琼脂稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度MIC

抗菌药物的mic名词解释

抗菌药物的mic名词解释抗菌药物是指用于治疗细菌感染的药物，它们通过抑制细菌的生长或杀死细菌来达到治疗的目的。

MIC（最小抑菌浓度）是评价抗菌药物对细菌活性的一个重要指标。

本文将解释MIC的含义以及与抗菌药物及微生物耐药性相关的重要性。

一、MIC的定义MIC是指在体外实验条件下，抗生素或抗菌药物能够抑制细菌生长的最低浓度。

通常使用微量琼脂平板法或稀释法对抗菌药物进行浓度梯度测试，以确定细菌对药物的敏感性。

MIC值越低，表示药物对细菌的抑菌能力越强。

二、MIC的重要性1. 指导临床用药MIC值是临床上决定抗菌药物有效浓度的关键参数。

在治疗感染时，医生需要知道病原菌对抗生素的敏感性，以确定合适的药物剂量和疗程。

MIC测定可以帮助医生选择适当的抗生素，从而提高治疗的效果。

2. 药物耐药性评估MIC值不仅对于个体患者的治疗重要，也对于评估细菌的耐药性具有重要意义。

通过监测大量细菌株的MIC值，可以了解细菌对某些抗生素的耐药性水平。

在全球范围内进行耐药性监测可以帮助制定抗菌药物使用策略，减少多重耐药菌株的传播。

3. 临床研究工具MIC值是临床试验中评估新药物疗效的重要指标之一。

通过对新抗菌药物的MIC测试，可以确定其在细菌感染治疗中的最佳浓度范围，进一步确定其用于临床的剂量和给药方案。

三、MIC测定方法1. 白蛋白微量琼脂平板法这是常用的MIC测定方法之一。

它通过制备含有不同浓度抗菌药物的琼脂平板，将已知浓度的细菌悬液均匀涂布在琼脂平板表面，观察生长的抑制情况来确定MIC值。

2. 稀释法稀释法是一种经典的MIC测定方法。

它通过将抗菌药物稀释成一系列不同浓度的试液，然后将细菌悬液与不同浓度的试液接触，培养并观察细菌的生长情况，从而确定细菌对药物的敏感性。

四、MIC值的解读对于MIC值的解读需要根据具体抗菌药物和细菌来评估。

一般来说，低于或等于药物本身的CLSI（Clinical and Laboratory Standards Institute）建议的断点值的MIC被认为是敏感的，而高于断点值的MIC则表示相对或绝对的耐药。

抗菌药物最小抑菌浓度的测定

抗菌药物最小抑菌浓度的测定之答禄夫天创作一、概念：最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）：在特定环境下孵育24小时，可抑制某种微生物出现明显增长的最低药物浓度即最小抑菌浓度，用于定量测定体外抗菌活性。

二、实验目的：通过采取常量稀释法, 检测几种抗菌药物对----菌株的最小抑菌浓度( MIC) , 对临床诊断用药有指导作用。

三、仪器和试剂：MH液体培养基无菌试管分光光度计MH琼脂微量加样器蒸馏水吸头0.1mol磷酸缓冲液接种环（PH6.0）无菌生理盐水无菌平板无菌针筒抗菌药物金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌四、检验方法：液体稀释法、琼脂稀释法、E试验（E test）液体稀释法操纵步调：1..抗菌药物原液制备抗菌药物贮存液浓度不该低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。

溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。

所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。

例如：需配制100 ml 浓度为1280μg/ml 的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg 。

用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg 。

根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg ×750μg/ml ）/1280μg/ml=107.0ml ，然后将182.6 mg 抗生素粉剂溶解于107.0ml 稀释剂中。

制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表1。

配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-20℃环境，并注意抗菌药物的保管期限。

表1 稀释法中经常使用的抗菌药物容积稀释法2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操纵尺度，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。

3.培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。

需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。

琼脂稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)

琼脂稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)|琼脂稀释法琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，加入融化并冷至50℃左右的定量MH琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。

