多肽合成方法

多肽合成中肽键形成的基本原理一个肽键的形成（生成一个二肽），从表面上看是一个简单的化学过程，它指两个氨基酸组分通过肽键（酰胺键）连接，同时脱去水。在温和反应条件下，肽键的形成是通过活化一个氨基酸（A）的羧基部分，第二个氨基酸（B）则亲核进攻活化的羧基部分而形成二肽（A－B）。如果羧基组分（A）的氨基未保护，肽键的形成则不可控制，可能开有成线性肽和环肽等副产物，与目标化合物A－B混在一起。所以，在多肽合成过程中，对不参与肽键形成的所有官能团必须以暂时可逆的方式加以保护。因此，多肽合成－即每一个肽键的形成，包括三个步聚：第一步，需要制备部分保护的氨基酸，氨基酸的两性离子结构不再存在；第二步，为形成肽键的两步反应，N－保护氨基酸的羧基必须先活化为活性中间体，随后形成肽键。这一耦合反应既可作为一步反应进行，也可作为两个连续的反应进行。第三步，对保护基进行选择性脱除或全脱除。尽管全部脱除要等到肽链全部组装完成后才能进行，但为了继??? 续肽合成，选择性脱除保护基也是必需的。由于10个氨基酸（Ser、Thr、Tyr、Asp、Glu、Lys、Arg、His、Sec和Cys）含有需要选择性保护的侧链官能团，使肽合成变得更加复杂。因为对选择性的要求不同，所以必须区分临时性和半永久性保护基。临时性保护基用于下一步要反应氨基酸的氨基或羧基官能团的暂时保护，在不干扰已经形成的肽键或氨基酸侧链的半永久性保护基才脱除，有时也在合成过程中脱除。

在理想状态下，羧基组分的活化和随后的肽键形成（耦合反应）应为快速反应，没

有消旋或副产物形成，并应用等摩尔反应物以获得高产率。但遗憾的是，还没有一

种能满足这些要求的化学耦合方法相比，适用于实际合成的方法很少。

在肽合成过程中，参与多种反应的官能团常常与一个手性中心相连（甘氨酸是唯一

的例外），存在发生的消旋的潜在危险。

多肽合成循环的最后一步，保护基要全部脱除。除了在二肽的合成中需要全脱保护

以外，选择性脱除保护基对于肽链延长具有非常重要的意义。合成策略要深思熟虑

地规划，依战略选择，可以选择性脱除

N

α

－氨基保护基或羧基保护基。“战略”

一词这里是指单个氨基酸的缩合反应顺序。一般来说，在逐步合成和片段缩合之间

是有区别的。在溶液中进行肽合成（也指“常规合成”），对困难序列，多数情况

下，用肽链逐步延长法只能合成较短的片段。要合成更长的肽时，目标分子必须分

割成合适的片段，并确定在片段缩合过程中，它们能使能

C

端差向异构化程度最

小。在单个片段逐步组装完成后，再连接产生目标化合物。肽合成战术包括选择最

恰当的保护基组合和最佳的片段偶联方法。

最初的固相多肽合成（

SPPS

）只是肽和蛋白质逐步合成法的一种变化，其概念是将

增长的肽链连接到一个不溶性的聚合物载体上，由

Robert Bruce Merrifield

在

1963

年首次报道。今天，为纪念他

1984

年获得诺贝尔奖而称之为

Merrifield

。在

聚合物载体上，也可以进行片段缩合反应。

多肽合成方法之酰基叠氮物法

早在

1902

年，

Theodor Curtius

就将酰基叠氮物法引入到肽化学中，因此它是最

古老的缩合方法之一。在碱性水溶液中，除了与酰基叠氨缩合的游离氨基酸和肽以外，氨基酸酯可用于有机溶剂中。与其他许多缩合方法不同的是，它不需要增加辅助碱或另一等当量的氨基组分来捕获腙酸。

长期以来，一直认为叠氮物法是唯一不发生消旋的缩合方法，随着可选择性裂解的氨基酸保护基引入，该方法经历了一次大规模的复兴。该方法的起始原料分别是晶体状的氨基酸酰肼或肽酰肼

64,

通过肼解相应的酯很容易得到。在－

10

℃的盐酸

中，用等当量的亚硝酸钠使酰肼发生亚硝化而转化为叠氮化物

65,

依次洗涤、干

燥，然后与相应的氨基组分反应。有些叠氮化物可用冰水稀释而沉淀出来。

二苯磷酰基叠氮化物（

DPPA

）也可以用于酰基叠氮化物的合成。

Honzl-Rudinger

方法采用亚硝酸叔丁作为亚硝化试剂，并且使叠氮缩合反应可在有机溶剂中进行。因酰基叠氮化物的热不稳定性，缩合反应需在低温下进行。当温度较高时，Curtius

重排，即酰基叠氮转化为异氰酸酯的反应成为一个主要的副反应，最终导

致生成副产物脲。由于反应温度低（如

4

℃）而导致反应速率相当慢，使得肽缩合

反应通常需要几天才能完全。

对于较长的

N

端保护的肽链，酯基的肼解一般比较困难，因此，使用正交的

N

保护

肼衍生物是一种选择。在肼基的选择性脱除后，按倒接（

backing-off

）策略组合

的肽片段可以用于叠氮缩合。

如前所述，虽然叠氮法一直被认为是消旋化倾向最小的缩合方法，但在反应中，过量的碱会诱发相当大的消旋。因此，在缩合反应期间要避免与碱接触，例如，氨基组分的铵盐应采用

N

，

N

－二异丙胺或

N

－烷基吗啉代替三乙胺来中和。

虽然有上述局限性，但该方法仍很重要，尤其对于片段缩合而言，因为该方法具有较低的异构化倾向，适用于羟基未保护丝氨酸或苏氨酸组分，同时，

N

ˊ保护的本

行酰肼还具有多种用途。

多肽合成方法之酸酐法

在多肽合成中，最初考虑应用酸酐要追溯到

1881

年

Theodor Curtius

对苯甲酰基

氨基乙酸合成的早期研究。从氨基乙酸银与苯甲酰氯的反应中，除获得苯甲酰氨基乙酸外，还得到了

BZ-Glyn-OH(n=2-6)

。早期曾认为，当用苯甲酰氯处理时，

N

－

苯甲酰基氨基酸或

N

－苯甲酰基肽与苯甲酸形成了活性中间体不对称酸酐。

大约在

70

年后，

Theodor Wieland

利用这些发现将混合酸酐法用于现代多肽合

成。目前，除该方法外，对称酸酐以及由氨基酸的羧基和氨基甲酸在分子内形成的N