细菌内毒素检查方法研
细菌内毒素检查方式的研究
左卡尼汀注射液细菌内毒素检查方式的研究概述：左卡尼汀，是一种普遍存在于机体组织内的氨基酸，其重要功能是增进其氧化分解，为细胞提供能量，增进脂类代谢。
临床上要紧用于医治冠心病、心绞痛、心律失常，亦可作为医治血液透析患者的辅助药物。
目前《中国药典》2020年版并未收录该品种。
也尚无国家标准对其进行细菌内毒素检查。
因此，参照《中国药典》2010年版二部附录收载的细菌内毒素检查法，对本品进行了细菌内毒素检查的方式研究。
1．验证目的考察鲎试剂的灵敏度是不是准确；考察查验人员的操作方式是不是准确及实验条件是不是符合规定；查验在某一浓度下的供试品关于鲎试剂与内毒素有无干扰作用。
2．验证要求为确保细菌内毒素查验结果的准确靠得住，当做立产品的细菌内毒素检查时，需确信供试品在多大的稀释倍数或浓度下对内毒素和鲎试剂的反映不存在干扰作用，为可否利用细菌内毒素检查法提供依据。
而且验证当供试品的配方和工艺有转变，鲎试剂来源改变或供试品阳性时供试品是不是存在干扰作用。
由于干扰实验查验的是在供试品存在的情形下内毒素与鲎试剂的反映是不是正常，与所利用鲎试剂灵敏度无关，因此在干扰实验中原那么上可利用任一灵敏度的鲎试剂。
3．验证材料及设备样品信息3.1.1 样品名称:左卡尼汀注射液3.1.2 批号：、、3.1.3 规格：5ml:1g仪器与试药3.2.1 仪器:ET-96内毒素凝胶法测定仪；ZH-2型自动漩涡混合器。
3.2.2 试药:细菌内毒素工作标准品(规格：每支10 EU，批号：1007010，湛江博康海洋生物)；细菌内毒素检查用水(BET水，规格：每支5ml，批号：100507，湛江博康海洋生物)；鲎试剂A(TAL，规格：每支，批号：100203一、1005100，灵敏度别离为:、EU／ml，湛江博康海洋生物)；鲎试剂B(TAL，规格：每支，批号:100802，灵敏度为:／ml，厦门市鲎试剂实验厂)；左卡尼汀注射液(规格：5ml:1g，批号：、、)。
内毒素检测方法
内毒素检测方法内毒素是一种存在于细菌细胞壁中的有毒物质，其存在会对人体健康造成严重威胁。
因此，及早发现和检测内毒素的方法至关重要。
本文将介绍几种常用的内毒素检测方法，希望能对相关领域的科研工作者和实验人员有所帮助。
首先，最常用的内毒素检测方法之一是内毒素检测试剂盒法。
这种方法的优势在于操作简单，结果快速。
通常情况下，只需要将待测样品加入试剂盒中，按照说明书进行操作，就能得到内毒素的检测结果。
然而，这种方法也存在一定的局限性，例如无法区分内毒素的具体种类，只能判断内毒素的存在与否。
其次，内毒素检测的另一种方法是内毒素生物学检测方法。
这种方法通过利用生物学特性来检测内毒素的存在，例如利用小鼠或大鼠来进行生物学反应检测。
这种方法的优势在于能够检测到不同种类的内毒素，并且结果比较准确。
但是，这种方法也存在一些缺点，例如操作复杂、耗时较长，而且对实验动物的使用也存在一定的伦理争议。
另外，还有一种常用的内毒素检测方法是内毒素生化检测方法。
这种方法通过利用内毒素与特定生化试剂的反应来进行检测，例如内毒素与内毒素结合蛋白的结合反应等。
这种方法的优势在于能够定量检测内毒素的含量，结果比较准确。
但是，这种方法也存在一些局限性，例如对实验条件要求较高，操作技术要求严格等。
综上所述，内毒素检测方法有多种，每种方法都有其独特的优势和局限性。
在实际应用中，需要根据具体的实验目的和条件选择合适的内毒素检测方法。
同时，也需要不断地探索和研究新的内毒素检测方法，以提高内毒素检测的准确性和效率，保障人体健康。
希望本文所介绍的内毒素检测方法能够对相关领域的科研工作者和实验人员有所帮助，促进内毒素检测技术的不断进步和创新。
内毒素实验凝胶法
保温和拿取试管过程应避免受到振动造成假阴性结果。
鲎试剂灵敏度复核试验
若最大浓度2.0λ管均为阳性，最低浓度0.25λ管 均为阴性，阴性对照管为阴性，试验方为有效。 计算反应终点浓度的几何平均值，即为鲎试剂灵 敏度的测定值（λc），计算方法见中国药典。 反应终点浓度是指系列递减的内毒素浓度中最 后一个呈阳性结果的浓度。 当λc在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，方 可用于细菌内毒素检查，并以标示灵敏度λ为该批 鲎试剂的灵敏度。
细菌内毒素检查法 （凝胶法）
苏州大学 卫生与环境技术研究所
细菌内毒素
细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁的产物,它主
要化学成分是脂多糖。细菌在生活状态下不会释放
出来，只有当细菌死亡后才会表现出毒性。
内毒素为外源性热原物质，它可激活中性粒细
胞等，使之释放出一种内源性热原质，作用于体温
调节中枢引起发热。
注意事项
1. 每批鲎试剂在用于试验前首先要进行灵敏度的 复核试验； 2. 安瓿开启前应先用砂石划痕(不管是色点或包环 易折安瓿)，用手半拉半掰将颈部折断，千万不能用 镊子敲击，防止碎玻屑掉入安瓿。 3. 在鲎试剂的溶解、样品的稀释及加入时，取样均 应准确，缓缓加入避免气泡。 4. 保温过程中不可随时取出观察，防止形成的凝胶 受到振动后变形而误判为阴性。
注意事项
5. 冻干的鲎试剂应存放在2-8℃下；避免长时间放 置在高于25℃的温度条件下。已复溶的鲎试剂在间 歇使用过程中最好放在2-8℃的冰箱里，可存放24 小时，在-20℃以下，可存放四个星期，鲎试剂只 能冻融一次。
谢
谢
鲎
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液，每一个内毒素浓度平行做4管；另外2管各加入
细菌内毒素检测方法
细菌内毒素检测方法细菌内毒素是一类由细菌产生的有毒物质，它们可以对人体和动物产生严重的危害。
因此，对细菌内毒素进行及时、准确的检测显得尤为重要。
本文将介绍几种常见的细菌内毒素检测方法，以供参考。
首先，常见的细菌内毒素检测方法之一是生物学检测法。
这种方法利用动物、细胞或其他生物体对内毒素的反应来进行检测。
例如，利用小鼠腹腔注射内毒素，观察其生理反应来判断内毒素的存在与否。
虽然这种方法具有较高的灵敏度和特异性，但由于涉及动物实验，存在一定的道德和法律问题，因此在实际应用中受到一定的限制。
其次，化学检测法也是一种常用的细菌内毒素检测方法。
该方法利用化学试剂与内毒素发生特定反应，通过观察反应产物的形成或颜色变化来判断内毒素的存在与否。
例如，内毒素在特定条件下可与Limulus试剂发生凝集反应，形成凝集物。
这种方法具有操作简便、结果快速的优点，但也存在一定的特异性和灵敏度问题。
另外，免疫学检测法也是一种常见的细菌内毒素检测方法。
该方法利用抗体与内毒素特异性结合，再通过染色、发光等方式来检测结合产物，从而判断内毒素的存在与否。
