抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)的测定
最小抑菌浓度测定
几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）方法1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
抗菌药物直接购自厂商或相关机构。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。
用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。
根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。
1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
1.1.3. 培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH 肉汤。
嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。
增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。
二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。
中国关于最低抑菌浓度的标准
中国关于最低抑菌浓度的标准
根据中国卫生部发布的《医疗机构感染监测规范》（GB 15982-2012），对于抗菌药物的最低抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration, MIC）的标准如下：
1. 青霉素类药物：对溶血性链球菌，血液培养病原体的MIC 不超过0.5μg/mL；对其他细菌的MIC不超过4μg/mL。
2. 氨基糖苷类药物：对肠杆菌科细菌的MIC不超过4μg/mL；对革兰阳性球菌的MIC不超过8μg/mL。
3. 头孢菌素类药物：对大肠埃希氏菌的MIC不超过4μg/mL；对葡萄球菌的MIC不超过8μg/mL。
4. 喹诺酮类药物：对肠杆菌科细菌和葡萄球菌的MIC不超过2μg/mL。
需要注意的是，这些标准是为了评估细菌对特定抗菌药物的敏感性而制定的，而不是单一的最低抑菌浓度标准。
此外，不同细菌对抗菌药物的敏感性可能存在差异，具体的标准还需参考相关文献和临床实践的指导。
抗菌药物最小抑菌浓度的测定之欧阳家百创编
抗菌药物最小抑菌浓度的测定欧阳家百（2021.03.07）一、概念：最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）：在特定环境下孵育24小时，可抑制某种微生物出现明显增长的最低药物浓度即最小抑菌浓度，用于定量测定体外抗菌活性。
二、实验目的：通过采用常量稀释法, 检测几种抗菌药物对----菌株的最小抑菌浓度( MIC) , 对临床诊断用药有指导作用。
三、仪器和试剂：MH液体培养基无菌试管分光光度计0.5麦氏标准比浊管MH琼脂微量加样器蒸馏水吸头0.1mol磷酸缓冲液接种环（PH6.0）无菌生理盐水无菌平板无菌滤膜0.22 无菌针筒抗菌药物金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌四、检验方法：液体稀释法、琼脂稀释法、E试验（E test）液体稀释法操作步骤：1..抗菌药物原液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100ml 浓度为1280μg/ml 的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg 。
用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。
根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表1。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-20℃环境，并注意抗菌药物的保存期限。
表1 稀释法中常用的抗菌药物容积稀释法2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
3.培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
抗生素最低抑菌浓度
抗生素最低抑菌浓度（MIC）和半数抑菌浓度（MIC）测定方法几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）方法：1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
抗菌药物直接购自厂商或相关机构。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。
用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。
根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。
1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
1.1.3. 培养基 NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。
嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。
增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。
二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。
测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)方法
测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）方法1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
抗菌药物直接购自厂商或相关机构。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。