本法优点是可在一个平板上同时作多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。

1.培养基制备使用MH琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.2~7.4。

淋病奈瑟菌使用GC琼脂基础加1%添加剂；其它链球菌使用含5%（V/V）绵羊血的MH琼脂（当试验磺胺药时，使用溶解的马血）。

2.含药琼脂平板制备根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在45~50℃水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度3~4mm。

通常按1∶9比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。

配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置2~8℃冰箱可贮存5天。

3.接种物制备与接种制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再1∶10稀释，以多点接种器吸取制备好菌液（约1~2μl）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104CFU，形成直径为5~8mm的菌斑。

接种好后置35℃孵育16~20h（甲氧西林耐药葡萄球菌、万古霉素耐药肠球菌孵育时间应满24h），观察结果。

奈瑟菌属、链球菌属细菌置5%二氧化碳、幽门螺杆菌置微需氧环境中孵育。

4.结果判断将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。

在含甲氧苄胺嘧啶或磺胺琼脂平板上可见轻微细菌生长，与生长对照比较抑制80%以上细菌生长的最低药物浓度作为终点浓度。

如果出现有2个以上菌落生长于含药浓度高于终点水平的琼脂平板上，或低浓度药物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象，则应检查培养物纯度或重复试验。

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琼脂稀释法操作步骤

原理
琼脂稀释法利用了琼脂培养基的固化特性，使得抗菌药物能够在培养基中均匀分布并保持相对稳定的浓度。当接种了待测微生物后，微生物在含有不同药物浓度的琼脂平板上生长，通过比较不同平板上的菌落生长情况，可以确定药物的最低抑菌浓度。
应用领域及意义
临床医学
用于指导临床用药，协助医生选择合适的抗菌药物和剂量，提高治疗效果。
02
实验准备
试剂与仪器
试剂
琼脂粉、培养基、抗生素标准品、无菌水等。
仪器
电子天平、pH计、高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、移液器、无菌吸管、无菌平皿等。
实验前准备事项
实验室环境准备
确保实验室干净整洁，定期进行消毒处理。实验前开启紫外灯照射30分钟，确保无菌操作环境。
试剂与仪器准备
检查所需试剂是否齐全，有无过期或污染现象。对实验所需仪器进行清洗和烘干，确保无菌状态。
用计数板或显微镜对菌落进行计数，记录每个培养皿中的菌落数。
根据菌落计数结果计算菌液浓度，以CFU/ml 表示。同时记录实验过程中的操作细节和观察结果，以便后续分析和比较。
04
结果分析与解读
菌落计数方法
平板菌落计数法
将待测样品经过适当稀释后，涂布在琼脂平板上，培养一定时间后形成可见的菌落，通过计数菌落数量来推算样品中的微生物数量。
药学研究
用于评价新药的抗菌活性，为药物研发提供实验依据。
应用领域及意义
• 微生物学研究：用于研究微生物对抗菌药物的敏感性及其耐药机制。
应用领域及意义
意义
可用于监测微生物的耐药性变迁，为临床抗感染治疗提供重要参考。
提供了定量的药物敏感性试验方法，有助于准确评价抗菌药物的疗效。
有助于指导临床合理用药，减少抗菌药物的滥用和误用，降低医疗成本。

琼脂稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)资料解读

琼脂稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)|琼脂稀释法琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，加入融化并冷至50℃左右的定量MH琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。

本法优点是可在一个平板上同时作多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。

1.培养基制备使用MH琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.2~7.4。

淋病奈瑟菌使用GC琼脂基础加1%添加剂；其它链球菌使用含5%（V/V）绵羊血的MH琼脂（当试验磺胺药时，使用溶解的马血）。

2.含药琼脂平板制备根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在45~50℃水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度3~4mm。

通常按1∶9比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。

配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置2~8℃冰箱可贮存5天。

3.接种物制备与接种制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再1∶10稀释，以多点接种器吸取制备好菌液（约1~2μl）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104CFU，形成直径为5~8mm的菌斑。

