血清碱性磷酸酶的活性测定
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1.生理性增加：如儿童、妊娠期、进食 高糖高脂肪食物等使ALP活性升高
2.病理性改变 A.升高：肝胆疾病（主要见于阻塞性黄
疸，急或慢性黄疸型肝炎，肝硬化，肝 癌） 骨骼疾病（纤维性骨炎、变型 性骨炎、成骨不全症、骨质软化病、佝 偻病、肿瘤骨转移等） B.降低:主要见于呆小症、磷酸酶过少症 等
---
蒸馏水
---
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0.100
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PH10碳酸盐
1.00
1.00
1.00
1.00
缓冲液
混匀，37℃水浴保温5min，同时将底物Leabharlann Baidu预热
底物液
1.00
1.00
1.00
1.00
混匀，37℃水浴保温15min
铁氰化钾溶
3.00
3.00
3.00
3.00
液
血清
---
---
---
0.100
立即混匀，在510nm波长处比色，以蒸馏水调零点，读取各管吸光度
3
实验原理
二.测定方法 1.终止测定法（定时法或终点法）是当
酶促反应进行到一定时间点，通过物理 或化学方法(强酸、强碱、蛋白沉淀剂） 终止反应。 动力学分析法（连续监测法或速率法） 在酶促反应过程中，用仪器连续监测酶 促反应产物或底物的变化量，通过计算 求出酶的活性。
4
实验原理
测定ALP活力分两种 1.测定底物解离下的磷酸根来计算。如
显色液 铁氰化钾K3[Fe(CN)6]2.5g、硼酸 17g，各溶于400ml蒸馏水，混合后加蒸馏 水至1L，棕色瓶避光保存。
酚标准工作液0.05mg/ml
7
实验操作
试剂/ml 测定管（T） 标准管（S) 空白管（B） 对照管（C）
血液
0.100
---
---
---
酚标准液
---
0.100
---
8
计算公式
9
注意事项
1.铁氰化钾应避光保存，如出现蓝绿色 即作废。铁氰化钾 的水溶液受到光线 的作用，就会分解成黄血盐钾 K4[Fe(CN)6]
2.底物液中不应含有酚，如含有酚时空 白管显红色，说明磷酸苯二钠开始分解， 不宜继续使用
3.加入铁氰化钾后必须迅速混匀，否则 显色不充分
10
临床意义
6
试剂
碳酸盐缓冲液（0.1mol/L PH10.0) 无水碳 酸钠6.36g、碳酸氢钠3.36g、4-氨基安替 比林1.5g溶于800ml蒸馏水中，定容至1L。 棕色瓶贮存。
磷酸苯二钠底物液（20mmol/L) 先将 500ml蒸馏水煮沸，迅速加入磷酸苯二钠 2.18g，冷却后加氯仿2ml，4℃冰箱保存。
11
思考
结合参考值范围、临床意义分析本小组 的实验结果
12
血清碱性磷酸酶活力的测定
磷酸苯二钠法
1
实验目的
1.熟悉酶活力测定方法的一般原理 2.掌握血清碱性磷酸酶(ALP)的测定原理
与临床意义。 3.酶活力测定的目的是了解组织提取液、
体液中酶的存在于含量。
2
实验原理
一.基本概念 1.酶活力测定 酶的催化功能可以用在一定条件下
酶所催化的某一特定化学反应的速度来表示。反 应速度越快，酶活力越高;反之，活力越低。测定 酶活力实际上是测定酶促反应速率。 2.酶的活力单位 a.国际 在特定的条件下，1min内将1μmol底物转 化为产物所需的酶量为1个国际单位(IU)。 1IU=16.67×10-9Katal b.临床上采用金氏（Kings）的定义：每100ml血清 在37℃与底物作用15min，产生苯酚1mg的酶量为1 个金氏单位。 c.Kat单位 在特定条件下，每秒钟转化1mol底物的 酶量。1Kat=6×107 IU
β-甘油磷酸钠法，但存在血清本身有磷 酸根的缺点。 2.测定底物解离后的羟基化合物 A.在显色剂的作用下显色比色测定（本 次） B.生成的酚化合物本身在一定条件下就 可以显色（对硝基苯磷酸二钠法）
5
实验原理
三.核心原理 ALP催化磷酸苯二钠转变成苯酚的速率
可用分光光度计监测，从而计算ALP活 力的大小 磷钠酸苯二钠+H2O---P-HA-L-1P0----苯酚+磷酸氢二 苯酚+4-氨基安替比林--铁氰化钾---红色醌 亚胺衍生物
2.病理性改变 A.升高：肝胆疾病（主要见于阻塞性黄
疸，急或慢性黄疸型肝炎，肝硬化，肝 癌） 骨骼疾病（纤维性骨炎、变型 性骨炎、成骨不全症、骨质软化病、佝 偻病、肿瘤骨转移等） B.降低:主要见于呆小症、磷酸酶过少症 等
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蒸馏水
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PH10碳酸盐
