绿脓杆菌检验技术.ppt
【精品文档】绿脓杆菌
绿脓杆菌检验方法pseudomonas aeruginosa 绿脓杆菌在自然界分布甚广，空气、水、土壤中均有存在。
1 方法提要根据本菌生物学特征：革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。
此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在42℃条件下生长等，可与类似菌相区别。
2 培养基和试剂2.1 1.05284.0500（绿脓）培养基制法：取44.5g 于1 L水中，加温使溶解，调pH为7.2，煮沸过滤后补足液量，溶解混匀，，121℃15min灭菌后备用。
平板制法：将灭菌后培养基倾注5CM平板约3CM厚，冷却凝固后贮藏于冰箱（4℃）３仪器3.1 培养箱：37℃、42℃。
3.2 锥形烧瓶。
3.3 过滤装置。
3.4 灭菌平皿。
3.5 灭菌刻度吸管。
3.6 显微镜。
3.7 载玻片。
3.8 接种针、接种环。
3.9 电炉。
3.10 高压消毒锅。
4 操作步骤4.1 菌落的培养：取250ml样品经0.22μ无菌过滤后，将过滤后的滤膜用无菌镊子轻轻取下贴于制备好的平板上，并将气泡赶走，置37℃培养48h。
如有绿脓杆菌生长，则有呈黄绿色或蓝绿色菌落出现。
4.2 分离并提纯培养：挑取典型菌落，划线接种在普通细菌琼脂平板上，置37℃培养24h。
4.3 染色镜检：挑取单一菌落，涂片，革兰氏染色，镜检为革兰氏阴性者应进行氧化酶试验。
4.4 氧化酶试验：取一张氧化酶试纸放在灭菌平皿内，用无菌玻璃棒挑取绿脓杆菌菌落涂在滤纸片上，在15～30s之内，出现粉红色或紫红色时，为氧化酶试验阳性，若培养物不变色，氧化酶试验阴性。
4.5 绿脓荧光试验：取4W/366nmUV灯观察菌落，可以看到产生荧光。
4.6 42℃生长试验：挑取纯培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，放在41～42℃培养箱中，培养24～48h，绿脓杆菌能生长，为阳性，而近似的荧光假单胞菌则不能生长。
5 检验结果报告1）经染色镜检为革兰氏阴性无芽胞杆菌，氧化酶阳性，应报告检出绿脓杆菌。
绿脓杆菌的试验方法
氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻棒挑取可疑菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的1％二甲基对苯二胺试液，30 s内出现粉红色或紫红色，为氧化酶试验阳性，不变色者为阴性。
绿脓菌素试验：取2～3个可疑菌落，分别接种在绿脓菌素测定培用养基斜面，35℃±2℃培养24 h，加入三氯甲烷3～5 mL，充分振荡使培养物中可能存在的绿
有限公司
文件编号
WI-03-33
版号
A.0
绿脓杆菌的测定方法
页次
生效日期
2020/01/02
脓菌素溶解，待三氯甲烷呈蓝色时，用吸管移到另一试管中并加入1 mol/L的盐酸1 mL，振荡后静置片刻。如上层出现粉红色或紫红色即为阳性，表示有绿脓菌素存在。
硝酸盐还原产气试验：挑取被检菌纯培养物接种硝在酸盐胨水培养基中，置35℃±2℃培养24 h，培养基小倒管中有气者即为阳性。
5．记录保存：
5.1．质检保管5年。
6．相关操作规程
6.1．电热鼓风干燥箱操作规程
6.2．HWS-12型电热恒温水浴锅操作规程
6.3．生化培养箱操作规程
6.4．YX手提式压力蒸汽消毒器操作规程
6.5．净化工作台操作规程
7．相关记录
7.1. 生物性能检测记录。
编制：
日期：
审核：
日期：
批准：