接种好后置35℃孵育16~20h（甲氧西林耐药葡萄球菌、万古霉素耐药肠球菌孵育时间应满24h），观察结果。

奈瑟菌属、链球菌属细菌置5%二氧化碳、幽门螺杆菌置微需氧环境中孵育。

4.结果判断将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。

在含甲氧苄胺嘧啶或磺胺琼脂平板上可见轻微细菌生长，与生长对照比较抑制80%以上细菌生长的最低药物浓度作为终点浓度。

如果出现有2个以上菌落生长于含药浓度高于终点水平的琼脂平板上，或低浓度药物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象，则应检查培养物纯度或重复试验。

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最小抑菌浓度测定

几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）方法1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。

溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。

抗菌药物直接购自厂商或相关机构。

所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。

例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。

用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。

根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。

制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。

配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。

1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。

1.1.3. 培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。

需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。

在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH 肉汤。

嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。

1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。

增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。

二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。

抗生素最低抑菌浓度

抗生素最低抑菌浓度（MIC）和半数抑菌浓度（MIC）测定方法2008年05月07日星期三 02:19几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）方法：1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。

溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。

抗菌药物直接购自厂商或相关机构。

所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。

例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。

用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。

根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。

制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。

配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。

1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。

1.1.3. 培养基 NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。

需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。

在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。

嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。

1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。

增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。

二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。

几种测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)方法

几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）方法1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。

溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。

抗菌药物直接购自厂商或相关机构。

所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。

例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。

用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。

根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。

制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。

配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。

1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。

1.1.3. 培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。

需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。

在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。

嗜血杆菌属菌使用HTM 肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。

1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。

增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。

二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。

抗生素最低抑菌浓度

抗生素最低抑菌浓度（MIC）和半数抑菌浓度（MIC）测定方法几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）方法：1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。

溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。

抗菌药物直接购自厂商或相关机构。

所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。

例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。

用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。

根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。

制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。

配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。

1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。

1.1.3. 培养基 NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。

需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。

在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。

嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。

1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。

增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。

二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。

测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)方法

测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）方法1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。

溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。

抗菌药物直接购自厂商或相关机构。

所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。

例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。

用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。

根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。

制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。

配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。

1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。

1.1.3.培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。

需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。

在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。

嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。

1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。

增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。

二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。

最低抑菌浓度测定方法

2.1.8 抗（抑）菌试验2.1.8.1 目的测定抗（抑）菌产品对细菌和真菌的抗（抑）菌作用。

常使用的方法有抑菌环试验、最小抑制浓度测定试验、滞留抑菌效果测定试验、洗衣粉抗菌效果测定试验、振荡烧瓶试验、浸渍试验与奎因试验，可视情况选用。

2.1.8.2 抑菌环试验2.1.8.2.1 原理利用抑菌剂不断溶解经琼脂扩散形成不同浓度梯度，以显示其抑菌作用。

试验通过抑菌环大小以判断其是否具有抑菌能力。

本试验适用于抑菌剂与溶出性抗（抑）菌产品的鉴定。

2.1.8.2.2 试验器材(1)金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、大肠杆菌(8099)、白色念珠菌(A TCC 10231) 菌悬液(见2.1.1.2)及根据抑菌剂特定用途所用的其他菌悬液。

(2)抑菌剂载体(5 mm 直径园形新华一号定性滤纸片，经压力蒸汽灭菌处理后，置120℃烤干2h，保存备用)。

(3)活菌培养计数所需器材(见2.1.1.3)。

(4)微量移液器(5μl～50μl，可调式)。

(5)游标卡尺。

(6)营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基与沙堡琼脂培养基2.1.8.2.3 操作程序(1)抑菌片的制备:对液体抑菌剂，取无菌并干燥的滤纸片。

每片滴加实际使用浓度抑菌剂溶液20μl，然后将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内，开盖置温箱(37℃) 中烤干，或置室温下自然干燥后备用。

溶出性抗（抑）菌产品，可直接制成直径为5mm，厚不超过4mm圆片(块)，每4 片(块) 一组。

(2)阴性对照样片的制备:取无菌干燥滤纸片，每片滴加无菌蒸馏水20μl，干燥后备用。

溶出性抗（抑）菌产品的阴性对照样本，应取同种材质不含抑菌成份的样品，制成与试验组大小相同的样片(块)。

(3)试验菌的接种:用无菌棉拭子蘸取浓度为5×105cfu/ml～5×106cfu/ml 试验菌悬液，在营养琼脂培养基平板表面均匀涂抹3次。

每涂抹1次，平板应转动60°，最后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周。

最小抑菌浓度测定

几种测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC）方法1。

1.常量肉汤稀释法1。

1。

抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml（如1280μg/ml）或10倍于最高测定浓度。

溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。

抗菌药物直接购自厂商或相关机构.所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算.例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。

