眼角膜病理切片操作规程

眼角膜病理切片操作规程

1.取材

用镊子将眼球从10%福尔马林中取出，放在培养皿上，用剪刀

沿冠状方向剪掉眼球的后半部分（角膜面为前瓣部分，与角膜相对

的为眼球的后半部分），去除晶状体（透明坚硬小球）后，用剪刀

把巩膜剪掉，沿矢状面从角膜的正中把角膜平均分为两瓣，放入塑

料包埋盒内，标号，盖上盖子。

2.脱水

将包埋盒依次浸入70%酒精（14h），80%酒精（4h）,90%酒精

（4h），95%酒精（过夜），100%Ⅰ酒精（1h），100%Ⅱ酒精（1h）。

3.透明

将脱水完成后的包埋盒依次进入二甲苯Ⅰ（10min）,二甲苯Ⅱ（10min）。

4.浸蜡

将透明完成的包埋盒依次浸入蜡Ⅰ（1h），蜡Ⅱ(1h)。若为新

蜡块，在酒精灯熔化成液体状，室温凝固，再熔化为液体状才可使

用（去除气泡），将盛有液体状石蜡的烧杯放入烘箱（70℃）。

5.包埋

将包埋盒从液体石蜡中取出，打开包埋盒，将盖子去掉，用镊

子夹取角膜组织放入金属包埋模子中，沿着模子的一角缓缓倒入液

体石蜡，直到倒满整个模子。借助镊子使角膜的矢状面朝下垂直立

于模子中央，将塑料包埋盒底座盖在组织上，室温凝固后放入烧杯

中，用冷水冲洗10-20min，再拿出，去掉金属模子，将石蜡块放入

冰箱上层4℃保存。

6.切片

将石蜡块两侧多余部分修掉，使平齐，夹在刀片机上，调节厚

度5um，左手摇动手轮调节石蜡块与刀片间的距离，右手摇动手轮

切去多余部分，待切到组织时，左手停止摇动，右手摇动手轮切出

连续切片，用镊子和毛笔将切片展开在37℃水浴锅中，用镊子展平，待切片维持一定温度后，用载玻片（涂过多聚赖氨酸）倾斜入水，

从切片一端靠近，逐渐使切片贴在载玻片上，插在玻片架上。

7.烤片

将玻片架放入烘箱，设置温度70℃，烤片2h。

8.脱蜡

将载玻片连带玻片架依次浸入二甲苯Ⅰ（10min）,二甲苯Ⅱ（10min）。

9.水化

将脱蜡完的载玻片连带玻片架依次浸入100%、95%、70%、30%

乙醇各2min，温水2min，若脱蜡不干净，再温水2min。

10.染色

将载玻片用蒸馏水润湿1min，用滤纸吸干水分。用试剂一核染液染色3min，自来水冲洗3-5秒（背面冲洗）。用试剂二浆染液染色10-30秒，手拿载玻片放入盛有自来水的烧杯中涮几次。

将载玻片连带玻片架依次浸入30%、70%、95%、100%乙醇中各

2min（脱水），再依次浸入二甲苯Ⅰ，二甲苯Ⅱ中各2min（透

明）。用滤纸条吸干载玻片上液体。

11.封片

吸取中性树胶滴在组织上，用事先洗净并充分干燥的盖玻片垂直盖在树胶滴上使之充分扩散至整个组织。放在室温下晾干。

12.照相

在倒置荧光显微镜下观察角膜是否有病理变化，并照相留证。

书写：杨姣