日期：
4.2 器具
烧杯（250ml）、量筒（100ml）、三角烧瓶（250ml）、试管、硅胶塞、白金耳、酒精灯、培养皿（φ90mm）、刻度吸管（1ml,5ml，20ml）
4.3 培养基、菌种：
SCDLP培养液、十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基、染色液（革兰氏染色用）、绿脓菌素测定用培养基、酸盐胨水培养基、明胶培养基、琼脂培养基、乙酰胺培养基、普通琼脂斜面培养基。
铜绿假单胞菌PPT优秀课件
250
200
150
100
50
0
1994 1995 1996 1998 1999 2000 2001
总菌株 554 1048 1348 1542 1291 1678 1949
铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 克雷伯菌属 不动杆菌属 肠杆菌属 嗜麦芽窄食单胞菌 变形杆菌属 沙雷菌属 其它假单胞菌属 枸橼酸杆菌属
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青霉素结合蛋白( Penicillin2B inding2p roteins, PB2Ps)是位于细菌细胞内膜上的一些膜蛋白,是β内酰胺 类抗生素的专一性作用靶点,最初因为能与青霉素共价结 合而得名。PBPs是参与细菌细胞壁肽聚糖生物合成的酶, 包括转肽酶、羧肽酶和内肽酶。它的正常存在是细菌保持 正常形态及功能的必需条件。β内酰胺类抗生素正是通过 与PBPs结合抑制细菌细胞壁的生物合成引起细菌细胞死 亡从而发挥杀菌作用[ 22 ] 。当细胞膜上的PBPs数量减 少,或者PBPs的结构改变或产生一种新的PBPs,使其与β内 酰胺类抗生素的亲和力明显降低,就会产生耐药。这种机 制与β内酰胺酶能发生协同效应,引起细菌对β内酰胺类抗 生素的耐药。
铜绿假单胞菌对外界环境抵抗力较强，在潮湿处能长期生 存，对紫外线不敏感，湿热55℃ 1小时才被杀灭。
4
G- 致病菌标本来源分布
1994～2001年共监测10,279株菌
各种脓液3% 胆汁4%
血液5%
其他12%
伤口6%
泌尿道12%
呼吸道58%
5
7年间最常见的革兰氏阴性菌（株数）
铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 克雷伯菌属 不动杆菌属 肠杆菌属 嗜麦芽窄食单胞 菌 变形杆菌属 沙雷菌属 其它假单胞菌属 枸橼酸杆菌属
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绿脓杆菌检测方法
绿脓杆菌检测方法
一、基本原理
绿脓杆菌是革兰氏阴性杆菌，具有产生绿色色素和氧化酶等生化实验特征，因此，可利用选择性培养基培养、菌体检验和生化试验进行鉴定。
二、主要设备和材料
恒温培养箱、显微镜
三、培养基和试剂
NAC液体培养基、NAC琼脂平皿、普通营养琼脂平皿、糖发酵培养基、尿素培养基、西蒙氏柠檬酸盐培养基、硝酸盐培养基、营养明胶、氧化酶试剂。
四、检测程序
五、操作步骤
1. 采样
采取回盲部内容物、粪便或病灶组织、分泌物。
2. 分离培养
将已接种的NAC液体培养基置37℃恒温培养箱中培养24h后观察生长情况，对未产生绿色色素者转种于NAC琼脂平皿，37℃恒温培养24h。
3. 鉴定
3.1 生长特性及菌落特征
绿浓杆菌在NAC液体培养基中均匀浑浊生长、有菌膜、大部分菌株可在培养液上半部形成绿色色素；在NAC琼脂平皿上形成扁平，边缘不齐呈锯齿状，2～3mm的菌落，大部分菌落可产生绿色色素而致使培养基呈绿色，部分菌株需延长培养时间方可产生色素。