用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg.根据公式计算所需稀释剂用量为：（182。

6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107。

0ml，然后将182。

6 mg抗生素粉剂溶解于107。

0ml稀释剂中。

制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5.配制好的抗菌药物贮存液应贮存于—60℃以下环境,保存期不超过6个月。

1。

1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准,药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。

1。

3。

培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7。

2~7。

4。

需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。

在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时,应在肉汤中加入2％（W/V)氯化钠,按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。

嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤,肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5％溶解马血的MH肉汤。

1.1。

4.接种物的制备有2种方法配制接种物,一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中,35℃孵育2—6h.增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准,约含1～2×108CFU/ml.二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株,推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。

最小抑菌浓度的测定

几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）方法1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。

溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。

抗菌药物直接购自厂商或相关机构。

所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。

例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。

用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。

根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。

制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。

配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。

1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。

1.1.3. 培养基 NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。

需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。

在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。

嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。

1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。

增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。

二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。

抗菌药物最小抑菌浓度的测定

抗菌药物最小抑菌浓度的测定之阿布丰王创作一、概念：最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）：在特定环境下孵育24小时,可抑制某种微生物呈现明显增长的最低药物浓度即最小抑菌浓度,用于定量测定体外抗菌活性.二、实验目的：通过采纳常量稀释法, 检测几种抗菌药物对----菌株的最小抑菌浓度( MIC) , 对临床诊断用药有指导作用.三、仪器和试剂：MH液体培养基无菌试管分光光度计0.5麦氏标准比浊管MH琼脂微量加样器蒸馏水吸头0.1mol磷酸缓冲液接种环（PH6.0）无菌生理盐水无菌平板无菌滤膜0.22 无菌针筒抗菌药物金黄色葡萄球菌、年夜肠埃希菌、铜绿假单胞菌四、检验方法：液体稀释法、琼脂稀释法、E试验（E test）液体稀释法把持步伐：1..抗菌药物原液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度.溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度. 所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算.例如：需配制100 ml 浓度为1280μg/ml 的抗生素贮存液,所用抗生素为粉剂,其药物的有效力为750μg/mg.用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg.根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg ×750μg/ml ）/1280μg/ml=107.0ml,然后将182.6 mg 抗生素粉剂溶解于107.0ml 稀释剂中.制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表1.配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-20℃环境,并注意抗菌药物的保管期限.表1 稀释法中经常使用的抗菌药物容积稀释法2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验把持标准,药物浓度范围应包括耐药、中介和敏感分界点值,特殊情况例外.3.培养基 NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤,pH7.2~7.4.需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好.