例如，ELISA法是一种常用的免疫学检测方法，它具有高度的特异性和灵敏度，且可以进行高通量检测，因此在实际应用中得到了广泛的应用。
最后，分子生物学检测法也是一种较为先进的细菌内毒素检测方法。
该方法利用PCR、基因芯片等技术，通过检测内毒素相关基因或基因产物来判断内毒素的存在与否。
这种方法具有高度的特异性和灵敏度，且可以进行多重检测，因此在临床诊断和科研领域得到了广泛的应用。
综上所述，针对细菌内毒素的检测方法有生物学检测法、化学检测法、免疫学检测法和分子生物学检测法等多种选择。
在实际应用中，可以根据需要的特异性、灵敏度、操作简便性等因素来选择合适的检测方法。
希望本文所介绍的内容能够对相关人士有所帮助。
注射用克林霉素磷酸酯细菌内毒素检查方法学研究(1)
注射用克林霉素磷酸酯细菌内毒素检查方法学研究简述：本试验对注射用克林霉素磷酸酯细菌内毒素检查的可行性进行了验证，结果表明：注射用克林霉素磷酸酯可以用细菌内毒素检查法进行细菌内毒素限量的控制，其细菌内毒素限值可定为：每1mg克林霉素磷酸酯中含内毒素的量应小于0.10EU。
一、试验目的对注射用克林霉素磷酸酯细菌内毒素检查的可行性进行了验证，为该品种质量标准中制定细菌内毒素检查项提供依据。
二、试验方法与结果1、限值的确定注射用克林霉素磷酸酯临床用于治疗革兰氏阳性菌、厌氧菌引起的各种感染性疾病，重度感染推荐剂量为按静脉滴注：成人一日1.2~2.7g。
参照60kg体重的剂量，按静脉注射剂的内毒素阈值计算供试品细菌内毒素限值，公式如下：5EU/（kg·hˉ1）L=K/M=————————————— =0.1EU/mg2700 mg /(60kg·hˉ1)式中L为供试品的细菌内毒素限值；K为按规定给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，静脉注射剂的K值为5EU/(kg.h)；M为人用每公斤体重每小时最大剂量。
根据以上公式计算出细菌内毒素限值为：每1mg克林霉素磷酸酯中含内毒素的量应小于0.10EU。
现将该品种的细菌内毒素限值按L<0.10EU/mg进行细菌内毒素方法学验证。
2、试剂2.1 注射用克林霉素磷酸酯生产厂家：批号：2.2 鲎试剂湛江博康海洋生物有限公司规格：0.1ml 批号：1106210 灵敏度：0.25EU/ml湛江安度斯生物有限公司规格：0.1ml 批号：1011091 灵敏度：0.25EU/ml2.3 细菌内毒素工作标准品中国药品生物制品检定所规格：140EU/支批号：150601-2010702.4 细菌内毒素检查用水湛江安度斯生物有限公司规格：5ml/支批号：10052403、鲎试剂灵敏度复核试验按照《中国药典》2010年版二部附录细菌内毒素检查法规定，进行鲎试剂灵敏度复核，结果见表1所示。
细菌内毒素检查验证方案
细菌内毒素检查验证方案一、引言细菌内毒素是一类具有强毒性的生物毒素，可以由细菌产生并释放到环境中。
其存在对于人类和动物的健康具有潜在的危害。
因此，建立一种可靠有效的细菌内毒素检查验证方案至关重要。
本文将介绍一种基于实验室技术的细菌内毒素检查验证方案。
二、实验目的本实验的目的是开发一种验证细菌内毒素检测的方法，以确保检测结果的准确性和可靠性。
具体目标包括：1. 确定合适的细菌内毒素检测方法；2. 确定验证方案的实施步骤；3. 评估验证方案的可行性和有效性。
三、实验设计1. 材料准备- 细菌内毒素检测试剂盒（根据实验需求选择合适的试剂盒）- 多个细菌培养菌株- 培养基和培养用具- 杂质过滤器- 试管和离心管等实验室常用器具2. 实验步骤1) 培养细菌菌株：选择多个细菌菌株进行培养，确保含有多种不同类型的内毒素。
2) 提取内毒素：将培养的细菌离心，取上清液，通过杂质过滤器去除细菌细胞残留和固体杂质。
得到的上清液即为细菌内毒素提取物。
3) 验证检测方法：使用细菌内毒素检测试剂盒对提取物进行检测，按照试剂盒说明书进行操作。
根据试剂盒结果，评估其准确性和可靠性。
4) 重复实验：根据上述步骤，重复多次实验以确保实验结果的稳定性和可重复性。
5) 数据分析：收集实验结果并进行统计分析，评估所选择的细菌内毒素检测方法的可行性和有效性。
四、实验注意事项1. 实验过程中要严格遵守实验室操作规范，注意安全。
2. 选择合适的细菌内毒素检测试剂盒，确保其适用于所需检测的内毒素类型。
3. 在提取内毒素时，要注意避免细菌细胞的污染。
4. 实验过程中要确保操作的准确性和重复性，避免人为误差的干扰。
5. 对于实验结果的分析，要进行统计学处理，确保数据的准确性和可信度。
五、预期结果通过本实验，预计将得到以下结果：1. 确定合适的细菌内毒素检测方法，验证其具有较高的准确性和可靠性。
2. 提供一个详细的细菌内毒素检查验证方案，使其可应用于实际生产中。
内毒素检测方法
内毒素检测方法内毒素是一种存在于细菌细胞壁中的毒素，它对人体和动物的健康造成严重危害。
因此，对内毒素的检测显得尤为重要。
本文将介绍几种常见的内毒素检测方法，希望能够对相关领域的研究人员和实践者提供一些帮助。
首先，最常用的内毒素检测方法之一是内毒素检测试剂盒法。
这种方法简单易行，无需复杂的实验设备和操作技术，适用于实验室和野外条件。
通过将待测样品与内毒素检测试剂盒中的试剂发生反应，根据颜色变化或者光学密度的变化来判断内毒素的含量。
这种方法操作简便，结果直观，因此被广泛应用于内毒素检测领域。
其次，生物学法也是一种常见的内毒素检测方法。
生物学法主要是利用动物或者细胞对内毒素的反应来进行检测。
例如，利用小鼠腹腔注射待测样品，观察小鼠的生理反应来判断内毒素的毒性。
这种方法对内毒素的检测非常敏感，但是由于涉及动物实验，受到了伦理和法律的限制。
另外，生物传感器技术也在内毒素检测领域发挥着重要作用。
生物传感器是一种能够将生物信息转化为可测量的信号的装置，利用生物传感器可以实现对内毒素的高灵敏度检测。
通过改变生物传感器的生物识别元件，可以实现对不同类型内毒素的检测，具有很高的应用前景。
最后，分子生物学方法也是内毒素检测的重要手段之一。
PCR法和基因芯片技术可以实现对内毒素基因的检测和分析，从而判断样品中是否存在内毒素。
这种方法具有高度的特异性和灵敏度，能够准确地检测出内毒素的存在，并且可以对内毒素的种类进行鉴定。
综上所述，内毒素检测是保障食品安全和医药卫生的重要环节，各种内毒素检测方法各有优劣。
在实际应用中，可以根据具体的情况选择合适的方法进行检测。
希望本文介绍的内毒素检测方法能够为相关领域的研究和实践提供一些参考，推动内毒素检测技术的发展与进步。
细菌内毒素检查法研究进展
细菌内毒素检查法研究进展摘要：细菌内毒素是革兰阴性菌细胞壁上的脂多糖，在极微量（1-5ng/kg体重）的情况下便可引起人体发热、白细胞减少、微循环障碍、全身炎症反应及多器官功能衰竭等严重不良反应，所以在药物生产中，尤其是注射剂的生产中，细菌内毒素的控制与检测非常重要，关乎人们的生命安全。
