DAB显色试剂盒(20 ×)使用说明
dab显色液成分
dab显色液成分
摘要：
I.引言
- 介绍DAB 显色液
II.DAB 显色液的成分
- 过氧化氢
- 邻苯二胺
- 缓冲液
III.DAB 显色液的作用
- 检测蛋白质
IV.使用DAB 显色液的注意事项
- 避免高温和阳光直射
- 不要与还原剂接触
V.结论
- DAB 显色液在实验中的重要性
正文：
DAB 显色液是一种在实验室中常用的试剂，其主要成分包括过氧化氢、邻苯二胺和缓冲液。
过氧化氢是一种氧化剂，在DAB 显色液中起到漂白作用；邻苯二胺则是一种显色剂，能够与蛋白质结合，形成有色沉淀。
缓冲液则是为了维持DAB 显色液的酸碱度稳定。
DAB 显色液的主要作用是检测蛋白质。
在实验过程中，将DAB 显色液
加入含有蛋白质的样品中，如果样品中含有蛋白质，DAB 显色液会与蛋白质结合，形成有色沉淀，从而可以判断样品中是否含有蛋白质。
在使用DAB 显色液时，需要注意以下几点：首先，DAB 显色液应避免高温和阳光直射，以免影响其质量和效果；其次，不要与还原剂接触，因为过氧化氢是一种氧化剂，与还原剂接触会发生反应，导致DAB 显色液失效。
总的来说，DAB 显色液在实验室中起着非常重要的作用，对于检测蛋白质具有高度的敏感性和特异性。
多色免疫荧光染色试剂盒使用说明
多色免疫荧光染色试剂盒使用说明多色免疫荧光染色试剂盒使用说明酪酰胺信号放大(TSA，Tyramide signal amplification)技术是一类利用辣根过氧化酶(HRP)对靶蛋白进行标记的酶学检测方法，类似常规免疫组化的DAB显色方法，TSA技术同样采纳HRP标记的二抗，同样有对应的“显色”步骤(HRP催化加入反应体系的酪胺荧光素底物，产生活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合，使样品上稳定的共价结合酪胺荧光素。
之后用热修复法洗去非共价结合的一抗-二抗-HRP复合物，重复下一种一抗-hrp二抗来其次轮孵育，换另一种酪胺荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。
TSA具体原理是利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(酪胺盐在HRP催化H202下形成共价键结合位点)，产生大量的酶促产物，该产物能与四周的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合，这样在抗原-抗体结合部位就有大量的荧光素沉积，结果使其检测信号得到10-100倍增加。
简洁来说，用这种方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的HRP(而不是直接偶联荧光素)，来催化后续添加入体系的非活性荧光素。
荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化，跟接近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。
然后微波或煮沸或者水浴等热修复处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素稳定共价结合在样本切片蛋白上。
再换个一抗来其次轮孵育，周而复始。
等到全部抗体孵育结束，荧光素都结合好后，最终去检测结果。
由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担忧抗体交叉反应，以及一抗二抗种属匹配问题，大大削减了试验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。
也就是说，假如用TSA技术，同一张片子上全部的靶标都可以选用特异性高的兔单克隆抗体。
搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以进行试验，而且信号放大的倍数大大增加。
茹创生物开发的试剂盒详细酪胺荧光染料为以下其中一种或者多种：TYR-480，TYR-520，TYR-570，TYR-620，TYR-690，TYR-780。
试剂盒使用说明书
人G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)水平。