在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时,应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠,按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤.嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤,肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤.4.接种物的制备有2种方法配制接种物,一是细菌生长方法,用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个,接种于4-5ml的水解酪卵白（MH）肉汤中,35℃孵育2-6h.增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准,约含1~2×108CFU/ml.二是直接菌落悬液配制法,对某些苛养菌,如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株,推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液.用MH肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释后备用.注意应在15分钟内接种完配制好的接种物,并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养,以检查接种物纯度.5.稀释抗菌药物的制备及菌液接种取无菌试管（13×100mm）13支,排成一排,除第1管加入1.6mlMH肉汤外,其余每管加入MH肉汤1ml,在第1管加入抗菌药物原液（如1280μg/ml） 0.4ml混匀,然后吸取1ml至第2管,混匀后再吸取1ml至第3管,如此连续倍比稀释至第11管,并从第11管中吸取1ml弃去,第12管为不含药物的生长对比.此时各管药物浓度依次为256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml.然后在每管内加入上述制备好的接种物各1ml,使每管最终菌液浓度约为5×105CFU/ml.第1管至第11管药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125μg/ml.另外设对比3支,别为肉汤对比、质控菌对比和待测菌生长对比.6.孵育将接种好的稀释管塞好塞子,置35℃普通空气孵箱中孵育16~20h；嗜血杆菌和链球菌在普通空气孵箱中孵育20~24h；对可能的耐甲氧西林葡萄球菌和耐万古霉素肠球菌应继续孵育满24h.7.结果判断与解释在读取和陈说所测试菌株的MIC前,应检查生长对比管的细菌生长情况是否良好,同时还应检查接种物的传代培养情况以确定其是否污染,质控菌株的MIC值是否处于质控范围.以肉眼观察,药物最低浓度管无细菌生长者,即为受试菌的MIC.甲氧苄胺嘧啶或磺胺药物的肉汤稀释法终点判断,与阳性生长对比管比力抑制80%细菌生长管药物浓度为受试菌MIC.【MIC参考范围】表2稀释法质控标准菌株MIC预期值范围（ug/ml）经常使用抗菌药物稀释和配制方法药物溶媒配制方法青霉素N.S 一次氨苄西林N.S 一次氨苄西林氟氯西林N.S 一次氨苄西林舒巴坦N.S 一次阿莫西林氟氯西林N.S 一次阿莫西林舒巴坦N.S 一次阿莫西林克拉维酸N.S 一次奈夫西林N.S 一次阿洛西林5%GNS,5-10%G.S 二次,每g先用10ml注射用水溶解美洛西林5%GNS,5-10%G.S 一次美洛西林舒巴坦N.S,5%GNS,5-10%G.S 二次,先用适量注射用水或生理盐水溶解羧苄西林5%G.S 一次替卡西林克拉维酸5%G.S 二次,先用10ml注射用水溶解哌拉西林无一次哌拉西林他唑巴坦5%G.S,NS 一次哌拉西林舒巴坦5%G.S,NS 一次苯唑西林N.S,G.S 一次头孢唑啉N.S,G.S 二次,先用注射用水溶解五水头孢唑啉N.S,5%G.S 二次,先用注射用水溶解头孢硫脒N.S 一次头孢噻吩N.S,5%G.S 二次．先4g用20ml注射用水溶解头孢呋辛无一次头孢美唑N.S,G.S 一次头孢替安N.S,G.S 一次头孢替唑N.S,G.S 一次头孢尼西N.S,5-10%G.S 一次头孢西丁N.S,5-10%G.S 一次头孢孟多N.S,5%G.S 一次头孢他定N.S,5%G.S 一次头孢曲松N.S,5%G.S 二次,先用注射用水、N.S、G.S配成0.1g/ml 头孢哌酮G..N.S 一次,终浓度为5-25mg/ml头孢哌酮舒巴坦N.S,5%G.S 二次,1g—水溶后总量4ml,再用同一溶媒溶解. 头孢哌酮他唑巴坦N.S,5%G.S 二次．先用注射用水、N.S 5-10ml溶解拉氧头孢N.S,5%G.S 一次头孢米诺N.S,5-10%G.S 一次头孢唑肟N.S,10%G.S 一次头孢地嗪N.S,林格,5%G.S 一次头孢甲肟N.S,G.S 一次头孢匹胺N.S,G.S 一次头孢吡肟N.S,G.S 一次头孢匹罗N.S,G.S 一次亚胺培南西司他汀N.S,G.S 一次美罗培南N.S,5-10%G.S 二次,可先用合适液体配制氨曲南N.S,5-10%G.S 二次,1g先用至少3ml注射用水溶解,终浓度不超越2%阿奇霉素N.S,5%G.S 二次．先用注射用水稀释成0.1mg/ml,再稀释成终浓度为1-2mg/ml依替米星N.S,5%G.S 一次多西环素N.S,5%G.S 二次．先用注射用水或其他溶液稀释成10mg/ml,再溶解成0.1-1mg/ml克林霉素无一次万古霉素N.S,5%G.S 二次．先用10ml注射用水溶解,再加入至少200ml溶液中.滴注>1小时.去甲万古霉素N.S,5%G.S 二次．先用注射用水溶解,再用至少200ml液体慢滴.替考拉宁N.S,5%G.S 二次．先用注射用水溶解,双手滚动小瓶至药粉全部溶解.如果呈现泡沫,静置15分钟.培氟沙星5%G.S 一次氟罗沙星5%G.S 一次洛美沙星N.S,5%G.S 二次,先用5ml注射用水溶解左氧氟沙星N.S, G.S 一次加替沙星N.S,5%G.S 一次,终浓度为2mg/ml依诺沙星5%G.S 一次帕珠沙星N.S 一次利福霉素5%G.S 一次氟康唑无一次两性霉素B 5%G.S（用NS有沉淀）二次．5ml注射用水溶解25mg药物,终浓度<0.1mg/ml,避光慢滴6h以上阿昔洛韦N.S,5%G.S 二次．每0.1g用10ml注射用水溶解成50g/l.再用年夜瓶稀释成至少100ml.终浓度不超越7g/l.慢滴.注意水化更昔洛韦N.S,5%G.S 先用N.S或注射用水溶解,再用年夜瓶稀释成100ml.浓度不超越10mg/ml,一次最年夜量6mg/kg聚安洛韦N.S,5%G.S 一次膦甲酸钠无一次．注意水化（2.5L/d）,可适当用利尿剂,慢滴阿糖腺苷无一次．日剂量<10mg/kg病毒唑N.S,5%G.S 一次．1mg/ml,慢滴磷霉素N.S,5%G.S 先用注射用水溶解.慢滴1-2小时.总结：1. N.S溶解：青霉素、氨苄西林类、阿莫西林类、奈夫西林、头孢硫脒、帕珠沙星（阿青安怕牛来）2. G.S溶解：培氟沙星、氟罗沙星、曲伐沙星、依诺沙星、两性霉素B/利福霉素（两粒）3. 需二次配制的：青霉素类：阿洛西林、美洛西林舒巴坦、替卡西林克拉维酸（阿美卡拉）；头孢类：唑啉、噻吩、曲松、哌酮舒巴坦（他唑巴坦）；两粒霉素B、磷霉素、多西环素、阿奇霉素、洛美沙星（20多哈罗）、万古霉素、去甲万古霉素、替考拉宁；阿昔洛韦、更昔洛韦、氨曲南、美罗培南。