用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。
根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。
1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
1.1.3.培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。
嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。
增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。
二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。
最小抑菌浓度的测定
几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）方法1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
抗菌药物直接购自厂商或相关机构。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。
用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。
根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。
1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
1.1.3. 培养基 NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。
嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。
增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。
二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。
最低抑菌浓度(MIC)测定
word附件3.4最低抑菌浓度（MIC）测定1.菌悬液的制备刮取18～20小时的培养物，在管壁上充分研磨后混悬于1ml缓冲液中，借助比浊仪，调菌悬液浓度至104/ml，于1小时用多点接种仪接种（放置室温应大于25℃）。
2.MIC测定(1)抗菌药物储存液制备⏹抗菌药物称量及配制：根据各抗菌药物的纯度称取，以目前所用抗菌药物为例。
抗菌素纯度称量（mg）加溶剂(ml)储存液浓度(μg/ml)四环素100% 3.2 1 3200大观霉素63.4% 40.38 1 25600头孢曲松81.5% 2.45 1 2000环丙沙星84.4 3.8 1 3200⏹分装与保存：每管200μl，-70℃可保存一年。
(2)抗菌药物工作液制备青霉素：四环素:大观霉素：头孢曲松:环丙沙星：(3)抗菌药物梯度培养皿的制备⏹培养皿编号：按各抗菌药物浓度编号。
⏹将配制好的各抗菌药物工作液150μl加到各培养皿中，与15ml 50℃预温的培养基充分混匀，平放在超净台，半开培养皿盖至培养基凝固后，用塑料袋密封保存于4℃冰箱。
(4)菌悬液接种与培养⏹多头接种针以及菌液板用高压法灭菌处理，其他配件用酒精消毒处理；使用前必须确认完全烘干。
⏹按照仪器要求将菌悬液接种于各抗菌药物梯度培养皿，接种菌后置超净台直至菌悬液渗入。
⏹置35℃～36℃、5%～10% CO2一定湿度的环境中培养。
⏹记录放置时间。
⏹培养18～24小时观察结果。
(5)结果判读⏹观察细菌生长情况：-记录结果读取时间。
-在适宜的光线下，观察对照培养皿的菌落生长情况，并对所有菌株进行初步鉴定（涂片染色和氧化酶试验）。
-比较观察对照平皿和抗菌药物平皿，进行判读：接种点有1个以上菌落或呈菌苔状为生长；接种点无任何菌落或呈薄雾印迹为无生长。
⏹MIC判读与记录：-MIC是指抗菌药物能够抑制细菌生长的最小抑菌药物浓度，表示单位为 g/ml 。
-记录各抗菌药物浓度平皿上细菌生长情况，在《WHO参考菌株及MIC 实验结果记录表》用（+）表示生长，（-）表示无生长。
几种测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)方法
几种测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)方法近年来，随着抗生素的广泛使用以及细菌耐药性的增加，抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）的测定变得日益重要。
MIC是指抗菌药物能够抑制细菌生长的最低浓度，是评估抗菌药物对细菌耐药性的一种重要方法。
下面介绍几种测定抗菌药物MIC的方法。
1. 琼脂扩散法琼脂扩散法是一种经典的MIC测定方法。
该方法基于抗生素与菌株相互作用抑制菌株生长的原理。
实验中将不同浓度的抗生素溶液加入琼脂平板中，并在琼脂表面均匀涂布细菌悬液。
待菌株在琼脂表面生长形成克隆后，观察克隆周围清晰的无菌区域大小，根据无菌区域所对应的抗生素浓度计算MIC值。
该方法简单易行，但由于该方法目测判断，因此存在主观性差异和读片误差的问题。
2. 荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑）（Alamar blue）法荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑）法是一种高通量及准确性较高的MIC测定方法。
该方法基于菌株呼吸代谢消耗的荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑）的发光信号变化来评估抗生素的MIC值。
实验中将不同浓度的抗生素溶液加入微孔板中，并添加细菌悬液及荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑），经过一定时间后读取板上的荧光信号，测算MIC 值。
该方法准确性高，可用于筛选大量样本的抗菌药物敏感性，但需要特殊设备和耗费较多经费。
3. 壳聚糖纳米粒子微滴法壳聚糖纳米粒子微滴法是一种新兴的MIC测定方法。
该方法基于壳聚糖纳米粒子本身具有抑菌作用及微滴原理，实验中将不同浓度的抗生素与含菌液的溶液制成微滴，并添加壳聚糖纳米粒子，待微滴凝胶后进行观察，根据微滴内的细菌生长情况评估折射率值，进而计算MIC值。