1.00
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缓冲液
混匀，37℃水浴保温5min，同时将底物Leabharlann Baidu预热
底物液
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混匀，37℃水浴保温15min
铁氰化钾溶
3.00
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液
血清
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立即混匀，在510nm波长处比色，以蒸馏水调零点，读取各管吸光度
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实验原理
二.测定方法 1.终止测定法（定时法或终点法）是当
酶促反应进行到一定时间点，通过物理 或化学方法(强酸、强碱、蛋白沉淀剂） 终止反应。 动力学分析法（连续监测法或速率法） 在酶促反应过程中，用仪器连续监测酶 促反应产物或底物的变化量，通过计算 求出酶的活性。
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实验原理
测定ALP活力分两种 1.测定底物解离下的磷酸根来计算。如
显色液 铁氰化钾K3[Fe(CN)6]2.5g、硼酸 17g，各溶于400ml蒸馏水，混合后加蒸馏 水至1L，棕色瓶避光保存。
酚标准工作液0.05mg/ml
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实验操作
试剂/ml 测定管（T） 标准管（S) 空白管（B） 对照管（C）
血液
0.100
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酚标准液
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计算公式
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注意事项
1.铁氰化钾应避光保存，如出现蓝绿色 即作废。铁氰化钾 的水溶液受到光线 的作用，就会分解成黄血盐钾 K4[Fe(CN)6]
2.底物液中不应含有酚，如含有酚时空 白管显红色，说明磷酸苯二钠开始分解， 不宜继续使用
3.加入铁氰化钾后必须迅速混匀，否则 显色不充分
10
临床意义
6
试剂
碳酸盐缓冲液（0.1mol/L PH10.0) 无水碳 酸钠6.36g、碳酸氢钠3.36g、4-氨基安替 比林1.5g溶于800ml蒸馏水中，定容至1L。 棕色瓶贮存。
磷酸苯二钠底物液（20mmol/L) 先将 500ml蒸馏水煮沸，迅速加入磷酸苯二钠 2.18g，冷却后加氯仿2ml，4℃冰箱保存。
11
思考
结合参考值范围、临床意义分析本小组 的实验结果
12
血清碱性磷酸酶活力的测定
磷酸苯二钠法
1
实验目的
1.熟悉酶活力测定方法的一般原理 2.掌握血清碱性磷酸酶(ALP)的测定原理
与临床意义。 3.酶活力测定的目的是了解组织提取液、
体液中酶的存在于含量。
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实验原理
一.基本概念 1.酶活力测定 酶的催化功能可以用在一定条件下
酶所催化的某一特定化学反应的速度来表示。反 应速度越快，酶活力越高;反之，活力越低。测定 酶活力实际上是测定酶促反应速率。 2.酶的活力单位 a.国际 在特定的条件下，1min内将1μmol底物转 化为产物所需的酶量为1个国际单位(IU)。 1IU=16.67×10-9Katal b.临床上采用金氏（Kings）的定义：每100ml血清 在37℃与底物作用15min，产生苯酚1mg的酶量为1 个金氏单位。 c.Kat单位 在特定条件下，每秒钟转化1mol底物的 酶量。1Kat=6×107 IU
β-甘油磷酸钠法，但存在血清本身有磷 酸根的缺点。 2.测定底物解离后的羟基化合物 A.在显色剂的作用下显色比色测定（本 次） B.生成的酚化合物本身在一定条件下就 可以显色（对硝基苯磷酸二钠法）
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实验原理
三.核心原理 ALP催化磷酸苯二钠转变成苯酚的速率
可用分光光度计监测，从而计算ALP活 力的大小 磷钠酸苯二钠+H2O---P-HA-L-1P0----苯酚+磷酸氢二 苯酚+4-氨基安替比林--铁氰化钾---红色醌 亚胺衍生物