抗菌药物最小抑菌浓度的测定

抗菌药物最小抑菌浓度的测定一、概念：最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）：在特定环境下孵冇24 小时，可抑制某种微生物出现明显增长的最低药物浓度即最小抑菌浓度，用于泄量测立体外抗菌活性。

二、实验目的：通过采用常量稀释法，检测几种抗菌药物对--菌株的最小抑菌浓度（MIC）, 对临床诊断用药有指导作用。

MH液体培养基无菌试管分光光度计0.5麦氏标准比浊管MH琼脂微量加样器蒸饰水吸头接种环0.1 mol磷酸缓冲液(PH6.0)无菌生理盐水无菌平板无菌滤膜0.22无菌针筒抗菌药物金黄色匍萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌四、检验方法：液体稀释法、琼脂稀释法、E试验（Etcst）液体稀释法操作步骤：抗菌药物原液配置0000000000000MH液体试管中抗菌药物梯度稀释观察结果1..抗菌药物原液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000ug/ml(如1280ug/ml)或10倍于最高测左浓度。

溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。

所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。

例如：需配制100 ml浓度为1280ug/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750ixg/mgo用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg.根据公式讣算所需稀释剂用量为：(182.6 mgX75O u g/ml)/1280 ug/ml= 107.0ml,然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。

制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表1。

配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-20°C环境，并注意抗菌药物的保存期限。

表1稀释法中常用的抗菌药物容积稀释法2.药敏试验用抗菌药物浓度范带|根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范国应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。

3.培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton (MH)肉汤，pH7.2~7.4。

几种MIC的测定方法

几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）的方法1浊度法1.1常量肉汤稀释法（试管）1.1.1.抗菌药物贮存液制备将抗菌肽稀释到无菌水中，制成1024μg/ml的原液，（也可以用0.22um滤膜进行过滤，但要去掉前面5 ml的过滤抗菌肽溶液）。