用纯化的人G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)，再与HRP标记的G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：450pg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
dab染色方法流程
dab染色方法流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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1. 切片脱蜡和水化。
用二甲苯脱蜡三次，每次 5 分钟。
免疫组化染色操作步骤
免疫组织化学染色原理和操作步骤一、免疫组织化学原理免疫组织化学（IHC）又称免疫细胞化学，是根据抗原—抗体特异性结合的原理，应用带有可见标记的特异性抗体作为探针，检测组织和细胞中抗原性物质的一种技术。
免疫组化技术主要有直接法和间接法：直接法是以标记的一抗孵育标本以检测其中的抗原成分；间接法则先后加入一抗和二抗，形成抗原—一抗—二抗复合体以达到检测该抗原的目的，该法因二抗的放大作用而具有较高的敏感性。
间接法常用的有过氧化物酶—抗过氧化物酶（PAP）法、亲和素—生物素—过氧化物酶（ABC）法和链霉亲和素—过氧化物酶（SP）法。
PAP法一抗和二抗均不标记，避免了标记过程对抗体活性的影响，但需要制备过氧化物酶的抗体，与适量过氧化物酶混合形成PAP复合物（含3个酶分子和2个抗体分子），染色时依次加入一抗、二抗、PAP 复合物孵育标本，最后用H2O2和二氨基联苯（DAB）为底物显示过氧化物酶，即可检测标本中的抗原成分。
生物素为含硫的杂环单羧酸，可通过其羧基与蛋白质中的氨基结合，从而标记抗体和酶。
亲合素又称抗生物素蛋白，与生物素有很高的亲合力，1分子亲合素可结合4分子生物素，ABC法即在此基础上建立。
ABC法与PAP法相似，一抗不标记，二抗用生物素标记，染色前按一定比例将亲和素与生物素标记的过氧化物酶混合，制成ABC复合物，并使亲合素分子上至少空出一个生物素结合位点。
在标本孵育过一抗和二抗后，再加入ABC复合物使其结合到二抗的生物素上，最后加入DAB 进行显色。
ABC法的敏感性较PAP法更高。
图1. 免疫组织化学基本原理示意图（引自八年制《组织学与胚胎学》）SP法与ABC法相似，其不同于ABC法之处在于用生物学特性与亲和素相似的链亲和素标记过氧化物酶。
在标本孵育过一抗和二抗后，加入链亲和素标记的过氧化物酶使其结合到二抗的生物素上，最后加入DAB进行显色。
与亲和素相比，链酶亲和素的结合力与亲和素相似而非特异性结合较亲和素低。
DAB显色试剂盒(20×)说明书
DAB显色试剂盒（20×）说明书货号：DA1010规格：DA1010-3DA1010-10溶液A3ml10ml溶液B3ml10ml保存：-20℃避光密闭保存，一年有效，避免反复冻融；短期可2-8℃保存。
产品简介：DAB是过氧化物酶（POD）的显色底物，DAB显色液主要用于免疫过氧化物酶法，适用于辣根过氧化物酶HRP标记的免疫印记或免疫组化反应。
过氧化物酶催化底物发生反应，于反应部位产生棕色沉淀物，免疫印记可直接在膜上显示条带；免疫组化标本显色时间一般为室温5-20分钟，随后在显微镜下观察显色情况，显色充分后应将标本及时脱水封固，其终产物可直接在光镜下观察，也可经OsO4处理后，增加反应产物的电子密度，用于电镜观察。
操作说明：1.对于组织切片或蛋白质印记膜，在与辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。
2.取900μl PBS（或双蒸水），加入50μl溶液A，50μl溶液B混合均匀，即配成DAB工作液。
如需要更大体积工作液，可按比例放大。
此溶液必须现用现配，配好后避光保存，1小时内使用，过期后请将剩余的液体废弃。
3.向组织切片或印记膜上加入适量DAB工作液，确保能充分覆盖样品。
4.室温避光孵育3-10分钟或更长时间，避免光照，直至显色至预期深浅。
5.去除DAB染色工作液，用蒸馏水洗涤2-3次即可终止显色反应。
6.对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，可对其进行其他染料复染。
对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。
注意事项：1.DAB溶液应低温密封保存。
如有结晶析出，应确保结晶完全溶解再行使用。
2.显色工作液应现用现配，新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色，如颜色过深，请勿使用。