3.2 菌体特征
革兰阴性杆菌，菌体长短不一。
3.3氧化酶试验阳性
被检菌为革兰阴性杆菌，氧化酶阳性及产生绿色色素，可报告检出绿脓杆菌。
3.4 生化试验
对不产生绿色色素的菌应做如下鉴定，见表1。
表1 绿脓杆菌的主要生化特性
3.5 半固体动力试验阳性
3.6 42℃生长试验阳性
4. 结果报告
凡符合上述各项检测结果者做出阳性报告，不符合者做出阴性报告。
绿脓杆菌检测方法
绿脓杆菌检测方法一、基本原理绿脓杆菌是革兰氏阴性杆菌，具有产生绿色色素和氧化酶等生化实验特征，因此，可利用选择性培养基培养、菌体检验和生化试验进行鉴定。
二、主要设备和材料包温培养箱、显微镜三、培养基和试剂NAC液体培养基、NAC琼脂平血、普通营养琼脂平血、糖发酵培养基、尿素培养基、西蒙氏柠檬酸盐培养基、硝酸盐培养基、营养明胶、氧化酶试剂。
四、检测程序NAC液体培养基37C24h有绿色色素和菌膜室温放置至72h有绿色色素和菌膜产生无绿色色素、有菌膜氧化酶试验革兰氏染色镜检报告革兰染色镜检生化试验半固体动力试验氧化酶试验42C 生长试验五、操作步骤1.采样采取回盲部内容物、粪便或病灶组织、分泌物。
2.分离培养将已接种的NAC液体培养基置37C包温培养箱中培养24h 后观察生长情况，对未产生绿色色素者转种丁NAC琼脂平也，37C包温培养24h。
3.鉴定3.1生长特性及菌落特征绿浓杆菌在NAC液体培养基中均匀浑浊生长、有菌膜、大部分菌株可在培养液上半部形成绿色色素;在NAC琼脂平也上形成扁平，边缘不齐呈锯齿状，23mm的菌落，大部分菌落可产生绿色色素而致使培养基呈绿色，部分菌株需延长培养时间方可产生色素。
3.2菌体特征革兰阴性杆菌，菌体长短不一。
3.3氧化酶试验阳性被检菌为革兰阴性杆菌，氧化酶阳性及产生绿色色素，可报告检出绿脓杆菌。
3.4生化试验对不产生绿色色素的菌应做如下鉴定，见表1。
表1绿脓杆菌的主要生化特性葡萄糖木糖乳糖蔗糖枸椽酸盐尿素明胶液化靛基质硫化氢硝酸盐还原产气+一+/一+一一+：阳性；一：阴性；+/-：多数菌株阳性3.5半固体动力试验阳性3.642C生长试验阳性4.结果报告凡符合上述各项检测结果者做出阳性报告，不符合者做出阴性报告。
绿脓杆菌ppt课件
痰培养+药敏试验
患者5月13号入院，15号留取痰培养加药敏试验， 25号痰培养结果显示绿脓杆菌感染，药敏试验显示
对环丙沙星敏感； 6月1号—13号，期间多次行腰穿，测压在正常范
围内，脑脊液，血常规，血培养均无异常。 6月13号对患者再次留取痰培养，和药敏试验。 6月14号痰培养结果显示，有金葡菌感染，药敏试 验显示该菌对万古霉素敏感，绿脓杆菌感染，药敏
注意个人防护勤洗手提高机体免疫力避免与铜绿假单胞菌感染患者接触有皮肤创面时应戴手套及时消毒处理不同病种最好能分室居住如条件不许可也可同居一室但必须做好床边隔离每一病床应加隔离标记病员不准互相接触减少人员走动减少探视以防交叉感染
绿脓杆菌
绿脓杆菌（p.aeruginosa）或称铜绿色假单胞菌，是一种致病力较 低但抗药性强的杆菌。广泛存在于自然界，是伤口感染较常见的一
发热症状。皮肤可出现特征性坏疽性深脓疱。
2.皮肤软组织感染 败血症患者可继发红斑坏疽性皮疹、皮下结节、
深部脓肿、蜂窝织炎等皮损。烧伤创面、褥疮、外伤创口及静脉曲张溃 疡面上由于产生大量的白蛋白，有利于细菌滋生。
3.尿路感染 假单胞菌是医院内泌尿道交叉感染的常见菌，占院内感染
尿路分离菌的第二位，留置导尿管是截瘫患者获得感染的诱因。其他如 神经原膀胱、尿路梗阻，慢性尿路感染长期应用抗菌治疗亦易罹患假单
2.培养法：取感染部位标本，如脓液痰液、血、尿、皮疹、穿刺物或 渗出液等进行细菌培养，根据微生物特性进行鉴定，可确立诊断。