抗菌药物贮存液浓度按照不同梯度稀释。

1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。

1.1.3. 培养基推荐使用LB肉汤培养基，pH7.0~7.4。

指示菌为大肠杆菌或沙门氏菌。

1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的LB肉汤中，35℃孵育2-6 h。

增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或LB肉汤培养基校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。

二是直接菌落悬液配制法，推荐直接取培养18~24 h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。

用LB肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释后备用。

注意应在15分钟内接种完配制好的接种物，并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养，以检查接种物纯度。

1.1.5.稀释抗菌药物的制备及菌液接种取无菌试管（13×100mm）13支，排成一排，除第1管加入1.6ml LB肉汤外，其余每管加入LB肉汤1ml，在第1管加入抗菌药物原液（如1024μg/ml）0.4ml混匀，然后吸取1ml至第2管，混匀后再吸取1ml至第3管，如此连续倍比稀释至第11管，并从第11管中吸取1ml弃去，第12管为不含药物的生长对照。

此时各管药物浓度依次为256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml。

然后在每管内加入上述制备好的接种物各1ml，使每管最终菌液浓度约为5×105CFU/ml。

第1管至第11管药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125μg/ml。

最小抑菌浓度(MIC)及抑菌率的测定

最小抑菌浓度（MIC）及抑菌率的测定提纯蛋白质后，需要测定其最小抑菌浓度（MIC），有文献提到根据MIC测得的结果计算抑菌率：抑菌率（%）= (阳性对照OD值—试验OD值) / (阳性对照OD值—阴性对照OD值)X100样品的MIC与同性质药物和一些常用药物的MIC进行比较才有意义，不能单纯通过自己样品的结果就判断出高低，并且不能只用一种细菌。

要考虑用不同种类的细菌进行实验，还要做质控。

根据抑菌率大小可以判断是否具有抑菌能力。

可参考以下药敏介绍：诸多药敏试验方法中，肉汤稀释法是标准方法，琼脂稀释法也可认为属于标准方法。

其他任何方法必须与标准方法比较，才能确定可靠性。

其他方法之间相互比较没有太大价值。

比较须平行测定耐药菌株和敏感菌株。

耐药菌株，被评价方法与标准方法的误差称极重要误差，不得大于3%；敏感菌株，被评价方法的误差称重要误差，不大于7%。

不同的药敏试验方法，针对不同药物，可靠性不一样。

如测MRSA须高盐条件，有的试剂盒中不加盐，结果不准确，但这不影响肠球菌的测定结果。

所以，评价一种方法，应该是有针对性地验证一种细菌对一种药物测定结果的可靠性。

质量控制及其校准作用1、纸片法药敏试验用敏感菌株做质量控制。

此外，ATCC25923，ATCC25922，ATCC27853三个菌株还具备校准作用，此点往往被忽视。

在NCCLS有关文件中，质量控制一节的第一部分就是讲方法的校准。

由于培养基和操作的原因，国内大部分实验室的药敏试验没有经过校准，试验的准确度差异很大。

校准过程中，须注意用适合的参考菌株校准相应菌类的药敏试验。

如葡萄球菌药敏试验用ATCC25923校准；肠杆菌药敏试验用ATCC25922校准。

2、筛选法药敏试验必须用耐药菌株做质量控制，最好是低水平耐药菌株。

MRS筛选试验以ATCC43300控制。

万古霉素筛选试验，以ATCC51299控制。

3、稀释法药敏试验对质量控制要求较高，特别是微量稀释法，必须做质量控制，否则会出现较大误差。

琼脂稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度

琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，加入融化并冷至50C左右的定量MH琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。

本法优点是可在一个平板上同时作多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。

1. 培养基制备使用MH琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.2~7.4。

淋病奈瑟菌使用GC琼脂基础加1%添加剂；其它链球菌使用含5%（V/V ）绵羊血的MH琼脂（当试验磺胺药时，使用溶解的马血）。

2. 含药琼脂平板制备根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在45~50 C水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度3~4mm。

通常按1 : 9比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。

配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置2~8 C冰箱可贮存5天。

3. 接种物制备与接种制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再 1 : 10稀释，以多点接种器吸取制备好菌液（约1~2卩I）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104CFU，形成直径为5~8mm的菌斑。