3.显色时间严格控制，根据情况调整，以免显色过度。
固相膜显色数小时后即会褪色，不能永久存在。
4.DAB为可疑致癌物，请采取必要的防范措施。
操作时应戴手套，尽量避免与皮肤接触，用后及时彻底冲洗，接触DAB的实验用品最好经洗液浸泡24h后使用。
大肠杆菌内素试剂盒使用说明书
大肠杆菌内毒素试剂盒使用说明书检测范围：96T0.03Eu/L – 0.8Eu/L使用目的：本试剂盒用于测定大肠杆菌样本中内毒素(endotoxin)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大肠杆菌内毒素(endotoxin)水平。
用纯化的大肠杆菌内毒素(endotoxin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入内毒素(endotoxin)，再与HRP标记的内毒素(endotoxin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的内毒素(endotoxin)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大肠杆菌内毒素(endotoxin)浓度。
标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
免疫显色试剂说明书
免疫显色试剂说明书【产品名称】免疫显色试剂【包装规格】【预期用途】在免疫组化反应或原位杂交反应中与首要抗原抗体结合，通过染色，将靶点进行标记。
【检测原理】免疫显色试剂是二步法免疫组化试剂盒，适合与兔或鼠源一抗配用。
其主要过程为，一抗与切片中的靶抗原形成抗原抗体复合物，酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物与抗原抗体复合物中的一抗结合，再利用辣根过氧化物酶催化二氨基联苯胺（DAB）在抗原部位形成棕色显色。
由于该系统不含生物素和链亲和素，所以不受内源性生物素干扰，染色背景非常清晰。
【主要组成成分】其他需要但未提供的材料：PBST缓冲液（pH7.2-7.4）、纯化水、酒精、脱蜡液、苏木素染色液、中性树胶、塑料湿盒、染色缸、染色架等。
【储存条件及有效期】储存条件：2-8℃，有效期18个月。
请在开瓶3个月内使用。
生产日期、有效期至：见标签。
【样本要求】常规经福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片。
【检测方法】常规脱蜡水化：石蜡切片经常规脱蜡和水化。
抗原热修复：参照一抗说明书进行抗原修复。
DAB工作液的配制：按每毫升DAB缓冲液（试剂D）中加入50μL DAB色原（试剂C）（约1滴）的比例配制DAB工作液，DAB工作液应现配现用。
配制好的DAB 工作液需在2小时内使用，如出现沉淀，使用前先混匀。
操作步骤：1）抗原修复完毕后自然冷却的切片，用自来水清洗。
2）除去切片上组织周围的液体，用免疫组化笔圈定玻片上的待测组织区域并放入PBST缓冲液中。
3）取出切片，除去PBST缓冲液，滴加内源性过氧化物酶阻断剂（试剂A）（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），于组织上孵育10分钟，用PBST清洗切片。
4）除去PBST缓冲液，滴加100μL左右一抗工作液（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），于组织上进行孵育（按照各自一抗说明书操作）。
一抗孵育完毕，用PBST清洗切片。
5）除去PBST缓冲液，每张切片加酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物（试剂B）100μL左右（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），室温下孵育30分钟。
试剂盒使用说明书
人抗乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中抗乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人抗乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）水平。
用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入抗乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb），再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的抗乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人抗乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）含量。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：270IU/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
罗氏(Roche)公司Tunel试剂盒操作说明手册
罗氏(R o c h e)公司T u n e l试剂盒操作说明书一、原理：TUNEL（TdT-mediateddUTPnickendlabeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。
其原理是荧光素（fl uorescein）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdTEnzyme）的作1%TritonX-100 in0.1%sodiumcitrate，临用前配制）、苏木素或甲基绿、DN ase1（3000U/ml–3U/mlin50 mMTris-HCl，pH7.5，10 mMMgCl2，1mg/ mlBSA）等。
三、实验步骤操作流程图：制作石蜡切片→脱蜡、水合→细胞通透→加TUNEL反应液→加c onverter-POD→与底物DAB反应显色→光学显微镜计数并拍照。
具体操作步骤（石蜡包埋切片的检测）：1.用二甲苯浸洗2次，每次5min；2.用梯度乙醇（100、95、90、80、70%）各浸洗1次，每次3min；注：上面两步是针对石蜡切片样本的处理4.用ProteinaseK工作液处理组织15-30min在21–37°C（温度、时间、浓二甲苯透明、中性树胶封片。
15.加一滴PBS或甘油在视野下，用光学显微镜观察凋亡细胞（共计200~500个细胞）并拍照。
可结合凋亡细胞形态特征来综合判断（未染色细胞变小，胞膜完整但出现发泡现象，晚期出现凋亡小体，贴壁细胞出现邹缩、变圆、脱落；而染色细胞呈现染色质浓缩、边缘化，核膜裂解，染色质分割成块状/凋亡小体）对于培养细胞的预处理：①在载玻片上铺一层薄薄的多聚赖氨酸（见备注4），干燥后在去离子水中漂洗，干燥后4℃保存；②适当方法诱导细胞凋亡，同时设未经诱导的对照组，各组离心收集约1×106个细胞，PBS洗一次，重悬，加到铺好的多聚赖氨酸载玻片上，自然干燥，使细胞很好的吸附到载玻片上；③将吸附细胞的载玻片在4%多聚甲醛（见备注2）中固定25min；④PBS浸洗二次，每次5min；水（二甲苯）透明、封片后通过光学显微镜观察操作。
DAB显色试剂盒说明书
产品说明书 / Specification Sheet辣根过氧化氢酶DAB显色试剂盒产品编号：PW017产品简介：DAB即：二氨基联苯胺（3，3’-diaminobenzidine）是过氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成浅棕色不溶性产物。
用于检测过氧化物酶的活性，它灵敏度高，特异性好。
是HRP结合物最常用的底物,常在免疫组化,原位杂交,Western blot等膜显色或检测细胞或组织内源性的过氧化物酶中应用广泛。
运输和保存条件：常温下运输，收到后，将溶液A, 溶液C在-20度闭光的环境中保存，反应液2-8度保存，保质期一年。
组成:本试剂是为免疫组化,原位杂交,Western blot等膜显色专门配制的,由反应液,溶液A, 溶液C三部分构成:能够使用5次1: PW017-1 反应液50ml2:PW017-2 溶液A 1 ml3:PW017-3 溶液C 0.12ml使用方法:1:在免疫印迹(western blot)实验中,先将相应的HRP（辣根过氧化氢酶）标记的二抗覆盖膜后,在37度的情况下,于震荡器上,震荡一个半小时左右,再用TBST或者PBST洗涤膜3~4次,最后一次用TBS或PBS洗涤膜,再将膜转移到阴暗处。
2:显色前,先取反应液10 ml在一个15ml的干净棕色瓶子中，再取200ul左右的溶液A和溶液C 20ul形成显色工作液, 加入充分混匀。
3在阴暗处.将显色工作液加入膜上,将膜覆盖, 在37度的情况下,震荡反应十分钟左右即可.这时浅棕色的条带出现。