本文对细菌内毒素检查法研究进展进行探讨。
关键词：细菌内毒素检查法；鲎试剂；微量凝胶法；重组C因子法引言：细菌内毒素广泛存在于人们的生活中，可引起人体发热、白细胞减少、微循环障碍、内毒素休克、弥散性血管内凝血等症状，在药品生产过程中不可避免地会引入细菌内毒素，所以药品质量控制中对内毒素的检测尤为重要。
目前，细菌内毒素的检测方法有家兔热原试验法、鲎试剂法、微量凝胶法、重组C因子法、酶联免疫法等检测方法。
文章对这几种检测方法进行综述，比较各自的优缺点，以期为内毒素的检测提供更合理有效的方法。
概述细菌内毒素的检测方法：家兔热原试验法、鲎试剂法、微量凝胶法、重组C因子法、酶联免疫法等检测方法。
《中华人民共和国药典》（2015版）规定细菌内毒素的检测采用鲎试剂检测法。
鲎试剂是由美洲鲎或东方鲎的血液中变形细胞的溶解物提取而成。
我国每年对鲎试剂的需求为1000万支，使我国鲎资源面临着巨大压力。
由于近些年浅海环境的恶化，人们肆意地捕食，我国的鲎资源急剧减少，所以，寻找细菌内毒素检查法的替代方法和补充方法已经迫在眉睫。
二、细菌内毒素检查方法分析1、家兔法由于家兔对热原的反应与人基本相似，所以，采用家兔耳缘静脉注射的方式，监测家兔体温，用来定性检测热原。
但是家兔法存在很多缺点，如：不能定量检测热原、使用动物实验、检测周期长、灵敏度低等，因此家兔法正在逐步被取代。
2、鲎试剂法鲎试剂法是目前检查细菌内毒素的常用标准，鲎试剂主要含有：C因子、B因子、G因子、凝固蛋白酶原等物质，其反应原理是：首先C因子与细菌内毒素结合被激活为酶活性形式，然后活化的C因子将B因子活化，活化的B因子将凝固蛋白酶原活化为凝固蛋白酶，凝固蛋白酶将凝固蛋白原转化为凝固蛋白形成凝胶。
光度法细菌内毒素检查实验方法
光度法细菌内毒素检查实验方法
光度法细菌内毒素检查实验方法主要包括以下步骤:
1.准备试剂和样品:准备所需的宣试剂、内毒素标准品、样品等。
2.加样:按照实验要求，将室试剂、内毒索标准品和样品加入反应管中。
3.孵育:将反应管放入恒温箱中，在适宜的温度下进行孵育。
4.检测:在孵育结束后，使用光度计检测反应管中的吸光度或透光率。
5.结果分析:根据检测结果，计算样品中的内毒素含量，并与标准品进行比较，判断样品是否合格。
需要注意的是。
光度法细菌内毒索检查实验方法的具体操作步骤可能因不同的实验条件和仪器而有所差异。
因此，在进行实验前，应仔细阅读实验说明书，了解实验原理和操作步骤，并严格按照实验要求进行操作。
同时，为了保证实验结果的准确性和可靠性，还应进行必要的实验质星控制和验证。
康艾注射液中细菌内毒素检测方法的研究
５ ０・
中国中医药科技 ２ ｌ ｏ ２年 １ 月第 １ ９卷第 １ Ｊｎ ０ ２ Ｖ １１ ｏ １ 期 ａ ．２ １ ｏ．９ Ｎ ．
康 艾 注射 液 中细 菌 内毒 素检 测 方 法 的研 究
王 宗春 刘 红
（ 武汉 大学人 民医院药学部 ・ 武汉 ４ ０ ６ ３０ ０ 湖北省 医药工业研 究院 ・武汉 ４０ ６ ） ３ ０ １
ｍｌ＿ 。 ‘
取 ６支 ） 配制成 １ 稀释溶 液 ， 用两个 厂家生 产 的鲎试 ， Ｏ倍 使
剂（ 灵敏度 均为 ０ ５ Ｕ ・ ｌ ） 按中 国药典 ２ １ ． Ｅ ｍ ， ００年版 （ 二
参考文献
［ ］ 傅熙博 ， １ 韩宏斌 ， 付庆才 ， 康艾注射液在原 发性 肝癌 围手术 等． 期 的治疗作用观察． 中国肿瘤临床与康 复 ， １ ， （ ）９ ． ２ ０１ １： ０ ７ ５
法检 查康 艾注射液 中细 菌内毒素具有 简便 、 快捷 、 可靠等优点 ， 细茵 内毒素限值 为 ５ Ｕ ・ ｌ 。 Ｅ ｍ ＿。
主题词 内毒 素检 测／ 方法 康艾注射液 细 茵 千克体重每小时 的最大供试 品剂量 ， 照康 艾注射液说 明书 按
康 艾注射液 的主要成份 为黄芪 、 人参 艾注射 液的细菌 内毒素检查 法。方法： 建 按照 中国药典 ２ １ ０ ０年版 （ 二部 ） 附录 Ｘ Ｅ细 Ｉ
菌内毒 素检 查法 ， ３批康 艾注射 液进 行 干扰试 验和 细 菌 内毒 素检 查。结果 ： 艾 注射 液经 １ 对 康 ０倍 稀释 后， 用灵敏度 为 ０ ５ Ｕ・ ｌ１ ． Ｅ ｍ －的鲎试剂进行 实验 ， 试品不干扰 细菌内毒 素检 查。结论 ： 用鲎试剂 方 供 使
表 ｌ 鲎 试 剂 灵 敏 度 复 核 结 果
注射用卡络磺钠细菌内毒素检查方法研究
第一作者简介：孙智培，助理工程师；研究方向：生物工程。
Ｔｅｌ：１５７７３２３３５８６；Ｅ ｍａｉｌ：２９９００５９８５４＠ｑｑ ｃｏｍ 通讯作者简介：胡翮，副主任药师；研究方向：食品药品检验。
Ｔｅｌ：１３７８６２１９５８６；Ｅ ｍａｉｌ：４１１８４９８６２＠ｑｑ ｃｏｍ注射用卡络磺钠细菌内毒素检查方法研究孙智培，何硕，胡翮（湘潭市食品药品检验所，湘潭４１１１００）摘要 目的：建立注射用卡络磺钠的细菌内毒素检验方法。
方法：按照《中国药典》２０１５年版四部通则１１４３细菌内毒素检查法，用两个不同厂家鲎试剂对３批注射用卡络磺钠进行了干扰实验和细菌内毒素检查。
结果：注射用卡络磺钠浓度稀释至０ １３ｍｇ·ｍＬ－１，使用灵敏度为０ ２５ＥＵ·ｍＬ－１的鲎试剂，对鲎试剂和细菌内毒素反应无干扰作用，可对注射用卡络磺钠进行细菌内毒素检查。
结论：建立的方法可用于注射用卡络磺钠的细菌内毒素检查。
关键词：注射用卡络磺钠；细菌内毒素；凝胶法；干扰实验中图分类号：Ｒ９２１ ２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９－３６５６（２０２０）－３－０２２３－４ｄｏｉ：１０ １９７７８／ｊ ｃｈｐ ２０２０ ０３ ００８ＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔｆｏｒＣａｒｂａｚｏｃｈｒｏｍｅＳｏｄｉｕｍＳｕｌｆｏｎａｔｅｆｏｒＩｎｊｅｃｔｉｏｎＳＵＮＺｈｉｐｅｉ，ＨＥＳｈｕｏ，ＨＵＨｅ（ＸｉａｎｇｔａｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｘｉａｎｇｔａｎ４１１１００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｍｅｔｈｏｄｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔｆｏｒＣａｒｂａｚｏｃｈｒｏｍｅＳｏｄｉｕｍＳｕｌｆｏｎａｔｅｆｏｒＩｎ ｊｅｃｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｉｎａｃｃｏｒｄａｎｃｅｗｉｔｈｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔｉｎｇｅｎｅｒａｌｎｏｔｉｃｅ１１４３ｏｆＣｈＰ２０１５ＶｏｌｕｍｅⅣ，ｔｈｅＴＡＬｓｆｒｏｍｔｗｏｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｃｏｎｄｕｃｔｔｈｅｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｔｅｓｔａｎｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｉｎｔｈｒｅｅｂａｔｃｈｅｓｏｆＣａｒｏｓｕｌｆｏｎａｔｅＳｏｄｉｕｍＳｕｌｆｏｎａｔｅｆｏｒＩｎｊｅｃｔｉｏｎ Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｒｅｗａｓｎｏｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｏｎｔｈｅｒｅａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＴＡＬａｎｄｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｗｈｅｎＣａｒｂａｚｏｃｈｒｏｍｅＳｏｄｉｕｍＳｕｌｆｏｎａｔｅｆｏｒＩｎｊｅｃｔｉｏｎｗａｓｄｉｌｕｔｅｄｔｏ０ １３ｍｇ·ｍＬ－１ａｎｄｔｈｅＴＡＬｈａｄｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆ０ ２５ＥＵ·ｍＬ－１Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｍｅｔｈｏｄｃａｎｂｅａｐｐｌｉｃａｂｌｅｔｏｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｉｎＣａｒｂａｚｏｃｈｒｏｍｅＳｏｄｉｕｍＳｕｌｆｏｎａｔｅｆｏｒＩｎｊｅｃｔｉｏｎＫｅｙｗｏｒｄｓ：ＣａｒｂａｚｏｃｈｒｏｍｅＳｏｄｉｕｍＳｕｌｆｏｎａｔｅｆｏｒＩｎｊｅｃｔｉｏｎ；ｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎ；ｇｅｌｍｅｔｈｏｄ；ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｔｅｓｔ 注射用卡络磺钠主要成分为卡络磺钠，为肾上腺色腙衍生物，又称为新安络血［１］。
《细菌内毒素检查法》课件
本课程将介绍细菌内毒素检查法的原理、种类、检测方法、应用领域、优势 和局限性以及实施过程，以及其在研究领域中的发展趋势。
细菌内毒素的危害
1 健康危害
因某些细菌种群大量滋生 释放内毒素而导致食物中 毒、中毒性休克等健康问 题。
2 环境危害
有些细菌内毒素难以处理 且对环境造成危害，例如 鱼类致病性细菌产生的内 毒素对水质造成危害。
3 经济危害
某些细菌内毒素对食品安 全造成威胁，导致企业经 济损失。
检测方法
酶联免疫吸附法
基于免疫抗原抗体对，可检测 极低浓度内毒素。
化学检测法
基于内毒素的化学性质，但存 在交叉反应等缺点。
电子显微镜法
可直接观察细胞内毒素的形态 和分布，但检测精度较低。
生物学检测法
基于细胞生物活性特性，能够 反映细胞内毒素的毒性，但耗 时、费力。
应用领域
食品安全
应用于食品卫生监测和食品 安全评价，确保食品安全。
环境监测
帮助研究水质、土壤污染、 制药废水等环境问题的解决。
医疗诊断
辅助疾病的早期诊断和治疗， 特别是针对慢性病。
优势和局限性
优势
• 检测灵敏度高 • 检测方法多样化 • 结果直观、准确
局限性
• 样品处理条件严格 • 存在交叉反应 • 检测过程较复杂
新材料技术
开发出更为灵敏、可靠、高通量、 低成本的检测材料。
实施过程
1
样品处理
对待检样品进行预处理，获取检测样品。
2
检测方法选择
根据不同检测目的，综合选择检测方法。
3
试剂准备
选择合适的试剂，按照比例配制好所需试剂。
4仪器操作使用合源自的仪器，操作细菌内毒素检测。发展趋势
细菌内毒素常用检测方法
细菌内毒素常用检测方法细菌内毒素常用检测方法细菌内毒素是细菌代谢产生的有毒物质，可以对人体产生不良反应，包括炎症、细胞毒性和免疫反应。
因此，对细菌内毒素的检测非常重要。
本文将按照类别介绍几种常用的细菌内毒素检测方法。
1. 生物学方法生物学方法是通过生物实验来检测细菌内毒素的存在。
这种方法广泛应用于细菌内毒素的检测中。
常用的方法包括小鼠中毒试验、兔子毒性试验和果蝇反应试验。
这些方法基于动物对细菌内毒素的不同反应，可以初步确定细菌内毒素的存在。
2. 免疫学方法免疫学方法是利用抗体来检测细菌内毒素的存在。
这种方法是一种快速、敏感和特异的方法。
常用的免疫学方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和放射免疫分析法（RIA）。
这些方法基于抗体与细菌内毒素的结合来确定细菌内毒素的存在。
3. 生化方法生化方法是利用化学试剂来检测细菌内毒素的存在。
这种方法是一种快速、高效和特异的方法。
常用的生化方法包括高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）。
这些方法基于细菌内毒素的化学结构和性质来确定细菌内毒素的存在。
4. 破坏性方法破坏性方法是利用物理或化学方法来破坏细菌内毒素，使其失去活性。
这种方法是一种快速、高效和安全的方法。
常用的破坏性方法包括加热处理、辐射治疗和酸碱处理。
这些方法可以将细菌内毒素破坏成无活性的物质，使其不能对人体产生危害。
5. 分子生物学方法分子生物学方法是一种新型的检测方法，利用PCR、DNA芯片等技术来检测细菌内毒素的存在。
这种方法具有高灵敏度、高特异性和快速的优点。
常用的分子生物学方法包括PCR法和DNA芯片技术。
这些方法可以将细菌内毒素的基因级别分析，确定其存在。
综上所述，细菌内毒素的检测方法有很多种。
我们可以根据实际需要和需求选择合适的检测方法。
同时，我们也需要不断地研究和发展新型的检测方法，以提高检测的灵敏度和准确度，从而更好地保障人体健康。
枸橼酸细菌内毒素检查(凝胶法)方法学研究
枸橼酸细菌内毒素检查（凝胶法）方法学研究陈薪宇，曹春然，孙圆媛（北京市药品检验所国家药品监督管理局仿制药研究与评价重点实验室中药成分分析与生物评价北京市重点实验室，北京１０２２０６）摘要 目的：建立枸橼酸的细菌内毒素检查方法。
方法：按《中国药典》２０１５年版四部通则要求，使用两个厂家的鲎试剂进行细菌内毒素干扰试验预试验和干扰试验，并对样品进行细菌内毒素检查。
结果：枸橼酸浓度在０ ２５ｍｇ·ｍＬ－１及以下时对细菌内毒素检查无干扰，细菌在毒素限值定为０ ５０ＥＵ·ｍｇ－１（按干燥品计）。
对６批样品进行检查，结果均符合规定。
结论：所建立的细菌内毒素检查法（凝胶法）可用于枸橼酸的细菌内毒素检查。