接种好后置35C孵育16~20h （甲氧西林耐药葡萄球菌、万古霉素耐药肠球菌孵育时间应满24h）,观察结果。

奈瑟菌属、链球菌属细菌置5%二氧化碳、幽门螺杆菌置微需氧环境中孵育。

4. 结果判断将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。

在含甲氧苄胺嘧啶或磺胺琼脂平板上可见轻微细菌生长，与生长对照比较抑制80%以上细菌生长的最低药物浓度作为终点浓度。

如果出现有2个以上菌落生长于含药浓度高于终点水平的琼脂平板上，或低浓度药物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象，则应检查培养物纯度或重复试验。

原理：将抗菌药物配制到琼脂培养基中成：128 u g/ml * 64 u g/ml . 32 u g/ml .............................. 0. 06 ug/ml对倍稀释的浓度系列多点接种器将制备好的细菌菌悬液迅速点种到琼脂表面，经35C16-20小时培养肉眼观察细菌生长，以未见细菌生长平板的最低药物浓度为最低抑菌浓度(MIC)抗菌药物保存液的准备1估算抗菌药物最小称量琼脂稀释法最高药物浓度为128 u g/ml 药物和培养基的体积比1： 14,即药物浓度將成15倍稀释，因此保存液为128ug/mlX15 = 1920 u g/ml 如果1次用量为10ml ,则：抗菌药物最小称量二1920ug/ml*10ml抗菌药物的效价抗菌药物保存液的准备2抗菌药物稀释选择合适的抗菌药物稀释液进行药物稀释, 稀释液需要量见下列公式：抗菌药物实际称量*效价稀释液体积二保存液浓度(1920iig/ml)抗菌药物保存液的准备3实际操作:先计算完成一批试验需几次完成，每次用量多少，然后可一起称量，一起稀释亍然后按每次需要量分装在试管中，贴上标签，注明药物名称，浓度,体积数及配制日期，置与＜-20D C保存，备用。

最低抑菌浓度测定方法

最低抑菌浓度测定方法一、前言最低抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration，MIC）是指一种抗菌药物能够抑制细菌生长的最低浓度。

MIC测定是临床微生物学和药理学中的重要实验方法之一，对于评估抗菌药物的疗效和选择合适的治疗方案具有重要意义。

本文将介绍最低抑菌浓度测定方法，包括试验材料、实验步骤和结果判读等内容。

二、试验材料1. 细菌：需测试的细菌株，可选用革兰氏阳性或阴性细菌。

2. 培养基：可选用Mueller-Hinton琼脂培养基或Brain Heart Infusion琼脂培养基等。

3. 抗生素：需测试的抗生素，可选用氨苄西林、头孢呋辛等常见抗生素。

4. 96孔板：用于进行微量稀释法测定MIC值。

5. 稀释液：可选用双倍稀释液（double-strength broth）或盐水等。

6. 恒温箱：用于控制培养温度为37℃。

7. 显微镜：用于观察细菌生长情况。

三、实验步骤1. 制备菌液：取一支革兰氏染色阳性或阴性细菌，接种于含有适当营养成分的培养基中，进行预培养。

待菌液浑浊度达到0.5 McFarland标准时，可用于后续实验。

2. 稀释菌液：将制备好的菌液按一定比例稀释至10^-4或10^-5倍，得到约10^6 CFU/mL的细菌悬浮液。

3. 制备抗生素溶液：将需测试的抗生素按一定比例加入到稀释液中，制备出不同浓度的抗生素溶液。

4. 测定MIC值：将制备好的抗生素溶液加入到96孔板中，并依次加入稀释好的细菌悬浮液。

每个孔内均应包括对照组和实验组。

将孔板放入恒温箱中，在37℃条件下培养18-24小时。

观察各孔内是否有细胞生长，记录最低浓度呈现无细胞生长情况的孔号，即为MIC值。

四、结果判读1. MIC值的判读应根据不同抗生素和细菌株的敏感性标准进行。

2. 一般来说，MIC值越低，说明抗生素对该细菌株的敏感性越强。

3. 当MIC值等于或低于临床常用浓度时，说明该抗生素对该细菌株具有治疗价值。