4倒掉反应液，双蒸水冲洗条带3~4次，自然干燥。
5照像记录实验结果。
注意事项:1: 溶液A在使用之前，37度温育10分钟，以免产生沉淀。
2: 显色时间严格控制，非常小心，一般10分钟左右。
以免造成过度显色，而且显色后数小时将会褪色。
3: 请使用完后，将反应液，溶液A, 溶液C的盖子旋紧,以防止溶液挥发和与空气中的成分发生化学反应。
DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(20×)
仅供科研版本号：161208 DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(20×)【产品组成】【保存条件】-20℃,避光,12个月【产品概述】DAB辣根过氧化物酶显色液(DABHorseradishPeroxidaseColorDevelopmentKit)是一种依据辣根过氧化物酶(HRP)结合显色，用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western、Southern、Northern、EMSA等膜显色的试剂盒。
DAB即3,3N-DiaminobenzidineTertrahydrochloride,是辣根过氧化物酶的常用底物。
在辣根过氧化物酶的催化下,DAB会产生棕色沉淀，该棕色沉淀丌溶于水和乙醇。
因此在DAB显色后,还可以使用溶于乙醇的染料进行后续染色。
本显色液可以用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的辣根过氧化物酶显色，也可用于Western 等结合有辣根过氧化物酶的膜的显色检测。
同时也可以用于细胞或组织内源性的辣根过氧化物酶显色。
【使用方法】1、常规组织切片、细胞样品、膜不辣根过氧化物酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。
对于检测内源性辣根过氧化物酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也可用洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。
2、按(A):试剂(B):蒸馏水=1:1:18的比例混合,即为DAB染色工作液，即配即用。
3、洗涤过组织后，去除洗涤液，加入适量DAB染色工作液，确保覆盖样品。
4、室温避光孵育30min或更长时间，直至显色至预期深浅。
5、去除DAB染色工作液，用蒸馏水清洗1～2次即可终止显色反应。
6、对组织切片或细胞样品，反应终止后，如有必要可用中性红染色液染色，便于观察。
对于膜染色，反终止后可室温晾干避光保存。
【常见问题及可能原因】1、背景显色太深①在免疫组化时如果背景显色太深，考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。
DAB显色液
存在。 6． 该显色液只能用于辣根过氧化酶（HRP）
标记的杂交和沉淀反应。 7． 染色后可用甲基绿或苏木素复染，增强对
照。
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色工作液. 3． 室温下，小心加上上述显色工作液铺满整
个切片样品表面 。 4．室温下孵育 5 至 10 分钟，或直至样本出现
棕褐色 5．小心移去切片上显色工作液 6．室温下，小心将切片置入 50 毫升 PBS 缓冲
液中浸泡 5 秒 7．小心移去切片上的 PBS 缓冲液 8．放上盖玻片或封片 9．（选择步骤）进行甲基绿复染 10．即刻在一般光学显微镜下观察：阳性呈现
棕褐色 注意事项
1． 限定 Reagent A 和 Reagent B 比例为 0.5-3ml:1 滴（垂直加为 50ul） ，小心 Reagent A 比例不要过低，否则可能造成 不显色。
2． 显色液具有毒性或刺激性，操作时，须戴 手套。
3． 显色时间严格控制，非常小心；需根据情 况调整，不能过长，以免造成过度显色
二、 免疫化学染色 1． 准备好含有待测蛋白的组织切片：包括固着、 封阻、一抗（或生物素）处理、辣根过氧化 酶（HRP）标记的二抗（或链霉亲和素）处 理、清洗等步骤 2． 加入 1 毫升 Reagent A 和 1 滴 （约 50ul） Reagent B 到 1.5 毫升离心管，充分混匀为显
订购电话： 0531-82861981 网 址：
二氨基联苯胺（DAB）显色液