关键词：枸橼酸；细菌内毒素；凝胶法中图分类号：Ｒ９２１ ２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９－３６５６（２０２１）０１－００６１－０６ｄｏｉ：１０ １９７７８／ｊ ｃｈｐ ２０２１ ０１ ０１２Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｎｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｓｔｅｓｔ（ｇｅｌｍｅｔｈｏｄ）ｏｆｃｉｔｒｉｃａｃｉｄＣＨＥＮＸｉｎｙｕ，ＣＡＯＣｈｕｎｒａｎ，ＳＵＮＹｕａｎｙｕａｎ（ＢｅｉｊｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，ＮＭＰＡＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＧｅｎｅｒｉｃＤｒｕｇｓ，ＢｅｉｊｉｎｇＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｎａｌｙｓｉｓａｎｄＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｎＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０２２０６，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｓｔｅｓｔｍｅｔｈｏｄｆｏｒｃｉｔｒｉｃａｃｉｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｐｒｅ ｔｅｓｔａｎｄｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｔｅｓｔｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｓｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｗｉｔｈＴＡＬｓｆｒｏｍｔｗｏｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒｓ，ａｎｄｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｓｏｆｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄａｎｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｊｕｄｇｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｇｅｎｅｒａｌｎｏｔｉｃｅｓｏｆｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ２０２０ＶｏｌｕｍｅＩＶ Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｏｎｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｓｔｅｓｔｗｈｅｎｔｈｅｃｏｎｃｅｎ ｔｒａｔｉｏｎｏｆｃｉｔｒｉｃａｃｉｄｗａｓｎｏｔｍｏｒｅｔｈａｎ０ ２５ｍｇ·ｍＬ－１ Ｔｈｅｌｉｍｉｔｖａｌｕｅｏｆｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｓｗａｓｓｅｔａｓ０ ５０ＥＵ·ｍｇ－１（ａｎｈｙｄｒｏｕｓｓｕｂｓｔａｎｃｅ） Ｔｈｅｔｅｓｔｒｅｓｕｌｔｓｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｓｉｎ６ｂａｔｃｈｅｓｏｆｓａｍｐｌｅｓｍｅｔｔｈｅｃｒｉｔｅｒｉａ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｍｅｔｈｏｄ（ｇｅｌｍｅｔｈｏｄ）ｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔｏｆｃｉｔｒｉｃａｃｉｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｉｔｒｉｃａｃｉｄ；ｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｓｔｅｓｔ；ｇｅｌｍｅｔｈｏｄ 枸橼酸（无水物、一水合物）作为常见的药用辅料、ｐＨ调节剂、稳定剂和酸化剂，广泛应用于药物注射剂中［１］，为保证注射剂在使用过程中的安全性，控制枸橼酸（无水物、一水合物）细菌内毒素含量十分重要。
壳聚糖凝胶膜中细菌内毒素检查方法学研究
壳聚糖凝胶膜中细菌内毒素检查方法学研究简述：本实验对壳聚糖凝胶膜内毒素检查的可行性进行了验证，结果表明：壳聚糖凝胶膜可以用细菌内毒素检查法进行细菌内毒素限量的控制，其细菌内毒素限制可定义为：每1 mg壳聚糖凝胶膜中含内毒素的量应小于0.5 EU。
一、实验目的对壳聚糖凝胶膜细菌内毒素检查的可行性进行了验证，为该品种质量标准中制定细菌内毒素检查项提供依据。
二、试验材料与仪器1.细菌内毒素工作标准品（冻干品）生产单位：福州新北生化工业有限公司批号：120719规格：10 EU2.细菌内毒素检查用水（BET水）生产单位：福州新北生化工业有限公司批号：11101815规格：50 ml3.鲎试剂4.鼓风干燥箱厂家：上海精宏实验设备有限公司型号：DHG-90305.漩涡混合器厂家：姜堰市沈高康健生化器具厂型号：MM-26.恒温水浴锅厂家：上海康路仪器设备有限公司型号：HH-S三、试验方法与结果1.限值的确定依据中华人民共和国医药行业标准（YY/T 0606.7-2008）组织医疗产品第七部分：壳聚糖中规定：以无菌方式提供时，壳聚糖产品中细菌内毒素含量应小于0.5 EU/mg（500 EU/ml）。
2.鲎试剂灵敏度复核试验按照《中国药典》2010版二部附录细菌内毒素检查法规定，进行鲎试剂灵敏度复核，结果见表1所示。
表1 灵敏度复核试验结果两批鲎试剂用细菌内毒素工作标准品检查，λc都在λ的0.5~2.0倍间，结果均符合规定。
3.干扰试验取灵敏度（λ）为0.5 EU/ml的鲎试剂进行干扰试验，则供试品最大有效稀释倍数（MVD）=cL/λ=1000倍。
用BET水将壳聚糖凝胶膜稀释1000倍（0.5 EU/ml）的溶液作为供试品溶液。
另取一支细菌内毒素标准品，加入2.0 ml BET水使其溶解，用封口膜将其瓶颈封严，置漩涡混合器上混合15 min，然后用BET水依次稀释至1.0、0.5、0.25、0.125（EU/ml）的不同浓度溶液作为Es系列溶液。
细菌内毒素检查方法研讨