3.血象检查：白细胞轻度增高，也有减少的情况，并可见贫血及黄疸 。
4.辅助检查：
呼吸道感染，X线表现为双肺散在支气管肺炎伴结节状渗出阴影，或 阴影中可见小透光区(小脓肿)。听诊检查可有弥漫性细小水泡音及喘 鸣。脑脓肿的CT表现为边界清楚或不楚的低密度灶，脓肿附近脑组 织可有低密度水肿带。
绿脓杆菌病PPT课件
11
2019/11/11ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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病理变化
死亡雏鸡，羽毛粗乱。泄殖腔周围有稀粪 污染。头颈部、胸腹部皮下水肿、淤血或 溃疡，皮下有淡绿色胶冻样浸润物。严重 者水肿部皮下可见出血点或出血斑。
实质脏器不同程度充血、出血。肝脾肿大， 有出血点，肝脏有淡黄色小米粒大小坏死 灶。气囊混浊、增厚。肺充血、出血。肠 黏膜充血、出血。
绿脓杆菌病
1
2019/11/11
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病原
流行 病学
临诊 症状
病理 变化
诊断
防制
公共 卫生
2
2019/11/11
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绿脓杆菌病
由铜绿假单胞菌引起化脓性炎症和败血 症的一种人兽共患病。
铜绿假单胞菌是条件致病菌，对人和动 物均有致病性，人主要表现在烧伤、外 科术后感染等。动物常见内脏器官脓肿， 幼畜禽常导致死亡。
绿脓杆菌广泛存在于自然界，无论土壤、 水、动植物、空气和环境中都存在。易感 动物也十分广，几乎所有动物在一定条件 下都可感染发病。
本病的传播途径也多种多样，主要是通过 消化道、下呼吸道或创伤接触感染。多呈 散在发生。饲养管理不良、疾病、应激等 因素往往引起本病爆发。
7
2019/11/11
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结束
5
2019/11/11
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本菌是专性需氧菌，对外界环境的抵抗力较 强，在潮湿处能长期存活，对干燥、紫外线 有较强抵抗力。
绿脓杆菌对青霉素、链霉素、红霉素、新霉 素等抗生素有天然的抗药性，也易在使用抗 生素后发生获得耐药性。
绿脓杆菌病[精品ppt课件]
![绿脓杆菌病[精品ppt课件]](https://img.taocdn.com/s3/m/f28c7cdb6294dd88d0d26b95.png)
【流行特点】
本病四季均可发生，以春季多见， 雏鸡最易感，随着年龄增加，抵抗力 增强。育雏室温【临床特征】
败血型多发于1～6日龄雏鸡，死亡率为30%～ 60%，表现为精神不振，食欲废绝，排白色稀便
粪 便 呈 白 色 黏 液 样
少数病例出现角膜或眼前房混浊（范国雄 ） 有时病鸡出现震颤，很快死亡
注射部位皮下胶冻样浸润（头部）
肝脏轻度肿大，有出血点和小坏死灶
肝脏肿大，有出血点和小坏死灶，胆囊扩张
【防治要点】
切实做好种蛋收集、贮存、入 孵、孵化中期和出雏中的消毒工作， 接种疫苗时，应注意对器械严格消 毒，尽量避免接种感染。也可在接 种前后2～3天使用药物进行预防。 对病鸡应及时淘汰，全群口服氯霉 素、强力霉素、氧氟沙星、环丙沙 星等，有一定疗效。
绿脓假单胞菌属感染讲课PPT课件
加强临床医生对绿脓假单胞菌属感 染的认知，提高诊断和治疗水平。
建立绿脓假单胞菌属感染的监测和 预警系统，及时发现并控制疫情。