增敏二氨基联苯胺（DAB）显色液
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
说明： 二氨基联苯胺（3，3’-diaminobenzidine，
用于免疫组化检测的DAB显色试剂盒及其应用[发明专利]
![用于免疫组化检测的DAB显色试剂盒及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/9f18a340f342336c1eb91a37f111f18583d00c35.png)
(19)国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 202110839028.4(22)申请日 2021.07.23(65)同一申请的已公布的文献号申请公布号 CN 113484313 A(43)申请公布日 2021.10.08(73)专利权人 图凌（杭州）生物医药有限公司地址 310052 浙江省杭州市滨江区长河街道滨安路688号5幢1702室(72)发明人 陶娜娜 章月凯 潘丽 (74)专利代理机构 杭州信与义专利代理有限公司 33450专利代理师 万景旺(51)Int.Cl.G01N 21/78(2006.01)G01N 33/58(2006.01)G01N 33/53(2006.01)(56)对比文件US 5225325 A ,1993.07.06CN 110361245 A ,2019.10.22CN 105164272 A ,2015.12.16US 2012077211 A1,2012.03.29CN 109856383 A ,2019.06.07CN 111766385 A ,2020.10.13US 2002164660 A1,2002.11.07CN 111426826 A ,2020.07.17审查员 卞庆娜 (54)发明名称用于免疫组化检测的DAB显色试剂盒及其应用(57)摘要本发明公开了一种用于免疫组织化学检测的DAB显色试剂盒，属于免疫组化检测技术领域。
所述DAB显色试剂盒包括DAB缓冲液和DAB色原，所述DAB缓冲液包括咪唑、4‑壬基苯基‑聚乙二醇、苯扎氯铵、过氧化氢、EDTA溶液和焦磷酸钠；所述DAB色原包括：1,2‑丙二醇和3,3‑二氨基联苯胺四氯盐水合物，进一步，所述试剂盒还包括DAB增强剂，所述DAB增强剂包括硫酸铜、氧化钠、氧化钾、蔗糖和苯扎氯铵。
本发明进一步公开了所述DAB显色试剂盒的应用。
利用本发明的DAB显色试剂盒进行免疫组化检测，能够显著提高染色强度和灵敏度，并且本发明的DAB显色试剂盒组分简单，易于配制，具有极佳的稳定性。
DAB 染色液说明书
DAB染色液说明书【产品名称】通用名称：DAB染色液英文名称：DAB Staining Sloution(Polymer)【包装规格】货号规格4951011100Test/Kit4951012500Test/Kit【预期用途】本试剂盒可供医疗机构用于免疫组化检测，可与鼠源一抗和靶抗原形成的复合物相结合，对常规经福尔马林固定、石蜡包埋组织切片中的靶抗原进行染色，染色结果适用于在生物显微镜下进行观察。
主要用于免疫组织化学染色的显色。
【检验原理】本试剂盒可检测通用的鼠源一抗，一抗与切片中的靶抗原形成抗原抗体复合物，酶标羊抗小鼠IgG聚合物与抗原抗体复合物中的一抗结合。
酶标羊抗小鼠IgG聚合物中的HRP催化二氨基联苯胺（DAB）在抗原部位棕色沉积。
通过光学显微镜观察棕色部位来确定抗原表达情况。
【主要组成】产品组成100Test/Kit500Test/KitA液：内源性过氧化物酶阻断剂10ml/瓶X150ml/瓶X1B液：酶标羊抗小鼠IgG聚合物10ml/瓶X150ml/瓶X1C液：DAB缓冲液10ml/瓶X150ml/瓶X1D液：DAB色原0.6ml/瓶X13ml/瓶X1【产品概述】样本要求福尔马林固定，石蜡包埋的组织切片；丙酮固定的冷冻切片适用仪器普通光学显微镜自备材料浓缩型或即用型一抗、抗体稀释液、苏木素、中性树胶等储存及有效期2℃~8℃避光保存，有效期12个月，生产日期，失效日期见标签【检验方法】1.烤片：将准备好的组织切片置烤箱中60-65℃烤片1-1.5h。
2.脱蜡和水化：石蜡切片置于新鲜二甲苯中，浸泡10min x2次，沥液后，无水乙醇浸泡5min x2次；沥液后，95%乙醇浸泡5min；沥液后，85%乙醇浸泡5min；自来水冲洗3min x4次。
3.抗原修复：参照一抗说明书进行。
4.阻断内源性过氧化物酶：用免疫组化笔圈定玻片上待测组织区域，PBS缓冲液洗3min x3次。
