血细胞计数板的构造和使用方法简介(必3)

血细胞计数板的构造和使用方法

一、血细胞计数板的构造

血细胞计数板是由一块比普通载玻片厚的特制

玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平

台；中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两

半，每半边上面刻有一个方格网（见图B ——侧视

图、图A ——俯视图；1.计数板 2.盖玻片 3.计数

室）。方格网上刻有9个大方格（见图C 、E ），其

中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物（细

胞）计数用。计数室通常有两种规格：一种是

25×16型，即大方格内分为25个中方格（中方格

之间用双线分开，见图C 、D ），每一中方格又分为

16个小方格；另一种是16×25型，即大方格内分为16个中方格（见图E ），每一中方格又分为25个小方格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点：即每一大方格都是由25×16=16×25=400个小方格组成（见图D ）。

计数室边长为1mm （或2mm ），面积为l mm 2（或4 mm 2），盖上盖玻片后，计数室的深度为0.1mm ，所以计数室的容积为0.1mm 3（或0.4 mm 3）。（图A ——俯视图：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm 为盖上盖玻片后计数室的深度；1/400mm 2表示计数室面积是1mm 2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm 2）。

C D E

二、血细胞计数板的使用（以计数酵母菌为例）

(1)视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释。样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有4—5个酵母细胞为宜。

(2)将血细胞计数板用擦镜纸擦净，在计数室上盖上一块专用的盖玻片。

(3)将稀释后的酵母菌悬液摇匀，用吸管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数室，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。

(4)静置片刻，待酵母菌全部沉降到计数室低部，将血细胞计数板置载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数室后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。

(5)计数时若计数室是由16个中方格组成（见图E），数左上、左下、右上、右下的4个中方格（即100个小方格）的菌数；如果是由25个中方格组成的计数室，除数上述四个中方格外，还需数中央l个中方格（即80个小方格）的菌数（见图C、D）。

若菌体位于中方格线上，一

般只计数中方格的上方和左方线

上的酵母细胞（如右图用圈标出

者），以减少误差。计数时应不

时调节细准焦螺旋，才能观察到

不同深度的菌体。

(6)计数一个样品要以两个计

数室中计得的平均数值来计算，

每个样品计数应重复3次（每次

数值不应相差过大，否则应重新

操作），再取其平均值，最后换算出10毫升（或其他体积）（10毫升等于104mm3）菌悬液所含酵母菌细胞数量（注意考虑稀释倍数）。

(7)测数完毕，取下盖玻片，用清水将血细胞计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。