汇报人：
形态：短小杆 菌，有鞭毛， 无芽孢和荚膜
染色特性：革 兰氏阴性菌， 呈红色或粉红
色
培养特性：需 氧或兼性厌氧， 在普通培养基
上生长良好
抵抗力：对理 化因素抵抗力 较强，对抗生 素易产生耐药
性
生化特性：绿脓假单胞菌属是一种非发酵革兰氏阴性杆菌，具有氧化酶阳性、触酶阳性、硝酸盐还原阳性等生化特征。 抵抗力：绿脓假单胞菌属对多种抗生素具有抗药性，如青霉素、头孢菌素等，但对氨基糖苷类抗生素敏感。
针对不同症状采取 相应治疗措施，如 呼吸困难时给予吸 氧。
保持水电解质平衡， 防止脱水。
针对并发症进行治 疗，如肺炎、心脏 疾病等。
采取措施预防感染 ，如加强个人卫生 、避免接触病原体 等。定期进行环Βιβλιοθήκη 清洁和消毒，减 少细菌滋生和传播。
强化手卫生管理，提高医务人 员和患者的洗手率。
加强医疗设备、器械的消毒灭 菌工作，避免交叉感染。
汇报人：
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绿脓假单胞菌是一种条件致病 菌，常存在于人体皮肤、肠道 和呼吸道中
绿脓假单胞菌属感染是由绿脓 假单胞菌引起的一种常见感染
该菌对多种抗生素具有抗药 性，治疗较为困难
感染症状因部位而异，可表现 为皮肤化脓性炎症、肺炎、心
内膜炎等
感染途径：通过呼吸道、皮肤或伤口等途径感染 症状：发热、咳嗽、咳痰、呼吸困难等呼吸系统症状，以及皮肤红肿、疼痛、水疱等皮肤症状
案例三：一起医疗操作不当导致的绿脓假单胞菌属感染，引起社会关注，加强了医疗操 作规范。
化妆品中绿脓杆菌的检测
化妆品中绿脓杆菌的检测1．检测绿脓杆菌的意义绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)为革兰氏阴性细菌，属假单胞菌属。
它在自然界分布甚广，空气、水、土壤中均有存在，在潮湿处可长期生存，对外环境的抵抗力比其他细菌强，抗干燥的能力也强。
含水分较多的原料、化妆品易受其污染，绿脓杆菌对人类有致病力，常引起人体的眼、皮肤等处感染，特别是烧伤、烫伤及外伤患者感染上绿脓杆菌常使病情恶化，严重时可引起败血症，眼睛受伤感染后可使角膜溃疡并穿孑L，严重可致失明。
目前，该菌已是防止医院感染和药品、化妆品及水等必须严加控制的重要病原菌之一。
我国化妆品卫生标准规定：在化妆品中不得检出绿脓杆菌，因此，在化妆品中检测绿脓杆菌具有重要意义。
2．绿脓杆菌的生化特性绿脓杆菌是革兰氏阴性杆菌，有鞭毛，能在普通培养基上生长繁殖，为需氧及兼性厌氧类细菌。
绿脓杆菌能代谢产生一种绿色的水溶性色素，使培养基变成绿色，受它而引起的化脓感染，脓液就常带绿色，因此而定名为绿脓杆菌。
绿脓杆菌可分解葡萄糖；对明胶具有液化、溶解作用；能还原硝酸，盐成为亚硝酸盐，并将亚硝酸盐分解产生氢气；绿脓杆菌具有氧化酶(靛基氧化酶)能将试剂(盐酸二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺)氧化成红色的醌类化合物；还可在42℃的温度下生长繁殖。
绿脓杆菌的这些生化特性常用来作为分离和鉴别它的方法。
3．检验操作及结果报告(1)检验操作步骤增菌培养：将试样液稀释无菌操作加入SCDLP液体培养基中，置37'E进行24h分离培养。
该类培养基选择性强，大肠杆菌不能生长，革兰氏阳性菌生长完全受到抑制。
观察培养基上所形成的菌落，典型绿脓杆菌菌落特征是菌落扁平无定型，向周边扩散或略有蔓延，表面湿润，菌落呈灰白色，菌落周围培养基常扩张有水溶性色素。
证实试验：①染色镜检：取上述可疑为绿脓杆菌的菌落，进行革兰氏染色、镜检试验。
