑。
体内药物分析方法和方法的设计和评价
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1、HPLC法
• HPLC法在体内药品分析中应用已大大超出其 它分析方法，成为体内药品分析中应用最广泛 技术之一。与GC法相比，它含有以下优点：
• (1)适用范围广，可在室温下进行检测。对于 挥发性低，热稳定性差，分子量大以及离子型和评价
（一）以纯品进行测定
• 取药品或其代谢物纯品适量，按确定方法测 定，求得浓度与测定响应值之间关系，进行线 性范围、最适测定浓度、检测灵敏度、测定最 适 条 件 ( 如 pH 值 、 温 度 、 反 应 时 间 等 ） 等 选 择。
体内药物分析方法和方法的设计和评价
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(二)空白样品测定
• 取空白生物样品，按确定方法进行处理，测定 空白值(或色谱图)。空白值高低或色谱图情况 将影响到方法灵敏度和专属性，应力争将空白 值降低。在色谱分析中应力争降低体内样品中 内源性杂质峰，对无法消除内源性杂质峰应设 法使其从待测物色谱区域内移开。能否取得良 好样品空白试验结果，是决定测定方法实际可 行性主要步骤，必须设法处理。
• 另外，还有一些含抗生素类药品生物样品，它 们可用微生物方法测定，利用抗生素在琼脂培 养基内扩散作用，比较样品与药品标准品二者 对接种试验菌产生抑菌圈大小，借以测定样品 内抗生素药品浓度。
药物的鉴别技术
01
此法是色谱鉴别方法中常用的方法，一般采用对照品(或标准品)比较法： 主斑点的颜色（或荧光）、Rf、大小、颜色深浅
01
1.薄层色谱法
2.高效液相色谱法和气相色谱法
高校液相色谱和气相色谱法气态样品的传质速度快，柱阻力小，分离效能高的特点，化学惰性介质流动相干扰小，灵敏度高的特点。
二、光谱鉴别法
适用范围及特点 有机药物在红外光区用特征吸收，药物分子的组成、结构、官能团不同时，其红外吸收光谱也不同，故可作为有机药物鉴别的依据。 药物的红外光谱能反映药物分子的结构特点，具有专属性强、准确度高的特点，是验证已知药物的有效方法。 常用方法 用红外光谱鉴别药物时，《中国药典》（2005年版）和BP（2007）均采用标准图谱对照法
真伪鉴别必须通过一组试验 才能完成！
药物的鉴别技术
01
目的
02
判断药物的真伪，是药物检验工作 的首项任务。
03
内容
04
性状
05
鉴别
06
外观、物理常数
07
化学鉴别法
08
光谱鉴别法
09
色谱鉴别
10
生物学
药物的鉴别技术
课堂活动
1、甲硝唑原料药 2、对乙酰氨基酚片 3、板蓝根颗粒
甲硝唑原料药
对乙酰氨基酚片
复方板蓝根颗粒
（2010版药典）
本品为棕色的颗粒；味甜、微苦。
（部颁标准十二册）
课堂活动——标准规定
性状的描述
化药制剂
稳定性
外观
剂 型
性状的描述
臭、味
溶解性
物理常数
酸碱性
稳定性
外观
原料药
课堂活动
性状——物理常数
测定十六烷基三甲基溴化铵表面活性剂的临界胶束浓度
测定十六烷基三甲基溴化铵表面活性剂的临界胶束浓度应化115班陈长利摘要：凡能显著改变表面（或界面）性质的物质都称为表面活性剂。
表面活性剂的临界胶束浓度(CMC)作为表面活性剂的表面活性的一种量度，是表面活性溶液性质的重要表征之一。
表面活性剂的一些理化性质，如表面张力, 摩尔电导率, 渗透压、浊度、光学性质等在临界胶束浓度时都有显著的变化,所以通过测定发生这些显著变化时的转变点,就可以得知。
本文采用电导率法、紫外分光光度法测定CMC，并研究温度对CMC的影响关键词：十六烷基三甲基溴化铵；CMC；电导率法；温度；紫外分光光度法；荧光黄一、实验目的1.了解表面活性剂临界胶束浓度（CMC）的定义及常用测定方法。
2.用电导法及紫外可见分光光度法测定表面活性剂的CMC。
4.分析添加剂对CMC的影响。
二．实验原理1、凡能显著改变表面（或界面）性质的物质都称为表面活性剂。
表面活性剂分子都是由极性部分和非极性部分组成的，分子既含有亲油的足够长的（大于10个碳原子）烷基，又含有亲水的极性基团。
2、若按离子的类型分类，可分为三大类:①阴离子型表面活性剂，如羧酸盐(肥皂)，烷基硫酸盐(十二烷基硫酸钠)，烷基磺酸盐(十二烷基苯磺酸钠)等；②阳离子型表面活性剂，主要是胺盐，如十二烷基二甲基叔胺和十二烷基二甲基氯化胺；③非离子型表面活性剂，如聚氧乙烯类。
2、表面活性剂进入水中，在低浓度时呈分子状态，并且三三两两地把亲油基团靠拢而分散在水中。
当溶液浓度加大到一定程度时，许多表面活性物质的分子立刻结合成很大的集团，形成”胶束”。
以胶束形式存在于水中的表面活性物质是比较稳定的。
表面活性物质在水中形成胶束所需的最低浓度称为临界胶束浓度CMC。
CMC可看作是表面活性对溶液的表面活性的一种量度。
因为CMC越小，则表示此种表面活性剂形成胶束所需浓度越低，达到表面饱和吸附的浓度越低。
也就是说只要很少的表面活性剂就可起到润湿、乳化、加溶、起泡等作用。
淫羊藿黄酮类成分的多指标均匀设计提取工艺
淫羊藿黄酮类成分的多指标均匀设计提取工艺∗牛晓静;曹英杰;鲁静;段晓颖;徐立然【摘要】目的：通过均匀设计优选淫羊藿黄酮类成分的提取工艺。
方法利用紫外-可见分光光度法测定总黄酮的含量，高效液相色谱( HPLC)测定朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷及宝藿苷Ⅰ的含量；采用U10∗(108)均匀设计表设计实验，以上述6种含量作为评价指标，综合评价分析乙醇浓度、乙醇用量、提取时间3种因素对淫羊藿黄酮类成分提取工艺的影响。