去除PBS在圈定区域内滴加内源性过氧化物酶阻断剂室温孵育12min；PBS缓冲液浸洗2min x3次5.封闭：取出切片甩掉多余PBS溶液，滴加封闭液（常用5%羊血清）至组织上，37℃封闭30min。
显色液DAB液体装DAB液体装
HRP 显色液显色液（（DAB,DAB,液体装液体装液体装））
说明书修改日期说明书修改日期：：2015.07.13
Cat number ：KGP1045/KGP1045-20/KGP1045-100 Store at 2-8 for ℃ 6 months,避光
For Research Use Only （科研专用）
一、产品简介
二氨基联苯胺（DAB ）是辣根过氧化物酶最敏感、最常用的显色底物，反应产物为不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物。
本产品采用特殊配方，灵敏度高，背景低，储存稳定，使用方便。
适合于蛋白印迹、免疫组织化学和免疫细胞化学等的染色和显色反应。
二、试剂盒组成
组份 Cat ：KGP1045 可配制成5ml
Cat ：KGP1045-20 可配制成20mL
Cat ：KGP1045-100 可配制成100mL
保存条件 20×溶液A 250ul 1ml 5ml 2-8℃ 20×溶液B 250ul 1ml 5ml 2-8℃ 20×溶液C 250ul
1ml
5ml
2-8℃，避光
说明书 一份
三、使用说明
（1）临用前配制显色工作液，三组分A ,B,C 以1:1:1的比例混合，另加水稀释，配好的使用液避光，不可长时间存放。
例：A 组份50ul, B 组份50ul, C 组份50ul, 加入到1ml 的蒸馏水中，混匀，即用即配。
（2）使用时将显色工作液直接滴在膜上即可。
显色时间3-10分钟，显色时间过长可引起本底增高，故应密切观察显色 过程，并在本底较浅且达到适当显色强度时以流水漂洗终止显色反应。
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DAB显色试剂盒（20×）使用说明
货号：DA1010
规格：DA1010-3DA1010-10
溶液A:3ml10ml
溶液B：3ml10ml
保存：
-20℃避光密闭保存，一年有效。
避免反复冻融。
短期可2-8℃保存。
产品简介：
二氨基联苯胺（Diaminobenzidine,DAB）是过氧化物酶（POD）的底物，DAB显色液主要用于免疫过氧化物酶法，适用于辣根过氧化物酶HRP标记的免疫印记或免疫组化反应。
过氧化物酶使底物发生反应，于反应部位产生棕色沉淀物。
免疫印记可直接在膜上显示条带。
免疫组化标本显色时间一般为室温5-20分钟，随后在显微镜下观察显色情况，显色充分后应将标本及时脱水封固。
其终产物可直接在光镜下观察，也可经OsO4处理后，增加反应产物的电子密度，用于电镜观察。
操作说明：
1.对于组织切片或蛋白质印记膜，在与辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。
2.取900ul PBS（或双蒸水），加入50ul溶液A，50ul溶液B混合均匀，即配成DAB工作液。
如需要更大体积工作液，可按比例放大。
此溶液必须现用现配，配好后避光保存，1小时内使用，过期后请将剩余的液体废弃。
3.向组织切片或膜上加入适量DAB工作液，确保能充分覆盖样品。
4.室温避光孵育3-10分钟或更长时间，避免光照，直至显色至预期深浅。
5.去除DAB染色工作液，用蒸馏水洗涤2-3次即可终止显色反应。
6.对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，可对其进行其他染料复染。
对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。
注意事项：
1．DAB溶液应低温密封保存。
如有结晶析出，应确保结晶完全溶解再行使用；
2．显色工作液应现用现配，新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色，如颜色过深，请勿使用；
3．显色时间严格控制，根据情况调整，以免显色过度。
固相膜显色数小时后即会褪色，不能永久存在；
4．DAB为可疑致癌物，请采取必要的防范措施。
操作时应戴手套，尽量避免与皮肤接触，用后及时彻底冲洗，接触DAB的实验用品最好经洗液浸泡24h后使用。
相关试剂：
P103220×PBS，PH7.2-7.4
G1140Mayer'苏木素染液(免疫组化)
A2010AEC底物显色试剂盒。