这种方法具有较高的准确性和可靠性，但需要特殊仪器和技术支持。
4. 测序MIC法随着测序技术的发展，现已出现测序MIC法。
该方法基于高通量测序技术，对菌株进行全基因组测序，确定细菌株中抗生素耐药基因的编码序列，并进行序列比对和分析，确定抗生素的MIC值。
MIC法测最小抑菌浓度
常量肉汤稀释法：1、抗菌药物储存液的制备：浓度不应低于1000ug/ml或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
配制好的药物储存液应贮存于-60度以下环境，保存期不超过6个月。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂2、药敏实验用抗菌药物浓度范围：根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
3、培养基：NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。
嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
4、接种物的制备：有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。
增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。
二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。
用MH肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释后备用。
注意应在15分钟内接种完配制好的接种物，并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养，以检查接种物纯度。
5、MIC板制备：无菌操作，将倍比稀释后不同浓度的抗菌药物溶液分别加到灭菌的96孔聚苯乙烯板中，第1至第11孔加药液，每孔10μl，第12孔不加药作为生长对照，冰冻干燥后密封，-20℃以下保存备用。
6、接种物制备：将用生长法或直接菌悬液法制备的浓度相当于0.5麦氏比浊标准的菌悬液，经MH肉汤1∶1000稀释后，向每孔中加100μl，密封后置35℃普通空气孵箱中，孵育16~20h判断结果。
抗菌药物最小抑菌浓度的测定
抗菌药物最小抑菌浓度的测定一、概念：最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）：在特定环境下孵冇24 小时，可抑制某种微生物出现明显增长的最低药物浓度即最小抑菌浓度，用于泄量测立体外抗菌活性。
二、实验目的：通过采用常量稀释法，检测几种抗菌药物对--菌株的最小抑菌浓度（MIC）, 对临床诊断用药有指导作用。
MH液体培养基无菌试管分光光度计0.5麦氏标准比浊管MH琼脂微量加样器蒸饰水吸头接种环0.1 mol磷酸缓冲液(PH6.0)无菌生理盐水无菌平板无菌滤膜0.22无菌针筒抗菌药物金黄色匍萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌四、检验方法：液体稀释法、琼脂稀释法、E试验（Etcst）液体稀释法操作步骤：抗菌药物原液配置0000000000000MH液体试管中抗菌药物梯度稀释观察结果1..抗菌药物原液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000ug/ml(如1280ug/ml)或10倍于最高测左浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100 ml浓度为1280ug/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750ixg/mgo用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg.根据公式讣算所需稀释剂用量为：(182.6 mgX75O u g/ml)/1280 ug/ml= 107.0ml,然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表1。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-20°C环境，并注意抗菌药物的保存期限。
表1稀释法中常用的抗菌药物容积稀释法2.药敏试验用抗菌药物浓度范带|根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范国应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
3.培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton (MH)肉汤，pH7.2~7.4。
几种MIC的测定方法
几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）的方法1浊度法1.1常量肉汤稀释法（试管）1.1.1.抗菌药物贮存液制备将抗菌肽稀释到无菌水中，制成1024μg/ml的原液，（也可以用0.22um滤膜进行过滤，但要去掉前面5 ml的过滤抗菌肽溶液）。
抗菌药物贮存液浓度按照不同梯度稀释。
1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
1.1.3. 培养基推荐使用LB肉汤培养基，pH7.0~7.4。
指示菌为大肠杆菌或沙门氏菌。
1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的LB肉汤中，35℃孵育2-6 h。
增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或LB肉汤培养基校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。
二是直接菌落悬液配制法，推荐直接取培养18~24 h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。
用LB肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释后备用。
