em大鼠离体胸主动脉血管环实验方法介绍

离体大鼠胸主动脉环实验

目的：

观察药物对大鼠离体胸主动脉血管环收缩活动的影响；

动物：

健康的SD大鼠，雄性，体重250～280克

药品与试剂：

20%氨基甲酸乙酯，3mo1氯化钾，10-5mo1/L维拉帕米，0.1％苯肾上腺素，1％酚妥拉明，Krebs液，95%O2+5%CO2混合气体

器材：

HV-4/SV-4离体组织器官恒温灌流装置，超级恒温水浴，温度计，5g张力换能器，BL-420生物信号采集系统，手术剪刀，眼科剪，眼科镊，培养皿，烧杯，100μl、1m1移液器，棉线；

方法：

1．BL-420生物信号采集系统参数设置：

T:DC , F:10Hz ,采样率：100Hz, 扫描速度：25s/div，放大倍数200～500。

2．标本制备

（1）大鼠用20%氨基甲酸乙酯按1g/kg体重腹腔注射麻醉，剪开胸腔，迅速取出心脏及胸主动脉放入盛有4℃的混合气体饱和的Krebs营养液的培养皿中，连续用混合气体充气。

分离出主动脉，将血管内的残存血液冲洗干净，小心剥去外围的结缔组织，将主动脉弓以下的胸主动脉剪成4mm长的动脉环数段备用。

（2）需要保存内皮的血管，动作应轻柔。如需无内皮的血管环，可用棉签或牙签将血管内皮轻轻檫去。

（3）将不锈钢三角钩轻轻穿入血管环，并将另一的三角形不锈钢挂钩也轻轻穿入，通过挂钩悬挂于浴管内，下方固定于固定钩上，上方以一细钢丝挂钩连于张力换能器，通入混合气体，调节通气量至一个一个小气泡逸出为（如下图示）。浴槽内温度应保持37±0.5℃。

图1 离体主动脉血管环孵育测量方式图示

4）血管环的初始张力前15分钟调为1g，15分钟后调至2g，并以此张力平衡60分钟。每隔15分钟换液一次。

5）用终浓度60mmol KCL收缩血管环，作用15 min诱导血管环收缩，激发舒缩活性，待收缩稳定后用预热的Krebs洗脱，反复冲洗直至张力恢复到初始值为止；重复加入同一浓度KCL，连续3次，用Krebs液反复脱洗标本观察收缩曲线波形使其张力信号回复初始值。6）稳定30 min后进行后续实验，记录血管环张力变化数值。张力变化以血管环收缩幅度变化相对值的百分比（%）来表示。