②氧化酶试验：挑取可疑菌落(同上)置于滤纸片上，滴加一滴新配制的5％二甲基对苯二胺试剂，15~30min内，出现红色至紫红色，为氧化酶试验呈阳性；若不变色，为氧化酶试验阴性。
绿脓杆菌检测方法
绿脓杆菌检测方法
一、基本原理
绿脓杆菌是革兰氏阴性杆菌，具有产生绿色色素和氧化酶等生化实验特征，因此，可利用选择性培养基培养、菌体检验和生化试验进行鉴定。
二、主要设备和材料
恒温培养箱、显微镜
三、培养基和试剂
NAC液体培养基、NAC琼脂平皿、普通营养琼脂平皿、糖发酵培养基、尿素培养基、西蒙氏柠檬酸盐培养基、硝酸盐培养基、营养明胶、氧化酶试剂。
四、检测程序
五、操作步骤
1. 采样
采取回盲部内容物、粪便或病灶组织、分泌物。
2. 分离培养
将已接种的NAC液体培养基置37℃恒温培养箱中培养24h后观察生长情况，对未产生绿色色素者转种于NAC琼脂平皿，37℃恒温培养24h。
3. 鉴定
3.1 生长特性及菌落特征
绿浓杆菌在NAC液体培养基中均匀浑浊生长、有菌膜、大部分菌株可在培养液上半部形成绿色色素；在NAC琼脂平皿上形成扁平，边缘不齐呈锯齿状，2～3mm的菌落，大部分菌落可产生绿色色素而致使培养基呈绿色，部分菌株需延长培养时间方可产生色素。
3.2 菌体特征
革兰阴性杆菌，菌体长短不一。
3.3氧化酶试验阳性
被检菌为革兰阴性杆菌，氧化酶阳性及产生绿色色素，可报告检出绿脓杆菌。
3.4 生化试验
对不产生绿色色素的菌应做如下鉴定，见表1。
表1 绿脓杆菌的主要生化特性
3.5 半固体动力试验阳性
3.6 42℃生长试验阳性
4. 结果报告
凡符合上述各项检测结果者做出阳性报告，不符合者做出阴性报告。
绿脓杆菌检验技术讲解
革兰氏染色阳性（Gram Positive）:革兰氏阳性菌由于细胞壁厚、
肽聚糖含量较高和其分子交联度较紧 密，故在用乙醇洗脱时，肽聚糖网 孔会因脱水而明显收缩，再加上它基本不含类脂，故用乙醇处理不能在 壁上溶出缝隙，因此结晶紫与
碘复合物仍牢牢阻留下其细胞壁内，使其呈现蓝紫色。
硝酸盐还原产气实验：可疑菌落→硝酸 盐蛋白胨水→ 37℃ 24h →小倒管内有 气体产生为阳性，否则阴性。
明胶液化实验：可疑菌落→穿刺接种于 明胶培养基→ 37℃ 24h →取出放冰箱 10~30min
呈溶解状为阳性，不溶解则为阴性。
42℃生长实验 ：可疑菌落→普通琼脂 斜面→42℃ 24h→铜绿假单胞菌生长， 而近似的荧光假单胞菌不能生长 。
细菌的分离培养
原理： 通过划线，将混杂的细菌在平板表面逐一分散，经培养 后，各自形成菌落(colony)。根据菌落形态、特征挑选 单个菌落，移种培养后，即得到纯种细菌。
方法： 平板划线法有几种，可根据不同情况选用其中一种。 (1)平行划线法 此法适用于含菌不多的液体标本，
如脑脊液(CSF)、腹水、分泌物、脓汁以及稀薄 的菌液等。 ①左手斜持平板底，右手持接种环。接种环在火焰 上灭菌，冷却后，沾取一接种环标本，先在平板 的一端涂开，并从此处开始向下划密集的平行线， 约占平板面积的一半。 ②将平板转180°角，从平板另一端开始也划密集 的平行线，直到划满平板的剩余部分。 将平板底放入盖内，接种环火焰灭菌后放下，将平 板倒置，37℃培养。
操作步骤
检样前化妆品的处理 接样于营养肉汤增菌，37℃， 12h，140rpm培养 分离培养，挑取培养物接于十 六烷基三甲基溴化铵平 板， 37℃，18-24h
染色镜检
绿脓杆菌PPT课件
( bactericidal action of prostatic fluid )
bactericidal activity of mucous membrane of urethra
( urinous characteristics )
尿路感染
1
.