注意应在15分钟内接种完配制好的接种物，并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养，以检查接种物纯度。
1.1.5.稀释抗菌药物的制备及菌液接种取无菌试管（13×100mm）13支，排成一排，除第1管加入1.6ml LB肉汤外，其余每管加入LB肉汤1ml，在第1管加入抗菌药物原液（如1024μg/ml）0.4ml混匀，然后吸取1ml至第2管，混匀后再吸取1ml至第3管，如此连续倍比稀释至第11管，并从第11管中吸取1ml弃去，第12管为不含药物的生长对照。
此时各管药物浓度依次为256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml。
然后在每管内加入上述制备好的接种物各1ml，使每管最终菌液浓度约为5×105CFU/ml。
第1管至第11管药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125μg/ml。
抗菌中药mic测定的原理
抗菌中药mic测定的原理
抗菌中药MIC（最低抑菌浓度）测定的原理是通过确定抗菌药物对细菌生长的最低有效浓度来评估其抗菌活性。
MIC测定的常用方法是微量肉汤稀释法。
基本步骤如下：
1. 准备肉汤培养基：将饱和的肉汤培养基稀释到指定浓度，使得培养基中的营养物质和菌落形成所需的物质浓度适中。
2. 准备菌悬液：将待测的细菌菌株培养至对数生长期，然后用无菌生理盐水稀释，使得菌悬液中的细菌浓度适中。
3. 稀释药物：将待测的抗菌药物按一系列浓度进行稀释，通常以二倍递减的方式进行。
4. 配制试验管：将肉汤培养基和菌悬液按一定比例混合并置于试验管中，然后加入不同浓度的抗菌药物稀释液。
5. 孵育：将试验管放入恒温培养箱中，在适当的温度下孵育一定时间，促进细菌生长。
6. 判定MIC：观察试验管的结果，确定最低浓度的抗菌药物能够抑制细菌生长
的最小浓度即为MIC。
通过测定不同抗菌药物的MIC，可以对比不同药物的抑菌能力，评价抗菌药物的抗菌活性，并且可以提供合适的药物浓度来指导临床应用。
抗生素最低抑菌浓度(MIC)和半数抑菌浓度(MIC)测定方法
抗生素最低抑菌浓度（MIC）和半数抑菌浓度（MIC）测定方法常量肉汤稀释法1.1抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
抗菌药物直接购自厂商或相关机构。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。
用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。
根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。
1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
1.3.培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。
嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。
增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。
二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5xx比浊标准的菌悬液。
测定抗菌药物最低抑菌浓度方法
测定抗菌药物最低抑菌浓度方法抗菌药物最低抑菌浓度是一种测定药物对细菌的抑制能力的方法。
药物的最低抑菌浓度是指能够完全抑制细菌生长的最低药物浓度。
测定抗菌药物的最低抑菌浓度可以帮助医生选择最合适的药物治疗感染疾病，也可以用于判断细菌的耐药性。
下面将介绍一种常用的测定抗菌药物最低抑菌浓度的方法，稀释法。
稀释法是一种常见的测定抗菌药物最低抑菌浓度的方法。
其基本原理是通过将抗菌药物稀释成不同浓度，然后与已知浓度的细菌悬液共同培养，看最低浓度能够抑制细菌生长。
下面是稀释法的具体步骤：1.准备培养基：首先准备含有富集营养物的培养基，如米勒杆菌培养基。
将培养基制备成液体状态。
2.制备细菌悬液：选择已知浓度的细菌悬液，将其制备成适量悬液，浓度一般为约10^5CFU/mL。
3.准备药物浓度梯度：将抗菌药物按需要的浓度逐级稀释，通常是2倍递减。
最低浓度一般从药物的临床最低浓度开始。
4.混合药物和细菌悬液：将各浓度的药物与相同体积的细菌悬液混合，使其浓度达到希望的对数倍稀释。
5.接种培养：将混合液均匀地接种在含有富集营养物的培养基平板上，通常每个平板接种3个不同药物浓度的液滴。
6.培养：将接种的平板放入恒温培养箱中，通常在37℃温度下培养24小时。
7.观察结果：观察不同浓度液滴周围的菌落生长情况，可以看到浓度最低的液滴周围没有菌落生长，即为该抗菌药物的最低抑菌浓度。
稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度具有简单、经济、易于操作等优点，被广泛应用于临床和科研实验室中。
然而，它也存在一些限制。
首先，该方法只能测定药物对细菌的直接抑制作用，不能反映体内药物对细菌的作用情况。
其次，稀释法只能测定其中一时间点的抗菌活性，不能直接反应细菌对药物的耐药性发展情况。
此外，不同细菌对药物的敏感性存在差异，因此测定结果应结合临床经验和文献数据进行解读和分析。
总之，测定抗菌药物最低抑菌浓度是一项重要的实验研究和临床实践中的方法。
通过稀释法可以有效评估药物对细菌的抑制能力，有助于选择适宜的药物治疗感染疾病，并且能够为研究细菌耐药性提供信息。
琼脂稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度
琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，加入融化并冷至50C左右的定量MH琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。
本法优点是可在一个平板上同时作多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。
1. 培养基制备使用MH琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.2~7.4。
淋病奈瑟菌使用GC琼脂基础加1%添加剂；其它链球菌使用含5%（V/V ）绵羊血的MH琼脂（当试验磺胺药时，使用溶解的马血）。