结果淫羊藿黄酮类成分的最佳提取工艺：15倍量60％乙醇提取2次，每次165 min。
结论该工艺操作简便合理，结果稳定可靠，重复性好，具有可行性，适用于工业生产。
%Objective To optimize extraction technology of flavonesingredients from Herba Epimedii by uniform design. Methods Ultraviolet spectrophotometry was adopted to determine the content of total flavonoids. Content of epimedin A, epimedin B,epimedin C,icariin and baohuosideⅠ were determined by HPLC. U10∗( 108 ) uniform design was used to conduct the multiple comprehensive evaluation of six ingredients and comprehensively analyze the influence of the concentration and amount of ethanol, extracting time on extraction of flavonesin gredients from Herba Epimedii. Results The uniform design experiment showed that 15-fold weight of 60%ethanol,extracting 2 times and each time with 165 min were the optimum extraction condition. Conclusion The method is easy and reasonable to handle,has stable and reliable results,and good repeatabilityand feasibility.It can be applied in industrial production.【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2016(035)004【总页数】4页(P393-396)【关键词】淫羊藿;黄酮类成分;多指标;均匀设计;提取工艺【作者】牛晓静;曹英杰;鲁静;段晓颖;徐立然【作者单位】河南中医学院第一附属医院药学部，郑州 450008;河南中医学院第一附属医院药学部，郑州 450008;河南中医学院第一附属医院药学部，郑州450008;河南中医学院第一附属医院药学部，郑州 450008;河南中医学院第一附属医院药学部，郑州 450008【正文语种】中文【中图分类】R286;TQ460.6DOI 10.3870/j.issn.1004-0781.2016.04.017淫羊藿为小檗科植物淫羊藿Epimediumbrevicornu Maxim.、箭叶淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿Epimediumpubescens Maxim.或朝鲜淫羊藿Epimediumkoreanum Nakai的干燥叶。
实验一葡萄糖一般杂质检查
实验一:葡萄糖一般杂质检查验一：葡萄糖一般杂质检查一、教学目的：1．掌握葡萄糖中氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐等限量的检方法、原理、反应条件及计算。
2．熟悉纳氏比色管、验砷瓶、量筒、天平等使用方法。
3．了解药物一般杂质检查项目的意义。
二、实验内容：1．氯化物的限量检查取本品0.6g ，加水溶解使成25ml，再加稀硝酸10ml，溶液若不澄清、滤过，置50ml纳氏比色管中，加水使成40ml，加硝酸银试液1ml，用水稀释至50 ml，摇匀在暗处放置5分钟，如发生混浊，与标准氯化钠6 ml同法操作所制的对照液比较，不得更深（0.01）。
2．硫酸盐的限量检查取本品2g ，加水溶解使成40ml，溶液若不澄清、滤过，置50ml纳氏比色管中，加稀HCl2ml，摇匀，加25氯化钡溶液5ml，用水稀释成50 ml，摇匀，放置10分钟，如发生混浊，与标准硫酸钾溶液2 ml同法操作所制的对照液比较，不得更深（0.01）。
3．重金属的限量检查取本品4g ，加水23 ml溶解，再加稀醋酸2ml，加硫化氢试液10ml，摇匀在暗处放置10分钟，与标准铅溶液2 ml同法操作所制的对照液比较，不得更深（5ppm）。
4．铁盐的限量检查取本品2g ，加水20 ml溶解，再加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，用水稀释至45 ml，加硫氰酸铵溶液（3→100）3 ml摇匀，如显色，与标准铁溶液2 ml同法操作所制的对照液比较，不得更深（0.001）。
5．砷盐的限量检查演示。
思考题1．在进行氯化物检查、硫酸盐或重金属检查时，遇到有颜色的样品如何处理？2．重金属检查有几种方法？本实验采用何种方法？该法的最适pH为多少？3．何谓“限度检查”？杂质限度应如何计算？实验二特殊杂质检查一、目的要求：熟悉阿斯匹林、盐酸普鲁卡因中的一些特殊杂质的检查原理及操作方法。
二、提要1. 特殊杂质是指药物本身特有的根据其生产主艺、自身牲质，而产生的杂质其检查方法在药典中列在各药品的检查项下。