定义 尿路内大量微生物繁殖而引起的尿路炎
症，可有/无临床症状。微生物可为细菌、结核
菌、真菌、衣原体、支原体和病毒等，以细菌
性尿感最多见，发病率2.02%。
类型
真性菌尿
菌落计数 ≥105/ml
有症状尿感 无症状尿感
症状 部位
上尿路感染(肾盂肾炎) 下2尿路感染(膀胱炎)
尿感 结构
初/再
初发尿感 . 再发尿感
约为75％。
主要表现为尿频、尿急、尿痛、小腹不适。
一般无明显的全身感染症状。
四、无症状性菌尿（asymptomatic bacteriuria）
真性菌尿 + 无症状。
常于检体中发现，随年龄增长而增长,孕妇
达7%，老年妇女达10%。
11
.
并发症
肾乳头坏死 ( renal papillary necrosis ) ARF,CRF ( acute/chronic renal failure )
流行病学
女性发病率高
有症状尿感 婚育女性 无症状尿感 老年女性
男性50岁以上易发生
前列腺肥大
7
.
10%
5%
7%
2%
未婚
已婚
孕妇
老年
病理解剖
急性膀胱炎(acute ： cystitis)
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操作步骤
检样前化妆品的处理 接样于营养肉汤增菌，37℃， 12h，140rpm培养 分离培养，挑取培养物接于十 六烷基三甲基溴化铵平 板， 37℃，18-24h
染色镜检
配十六烷基三甲基溴化铵培 养基（选择性培养基，大肠杆菌
不能生长，革兰氏阳性菌生长完 全受到抑制）
配绿脓菌素测定用培养基， 明胶培养基，硝酸盐蛋白胨 水培养基，普通琼脂斜面培 养基
细菌的分离培养
原理： 通过划线，将混杂的细菌在平板表面逐一分散，经培养 后，各自形成菌落(colony)。根据菌落形态、特征挑选 单个菌落，移种培养后，即得到纯种细菌。
方法： 平板划线法有几种，可根据不同情况选用其中一种。 (1)平行划线法 此法适用于含菌不多的液体标
本，如脑脊液(CSF)、腹水、分泌物、脓汁以及 稀薄的菌液等。 ①左手斜持平板底，右手持接种环。接种环在火焰 上灭菌，冷却后，沾取一接种环标本，先在平板 的一端涂开，并从此处开始向下划密集的平行线， 约占平板面积的一半。 ②将平板转180°角，从平板另一端开始也划密集 的平行线，直到划满平板的剩余部分。 将平板底放入盖内，接种环火焰灭菌后放下，将 平板倒置，37℃培养。
革兰氏染色方法操 作步骤
盐生 水理
涂片
接 种 环
自然干燥
固定
结草 晶酸 紫铵
干燥 镜检
复染 1min
复
95%
红
脱色
乙醇
0.5min
媒染 1min
操作步骤
氧化4酶2 ℃生长 试验 试验
绿脓菌素 试验
特征性检验
硝酸盐还原 产气试验
明胶液化 试验
取菌接+ 菌1滴 二甲基对
42 ℃ 24h 苯二胺
接菌，37 ℃ 24h +氯仿 移出+盐酸
接菌 37 ℃ 24h
接菌 37 ℃ 24h
紫红色（+） 紫红色（+） 不变不色生（长-）（-） 不变色（-）
化妆品中铜绿假单胞菌
（Pseudomonas aeruginosa）
的检测
目的：
1.了解化妆品中铜绿假单胞菌检测的基本过程。
2.掌握几种培养基的配置方法。
3.掌握铜绿假单胞菌的鉴定及生化特征。
原理：
铜绿假单胞菌为需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性杆菌， 有鞭毛，在普通培养基上生长良好，菌落大小不一， 平均直径2mm～3mm，扁平，边缘不整齐，且常呈相 互融合状态。氧化酶阳性，能产生绿脓菌素，此外 还能液化明胶，还原硝酸盐产生氮气，在42℃条件 下可以生长，可与类似菌区别。