2. 含药琼脂平板制备根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在45~50 C水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度3~4mm。
通常按1 : 9比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。
配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置2~8 C冰箱可贮存5天。
3. 接种物制备与接种制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再 1 : 10稀释，以多点接种器吸取制备好菌液（约1~2卩I）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104CFU，形成直径为5~8mm的菌斑。
接种好后置35C孵育16~20h （甲氧西林耐药葡萄球菌、万古霉素耐药肠球菌孵育时间应满24h）,观察结果。
奈瑟菌属、链球菌属细菌置5%二氧化碳、幽门螺杆菌置微需氧环境中孵育。
4. 结果判断将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。
在含甲氧苄胺嘧啶或磺胺琼脂平板上可见轻微细菌生长，与生长对照比较抑制80%以上细菌生长的最低药物浓度作为终点浓度。
如果出现有2个以上菌落生长于含药浓度高于终点水平的琼脂平板上，或低浓度药物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象，则应检查培养物纯度或重复试验。
原理：将抗菌药物配制到琼脂培养基中成：128 u g/ml * 64 u g/ml . 32 u g/ml .............................. 0. 06 ug/ml对倍稀释的浓度系列多点接种器将制备好的细菌菌悬液迅速点种到琼脂表面，经35C16-20小时培养肉眼观察细菌生长，以未见细菌生长平板的最低药物浓度为最低抑菌浓度(MIC)抗菌药物保存液的准备1估算抗菌药物最小称量琼脂稀释法最高药物浓度为128 u g/ml 药物和培养基的体积比1： 14,即药物浓度將成15倍稀释，因此保存液为128ug/mlX15 = 1920 u g/ml 如果1次用量为10ml ,则：抗菌药物最小称量二1920ug/ml*10ml抗菌药物的效价抗菌药物保存液的准备2抗菌药物稀释选择合适的抗菌药物稀释液进行药物稀释, 稀释液需要量见下列公式：抗菌药物实际称量*效价稀释液体积二保存液浓度(1920iig/ml)抗菌药物保存液的准备3实际操作:先计算完成一批试验需几次完成，每次用量多少，然后可一起称量，一起稀释亍然后按每次需要量分装在试管中，贴上标签，注明药物名称，浓度,体积数及配制日期，置与＜-20D C保存，备用。
最低抑菌浓度测定方法
最低抑菌浓度测定方法一、前言最低抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration，MIC）是指一种抗菌药物能够抑制细菌生长的最低浓度。
MIC测定是临床微生物学和药理学中的重要实验方法之一，对于评估抗菌药物的疗效和选择合适的治疗方案具有重要意义。
本文将介绍最低抑菌浓度测定方法，包括试验材料、实验步骤和结果判读等内容。
二、试验材料1. 细菌：需测试的细菌株，可选用革兰氏阳性或阴性细菌。
2. 培养基：可选用Mueller-Hinton琼脂培养基或Brain Heart Infusion琼脂培养基等。
3. 抗生素：需测试的抗生素，可选用氨苄西林、头孢呋辛等常见抗生素。
4. 96孔板：用于进行微量稀释法测定MIC值。
5. 稀释液：可选用双倍稀释液（double-strength broth）或盐水等。
6. 恒温箱：用于控制培养温度为37℃。
7. 显微镜：用于观察细菌生长情况。
三、实验步骤1. 制备菌液：取一支革兰氏染色阳性或阴性细菌，接种于含有适当营养成分的培养基中，进行预培养。
待菌液浑浊度达到0.5 McFarland标准时，可用于后续实验。
2. 稀释菌液：将制备好的菌液按一定比例稀释至10^-4或10^-5倍，得到约10^6 CFU/mL的细菌悬浮液。
3. 制备抗生素溶液：将需测试的抗生素按一定比例加入到稀释液中，制备出不同浓度的抗生素溶液。
4. 测定MIC值：将制备好的抗生素溶液加入到96孔板中，并依次加入稀释好的细菌悬浮液。
每个孔内均应包括对照组和实验组。
将孔板放入恒温箱中，在37℃条件下培养18-24小时。
观察各孔内是否有细胞生长，记录最低浓度呈现无细胞生长情况的孔号，即为MIC值。
四、结果判读1. MIC值的判读应根据不同抗生素和细菌株的敏感性标准进行。
2. 一般来说，MIC值越低，说明抗生素对该细菌株的敏感性越强。
3. 当MIC值等于或低于临床常用浓度时，说明该抗生素对该细菌株具有治疗价值。
抗菌药物最小抑菌浓度的测定
抗菌药物最小抑菌浓度的测定一、概念：最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）：在特定环境下孵育24小时，可抑制某种微生物出现明显增长的最低药物浓度即最小抑菌浓度，用于定量测定体外抗菌活性。
二、实验目的：通过采用常量稀释法, 检测几种抗菌药物对----菌株的最小抑菌浓度( MIC) , 对临床诊断用药有指导作用。
三、仪器和试剂：四、检验方法：液体稀释法、琼脂稀释法、E试验（E test）液体稀释法操作步骤：1..抗菌药物原液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。
用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。
根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表1。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-20℃环境，并注意抗菌药物的保存期限。
表1 稀释法中常用的抗菌药物容积稀释法2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
3.培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。
嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。