细菌内毒素检查法１目的该SOP用来判断供试品中细菌内毒素是否符合规定。
2适用范围该SＯＰ适用于《中国兽药典》要求检查该项的药品和适合《中国兽药典》要求的其它品种的药品的细菌内毒素检查。
3职责进行该项检验的检验员应该按该SOP进行检验,检测室主任负责监督该ＳＯP的正确执行。
４检验4.1 技术依据及原理本法系用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应即内毒素在二价阳离子的参与下,作用于鲎血凝集酶系统而发生的一系列酶联反应，最后形成凝胶,以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定。
4．1.1鲎试剂灵敏度复核试验项的目的不仅是考查鲎试剂和细菌内毒素工作标准品的效价是否准确,也是考查检验人员操作方法是否正确和实验条件是否符合规定。
因此要求每个实验室在将一批新的鲎试剂用于干扰试验或供试品细菌内毒素检查前应进行鲎试剂灵敏度复核试验。
４.1.２供试品干扰试验项用于建立新品种细菌内毒素检查方法以及供试品的配方和工艺有变化,鲎试剂来源不同或供试品阳性对照结果呈阴性时确定供试品是否存在抑制或增强作用。
4.1．3检查法项为供试品细菌内毒素检查方法。
阴性对照、阳性对照和供试品阳性对照必须同时进行,否则试验结果无效。
4.２注意事项４．2.１实验前，须用肥皂洗手,用75%乙醇棉球消毒４.2．２实验时，须戴工作帽和口罩。
尤其在配制洗液和洗涤玻璃器皿时一定要戴手套、工作帽和口罩。
4.２.３试验应在洁净室或洁净工作台内进行。
4.2.4用移液管或刻度吸管等吸取样品时,须使用洗耳球,勿用嘴吸、吹,防止唾液溅入。
也可使用加样器等其它方法。
4.2.5 注意所用鲎试剂的批号、有效期、规格、灵敏度等。
4.2.６进行干扰实验时,标准对照和供试品阳性对照（含供试品的内毒素溶液）应同时进行。
４.2.7在进行灵敏度复核、干扰试验和供试品内毒素检查时,各个实验所要求的对照应同时进行，并在有效的条件下才能进行计算和判断。
４．３材料、仪器、试剂的准备及基本要求4.3.１天平供试品称量用,感量为０．１mg以下。
卡巴他赛细菌内毒素检查方法学研究
卡巴他赛细菌内毒素检查方法学研究摘要：目的：建立卡巴他赛细菌内毒素检查方法。
方法：按照《中华人民共和国药典》2020版四部通则1143细菌内毒素凝胶检查法的要求，采用两个厂家的鲎试剂进行细菌内毒素干扰试验，并对样品进行细菌内毒素检查。
结果：卡巴他赛用细菌内毒素检查用水和无水乙醇及吐温80溶解成6mg·ml-1的溶液，再稀释至24倍时，对细菌内毒素检查无干扰。
结论：可采用此法对卡巴他赛的细菌内毒素进行检查。
关键词：卡巴他赛；细菌内毒素；凝胶法；干扰试验；内毒素是革兰阴性细菌细胞壁脂多糖，极微量（1ng/kg）的内毒素进入人体即可引起发热反应。
大剂量的内毒素可引起机体发生内毒素休克、弥散性血管内凝血、多器官衰竭等反应，甚至导致死亡。
故注射剂中细菌内毒素含量应严格控制，生产注射剂所使用的原料中内毒素的含量也应进行控制，以保证注射剂的安全性。
卡巴他赛是一种治疗前列腺癌的二线药物，是化学半合成紫杉烷类小分子化合物。
本研究对卡巴他赛细菌内毒素检查的可行性进行方法学研究,为该原料质量标准中制定细菌内毒素检查提供依据。
1、仪器与材料1.1实验材料鲎试剂，灵敏度为0.125EU·ml-1，规格：0.1ml，批号2104091，湛江安度斯生物有限公司，批号20092512，福州新北生化工业有限公司；细菌内毒素工作标准品，效价80EU·支-1，批号150601-210987，中国食品药品检定研究院；细菌内毒素检查用水50ml·瓶-1，批号：2005220，湛江安度斯生物有限公司；无水乙醇，批号2009231，西陇科学股份有限公司；吐温80，批号：20210125，国药集团。
1.2仪器GZX-9246MBE电热恒温干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂），XW-80A型漩涡混合器（上海沪西分析仪器厂有限公司），HH-8型恒温水浴锅（上海梅香仪器有限公司），XSR204型万分之一天平（梅特勒-托利多），移液器（赛托利斯）。
内毒素检测方法
内毒素检测方法
内毒素是一种存在于细菌细胞壁中的毒素，当细菌死亡或者被杀死时，内毒素
会释放出来，对人体健康造成危害。
因此，检测内毒素的方法显得尤为重要。
目前，常见的内毒素检测方法包括生物学检测法、生化检测法和免疫学检测法。
生物学检测法是通过动物实验来检测内毒素的方法。
常用的动物包括小鼠、大
鼠和兔子等。
这种方法的优点是对内毒素的检测灵敏度高，但缺点也很明显，动物实验造成了动物的牺牲，而且实验周期长，费时费力。
生化检测法是通过检测内毒素对细胞或者生物分子的影响来进行内毒素检测的
方法。
这种方法的优点是可以定量检测内毒素的含量，而且不需要动物实验，但缺点是操作复杂，需要较长的实验周期。
免疫学检测法是通过检测内毒素与特定抗体的结合来进行内毒素检测的方法。
这种方法的优点是操作简便，快速高效，而且可以进行定量检测，但缺点是需要特定的抗体，成本较高。
除了以上几种常见的内毒素检测方法外，近年来，一些新型的检测方法也逐渐
出现。
比如基于光学原理的检测方法，利用内毒素与特定物质的光学特性进行检测，操作简便，快速高效；基于纳米材料的检测方法，利用纳米材料对内毒素的高灵敏度进行检测，具有极高的灵敏度和快速的检测速度。
综上所述，内毒素的检测方法有多种多样，每种方法都有其优缺点。
在选择合
适的内毒素检测方法时，需要根据实际情况综合考虑各种因素，选择最适合自己实验需求的方法。
同时，随着科学技术的不断发展，相信会有更多更高效的内毒素检测方法出现，为我们的科研工作和生产实践提供更好的技术支持。
头孢洛林酯细菌内毒素检查法研究
头孢洛林酯细菌内毒素检查法研究[摘要]目的：建立头孢洛林酯细菌内毒素检查法。
方法：按《中国药典》2010年版二部附录xii e进行试验和结果判断。
结果：用两个不同生产厂家，不同标示灵敏度鲎试剂进行研究，头孢洛林酯的最大不干扰浓度为3.2mg/ml，并对3批样品进行检查，均无干扰作用，其细菌内毒素均小于0.5eu/mg。
结论：本品细菌内毒素检查法（凝胶法）控制细菌内毒素的量合理可靠。
[关键词]头孢洛林酯；细菌内毒素；凝胶法；干扰试验中图分类号：s852.4+4 文献标识码：a 文章编号：1009-914x （2013）23-0215-01头孢洛林酯为抗生素类药物，属于第五代头孢菌素。
2010年10月，美国fda批准了日本武田制药研制的新型头孢类注射用抗生素—头孢洛林酯注射剂（teflaro）上市，用于治疗成人社区获得性细菌性肺炎（cabp）和急性细菌性皮肤和皮肤结构感染（absssi），包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（mrsa）。