为防止细菌溅散污染环境，接种环灭菌前，须先将接种环 靠近火焰或放内焰中烤干，然后再在外焰中烧红灭菌，杀 死残留的细菌。
2．干燥：放空气中自然干燥。如欲加速，也可把涂片置于 火焰上部的热气层中烘烤，但切勿将涂膜烤焦。
3．固定：用染色夹子夹住涂片，在火焰的最热部分连续通 过三次，以固定之。此时杀死大部分细菌，并使标本固定 于玻片上，以免在染色或水洗过程中被冲掉。
加热溶解 调pH 分装试管 高压 成高层 3.硝酸盐蛋白胨水培养基300ml
加热溶解 调pH 分装有小倒管的试管 直立制成高层 4.普通琼脂斜面培养基300ml
加热溶解 调pH 分装试管 高压 面
制成斜 直立制
高压 制成斜
注意事项
1. 培养基溶解时，加有琼脂的培养基易 沸，应注意看守。
2. 注意调节培养基的pH。 3. 称牛肉膏用玻片，称甘油用小烧杯。 4. 加热后应补足液量。 5. 注意做好标记。
(2)分区划线法。此法适用于含菌多的检测标本，如 粪便，喀痰、细菌固体培养物等。
①划线前的操作同平行划线法。先在平板的一端将标 本涂开并在平板的1/5～1/4面积上划密集的平行线， 接种环火焰灭菌。
②将平板转约70°角，待接种环冷却后，使接种环通 过已划线的1区5～7次，以后即不与1区接触作连续 密集划线，约占平板面积的1/4，接种环再通过火 焰灭菌。
除营养条件以外，微生物必须在最适酸碱度范围内才表 现出最大生命力，因此，应针对不同的微生物将培养基的pH 值调节到适当范围。
操作步骤
按培养基 配方称量
加水加
调节
热熔化 → pH值
分装 包装
灭菌 备用
操作步骤
1.绿脓菌素测定用培养基300ml 加热溶解 调pH 分装试管 高压
面 2.明胶培养基300ml
③再转平板约70°，如上法在第3区划线，此后接种 环不再灭菌。
④重复上述操作在第4区划线，划满余下的培养基表 面。将平板底放入盖内，接种环灭菌后放下，置 37℃培养。
实验二 染色镜检及五项指标试 验
革兰氏染色方法
涂片→干燥→固定→染色→镜检
1．涂片：取一洁净的载玻片，用记号笔在载玻片做好标记， 并在载玻片中间滴一小滴生理..盐水，以无菌接种环挑取 少量菌体涂片，玻片要洁净无油，否则菌液涂不开。
有气体（+） 无气体（-）
溶解成液状（+） 生长（+） 未溶解（-）
实验一 培养基的制备及细菌的 分离培养
实验目的
掌握培养基制备的原理和方法 掌握细菌的分离培养 了解灭菌方法
实验原理
不同的微生物生长繁殖都需要提供一定的营养条件， 在实验室中，微生物的营养是由培养基来提供的。培养基是 按照微生物生长繁殖所需要的营养物质，用人工方法配制而 成的营养基质。
4．染色：
①初染:将结晶紫染液加于涂膜上，1min。
②媒染:水洗后加芦戈氏碘液处理，1min。
③脱色：水洗后用95％乙醇脱色，并摇动玻片，直至流下 的液体无色为止，约需0.5min。
④复染：水洗后加石炭酸复红稀释液染色，1min。
⑤水洗，用滤纸吸干，待标本充分干燥后进行镜检。
5．镜检：
干燥后，用油镜观察。判断两种菌体染色反应性。菌体被染 成蓝紫色的是革兰氏阳性菌（G+），被染成红色的为革兰氏 阴性菌（G-）。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过 于密集的细菌，常常呈假阳性。
。
注意事项：
酒精脱色是革兰氏染色中的重要环节，如脱色过度， 则革兰氏阳性菌可能被误染为革兰氏阴性菌，如脱色 不够，则革兰氏阴性菌可能被误染为革兰氏阳性菌， 所以脱色时间要很好掌握。脱色时间的长短还受涂片 厚薄的影响，一般涂片时取菌要少，涂片薄而均匀为响染色结果，如革兰氏阳性菌的陈旧培养物也有 出现革兰氏阴性的几率，所以被检菌的菌龄一般最好 在18~24h之内。