目前该品种并未在中国上市，因此研制开发该品种并建立检验方法，对实现品种国产化，制定国家标准具有重要意义。
在本文对该品种的细菌内毒素检查法进行了研究，现将结果报告如下：1.材料1.1 头孢洛林酯：批号20120901、20121102、20121201（自产）。
1.2 鲎试剂（tal）：标示灵敏度0.25eu/ml，规格0.1ml，批号1204120，湛江海洋生物有限公司；标示灵敏度0.125eu/ml，规格0.1ml，批号1209090，湛江安度斯生物有限公司。
1.3 细菌内毒素标准品：细菌内毒素工作标准品规格100eu/ml，批号2011-10，中国药品生物制品检定所。
1.4 细菌内毒素检查用水。
2.方法与结果2.1 鲎试剂灵敏度复核按《中国药典》2010年版细菌内毒素检查法项下的要求，进行鲎试剂灵敏度复核，结果见表1，鲎试剂灵敏度测定值在0.5λ～2λ，结果符合规定。
2.2 供试品内毒素限值（l）的确定注射用头孢洛林酯的临床每次最大用量为600mg，参照公式可计算出头孢洛林酯内毒素限值为l=k/m=5eu/（kg·h）/2000mg/60（kg·h）=0.5 eu/mg。
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细菌内毒素检查法1 目的该SOP用来判断供试品中细菌内毒素是否符合规定。
2适用范围该SOP适用于《中国兽药典》要求检查该项的药品和适合《中国兽药典》要求的其它品种的药品的细菌内毒素检查。
3职责进行该项检验的检验员应该按该SOP进行检验，检测室主任负责监督该SOP的正确执行。
4检验4.1技术依据及原理本法系用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应即内毒素在二价阳离子的参与下，作用于鲎血凝集酶系统而发生的一系列酶联反应，最后形成凝胶，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定。
4.1.1 鲎试剂灵敏度复核实验项的目的不仅是考查鲎试剂和细菌内毒素工作规范品的效价是否准确，也是考查检验人员操作方法是否正确和实验条件是否符合规定。
因此要求每个实验室在将一批新的鲎试剂用于干扰实验或供试品细菌内毒素检查前应进行鲎试剂灵敏度复核实验。
4.1.2供试品干扰实验项用于建立新品种细菌内毒素检查方法以及供试品的配方和工艺有变化，鲎试剂来源不同或供试品阳性对照结果呈阴性时确定供试品是否存在抑制或增强作用。
4.1.3检查法项为供试品细菌内毒素检查方法。
阴性对照、阳性对照和供试品阳性对照必须同时进行，否则实验结果无效。
4.2注意事项4.2.1实验前，须用肥皂洗手，用75%乙醇棉球消毒4.2.2实验时，须戴工作帽和口罩。
尤其在配制洗液和洗涤玻璃器皿时一定要戴手套、工作帽和口罩。
4.2.3实验应在洁净室或洁净工作台内进行。
4.2.4用移液管或刻度吸管等吸取样品时，须使用洗耳球，勿用嘴吸、吹，防止唾液溅入。
也可使用加样器等其它方法。
4.2.5 注意所用鲎试剂的批号、有效期、规格、灵敏度等。
4.2.6进行干扰实验时，规范对照和供试品阳性对照（含供试品的内毒素溶液）应同时进行。
4.2.7在进行灵敏度复核、干扰实验和供试品内毒素检查时，各个实验所要求的对照应同时进行，并在有效的条件下才能进行计算和判断。
4.3材料、仪器、试剂的准备及基本要求4.3.1天平供试品称量用，感量为0.1mg以下。
4.3.2电热干燥箱除外源性内毒素用，温度应能维持250℃以上至少一小时。
4.3.3恒温水浴箱或适宜的恒温器，应能在37℃±1℃保持一小时。
4.3.4 水银温度计或酒精温度计，精度在1℃以下。
4.3.5 旋涡混合器4.3.6 鲎试剂，应具有国家主管部门的批准文号。
4.3.7细菌内毒素国家规范品（NSE），细菌内毒素工作规范品（WSE）。
4.3.8 细菌内毒素检查用水（BET水）系指与灵敏度为0.03Eu/ml或更高灵敏度的鲎试剂在37℃±1℃条件下不产生凝集反应的灭菌注射用水。
4.3.9实验用具移液管（或刻度吸管，定量移液器）、凝集管（10×75mm）、三角瓶、小试管（16×100mm）、试管架、洗耳球、封口膜或金属试管帽、时钟、脱脂棉、吸水纸、剪刀、砂轮。
所用玻璃器皿须经250℃干烤至少1小时。
塑料用具应使用其它适宜的除细菌内毒素方法。
4.3.10 试剂 75%乙醇、纯化水、铬酸洗液。
4.4 检验步骤4.4.1实验准备4.4.1.1洗液的配制配制铬酸洗液或其他适宜的细菌内毒素灭活剂。
4.4.1.2玻璃器皿的洗涤将被洗涤的玻璃器皿用洗涤剂和自来水洗净并空干水分后置洗液中浸泡4小时，取出将洗液滤干，用自来水将残余的洗液洗净，再用新鲜纯化水冲洗干燥后置适宜的密闭金属容器中，迅速置烤箱中。
4.4.1.3 除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素玻璃器皿置烤箱后将烤箱调至250℃，待烤箱温度升至设定的温度后开始记时，须干烤至少1小时。
达到规定时间后，关断电源。
待烤箱温度自然降至室温，在不开启金属容器的情况下，可在两周内使用，否则须再次加热除去可能存在的外源性内毒素。
4.4.2鲎试剂灵敏度复核4.4.2.1内毒素规范溶液的制备4.4.2.1.1 取NSE或WSE一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，再用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，防止玻璃屑落入瓶内。
4.4.2.1.2按规范品使用说明书用移液管加入规定量的BET水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严。
置旋涡混合器上混合15分钟，然后制备成所需浓度的细菌内毒素规范溶液即2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ（λ为所复核鲎试剂的标示灵敏度），每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒（详细过程请参见使用说明书）。
若为NSE，可按其使用说明书将其稀释至规定浓度后分装并保存。
例如使用NSE（内毒素含量为9000EU/支）时的方法如下：复溶：准确吸取BET水1ml加入NSE的安瓿内，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器混合15分钟，即为9000EU/ml内毒标规范溶液。
稀释：取0.3ml内毒素规范溶液加上2.7mlBET水即为1→10稀释液，得到900EU/ml 内毒素规范液。
取0.3ml1→10稀释液，加上2.7mlBET水即为1→100稀释液，得到90EU/ml内毒素规范溶液。
往后依次类推，也可写成下列格式：0.3ml 0.3ml0.3ml 0.3ml 1ml 1ml9000EU/ml→900EU/ml→90EU/ml→ 9EU/ml→ 1EU/ml→0.5EU/ml→2.7ml 2.7ml 2.7ml 2.4ml 1ml 1ml1ml 1ml 1ml0.25EU/ml→0.125EU/ml→0.0625EU/ml→0.03125EU/ml1ml 1ml 1ml在上述稀释过程中，每稀释一步，均须在旋涡混合器上混合30秒钟。
4.4.2.2待复核鲎试剂的准备4.4.2.2.1 在制备内毒素规范溶液的同时，取0.1ml/支的鲎试剂18支轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底。
用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%乙醇棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内，加入0.1mlBET水复溶，使内容物充分溶解，避免产生气泡。
4.4.2.2.2 若待复核鲎试剂的规格不是0.1ml/支时，按标示量加入BET水复溶，将复溶后的鲎试剂溶液混匀后每0.1ml分配到10×75mm凝聚管中，要求至少分配18管备用。
4.4.2.3加样4.4.2.3.1 将已充分溶解的待复核鲎试剂18支（管）放在试管架上，排成5列，其中4支（管）4列分别加入2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的内毒素规范溶液；2支（管）1列分别加入BET水。
内毒素规范溶液和BET水的加样量均为0.1ml/支。
4.4.2.4 加样结束后，用封口膜封口，轻轻混匀，避免产生气泡，连同试管架放入37℃±1℃水浴或适宜恒温器中，试管架保持水平状态，保温60±2分钟，观察结果。
4.4.3干扰实验4.4.3.1供试品细菌内毒素限值（L）的确定4.4.3.1.1按供试品规范规定限值4.4.3.1.2供试品最大有效稀释倍数的计算：MVD＝C·L/λL为供试品的细菌内毒素限值，λ为测试用鲎试剂的灵敏度标示值，C表示供试品的浓度，或供试品复溶后所得溶液的浓度。
当L以EU/ml表示时C为1.0ml/ml，当L以EU/mg 或EU/u表示时，C为mg/ml或u/ml。
如需计算供试品的测试浓度C，可设MVD为1。
4.4.3.2内毒素规范溶液的制备同4.4.2.1。
4.4.3.3含供试品的内毒素溶液的制备4.4.3.3.1根据供试品的限值（L）和使用鲎试剂的灵敏度（λ）计算供试品测试浓度（C）或MVD。
4.4.3.3.2将供试品稀释，其稀释倍数不应超过MVD，并通过预实验确定正式实验供试品测试浓度。
4.4.3.3.3在制备内毒素规范溶液的同时用未检出内毒素的供试品溶液或其不超过最大有效稀释倍数的稀释液将WSE以相同方法制备成所需浓度的含供试品的细菌内毒素溶液（2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ）。
4.4.3.3.4 简化法制备含供试品的细菌内毒素溶液取0.5ml内毒素规范液（1.0EU/ml）＋0.5ml供试品溶液（10mg/ml）→1ml0.5EU/ml（5mg/ml）含供试品内毒素溶液。
同理分别用0.5ml浓度为0.5EU/ml、0.25EU/ml和0.125EU/ml的内毒素规范溶液加入0.5ml浓度为10mg/ml的供试品溶液制备0.25EU/ml、0.125EU/ml和0.0625EU/ml含5mg/ml 浓度的供试品阳性对照溶液（其体积大小根据实验所需量而定）。
4.4.3.4鲎试剂的准备4.4.3.4.1 在制备内毒素规范对照溶液和含供试品的内毒素溶液的同时，取0.1ml/支的鲎试剂36支轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，防止玻璃屑落入瓶内，加入0.1mlBET水复溶，轻轻摇动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。
4.4.3.4.2若鲎试剂的规格不是0.1ml/支时，按标示量加入水复溶，将复溶后的鲎试剂混匀后每0.1ml分配到10×75mm凝集管中，要求至少分配36管备用。
4.4.3.5加样4.4.3.5.1 将准备好的鲎试剂18支（管）放在试管架上，排成5列，其中4支（管）4列分别加入2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的内毒素规范对照溶液；2支（管）1列加入BET 水。
4.4.3.5.2将准备好的另外18支（管）放在试管架上，排成5列，其中4支（管）4列分别加入2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的含供试品的内毒素溶液；2支（管）1列加入供试品溶液。
4.4.3.5.3内毒素规范溶液和BET水、含供试品的内毒素溶液和供试品溶液的加样量均为0.1ml。
4.4.3.6加样结束后，用封口膜封口，轻轻混匀，避免产生气泡，连同试管架放入恒温水浴或适宜恒温器中，试管架保持水平状态保温60±2分钟后，观察结果。
4.4.3.7在进行正式干扰实验前可进行预实验，用L和λ（通常用0.5～0.03EU/ml）计算出C的范围，以1∶2的浓度比例，制备含2λ和0.25λ的系列浓度供试品溶液，每一浓度取2支（管）鲎试剂进行实验，判定无干扰浓度进行正式干扰实验。
4.4.4供试品细菌内毒素的检查4.4.4.1供试品溶液的制备4.4.4.1.1计算 MVD＝C·L/λ。
C、L、λ的意义同4.4.3.1.24.4.4.1.2稀释其稀释倍数不得超过MVD。
4.4.4.2 阳性对照溶液的制备按4.4.2.1用BET水制成2λ浓度的内毒素溶液。
4.4.4.3供试品阳性对照液的制备用被测供试品将WSE制成2λ浓度的内毒素溶液。
方法同4.4.3.3含供试品的内毒素溶液制备。
其中利用简化法时，由于供试品原液必须稀释一倍，采用的鲎试剂灵敏度要提高一倍（如输液），供试品浓度也相应调整。
4.4.4.4鲎试剂的制备4.4.4.4.1 在制备供试品溶液、内毒素规范溶液和供试品阳性对照溶液的同时，取0.1ml/支的鲎试剂5支，手指轻弹瓶壁，使颈部瓶壁上的粉末落入瓶内，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%乙醇棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内，加入0.1mlBET水复溶，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。